... qui trình phát < /b> trực tiếp gen < /b> độc < /b> tố < /b> B. cereusthựcphẩm chưa làm cách hoàn thiện 4.1 XÂY DỰNGQUY < /b> TRÌNH PHÁTHIỆNGEN < /b> ĐỘCTỐCỦA B. CEREUSTRONGTHỰCPHẨMB NG KỸTHUẬT MULTIPLEXPCR VỚI QUY < /b> MÔ PHÒNG ... khuẩn/ml gen < /b> độc < /b> tố < /b> vi khuẩn B. cereus tách chiết trực tiếp từ thựcphẩmphát < /b> kỹthuật Multiplex- PCR 40 3.2 KẾT QỦA ỨNGDỤNGKỸTHUẬTMULTIPLEXPCR ĐỂ PHÁTHIỆN TRỰC TIẾP GEN < /b> ĐỘCTỐBCEREUSTRÊNMỘT ... diện phát < /b> trực tiếp gen < /b> độc < /b> tố < /b> hblD B. cereuskỹthuậtPCR đơn mồi Nhận xét : Trênsốthựcphẩmthựchiên đồng thời phản ứng < /b> MultiplexPCR phản ứng < /b> PCR đơn mồi để phát < /b> độc < /b> tố < /b> gây ngộ độc < /b> thực phẩm, ...
... gây đau b ng tiêu chảy Biểu đồ 1: Số lợng mẫu phát < /b> Bacillus cereus nhóm thựcphẩm (N =103) Phát < /b> kiểu gene mang độc < /b> tố < /b> Bacillus cereus sản phẩm có nguồn gốc từ gạo Trong 103 mẫu thựcphẩmđợc ... %.Đây gene phổ biến mẫu phát < /b> PCR Theo nhiều nghiên cứu, HBL độc < /b> tố < /b> nội ruột ly giải hồng cầu bao gồm thành tố < /b> protein B mã hóa gene hblA, thành tố < /b> protein L: L1 mã hóa gene hblD L2 mã hóa gene hblC ... phân b không [10] B ng 2: Kết phát < /b> gene mang độc < /b> tố < /b> Bacillus cereus phơng pháp PCR đa mồi Nhóm / Số lợng mẫu B n Phở N= 35 Cơm N = 43 B nh từ b t gạo N = 25 Tổng số N = 103 Âm tính Nuôi PCR...
... 2.2.6 Tối ưu phản ứng < /b> Multiplex RT -PCR phát < /b> virus A/H5N1 Sau xác định điều kiện thích hợp cho phản ứng < /b> RT -PCR phát < /b> gen < /b> riêng rẽ, tiến hành tối ưu phản ứng < /b> multiplex RT- PCR với sinh phẩm Qiagen ... tế b o Sau ủ, tế b o gắn cố định tiến hành xác định có mặt protein NP virus tế b o nhiễm virus phản ứng < /b> EIA Hiện < /b> nay, kỹthuật MN kỹthuậtphát < /b> kháng thể kháng H5N1 tốt Nhược điểm kỹthuật áp dụng < /b> ... khuôn mẫu để thực phản ứng < /b> PCR khuếch đại đoạn gen < /b> mong muốn Có phương pháp thực RT -PCR Đó phương pháp RT -PCR b ớc phương pháp RT -PCR hai b ớc Trong phương pháp RT -PCR hai b ớc, phản ứng < /b> phiên mã...
... phản ứng < /b> RT -PCR phát < /b> gen < /b> M .54 B ng 3.8: Thành phần phản ứng < /b> RT -PCR phát < /b> gen < /b> H5 54 B ng 3.9: Chu trình nhiệt phản ứng < /b> RT -PCR phát < /b> gen < /b> H5 54 B ng 3.10: Thành phần phản ứng < /b> RT -PCR phát < /b> gen < /b> ... 2.2.7 Thử nghiệm phản ứng < /b> Multiplex RT -PCR mẫu b nh phẩm Để kiểm tra khả ứng < /b> dụng < /b> k thuậtmultiplex RT -PCR chuẩn hoá vào phát < /b> cúm A/H5N1 mẫu b nh phẩm, thực phản ứng < /b> mẫu b nh phẩm xác định dương ... .37 2.2.5 Tối ưu phản ứng < /b> RT -PCR phát < /b> gen < /b> M, HA NA 39 2.2.6 Tối ưu phản ứng < /b> Multiplex RT -PCR phát < /b> virus A/H5N1 .45 2.2.7 Thử nghiệm phản ứng < /b> Multiplex RT -PCR mẫu b nh phẩm 47 2.2.8 Điện...
... trình Multiplex- PCR nhân gen < /b> AZF (a, b, c) nhiễm sắc thể Y Đã áp dụng < /b> quy < /b> trình kỹthuật nói để phát < /b> vi đứt đoạn gen < /b> AZF BN nam vô sinh nguyên phát-< /b> vô tinh trùng Việc phát < /b> đứt đoạn gen < /b> AZF BN vô ... trình sinh tinh Với kết b ớc đầu sử dụng < /b> Multiplex- PCR để phát < /b> vi đứt đoạn gen < /b> vùng AZF, chưa có tần số đứt đoạn gen < /b> AZF B ng kỹthuật này, cần tiếp tục nghiên cứu để có số liệu thống kê vi đứt ... đoạn AZFb AZFc BN A16 Ống 1: dải b ng 1: đứt đoạn sY254 (AZFc); dải b ng 2: chứng dương; dải b ng 3: chứng âm; M: Marker 50 bp Ống 2: dải b ng 3: đứt đoạn sY134 (AZFb) M: Marker 50 bp Theo nhiều...
... Thanh Tùng MỤC LỤC I Khái quát độc < /b> tố < /b> nấm mốc II Điều kiện nấm mốc sản sinh độc < /b> tố < /b> III Các độc < /b> tố < /b> nấm mốc I Khái quát độc < /b> tố < /b> nấm mốc a Định nghĩa độc < /b> tố < /b> nấm mốc: - Độctố < /b> chất có nguồn gốc sinh vật, ... nhất, b p, loại hạt đậu khác b nh dầu nó, loại hạt cốc sản phẩm phụ, cùi dừa, hạt hướng dương b nh dầu - Quy < /b> định liều lượng aflatoxin: Hiện < /b> Việt Nam aflatoxin B1 quy < /b> định mức 20 ppb (µg/kg) cho thực ... Fabre Truhaut định nghĩa đầy đủ độc < /b> tố < /b> nấm mốc II Điều kiện nấm mốc sản sinh độc < /b> tố < /b> a Nhiệt độ - Nấm mốc phát < /b> triển khoảng 150C-300C, sinh trưởng tốt khoảng 25-300C - Tuy nhiên có vài loài phát...
... sót PCR, Chamberlain cộng người mô tả, phát < /b> triển kỹthuậtmultiplexPCR vào năm 1988 Trongkỹthuậtmultiplex PCR, nhiều gene đích khuyếch đại lúc nhiều cặp mồi phản ứng < /b> KỹthuậtmultiplexPCR ... tế b o [1] Khi phát < /b> triển môi trường nuôi cấy lỏng đại thựcb o, M tuberculosis tích lũy capsule giả không b m Thành phần capsule bung in vitro b n đại thựcb o Màng tế b o vi khuẩn lao gây b nh ... soát biểu cá gene b n cạnh: Mộtsố trình tự chèn có tác dụng < /b> hoạt hóa biểu gene gần kề, trường hợp di chuyển tạo nên vị trí thích hợp promoter có khả điều khiển biểu gene b n cạnh Khi hai yếu tố...
... V cholerae O1 có độc < /b> tố < /b> CT (ctxA + rfbO1) 0,0 0,0 V cholerae O139 có độc < /b> tố < /b> CT (ctxA + rfbO139) 5,0 9,4 V cholerae O1 độc < /b> tố < /b> CT (rfbO1) 3,0 8,3 V cholerae O139 độc < /b> tố < /b> CT (rfbO139) 8,1 12,5 V ... phản ứng < /b> quy < /b> trình nhiệt phản ứng < /b> m -PCR Các phản ứng < /b> m -PCR thực với nồng độ hóa chất quy < /b> trình nhiệt Thành phần phản ứng < /b> m -PCR gồm 13,5 µl hỗn hợp master mix (2 UI AmpliTaq gold; 0,2 mM dNTP; buffer ... Phản ứng < /b> m -PCR3 thực để phân biệt biotype El Tor cổ điển V cholerae O1 Các đoạn mồi thiết kế phân biệt hai biotype dựa vào gen < /b> tcpA 50 (Rivera cs, 2001) Trình tự đoạn mồi kích cỡ sản phẩm PCR...
... callus b o tm Bng 3.38 nh hng ca khong cỏch bn v ỏp lc khớ n biu hin gen < /b> tm thi ca gen < /b> gus b o nguyờn cõy Bng 3.39 nh hng ca khong cỏch bn v ỏp lc khớ n biu hin gen < /b> tm thi ca gen < /b> gus callus Bng ... phn ng PCR bao gm cỏc bc sau: Bc 1: 940C phỳt Bc 2: 940C phỳt Bc 3: 450C 50 giõy Bc 4: 720C phỳt 30 giõy Bc 5: lp li 35 chu k t bc n bc Bc 6: 720C phỳt Bc 7: 40C vụ cựng Kim tra ADN bng in ... Chỳng tụi s dng hai quy < /b> trỡnh chuyn gen:< /b> Chuyn gen < /b> trc tip bng sỳng bn gen < /b> v chuyn gen < /b> bng vi khun Agrobacterium Xõy dng quy < /b> trỡnh chuyn gen < /b> vo b o tm thụng qua vi khun Agrobacterium Xỏc nh chng...
... perfringens nguyên nhân thứ ba ngộ độc < /b> thựcphẩm phần lớn thựcphẩm chưa nấu chín Trênsốsơ tình hình ngộ độc < /b> thựcphẩmsố nước phát < /b> triển Còn nước phát < /b> triển, tình hình ngộ độc < /b> thựcphẩm diễn biến ... A, độc < /b> tố < /b> chủ yếu gây ngộ độc < /b> thựcphẩmGen < /b> mã hoá độc < /b> tố < /b> CPE, gen < /b> thường tìm thấy plasmid nằm nhiễm sắc thể Trong hầu hết chủng phân lập từ thựcphẩmb nhiễm độc,< /b> gen < /b> nằm nhiễm sắc thể Độctố < /b> ... giải phóng tế b o chết b phân hủy Nội độc < /b> tố < /b> có tính độc < /b> yếu ngoại độc < /b> tố < /b> b n nhiệt (ở nhiệt độ sôi nước độc < /b> tố < /b> không b hoạt tính) [6] Ngộ độc < /b> thựcphẩm ăn phải thức ăn có độc < /b> tố < /b> vi sinh vật...
... Minh, tháng 9/2005 ỨNGDỤNG KĨ THUẬTMULTIPLEX – PCR ĐỂ PHÁTHIỆNMỘTSỐGEN < /b> ĐỘC LỰC CỦA NHÓM E COLI SẢN SINH ĐỘCTỐ SHIGA (STEC) PHÂN LẬP ĐƯỢC TỪ PHÂN B , HEO TIÊU CHẢY VÀ THỊT B ” Hội đồng hướng ... BSTY B i Thị Thu Trang Đề tài thực nhằm phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực stx1, stx2, eae, ehxA, gen < /b> uid vi khuẩn E coli phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy b , heo, b mẫu b mặt thịt bkỹthuậtmultiplex – PCR ... 27 B ng 4.4 Kết phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực E coli nhóm khuẩn lạc phân b tiêu chảy 29 B ng 4.5 Kết phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực E coli b mặt thịt b .30 B ng 4.6 Tổng kết kết phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực...
... cycler): Multiplex – PCR1 : Phát < /b> gen < /b> eae, hly, stx1, stx2 Multiplex – PCR2 : Phát < /b> gen < /b> stx2e, sta, stb, lt-I - Trong q trình thực phản ứng < /b> multiplex – PCR, mẫu đối chứng dương (EDL933 H44) thực đồng ... b , phân heo tiêu chảy thịt b ” 1.2 Mục tiêu - Phát < /b> sốgen < /b> độc < /b> lực E coli kỹthuậtmultiplex – PCR từ mẫu phân tiêu chảy b , b , heo mẫu b mặt thịt b 1.3 Mục đích - Góp phần chẩn đốn kiểm sốt ... Chưa phát < /b> gen < /b> sta E coli phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy b , b heo 5.2 Đề nghị (1) Có thể ứng < /b> dụng < /b> kỹthuậtmultiplex – PCR để phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực dòng E coli gây b nh, góp phần chẩn đốn b nh...
... pháp y hình Trong nghiên cứu genome, PCRứng < /b> dụng < /b> nhân vô tính, multiplex PCR, cloning cDNA PCR đảo (inverse PCR) , recombinant PCR, Trong y khoa thú y, PCR sử dụng < /b> để chẩn đoán mầm b nh virus, ... đa b o Trong nông nghiệp công nghiệp thực phẩm, sử dụng < /b> PCR để phát < /b> gen < /b> halothan, gen < /b> thụ thể estrogen, gen < /b> thụ thể prolactin … công tác chọn giống vật nuôi, phát < /b> vi khuẩn gây ngộ độc < /b> thựcphẩm ... chuyên biệt CT - SMAC Kết phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực ghi nhận cụ thể b ng 4.4 Trong mẫu phân b tiêu chảy, có 8/8 mẫu (100%) phát < /b> E coli mang gen < /b> độc < /b> lực, có mẫu phát < /b> E coli mang -3 gen < /b> độc < /b> lực Gen < /b> ehxA phát...
... ỨNGDỤNGKỸTHUẬTMULTIPLEX – PCR ĐỂ PHÁTHIỆN CÁC GEN < /b> ĐỘC LỰC CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI PHÂN LẬP TỪ PHÂN B , PHÂN HEO TIÊU CHẢY VÀ THỊT B ” Hội đồng hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Ngọc Tuân BSTY ... SÁCH CÁC B NG B NG TRANG B ng 3.1 Số lượng mẫu .20 B ng 4.1 Kết phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực nhóm khuẩn lạc đại diện cho E coli phân b tiêu chảy 29 B ng 4.2 Kết phát < /b> gen < /b> stx1, stx2, eae, hly số khuẩn ... (3) mẫu b mặt thịt b chưa phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực E coli (4) Chưa phát < /b> gen < /b> sta E coli phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy b , b heo iv SUMMARY “Apply multiplex – PCRto detect some virulence genes of...
... khơng có sản phẩm - Chạy PCR cho cặp primer sử dụng < /b> multiplex với nhiệt độ ủ b t cặp thấp b nh thường - So sánh sản phẩm khơng chun biệt cho cặp primer kiểm tra với sản phẩm khơng chun biệt nhìn ... Loading dye Bromophenol blue 0,25% Sucrose 40% TE 1X vừa đủ 100% HĨA CHẤT NHUỘM GEL TBE 1X Ẹthidium bromide 10 mg/ml 61 PHỤ LỤC CÁC VẤN ĐỀ THƯỜNG GẶP TRONGMULTIPLEX – PCR VÀ HƯỚNG GIẢI QUY< /b> T Vấn ... coli by using multiplex - PCR assay for stx1, stx2, eaeA, enterohemorrhagic E coli hlyA, rfb0111, and rfbo157 J Clinical Microbiol 36(2):598-602 41 Paton J C and Paton A W., 199 8b Phathogenesis...
... Chưa phát < /b> gen < /b> sta E coli phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy b , b heo 5.2 Đề nghị (1) Có thể ứng < /b> dụng < /b> kỹthuậtmultiplex – PCR để phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực dòng E coli gây b nh, góp phần chẩn đoán b nh ... phân b tiêu chảy, mẫu b mặt thịt b , tổng kết kết phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực E coli mẫu khảo sát trình b y b ng 4.7 biểu đồ 4.1 B ng 4.7 Tổng kết kết phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực E coli mẫu khảo sát Mẫu N n Phân b ... Kết phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực E coli phân lập từ 10 mẫu phân b tiêu chảy trình b y b ng 4.5 - Trong tổng số 10 mẫu phân có 3/10 (30%) mẫu phát < /b> E coli mang gen < /b> độc < /b> lực, đó: 48 3/10 (30%) mẫu phân phát...
... (55,56%) phát < /b> gen < /b> lt - mẫu (33,33%) phát < /b> gen < /b> vt2e - mẫu (22,22%) phát < /b> gen < /b> hly - mẫu (11,11%) phát < /b> gen < /b> stx1 - mẫu (11,11%) phát < /b> hiêngen < /b> eae - Không phát < /b> gen < /b> stx2 sta E coli mẫu phân heo tiêu chảy - Gen < /b> ... multiplex – PCRphát < /b> gen < /b> gây độc < /b> Kết trình b y b ng 4.4 Kết b ng 4.4 cho thấy (1) khuẩn lạc riêng lẻ màu hồng MAC lấy ngẫu nhiên, multiplex – PCRphát < /b> 1/4 số khuẩn lạc mang gen < /b> stb (25%) (2) ... lẻ để xác định gen < /b> độc < /b> lực, kết trình b y b ng 4.2 B ng 4.2 Kết phát < /b> gen < /b> stx1, stx2, eae, hly số khuẩn lạc E coli riêng lẻ phân lập từ phân b tiêu chảy Mẫu Loại khuẩn lạc Gen < /b> độc < /b> lực stx2 eae...
... stb, lt-I E coli phân lập multiplex - PCR - Việc phát < /b> gen < /b> độc < /b> lực E coli thực phản ứng < /b> multiplex – PCR với máy luân nhiệt (thermal cycler): Multiplex – PCR1 : Phát < /b> gen < /b> eae, hly, stx1, stx2 Multiplex ... Multiplex – PCR2 : Phát < /b> gen < /b> stx2e, sta, stb, lt-I - Trong trình thực phản ứng < /b> multiplex – PCR, mẫu đối chứng dương (EDL933 H44) thực đồng thời với mẫu khảo sát EDL933 đối chứng dương với gen < /b> eae, ... H44 đối chứng dương với gen < /b> stx2e, stb, lt-I Hai mẫu đối chứng dương cung cấp từ Trường đại học Thú y Toulouse (Pháp) Multiplex – PCR1 * Trình tự primer sử dụng < /b> multiplex – PCR1 Gen < /b> độc < /b> TCGCCAGTTATCTGACATTCTG...
... sử dụng < /b> nhiều cặp primer phản ứng < /b> Multiplex – PCR mơ tả Chamberlain năm 1988 kể từ multiplex – PCRứng < /b> dụng < /b> nhiều lĩnh vực kiểm tra DNA (Protocol online) 2.2.2 Các giai đoạn phản ứng < /b> PCR Phản ứng < /b> ... immunosorbent assay (ELISA), DNA-probe, PCR 2.2 KỹthuậtPCR 2.2.1 Ngun tắc 23 PCR (polymerase chain reaction - phản ứng < /b> tổng hợp dây chuyền nhờ polymerase) Kary Mullis cộng phát < /b> minh năm 1985 PCRkỹ ... tế b o chất trước vào b n tế b o Khơng gây tiết Cl- STb kích thích tế b o ruột tiết bicarbonat (HCO3-) STb khơng làm tăng cAMP hay cGMP nội b o kích thích tăng lượng calci nội b o từ ngoại b o...