... tiếnhành tách plasmid chọn dòng xác định trình tự nucleotid 2.2.3 Biến nạp DNA Plasmid vàotếbào E. coli DH5α Vector pCR 2.1 sau gắn đoạn gene kháng thể táitổhợp biến nạp vàotếbàovikhuẩn E. coli ... thể táitổhợp E. coli Do ưu điểm bật nó: tếbào phát triển nhanh rẻ Nhiều vector sử dụng để tách dòng biểu gene tách dòng DNA đưa trực tiếp vào E. coli (biến nạp) vi c nhiễm vào thực thể khuẩn ... soát - Nhóm gene ức chế (oncogene supressors): chịu trách nhiệm ức chế gene sinh trưởng, không cho tếbào tham gia tuỳ tiệnvào chu kì sinh trưởng, Nếu gene bị bị tổn thương, gene sinh trưởng...
... trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNA vikhuẩn cho vàovikhuẩnnhận sau thực tái tổhợp để gắn DNA vàogenvikhuẩnnhậnTải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định Thí dụ: với Prophage tiếp hợpvào ... Bottin, 1998) Yeoung-Seuk Bae Guy R Knudsen, 1999 sử dụng Polyethylene-glycol đồng biến nạp gen tổng hợp β-Glucuronidase (GUS) gen tổng hợp GFP (Fluorescent Protein Genes ) vào nấm Trichoderma harzianum ... đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩnnhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn sinh tiếp hợp đƣợc...
... trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNA vikhuẩn cho vàovikhuẩnnhận sau thực tái tổhợp để gắn DNA vàogenvikhuẩnnhậnTải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định Thí dụ: với Prophage tiếp hợpvào ... Bottin, 1998) Yeoung-Seuk Bae Guy R Knudsen, 1999 sử dụng Polyethylene-glycol đồng biến nạp gen tổng hợp β-Glucuronidase (GUS) gen tổng hợp GFP (Fluorescent Protein Genes ) vào nấm Trichoderma harzianum ... đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩnnhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn sinh tiếp hợp đƣợc...
... biến nạp plasmid vàotếbàovikhuẩnVikhuẩn Ecoli Xử lí CaCl2 Sốc nhiệt 420C 45 giây Cấy lên đĩa Sơ đồ 3.2 Quy trình biến nạp plasmid vàotếbàovikhuẩnEcoliVikhuẩnEcoli sau xử lí CaCl2 ... chèn đoạn DNA vào plasmid pBluescript chuyển plasmid táitổhợpvàotếbào kí chủ Ecoli DH5α 1.3 Nội dung thực - NuôicấytếbàovikhuẩnEcoli DH5α - Thiết lập qui trình chuẩn bị tếbào khả nạp ... DNA táitổhợpvàotếbào Trong trƣờng hợptếbàoEcoli biến nạp có nghĩa đƣa DNA plasmid vàotếbào Biến nạp đƣợc sử dụng với nghĩa rộng hơn, cụ thể đƣa DNA vàotếbào Lần biến nạp vi khuẩn...
... Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Tài liệu tiếng nƣớc 11 Christine Josenhans, Susanne Friedrich and Sebastian Suerbaum,1998 Green fluorecens protein as a novel marker and reporter system in Helicobacter ... Pseudomonas fluorescens through chromosomal integratio of 2,4-diacelphloroglucinol biosynthesis genes.Chinese Science Bulletin 50: 775 – 781 Các Website http://www.emunix.emich.edu/~rwinning/genetics/glossary.htm ... thành cầu tiếp hợp chuyển genvàovikhuẩnnhậnVikhuẩn cho sử dụng hệ thống transposon mini-Tn5 đột biến hai lần mang gen gfp để chuyển gen Đây hệ thống chuyển gen đặc hiệu xâm nhập vị trí gen...
... Bottin, 1998) Yeoung-Seuk Bae Guy R Knudsen, 1999 sử dụng Polyethylene-glycol đồng biến nạp gen tổng hợp β-Glucuronidase (GUS) gen tổng hợp GFP (Fluorescent Protein Genes ) vào nấm Trichoderma harzianum ... Châu Phi Nos promoter “nopaline Synthase” Agrobacterium tumerfaciens hpr gen kháng hydromycine Streptomuces hygroscopius uidA gen “β-glucurnidase” Escherichia coli Reporter gen đƣợc sử dụng để ... (radiochemical) nhƣ CAT, chloramphenicol acetyltranferase, phƣơng pháp quang hóa học (chemiluminescence) nhƣ lux vikhuẩn luc, lucciferase đom đóm Hệ thống marker gen Marker gengen dùng để chọn lọc Các...
... trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNA vikhuẩn cho vàovikhuẩnnhận sau thực tái tổhợp để gắn DNA vàogenvikhuẩnnhậnTải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định Thí dụ: với Prophage tiếp hợpvào ... OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY ************ TRANSFER gfp (GREEN FLUORESCENT PROEIN) GENE INTO Pseudomonas fluorescens BACTERIAL CELL BY TRIPARENTAL ... đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩnnhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn sinh tiếp hợp đƣợc...
... lập với gentếbàoTếbào có khả tiếp nhận vector táitổhợp gọi tếbào chủ Tếbào chủ thƣờng đƣợc chọn lọc cải tạo để tạo thành chủng chủ có kiểu gen đặc tính thuận lợi cho thao tác gen Chủng ... chèn đoạn DNA vào plasmid pBluescript chuyển plasmid táitổhợpvàotếbào kí chủ Ecoli DH5α 1.3 Nội dung thực - NuôicấytếbàovikhuẩnEcoli DH5α - Thiết lập qui trình chuẩn bị tếbào khả nạp ... DNA táitổhợpvàotếbào Trong trƣờng hợptếbàoEcoli biến nạp có nghĩa đƣa DNA plasmid vàotếbào Biến nạp đƣợc sử dụng với nghĩa rộng hơn, cụ thể đƣa DNA vàotếbào Lần biến nạp vi khuẩn...
... polymerase Taq polymerase enzym tham gia vào trình tổng hợp mạch DNA Enzym có khả phân hủy primer bắt cặp vào mạch DNA tạo điều kiện cho vi c bổ sung nucleotide vào mạch DNA Taq polymerase đƣợc ... chúng tạo cấu trúc cho phép DNA tiếp cận với ComEA ComEA thể nhận để DNA vàotếbào ComEC tạo kênh vận chuyển dạng dịch qua DNA vàotếbào (Leendert W.Hamoen cộng sự, 1998) ComFA dạng helycase có ... polymerase (tổng hợp) 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải) 3’ 5’ 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ protease), phần chịu trách nhiệm exonuclease...
... trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNA vikhuẩn cho vàovikhuẩnnhận sau thực tái tổhợp để gắn DNA vàogenvikhuẩnnhậnTải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định Thí dụ: với Prophage tiếp hợpvào ... Bottin, 1998) Yeoung-Seuk Bae Guy R Knudsen, 1999 sử dụng Polyethylene-glycol đồng biến nạp gen tổng hợp β-Glucuronidase (GUS) gen tổng hợp GFP (Fluorescent Protein Genes ) vào nấm Trichoderma harzianum ... đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩnnhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn sinh tiếp hợp đƣợc...
... polymerase Taq polymerase enzym tham gia vào trình tổng hợp mạch DNA Enzym có khả phân hủy primer bắt cặp vào mạch DNA tạo điều kiện cho vi c bổ sung nucleotide vào mạch DNA Taq polymerase đƣợc ... chúng tạo cấu trúc cho phép DNA tiếp cận với ComEA ComEA thể nhận để DNA vàotếbào ComEC tạo kênh vận chuyển dạng dịch qua DNA vàotếbào (Leendert W.Hamoen cộng sự, 1998) ComFA dạng helycase có ... polymerase (tổng hợp) 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải) 3’ 5’ 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ protease), phần chịu trách nhiệm exonuclease...
... polymerase Taq polymerase enzym tham gia vào trình tổng hợp mạch DNA Enzym có khả phân hủy primer bắt cặp vào mạch DNA tạo điều kiện cho vi c bổ sung nucleotide vào mạch DNA Taq polymerase đƣợc ... chúng tạo cấu trúc cho phép DNA tiếp cận với ComEA ComEA thể nhận để DNA vàotếbào ComEC tạo kênh vận chuyển dạng dịch qua DNA vàotếbào (Leendert W.Hamoen cộng sự, 1998) ComFA dạng helycase có ... polymerase (tổng hợp) 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải) 3’ 5’ 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ protease), phần chịu trách nhiệm exonuclease...
... 10µl dịch huyền phù tếbào competent cell đƣợc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, thêm 3µl DNA plasmid táitổhợp vào, đảo nhẹ, giữ lạnh đá 20 phút - Chuyển nhanh eppendorf vào bồn nhiệt 420C, ... Schumann, 1995, Genetic Engineering Techniques Các website http://www.protocol-online.org/prot/Mmolecular_Biology/ http://brahms.chem.uic.edu/~cgpage/protocol/cloning.html A 51 http://core.eai.edu/biol/foruvellm/farwelebpage/Biotech3100/pvector.200.pfd ... QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Các quy trình biến nạp plasmid vàotếbàovikhuẩn B A C Hình 4.1 Biến nạp plasmid vàotếbàovikhuẩn thể tích 10:1.5 (A) Biến nạp với tỷ lệ tếbào khả nạp plasmid theo thể...
... biến nạp plasmid vàotếbàovikhuẩnVikhuẩn Ecoli Xử lí CaCl2 Sốc nhiệt 420C 45 giây Cấy lên đĩa Sơ đồ 3.2 Quy trình biến nạp plasmid vàotếbàovikhuẩnEcoliVikhuẩnEcoli sau xử lí CaCl2 ... dùng enzyme cellulose phân hủy thành tếbào thực vật Sau trộn tếbào trần với DNA táitổhợp với có mặt CaCl2 polyethylenglycol Tiếp theo ta lại nuôitếbào trần môi trƣờng thích hợp để táitạo ... 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải), 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ protease), phần chịu trách nhiệm exonuclease 5’ 3’ Do đó, enzym...
... plasmid vàotếbàovikhuẩn 26 3.3.2 Quy trình biến nạp đoạn DNA vàovikhuẩn E. coly DH5α kiểm tra .27 3.3.3 Xác định mật số vikhuẩn cách đo OD600nm kết hợp với phƣơng pháp đếm khuẩn lạc ... Cơ sở sinh hóa tếbào học hiên tƣợng biến nạp 2.3 Sự biến nạp nhântạovàotếbào E. coly 2.3.1 Khái niệm biến nạp nhântạo 2.3.2 Sự điều hoà gen operon Lac E. coly .5 ... Cách tiếnhành 28 3.3.4 Chuẩn bị tếbào khả nạp .29 3.3.5 Biến nạp plasmid pBluescript vàotếbàovikhuẩn E. coly DH5α phƣơng pháp sốc nhiệt 30 3.3.6 Chọn lọc khuẩn...
... 100mM lạnh vào hòa tan phần kết tủa Thêm 20μl glycerol 98% vào trữ -700C Biến nạp plasmid vào khả nạp Bƣớc 1: Hút 3µl dịch huyền phù tếbào competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, ... đảo nhe eppendorf Bƣớc 5: Ly tâm 12000 vòng/phút 10 phút 200C Thu hết dịch cho vào eppendorf tƣơng ứng Bƣớc 6: Cho vào eppendorf chứa dịch vừa thu đƣợc 1µl RNAse, ủ 370C Bƣớc 7: Cho vào eppendorf ... Wolgang Schumann, 1995, Genetic Enginereering Techniques Các website http://faculty.plattsbuggh.edu/donald-slysh/transformation.html 12.http://www.mun.ca/Biochem/course/4103/topic/transrormation.html...
... plasmid ta đƣợc plasmid táitổhợp Biến nạp plasmid táitổhợpvàovikhuẩn E. coly DH5α khả nạp, thu đƣợc kết nhƣ sau 52 a b Hình 4.16 Kết cấyvikhuẩn biến nạp plasmid táitổhợp với đoạn DNA 629 ... đƣợc cắt với hai enzym BamHI HindIII Hai enzym có trình tự nhận biết nằm trình tự nhận biết enzym EcoRV, cắt mẫu plasmid táitổhợptạo dạng thẳng mang đoạn DNA đƣợc chèn vào theo sơ đồ cắt vùng ... tạo đầu cho đoạn DNA enzym Klenow Fragment không kiểm tra đƣợc phƣơng pháp điện di gel agarose, kết đƣợc kiểm tra chèn vào plasmid (đã đƣợc cắt tạo đầu bằng) biến nạp vàovikhuẩn Kết diện di (hình...