... phươngpháp điện di gel polyacrylamid điều kiện biến tính để băng đoạn oligonucleotid có kích thước khác - Thu kết phươngpháptự ghi, chụp ảnh, làm phim phóng xạ tự ghi cho gel điện di đọc trình ... riêng biệt (ddATP, ddCTP, ddTTP) điện di khác Các băng ADN xácđịnh nhờ việc gắn đồng vị phóng xạ vào mồi, ddNTP Dựa vào để đọc trìnhtự ADN Các bước tiến hành: - Cắt ADN enzyme cắt giới hạn, ... Ví dụ: Nếu ta thêm ddCTP vào hỗn hợp phản ứng tổng hợp ADN trình tổng hợp chỗi polipeptid dừng lại vị trí C Nếu thêm ddGTP vào hỗn hợp gặp ddGTP chuỗi polynucleotit...
... phươngpháp vừa kể dùng để xácđịnhtrìnhtự DNA tạo dòng Sự đời phươngpháp PCR cho phép xácđịnh trực tiếp trìnhtự DNA khuyếch đại PCR không qua tạo dòng 2 -Phương pháp PCR dùng xácđịnhtrình ... PCR dùng xácđịnhtrìnhtựnucleic acid Nguyên tắc phươngpháp dựa phối hợp phươngpháp PCR phươngpháp sử dụng dideoxynucleotide .Phương pháp sử dụng vùng cần xácđịnhtrìnhtư biết trước ; ứng ... xạ tự ghi III-Các phươngpháp cải biên từphươngphápSanger Trong thực nghiệm, việc sử dụng phươngpháp thống nêu đòi hỏi thao tác phức tạo phải tạo dòng trở lại đoạn DNA cần xácđịnhtrình tự...
... xuất cung cấp • Sau hòa tan kết tủa tiến hành điện di gel polyacrylamid Kết thu nhờ máy đọc trìnhtự sử lí phần mềm chuyên dụng Những phần mềm cung cấp liệu in từ máy tính ...
... method III.Xỏc nh trỡnh t bng phng phỏp t ng Nguyên tắc chung giải trìnhtự gen tự động dựa theo sở phươngphápSanger Nhưng : Quá trình tổng hợp AND thực nhờ kỳ thuật PCR Mỗi ddNTP đánh dấu loại ... đoạn ADN tổng hợp phản ứng Điện di riêng rẽ kết phản ứng gel Làm phim phóng xạ tự ghi cho gel điện di đọc trìnhtự nucleotit điện di đồ mẫu từ cực âm gel lên cực dương theo nguyên tắc: đoạn ADN ... chúng nhờ đánh dấu phóng xạ Dựa vào để đọc trìnhtự ADN Nhõn t kt thỳc c hiu c s dng l cỏc dideoxynucleotit (phng phỏp dideoxynucleotid) Phng phỏp Sanger 2.Cỏch tin hnh: Cắt ADN enzym cắt giới...
... Xacdinhtrinh ty gen 18S-rDNA Trinh ty gen 18S-rDNA dupc xacdinh theo phuomg phap tdng hop cuaSanger va dong tac gia (1977) vdi bp kit xacdinhtrinh ty Bigdye terminator v3.1 va may dpe trinh ... thao Da dang sinh hpc Bac Truang San (lan thii hai): 61-64 Nha xuat ban Dai hpc Quoc gia Ha Npi Sanger F, Nicklen S, Coulson AR (1977) DNA sequencing with chain-terminating inhibitors Proc Natl...
... Nguyên tắc phươngpháp giải trìnhtự theo Sanger Giải trìnhtự đoạn oligonucleotide theo phươngpháp enzyme học Các phươngpháp cải biên từphươngphápSanger Xácđịnhtrìnhtự máy tự động: Trong ... Giải trìnhtự đoạn oligonucleotide theo phươngpháp hóa học Phươngpháp enzyme học Sanger thông qua việc sử dụng dideoxynucleotide Dựa vào tổng hợp nhờ enzyme DNA polymerase mạch bổ sung cho trình ... 2 Phươngpháp hóa học (Maxam Gilbert) Dựa vào thủy giải đặc trưng phân tử DNA cần xácđịnhtrìnhtựphươngpháp hóa học Trước hết DNA đánh dấu P32 đầu...
... cho giải trìnhtựtrình bày phần phươngpháp nghiên cứu Quá trình giải trìnhtự thực máy giải trìnhtựtự động ABI 3100 Sau giải trìnhtự gen mã hóa kháng nguyên HA virus H5N1, trìnhtự phân tích ... tốc độ tối đa phút 27 2.2.10 Xácđịnhtrìnhtự gen máy tự động Nguyên tắc: Dựa nguyên tắc Sanger có sử dụng dideoxynucleotit Trong kỹ thuật xácđịnhtrìnhtự máy tự động, người ta không đánh ... đọc trìnhtự 38 3.5 Kết xácđịnhtrìnhtự Sử dụng DNA plasmit cho phản ứng PCR giải trìnhtự với việc sử dụng sinh phẩm BigDyeR Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit Applied Biosystems, quy trình...
... người 2.4 Nguyên tắc đọc trìnhtự 2.4.1 Nguyên tắc phƣơng pháp đọc chuỗi mã SangerPhươngpháp đọc chuỗi mã Sanger dựa tổng hợp sợi DNA bổ sung sợi cần xácđịnhtrìnhtự Trong phản ứng tổng hợp ... 19 2.4.3 Đọc trìnhtự sản phẩm PCR Có hai phươngpháp đọc trìnhtự sản phẩm PCR: Một là, người ta tạo dòng phụ (subclone) sản phẩm PCR sau đọc trìnhtự subclone Hai là, đọc trìnhtự sản phẩm PCR ... Bửu Thanh, 2003) 2.4.2 Nguyên tắc giải trìnhtự gen máy sequencer Nguyên tắc chung máy giải trìnhtự gen tự động dựa sở phươngpháp dideoxy Máy đọc trìnhtự hai mạch đơn, phát giảm nhầm lẫn kỹ...
... PRISM 3100 Avant Genetic Analyzer 3.3 XÁCĐỊNHTRÌNHTỰ NUCLEOTIT CỦA MỘT SỐ ĐOẠN TRONG GENOME CỦA RGSV Các trìnhtự RGSV thu đƣợc máy xácđịnhtrìnhtựtự động ABI PRISM® 3100 Avant Genetic ... khử ion (3,5µl ) Tổng thể tích 10µl 2.3.10 Xácđịnhtrìnhtự so sánh trìnhtự gen thu đƣợc với trìnhtự tƣơng ứng GenBank Tách dòng xácđịnhtrìnhtự gen: Sản phẩm PCR đƣợc gắn vào vector tách ... gen 39 3.3 XÁCĐỊNHTRÌNHTỰ NUCLEOTIT CỦA MỘT SỐ ĐOẠN TRONG GENOME CỦA RGSV 40 3.4 SO SÁNH TRÌNHTỰ GEN CP-RGSV CỦA HAI TỈNH NINH THUẬN VÀ BÌNH THUẬN VỚI CÁC TRÌNHTỰ TƢƠNG ỨNG...
... ion vô trùng 2.3.8 XácđịnhtrìnhtựnucleicTrìnhtự DNA xácđịnhphươngpháp enzyme Sanger Cơ sở phương pháp: dựa vào tổng hợp mạch bổ sung với đoạn DNA mạch đơn cần xácđịnh nhờ enzyme DNA-polmerase ... vị trí ( trìnhtự ) xácđịnh Do đặc tính RE khả nhận biết cắt trìnhtựxácđịnh phân tử DNA nên dựa vào khả này, người ta chia chúng làm ba loại: - Loại I: Khi enzyme nhận biết trình tự, di chuyển ... thư vú Vì vậy, trình bày phần tách dòng xácđịnhtrìnhtự nucleotid gene mã hoá kháng thể tái tổ hợp kháng lại lympho bào tách từ bệnh nhân ung thư vú Để tách dòng xácđịnhtrìnhtự gene mã hóa...
... ADN Xácđịnhtrìnhtự đoạn gen vùng siêu biến I ADN plasmit sau kiểm tra khẳng định gắn sản phẩm PCR gửi cho “BIOSERVICE UNIT”, Bangkok, Thailand để xácđịnhtrìnhtự Kết xácđịnhtrìnhtự nucleotid ... từ mẫu tóc chưa gửi xácđịnhtrình tự) sau: So sánh trìnhtự nucleotid sản phẩm PCR mà thu với trìnhtự vùng siêu biến mtADN Anderson, 1981 công bố thu kết sau: REF: Trìnhtự nucleotid vùng siêu ... tái tổ hợp tiến hành theo Sambrook cộng [10] Trìnhtự đoạn gen vùng siêu biến I Công ty “BIOSERVICE UNIT”, Bangkok, Thailand xácđịnh theo phươngphápSanger KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Tách chiết ADN...
... tiêu xácđịnh cho trìnhtự base toàn phần gene Việc xácđịnhtrìnhtự ADN cho phép tìm hiểu chất đột biến gene, chức gene, mức độ tương tự gene với gene khác biết Kỹ thuật xácđịnhtrìnhtự nucleotide ... nucleotide ADN cách sử dụng phươngpháp dideoxy Một kỹ thuật sử dụng rộng rãi để xácđịnhtrìnhtự ADN phươngpháp dideoxy (dideoxy method) Frederick Sanger đưa Phươngpháp thực cách sử dụng dide- ... tả đỉnh màu khác nhau, trìnhtựđỉnh màu đồ thị cho phép đọc trìnhtự đoạn ADN Một đoạn khoảng 500 bp 64 người khác phân tích gel vòng từ đến Phươngpháp đọc trìnhtựtự động thực cho việc đánh...
... PRISM 3100 Avant Genetic Analyzer 3.3 XÁCĐỊNHTRÌNHTỰ NUCLEOTIT CỦA MỘT SỐ ĐOẠN TRONG GENOME CỦA RGSV Các trìnhtự RGSV thu đƣợc máy xácđịnhtrìnhtựtự động ABI PRISM® 3100 Avant Genetic ... khử ion (3,5µl ) Tổng thể tích 10µl 2.3.10 Xácđịnhtrìnhtự so sánh trìnhtự gen thu đƣợc với trìnhtự tƣơng ứng GenBank Tách dòng xácđịnhtrìnhtự gen: Sản phẩm PCR đƣợc gắn vào vector tách ... gen 39 3.3 XÁCĐỊNHTRÌNHTỰ NUCLEOTIT CỦA MỘT SỐ ĐOẠN TRONG GENOME CỦA RGSV 40 3.4 SO SÁNH TRÌNHTỰ GEN CP-RGSV CỦA HAI TỈNH NINH THUẬN VÀ BÌNH THUẬN VỚI CÁC TRÌNHTỰ TƢƠNG ỨNG...
... thuật xácđịnhtrìnhtự cao (highthroughput) đột ngột làm giảm chi phí xácđịnhtrìnhtự ADN, đem tới hy vọng cho nhiều nhà nghiên cứu thực việc với giá thành 1000 đô la [95] Mỹ Lượng lớn trìnhtự ... gián đoạn chuỗi phươngpháp sử [93] dụng thường lệ Với kỹ thuật này, nhà khoa học nghiên cứu trìnhtự phân tử liên quan tới nhiều bệnh di truyền người Khi xácđịnhtrìnhtự trở nên đỡ tốn ... toán, nhà nghiên cứu xácđịnh gen nhiều sinh vật cách liên kết trìnhtự nhiều đoạn khác (quá trình gọi "lắp ráp gen" -genome [94] assembly) Những kỹ thuật sử dụng để xácđịnh gen người, hoàn...
... expand) Tự động hoá chuẩn bị mẫu Xácđịnhtrìnhtự Maxam-Gilbert Các phươngphápxácđịnhtrìnhtự DNA khác Các chiến lược xácđịnhtrìnhtự với mức độ lớn Xácđịnhtrìnhtự RNA Xácđịnhtrìnhtự ... tử vừa xácđịnhtrìnhtựXácđịnhtrìnhtự DNA Tổng quan Trong thuật ngữ di truyền học, xácđịnhtrìnhtự DNA trìnhxácđịnh trật tự nucleotide đoạn DNA Hiện nay, hầu hết xácđịnhtrìnhtự DNA ... tiềm áp dụng cho sản phẩm dịch vụ hữu ích XácđịnhtrìnhtựSanger Part of a radioactively labelled sequencing gel Phươngphápxácđịnhtrìnhtự gốc Sanger Dye terminator sequencing View of the...