... CứU3.1. Đối tượng , vật liệu , địa điểm và thời gian nghiên cứu 3.1.1. Đối tượng nghiên cứu Gồm một số tổ hợp lai F1 , quần thể F2 3.1.2. Vật liệu nghiên cứu * Thí nghiệm trong phòng:Thiết bị :+ Máy PCR , máy chạy điện di , máy chụp ảnh điện di , máy li tâm , máy votex , tủ lạnh , lò vi sóng . + Các loại ống effendof , các loại pipet và đầu tiếp đi kèm . Thành phần cho phản ứng PCR + Cặp mồi phát hiện gen bất dục đực tms2 theo M.T.Lopez và cộng sự (2003)có trình tự là : RM11_F:5’TCTCCTCTTCCCCCGATC3’ RM11_R:5’ATAGCGGGCGAGCTTAG3’Hóa chất chạy PCR : dNTD , MgCl2 , Taq ADN polymerase , PCR mastermix , nước cất Hóa chất dùng để chiết tách ADN hệ gen : Để chọn tạo lúa lai hai dòng thành công thì dòng TGMS phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho ưu thế lai cao. Hiện nay các dòng TGMS đang được sử dụng như:103S,T1S96,64S,287S,36S2,Kim 76S,Pair 64S và 25S. Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS(tms1, tms2, tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó,gen tms2 có ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các dòng,giống lúa triển vọng để tạo dòng TGMS tốt,có khả năng phối hợp cao, tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế lai cao như TH33,Việt Lai 20,TH34,…Thành phần Nồng dộ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 50ml dung dịch TE làm việcTrisHCl(pH=8) 1M 10mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 1mM 0,1mlH2O 49,4mlThành phầndungdịch đệm TE•Hóa ... di phát hiện sản phẩm PCR trên gel agarose 1 %Thành phần Nồng độ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 10ml dung dịch chiết táchTrisHCl(pH=8) 1M 50mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 0,25mM ... PCRBước 6:Cho 600 µl hỗn hợp Chlorofom : Isoamylalcohol(24:1),lắc đều va ly tâm 7 phút với tốc độ 13000 vòng/phút rồi hút phần dungdịch ở trên vào ống eppendorf mới đã đánh dấu tương ứng. Bước 7: Cho 800 µl Ethanol(96%)(hoặc 600 µl Isopropanol),trộn đều và ly tâm 7 phút với tốc độ 13000 vòng/phút.Sau đó đổ phần dungdịch phía trên giữ lại phần kết tủa dưới đáy ống nghiệm. Bước 8: Rửa kết tủa bằng Ethanol 70%,làm khô tự nhiên ở nhiệt độ phòng bằng cách úp ngược ống nghiệm lên giấy thấm. Bước 9:Hòa tan kết tủa bằng 50 µl dungdịch TE rồi bảo quản ở nhiệt độ 20oC+Kiểm tra độ tinh sạch ADN bằng cáchđiện di trên gel agarose 1%.+Tiến hành phản ứng PCR với cặp mồi RM11 cho gen tms2. Bằng việc sử dụng ADN marker(chỉ thị phân tử) thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút ngắn .Các chỉ thị liên kết chặt với các tính trạng kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn vật liệu nghiên cứu. Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các dòng TGMS mới”....
... tính chất ion cao sẽ làm cho dungdịch đệm trở nên năng động rất nhiều. Do đó nồng độ Mg2+ cao hay thấp đều tạo ra những ảnh hƣởng rất lớn. Nồng độ Mg2+ cao sẽ làm cho phântử DNA mạch ... trở nên phổ biến trong sinh học phân tử, đem lại một cuộc cách mạng trong công nghệ di truyền học phân tử, đánh dấu một bƣớc tiến cực kỳ quan trọng cũng nhƣ các khám phá trƣớc đây về enzym ... kết quả chính xác. Mặt khác, sự phân tích thành phần và trật tự nucleotid trên phântử DNA bằng phƣơng pháp PCR còn có ý nghĩa to lớn trong công tác phân loại các loài sinh vật. Thực chất đây...
... PCRThành phần Nồng dộ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 50ml dung dịch TE làm việcTrisHCl(pH=8) 1M 10mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 1mM 0,1mlH2O 49,4mlThành phầndungdịch đệm TE•Hóa ... TE3.1.3. Địa điểm nghiên cứu:tại phòng công nghệ sinh học ứng dụng và khu thí nghiệm đồng ruộng khoa nông học – Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội . 3.1.4. Thời gian nghiên cứu : Đề tài được thực hiện từ tháng 1/2010 đến tháng 5/2010. Bằng việc sử dụng ADN marker(chỉ thị phân tử) thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút ngắn .Các chỉ thị liên kết chặt với các tính trạng kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn vật liệu nghiên cứu. Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các dòng TGMS mới”.PHầN ... Thành phần Nồng độ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 10ml dung dịch chiết táchTrisHCl(pH=8) 1M 50mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 0,25mM...
... thu nhận đƣợc các phân tử này ở trạng thái nguyên vẹn tối đa, ít bị phân hủy do các tác nhân cơ học (phân tử bị gãy do nghiền, lắc mạnh) hay hoá học (phân tử bị thủy giải do các enzym (enzym ... phân tách của phântử acid nucleotide: Gel agarose và gel polyacrylamide. Gel agrose Lỗ có đƣờng kính trung bình cho phép phân tách cácphântử DNA sợi đôi, kích thƣớc 300-10.000 bp. Các ... gắn xen vào giữa các base của phântử DNA và phát huỳnh quang dƣới tia tử ngoại. Điều này cho phép phát hiện vị trí các đoạn DNA trên gel. Đối với gel polyacrylamide: Cácphântử DNA thƣờng đƣợc...
... cập vào dịch vụ tin tức so với cácdịch vụ khácVới tỷ lệ lượng truy cập vào dịch vụ tin tức và vào trang điện tử nàythường xuyên thay đổi như vậy nhưng nhìn chung lượng truy cập vào dịch vụtin ... tỷ lệ cao hơn so với lượng truy cập vào cácdịch vụ kháctrong trang điện tử này. Trung bình lượng truy cập vào dịch vụ tin tức chiếmkhoảng 32.1249% so với lượng truy cập vào trang điện tử này. ... cập vào dịch vụ tin tức Trang Xa lộ mobile từ thời điểm nghiên cứu số liệu cho tới nay có 9 dịch vụ cung cấp thông tin như là dịch vụ tin tức, dịch vụ tình yêu, dịch vụtìm địa chỉ, dịch vụ...
... mới- Nếu cho bay hơi dung môi khỏi dungdịch của các hợp chất caophântử thì thu được màng mỏng. - Khi cho dungdịch đậm đặc của dungdịchcác hợp chất caophântử chảy qua các lỗ nhỏ có thể ... khi đến hàng triệu) thuộc loại các hợp chất caophân tử. Phântử của các hợp chất caophântử (còn gọi là đại phân tử) bao gồm hàng trăm, hàng ngàn các nguyên tử liên kết với nhau bằng lực ... chất caophân tử, chỉ có nước và không khí trên trái đất là phổ biến rộng rãi như các hợp chất caophân tử& quot;.1.2. tính chất chung của các hợp chất caophântử 1.2.1. Khối lượng phân tử Đối...
... ra Các em hãy quan sát bạnlàm thí nghiệm sau, từ đónêu hiện tượng và viếtphương trình phản ứng Dung dịch NaOH và dungdịch HClđều không màu, làm sao biết phảnứng có xảy ra hay không? Nêu cáchlàm? Các ... PbSO44) S2-+ 2H+Ỉ H2S Các em quan sát thí nghiệm dd NaClcho tác dụng với dd Ba(NO3)2. Viếtphản ứng dưới dạng phântử và ionPHẢN ỨNG TRAO ĐỔI TRONG DUNGDỊCHCÁC CHẤT ĐIỆN LIGV:Trần ... với dd HClHiện tượng ? Các em hãy cho biết một số phảnứng mà các em đã được học từtrước đến nay ?1.PHẢN ỨNG TẠO CHẤT KẾT TỦA* Dungdịch BaCl2tác dụng với dungdịch Na2SO4Hiện tượng:...
... TRONG PHÁT TRIỂN PHÔI 2 NỘI DUNG TRÌNH BÀY 1.GIỚI THIỆU CÁC BẤT THƯỜNG GEN TRONG UNG THƯ 2.PHÁT HIỆN NGUY CƠ DI TRUYỀN CỦA UNG THƯ 3.PHÁT HIỆN CÁCĐÍCH NHẮM PHÂNTỬ CHO ĐIỀU TRỊ UNG THƯ 40 ... AC, NEJM 2008) CÁC NHÓM GEN TRONG QUÁ TRÌNH UNG THƯ 44 1.GIỚI THIỆU CÁC BẤT THƯỜNG GEN TRONG UNG THƯ 2.PHÁT HIỆN NGUY CƠ DI TRUYỀN CỦA UNG THƯ 3.PHÁT HIỆN CÁCĐÍCH NHẮM PHÂNTỬ CHO ĐIỀU ... Hóa mô miễn dịch (IHC: Immunohistochemistry) UNG THƯ VÚ: KHUẾCH ĐẠI GEN HER2 CÁC GEN MẪN CẢM VỚI UNG THƯ VÚ 11 (Ma W, CA Cancer J Clin 2009;59;111-137) THUỐC NHẮM TRÚNG ĐÍCHPHÂNTỬ (Wiman...
... nghin nh trong 800l dung dch chit tỏch DNA (tớnh cho 10ml hn hp dung dch: 50mM Tris-HCl pH = 8.0; 0.25mM EDTA pH = 8.0; 300mM NaCl; 1% SDS cũn li l H2O), thờm 400l dung dch 25:24:1 (Phenol: ... ln kháng); 4-9. Các cá th trong t hp BB5/R23 ln lưt t cây 1-6; 10-18. Các cá th trong t hp BB5/Qu 99 ln lưt t cây 1-9 i vi qun th dòng m, 11 qun th phân tích chn ưc ... không cha gen) 3-11. Các cá th trong qun th BB21/c thanh cây t 1-8 Bảng 1. Tổng hợp kết quả chọn lọc gen kháng bạc lá ở các quần thể dòng bố Tổ hợp Số cây phân tích Gen Xa4 Gen...
... TRÍ MỒI TRONG PCR 2 NỘI DUNG TRÌNH BÀY 1.GIỚI THIỆU CÁC BẤT THƯỜNG GEN TRONG UNG THƯ 2.PHÁT HIỆN NGUY CƠ DI TRUYỀN CỦA UNG THƯ 3.PHÁT HIỆN CÁCĐÍCH NHẮM PHÂNTỬ CHO ĐIỀU TRỊ UNG THƯ 48 ... NEJM 2008) CÁC NHÓM GEN TRONG QUÁ TRÌNH UNG THƯ 38 Điện di GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI DNA ĐỂ XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN Tinh sch sản phẩm Giải trình tự DNA ỨNG DỤNG SINH HỌC PHÂNTỬ TRONG CÁC BỆNH ... receptor (+): 60-70% 2. HER2(+): 20-30% 3. Đt bin gen BRCA1/2: 5-10% 29 UNG THƯ VÚ: CÁC DẤU ẤN PHÂNTỬ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 PCR 1 PCR 2 PCR 3 PCR 4 PCR 5 11 12 PCR 6 PCR 7 13 14 15 16...
... dụng phương pháp phầntử hữu hạn để xác định phân bố nhiệt độ trên tiết diện thép theo các bước sau: - Bước 1: Thực hiện chia lưới phần tử, đánh số thứ tự nút trên từng phầntử - Bước 2: Lập ... độ và xác định tọa độ các nút trong từng phầntử - Bước 3: Tính ma trận dẫn nhiệt của từng phầntử ke: + Tính ma trận Jacôbi của phầntử theo công thức (11) + Tính các ma trận ⎟⎟⎠⎞⎜⎜⎝⎛31,31B; ... toán sử dụngphầntửtứ giác Khảo sát một phầntửtứ giác tổng quát như hình 2. Phầntử có 4 nút (1,2,3,4) lần lượt được đánh số ngược chiều kim đồng hồ. Hình 2. Mô hình phầntửtứ giác KÕT...
... một chất trong dungdịch ngƣời ta tiến hành nhƣ sau: Lấy chính xác thể tích của 1 dungdịch chƣa biết nồng độ (dung dịch X - dungdịch định phân) cho tác dụng vừa đủ với dungdịch của 1 chất ... yêu cầu phân tích. - Dungdịch xác định: Là dungdịch đƣợc tạo ra từ mẫu xác định. - Chuẩn độ: Sự thêm từtừdungdịch chất chuẩn (từ trên burette) vào thể tích đã biết trƣớc dungdịch chất ... của 1 chất khác đã biết nồng độ (dung dịch C - dungdịch chuẩn). Căn cứ vào thể tích tiêu tốn và nồng độ của dungdịch R mà ngƣời ta tính ra dungdịch X. 1.3 Các phƣơng pháp chuẩn độ - Phƣơng...