TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM MÔN VI SINH THỰC PHẨM BÁO CÁO ĐỀ TÀI -o0o - ĐỘC TỐ NẤM MỐC AFLATOXIN GVHD: TS.VŨ THỊ LÂM AN Thành viên: 11156026 Cao Thị Thùy Dung 11156034 Nguyễn Thị Ngọc Hiệp 11156057 Nguyễn Thị Sâm 11156066 Ninh Phương Thúy 11156068 Trần Thị Anh Thư 11156070 Trần Diễm Hoài Thương Độc tố nấm mốc Aflatoxin MỞ ĐẦU Trên giới nay, việc nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc độc tố nấm lương thực, thực phẩm vấn đề quan trọng nhằm bảo vệ sức khoẻ người vật nuôi Độc tố aflatoxin chủ yếu loài vi nấm Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus tạo ra, độc tố nguy hiểm thường nhiễm nông sản, gây độc cho người gia súc, gây tác dụng cấp tính, gây tổn thương gan (ung thư gan…), gây quái thai, gây đột biến,… chí với liều lượng cao dẫn tới tử vong Trong nhiều loại aflatoxin tự nhiên aflatoxin B1 coi chất độc nguy hiểm Mặc dù diện Aspergillus flavus lúc gắn liền với việc tồn aflatoxin với hàm lượng gây độc, thể nguy lớn việc nhiễm aflatoxin Ở nước ta, với đặc điểm khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, độ ẩm khơng khí thường cao, thời vụ canh tác, thu hoạch thường rơi vào mùa mưa phương tiện thu hoạch, phơi sấy nông sản kém, kho chứa không đảm bảo khô thoáng mát điều kiện thuận lợi cho nấm mốc phát triển gây nhiễm độc tố cho thực phẩm thức ăn chăn nuôi I Tổng quan Aflatoxin Lịch sử phát triển - 1924: Shofiel cộng phát loại độc tố sản sinh từ nấm mốc gây dịch bệnh cho gia súc -1960: vụ dịch lớn gây chết hàng loạt gà tây nước Anh Chỉ lâu sau, nhà khoa học tìm thủ phạm chất có “màu xanh da trời” đặt tên Aflatoxin - 1961: Người ta tìm chất hóa học chất độc - Aflatoxin tinh thể trắng, bền nhiệt, không bị phân hủy nhiệt độ thông thường (trên 120 C, đun 30 phút mơi trường kiềm tác dụng độc) tồn thực phẩm mà khơng cần có mặt nấm mốc tương ứng, bền với men tiêu hóa - Khơng bền ánh sáng mặt trời tia tử ngoại nên việc khử độc có nhiều biện pháp -Hiện nay, tìm thấy 18 loại Aflatoxin khác nhau, có loại thường gặp là: AFB1 (B1), AFB2 (B2), AFG1 (G1), AFG2 (G2) Trong Aflatoxin B1 chiếm nhiều nông sản, gây tác hại nhiều nhất, gây ngộ độc nhanh phổ biến Trang 2/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Nguồn gốc Aflatoxin sinh chủ yếu loại nấm: Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus Aspergillus parasiticus Aspergillus flavus Trang 3/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Là nấm mốc màu xanh vàng môi trường nuôi cấy, giống giống aspergillus khác chúng sinh bào tử đính Các tế bào bào tử đính túi sinh dạng nấm đính - Không phải tất chủng Aspergillus flavus sinh độc tố Aflatoxin, 73% có khả sinh độc tố, 23% sản sinh Aflatoxin mức cao - Một số lồi nấm mốc khác có khả sinh Aflatoxin với lượng : Penicillium puberulum Bai, Aspergillus tamariikita, Aspergillus niger tiegh, Aspergillus ostiamis wehmen, Aspergillus ruper… - Khả sinh độc tố Aflatoxin phụ thuộc vào yêu tố chủng nấm mốc, nhiệt độ, chất, độ ẩm chất môi trường - Nhiệt độ thích hợp để sản sinh Aflatoxin chủng nấm mốc từ 25-28 0C Nếu ni cấy Aspergillus flavus 450C khả sản sinh Aflatoxin bị ức chế - Độc tính Aflatoxin cao gấp 10 lần acid hydroxyanic (HCN) gấp 68 lần Arsen (As) Bảng : Các sản phẩm nhiễm Aflatoxin Các hạt ngũ cốc Ngơ,thóc,gạo,lúa mì Hạt có dầu Lạc,dừa,đậu tương,hướng dương Củ Sắn,khoai tây… Sữa Sữa tươi,pho mat… Thủy sản Cá,tôm… Sản phẩm lên men Bia,nước giải khát,rượu vang… Trang 4/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Trang 5/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Các Aflatoxin có khả phát huỳnh quang hấp thụ tia tử ngoại mức độ khác - Aflatoxin B1 B2 : xanh tím - Aflatoxin G1 G2: màu xanh lục  Cục quản lý Thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ qui định hàm lượng tối đa Aflatoxin thức ăn gia súc sau: • Bị giống, heo giống, gà trưởng thành khơng q 100 ppb • Heo thịt giai đoạn vỗ béo: 200 ppb • Bị thịt: 300 ppb • Bị sữa gia súc non: 20 ppb  Quy định Việt Nam-giới hạn tối đa (ML) ML (microgam/kg) Tiêu chí Đối với Aflatoxin B1 thực phẩm nói chung 15 Đối với Aflatoxin B1, B2, G1, G2 thực phẩm nói chung 0.5 Đối với Aflatoxin M1 sữa sản phẩm sữa + kg thức ăn cần nhiễm miligam (với lượng đủ dính đầu móng tay) đủ làm hỏng gan “Theo PGS.TS Đinh Duy Kháng, điều chưa xác Chất Aflatoxin độc chất cực độc nên tính lượng microgam tức phần triệu gam Nếu kg dính miligam q nhiều!” Q trình lây nhiễm Aflatoxin: - Trong điều kiện khí hậu thuận lợi (nóng ẩm), nấm mốc sản sinh độc tố vi nấm nhiễm vào thức ăn.Con người gia súc ăn phải thức ăn nhiễm Aflatoxin có triệu chứng nhiễm độc cấp tính triệu chứng mãn tính - Việc nhiễm Aflatoxin phụ thuộc nhiều vào tuổi, giới tính, lồi, tình trạng dinh dưỡng, mức độ tần số tiếp xúc  Các giai đoạn mà nấm nhiễm vào thực phẩm: • Nhiễm đồng lúc trước thu hoạch: Điều nhận biết rõ bắp chín khơ ngồi đồng, chưa thu hoạch kịp, gặp mưa có độ ẩm cao, loại nấm mốc có nguồn gốc từ đất công vào nông sản Muốn khắc Trang 6/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin phục tình trạng cần phải thu hoạch kịp thời, khơng nên để lâu ngồi đồng Sau thu hoạch phải phơi sấy cho khơ đến độ ẩm cịn 13% đem bảo quản • Nhiễm kho dự trữ thức ăn: Nguyên nhân chủ yếu độ ẩm thức ăn cao (>14%) đem dự trữ độ ẩm khơng khí kho cao làm cho hấp thu ẩm độ trở lại vào nguyên liệu, chênh lệch nhiệt độ ngày đêm làm cho nước ngưng tụ bề mặt lớp thức ăn gây tượng ẩm cục bộ, tạo điều kiện tốt cho nấm phát triển Người ta có quan sát vùng trung đơng với silo dự trữ bắp đại bị nhiệm nấm mốc, nguyên nhân ban ngày nhiệt độ mơi trường lên cao, có đến 40oC nên nước ngun liệu bay bão hịa khơng khí silo, đêm đến nhiệt độ hạ xuống thấp, nước ngưng tụ lớp bắp làm cho bị nhiễm nấm độc Muốn khắc phục tình trạng phải thường xun hút ẩm thơng thống kho • Nhiễm trùng chuồng ni gia súc, gia cầm: Trong thực tế nuôi dưỡng gia súc gia cầm, thức ăn rơi đổ nhiều xuống chuồng, thức ăn bị ẩm đọng lại nhiều máng lâu ngày môi trường thuận lợi để nấm mốc phát triển • Nhiễm vào thực phẩm để dành gia đình với thời gian dài Độc tính Aflatoxin Các triệu chứng nhiễm độc Aflatoxin nghiên cứu thông qua vụ nhiễm độc tự nhiên qua thử nghiệm động vật • Ở lợn :đầu tiên phá hủy gan,sau đến quan khác có liên quan,giảm tốc độ lớn hiệu sử dụng thức ăn thức ăn nhiễm Aflatoxin mức 100-400 ppb • Lợn con: nhạy cảm với Aflatoxin, phá hủy gan, rối loạn tuần hoàn máu chế (nếu vượt 400 ppb) • Lợn nái: sẩy thai thai chết Aflatoxin chất độc nguy hiểm, làm thay đổi mặt sinh học, phá hủy hệ thống miễn dịch Trong Aflatoxin B1 mạnh nhất, sau đến G1, B2, G2 Vận chuyển Aflatoxin thể bị nhiễm độc nhanh Chỉ sau 48h, phát thấy 85% lượng Aflatoxin chuyển hóa sữa tiết nước tiểu động vật cho ăn liều 0,50 mg/kg Aflatoxin Không phát Aflatoxin sau ngày sữa sau ngày phân nước tiểu a Nhiễm độc cấp tính Ở người : Nơn ói, đau bụng, sưng phổi, co giật, hôn mê, tử vong phù não tim, gan, thận tích mỡ… Mức độ nhiễm độc Aflatoxin thay đổi theo thời gian tùy vào tính mẫn cảm vật thử nghiệm.Gan vật bị nhiễm có màu nhợt sưng to Trang 7/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Có thể hoại tử mơ gan,chảy máu số gia cầm Mức độ nhẹ hơn, quan sát thấy tượng tụ máu phổi tăng sinh tế bào biểu mô ống dẫn mật b Nhiễm độc mãn tính: - Thể đầu tiên: chán ăn, chậm lớn, sụt cân… - Có tính di truyền theo kiểu: gây ung thư, quái thai, gây đột biến -Gây ung thư: Có độc tính cao gan xem tác nhân gây ung thư gan người động vật Aflatoxin B1 phân tử lực mạnh với thành ruột, có trọng lượng phân tử thấp nên dễ dàng hấp thu sau ăn Khi đến ruột non, nhanh chóng hấp thu vào tĩnh mạch, ruột non, tá tràng, sau tập trung nhiều gan Tác động bệnh lý Aflatoxin có tính cộng hưởng với tác nhân khác HBV, độc tố di truyền Các nghiên cứu việc đồng phơi nhiễm với virus viêm gan B (HBV) làm tăng nguy ung thư gan gấp 60 lần so với HBV đơn lẻ - GS dịch tễ học Pauline Jolly cộng phát aflatoxin làm tăng đáng kể lượng HIV máu bệnh nhân Nhóm nghiên cứu khảo sát 314 trường hợp dương tính với HIV chia thành nhóm, theo mức độ bị phơi nhiễm nhiều aflatoxin Kết cho thấy nhóm bị nhiễm aflatoxin nhiều có khuynh hướng phát triển HIV cao gấp 2,6 lần so với nhóm bị nhiễm aflatoxin Trang 8/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Gan nhiễm mỡ xơ gan Ung thư gan Trang 9/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Ngoài gan, quan khác phổi, thận, túi mật, hệ thống thần kinh… bị ảnh hưởng Gây viêm sưng nặng nề dẫn đến hoại tử tổ chức nội tạng Gây quái thai: Những thí nghiệm Elis Dipaolo năm 1976 chứng minh việc tiêm Afatoxin B1 vào chuột theo đường ổ bụng với liều mg/kg thể trọng gây dị tật thai thai chết Gây đột biến gen: có liên quan phơi nhiễm Aflatoxin B1 với đột biến gen bệnh nhân, nhiều đột biến gen p53 - gen kiểm soát chết tế bào, đột biến gen này, tế bào tăng lên, kéo theo nguy tế bào chuyển thành ác tính Năm 1961 Anh, người ta tiến hành thực nghiệm chuột cống, cho ăn thức ăn nhiễm mốc có 20% bột lạc thối, sau tháng thấy xuất ung thư gan Robinsơn nghiên cứu trẻ em ấn Độ bị xơ gan, phương pháp sắc kí lớp mỏng, ơng tìm thấy Aflatoxin nước tiểu trẻ bị xơ gan sữa bà mẹ có bị xơ gan Như vậy, theo ông xơ gan Aflatoxin có mối quan hệ chặt chẽ với Năm1986, Payet cộng quan sát trẻ em bị suy dinh dưỡng Kwashiorkor, nuôi thức ăn bổ sung đạm dạng bột lạc, không may bột lạc bị nhiễm độc tố Aflatoxin Trẻ ăn ngày 70-100g bột lạc bị nhiễm Aflatoxin với hàm lượng 0,5-1 ppm ăn kéo dài 10 tháng, đến trẻ tuổi thấy xuất triệu chứng rối loạn chức gan Sinh thiết gan thấy có tượng lt mơ gan trẻ  Khả tác động lên tác động lên tế bào gan Aflatoxin trải qua giai đoạn : • Ức chế polymerase chịu trách nhiệm tổng hợp AND ARN • Ngừng hẳn giảm tổng hợp AND • Ngăn cản chế sinh tổng hợp ARN truyền tin • Biến đổi hình dạng nhân tế bào • Hạn chế q trình sinh tổng hợp protein Hậu : gây ung thư biểu mơ tế bào gan Nói chung bệnh gây độc tố nấm người hay gặp đối tượng có đời sống thấp, thức ăn ngũ cốc thức ăn thực vật giàu chất béo khơng xứ lí bảo quản tốt Mặt khác điều kiện khí hậu nóng ẩm, tình trạng vệ sinh yếu tố thuận lợi cho nấm mốc phát triển sinh độc tố gây bệnh Hiện thuốc chữa bệnh đặc hiệu khơng có, biện pháp phòng bệnh quan trọng Trang 10/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin -Tính khối lượng mẫu thử m t theo gam có dịch lọc lần thu từ cột IA theo công thức: mo : khối lượng phần mẫu thử, mo= 25g -Tính phần khối lượng aflatoxin wi theo microgam/kg mẫu theo công thức: V5 : thể tích chất rửa giải mi : khối lượng aflatoxin có thể tích bơm KẾT LUẬN Thiệt hại Aflatoxin gây sức khỏe cộng đồng kinh tế không nhỏ Do đó, vấn đề bảo quản lương thực, sử dụng lương thực an tồn khơng sử dụng thực phẩm bị hỏng, bi nghi nhiễm nấm mốc vấn đề cần thiết có ý nghĩa việc hạn chế ung thư gan Ngày nay, hướng nghiên cứu tương lai nhà khoa học tìm cách chống nhiễm aflatoxin phương pháp sinh học Trang 18/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Tài liệu tham khảo Dương Thanh Liêm, Trần Văn An, Nguyễn Quang Thiệu, Độc chất học vệ sinh an tồn nơng sản – thực phẩm, NXB Nơng Nghiệp, 2010 Lê Ngọc Tú, Độc tố học an toàn thực phẩm, NXB Khoa học kĩ thuật, 2006  Một số TCVN: TCVN 7596-2007: Thực phẩm Xác định aflatoxin B1 hàm lượng tổng số aflatoxin B1, B2, G1 G2 ngũ cốc, loại hạt sản phẩm chúng Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao TCVN 7930 - 2008: Thực phẩm Xác định aflatoxin B1 tổng aflatoxin B1, B2, G1 G2 ngũ cốc, có vỏ sản phẩm chúng Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao có dẫn suất sau cột làm cột lực miễn dịch TCVN 7785 - 2007: SỮA VÀ SỮA BỘT – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AFLATOXIN M1 – LÀM SẠCH BẰNG SẮC KÍ ÁI LỰC MIỄN DỊCH VÀ XÁC ĐỊNH BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG  Một số trang Wed: http://dantri.com.vn/suc-khoe/nhiem-doc-nguyen-nhan-gay-tu-vong-o-nguoi-mac-benhda-la-711476.htm Trang 19/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin MỤC LỤC TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM I.Tổng quan Aflatoxin Lịch sử phát triển - 1924: Shofiel cộng phát loại độc tố sản sinh từ nấm mốc gây dịch bệnh cho gia súc .2 -1960: vụ dịch lớn gây chết hàng loạt gà tây nước Anh Chỉ lâu sau, nhà khoa học tìm thủ phạm chất có “màu xanh da trời” đặt tên Aflatoxin - 1961: Người ta tìm chất hóa học chất độc - Aflatoxin tinh thể trắng, bền nhiệt, không bị phân hủy nhiệt độ thông thường (trên 1200C, đun 30 phút môi trường kiềm tác dụng độc) tồn thực phẩm mà khơng cần có mặt nấm mốc tương ứng, bền với men tiêu hóa .2 - Không bền ánh sáng mặt trời tia tử ngoại nên việc khử độc có nhiều biện pháp -Hiện nay, tìm thấy 18 loại Aflatoxin khác nhau, có loại thường gặp là: AFB1 (B1), AFB2 (B2), AFG1 (G1), AFG2 (G2) Trong Aflatoxin B1 chiếm nhiều nông sản, gây tác hại nhiều nhất, gây ngộ độc nhanh phổ biến .2 .3 Nguồn gốc Aflatoxin sinh chủ yếu loại nấm: Aspergillus flavus Aspergillus parasiticus .3 Aspergillus parasiticus Aspergillus flavus .3 .4 - Là nấm mốc màu xanh vàng môi trường nuôi cấy, giống giống aspergillus khác chúng sinh bào tử đính Các tế bào bào tử đính túi sinh dạng nấm đính Trang 20/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin - Không phải tất chủng Aspergillus flavus sinh độc tố Aflatoxin, 73% có khả sinh độc tố, 23% sản sinh Aflatoxin mức cao .4 - Một số lồi nấm mốc khác có khả sinh Aflatoxin với lượng : Penicillium puberulum Bai, Aspergillus tamariikita, Aspergillus niger tiegh, Aspergillus ostiamis wehmen, Aspergillus ruper… .4 - Khả sinh độc tố Aflatoxin phụ thuộc vào yêu tố chủng nấm mốc, nhiệt độ, chất, độ ẩm chất môi trường - Nhiệt độ thích hợp để sản sinh Aflatoxin chủng nấm mốc từ 25-28 0C Nếu nuôi cấy Aspergillus flavus 450C khả sản sinh Aflatoxin bị ức chế - Độc tính Aflatoxin cao gấp 10 lần acid hydroxyanic (HCN) gấp 68 lần Arsen (As) Bảng : Các sản phẩm nhiễm Aflatoxin .4 Các hạt ngũ cốc Ngơ,thóc,gạo,lúa mì Hạt có dầu Lạc,dừa,đậu tương,hướng dương Củ Sắn,khoai tây… Sữa Sữa tươi,pho mat… Thủy sản Cá,tôm… Sản phẩm lên men Bia,nước giải khát,rượu vang… .4 Các Aflatoxin có khả phát huỳnh quang hấp thụ tia tử ngoại mức độ khác - Aflatoxin B1 B2 : xanh tím .6 - Aflatoxin G1 G2: màu xanh lục .6 Trang 21/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Cục quản lý Thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ qui định hàm lượng tối đa Aflatoxin thức ăn gia súc sau: Bò giống, heo giống, gà trưởng thành không 100 ppb Heo thịt giai đoạn vỗ béo: 200 ppb Bò thịt: 300 ppb .6 Bò sữa gia súc non: 20 ppb  Quy định Việt Nam-giới hạn tối đa (ML) + kg thức ăn cần nhiễm miligam (với lượng đủ dính đầu móng tay) đủ làm hỏng gan ML (microgam/kg) Tiêu chí .6 Đối với Aflatoxin B1 thực phẩm nói chung 15 .6 Đối với Aflatoxin B1, B2, G1, G2 thực phẩm nói chung 0.5 Đối với Aflatoxin M1 sữa sản phẩm sữa “Theo PGS.TS Đinh Duy Kháng, điều chưa xác Chất Aflatoxin độc chất cực độc nên tính lượng microgam tức phần triệu gam Nếu kg dính miligam nhiều!” .6 Quá trình lây nhiễm Aflatoxin: - Trong điều kiện khí hậu thuận lợi (nóng ẩm), nấm mốc sản sinh độc tố vi nấm nhiễm vào thức ăn.Con người gia súc ăn phải thức ăn nhiễm Aflatoxin có triệu chứng nhiễm độc cấp tính triệu chứng mãn tính - Việc nhiễm Aflatoxin phụ thuộc nhiều vào tuổi, giới tính, lồi, tình trạng dinh dưỡng, mức độ tần số tiếp xúc Các giai đoạn mà nấm nhiễm vào thực phẩm: Nhiễm đồng lúc trước thu hoạch: Trang 22/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Điều nhận biết rõ bắp chín khơ ngồi đồng, chưa thu hoạch kịp, gặp mưa có độ ẩm cao, loại nấm mốc có nguồn gốc từ đất cơng vào nơng sản Muốn khắc phục tình trạng cần phải thu hoạch kịp thời, không nên để lâu đồng Sau thu hoạch phải phơi sấy cho khơ đến độ ẩm cịn 13% đem bảo quản Nhiễm kho dự trữ thức ăn: Nguyên nhân chủ yếu độ ẩm thức ăn cao (>14%) đem dự trữ độ ẩm khơng khí kho cao làm cho hấp thu ẩm độ trở lại vào nguyên liệu, chênh lệch nhiệt độ ngày đêm làm cho nước ngưng tụ bề mặt lớp thức ăn gây tượng ẩm cục bộ, tạo điều kiện tốt cho nấm phát triển Người ta có quan sát vùng trung đông với silo dự trữ bắp đại bị nhiệm nấm mốc, nguyên nhân ban ngày nhiệt độ mơi trường lên cao, có đến 40oC nên nước nguyên liệu bay bão hịa khơng khí silo, đêm đến nhiệt độ hạ xuống thấp, nước ngưng tụ lớp bắp ngồi làm cho bị nhiễm nấm độc Muốn khắc phục tình trạng phải thường xuyên hút ẩm thơng thống kho Nhiễm trùng chuồng nuôi gia súc, gia cầm: Trong thực tế nuôi dưỡng gia súc gia cầm, thức ăn rơi đổ nhiều xuống chuồng, thức ăn bị ẩm đọng lại nhiều máng lâu ngày môi trường thuận lợi để nấm mốc phát triển Độc tính Aflatoxin Các triệu chứng nhiễm độc Aflatoxin nghiên cứu thông qua vụ nhiễm độc tự nhiên qua thử nghiệm động vật Ở lợn :đầu tiên phá hủy gan,sau đến quan khác có liên quan,giảm tốc độ lớn hiệu sử dụng thức ăn thức ăn nhiễm Aflatoxin mức 100-400 ppb Lợn con: nhạy cảm với Aflatoxin, phá hủy gan, rối loạn tuần hoàn máu chế (nếu vượt 400 ppb) Lợn nái: sẩy thai thai chết .7 Aflatoxin chất độc nguy hiểm, làm thay đổi mặt sinh học, phá hủy hệ thống miễn dịch Trong Aflatoxin B1 mạnh nhất, sau đến G1, B2, G2 Vận chuyển Aflatoxin thể bị nhiễm độc nhanh Chỉ sau 48h, phát thấy 85% lượng Aflatoxin chuyển hóa sữa tiết nước tiểu Trang 23/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin động vật cho ăn liều 0,50 mg/kg Aflatoxin Không phát Aflatoxin sau ngày sữa sau ngày phân nước tiểu .7 a Nhiễm độc cấp tính Ở người : Nơn ói, đau bụng, sưng phổi, co giật, mê, tử vong phù não tim, gan, thận tích mỡ… Mức độ nhiễm độc Aflatoxin thay đổi theo thời gian tùy vào tính mẫn cảm vật thử nghiệm.Gan vật bị nhiễm có màu nhợt sưng to .8 Có thể hoại tử mô gan,chảy máu số gia cầm Mức độ nhẹ hơn, quan sát thấy tượng tụ máu phổi tăng sinh tế bào biểu mô ống dẫn mật b Nhiễm độc mãn tính: - Thể đầu tiên: chán ăn, chậm lớn, sụt cân… .8 - Có tính di truyền theo kiểu: gây ung thư, quái thai, gây đột biến -Gây ung thư: Có độc tính cao gan xem tác nhân gây ung thư gan người động vật Aflatoxin B1 phân tử lực mạnh với thành ruột, có trọng lượng phân tử thấp nên dễ dàng hấp thu sau ăn Khi đến ruột non, nhanh chóng hấp thu vào tĩnh mạch, ruột non, tá tràng, sau tập trung nhiều gan Tác động bệnh lý Aflatoxin có tính cộng hưởng với tác nhân khác HBV, độc tố di truyền Các nghiên cứu việc đồng phơi nhiễm với virus viêm gan B (HBV) làm tăng nguy ung thư gan gấp 60 lần so với HBV đơn lẻ - GS dịch tễ học Pauline Jolly cộng phát aflatoxin làm tăng đáng kể lượng HIV máu bệnh nhân Nhóm nghiên cứu khảo sát 314 trường hợp dương tính với HIV chia thành nhóm, theo mức độ bị phơi nhiễm nhiều aflatoxin Kết cho thấy nhóm bị nhiễm aflatoxin nhiều có khuynh hướng phát triển HIV cao gấp 2,6 lần so với nhóm bị nhiễm aflatoxin .9 Gan nhiễm mỡ xơ gan Trang 24/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Ung thư gan Ngoài gan, quan khác phổi, thận, túi mật, hệ thống thần kinh… bị ảnh hưởng Gây viêm sưng nặng nề dẫn đến hoại tử tổ chức nội tạng 10 Gây quái thai: Những thí nghiệm Elis Dipaolo năm 1976 chứng minh việc tiêm Afatoxin B1 vào chuột theo đường ổ bụng với liều mg/kg thể trọng gây dị tật thai thai chết 10 Gây đột biến gen: có liên quan phơi nhiễm Aflatoxin B1 với đột biến gen bệnh nhân, nhiều đột biến gen p53 - gen kiểm soát chết tế bào, đột biến gen này, tế bào tăng lên, kéo theo nguy tế bào chuyển thành ác tính 10 Năm 1961 Anh, người ta tiến hành thực nghiệm chuột cống, cho ăn thức ăn nhiễm mốc có 20% bột lạc thối, sau tháng thấy xuất ung thư gan 10 Robinsơn nghiên cứu trẻ em ấn Độ bị xơ gan, phương pháp sắc kí lớp mỏng, ơng tìm thấy Aflatoxin nước tiểu trẻ bị xơ gan sữa bà mẹ có bị xơ gan Như vậy, theo ông xơ gan Aflatoxin có mối quan hệ chặt chẽ với 10 Năm1986, Payet cộng quan sát trẻ em bị suy dinh dưỡng Kwashiorkor, nuôi thức ăn bổ sung đạm dạng bột lạc, không may bột lạc bị nhiễm độc tố Aflatoxin Trẻ ăn ngày 70-100g bột lạc bị nhiễm Aflatoxin với hàm lượng 0,5-1 ppm ăn kéo dài 10 tháng, đến trẻ tuổi thấy xuất triệu chứng rối loạn chức gan Sinh thiết gan thấy có tượng lt mơ gan trẻ 10 Khả tác động lên tác động lên tế bào gan Aflatoxin trải qua giai đoạn :10 Ức chế polymerase chịu trách nhiệm tổng hợp AND ARN 10 Ngừng hẳn giảm tổng hợp AND 10 Ngăn cản chế sinh tổng hợp ARN truyền tin 10 Biến đổi hình dạng nhân tế bào 10 Hạn chế trình sinh tổng hợp protein 10 Hậu : gây ung thư biểu mô tế bào gan 10 Nói chung bệnh gây độc tố nấm người hay gặp đối tượng có đời sống thấp, thức ăn ngũ cốc thức ăn thực vật giàu chất béo không Trang 25/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin xứ lí bảo quản tốt Mặt khác điều kiện khí hậu nóng ẩm, tình trạng vệ sinh yếu tố thuận lợi cho nấm mốc phát triển sinh độc tố gây bệnh 10 Hiện thuốc chữa bệnh đặc hiệu khơng có, biện pháp phòng bệnh quan trọng 10 “BỆNH LẠ” Ở BA TƠ-QUẢNG NGÃI: HỘI CHỨNG VIÊM DA DÀY SỪNG BÀN TAY BÀN CHÂN (4-2012) 11 Triệu chứng: Qua khám sàng lọc, có đến 80% bệnh nhân bị suy đa phủ tạng, bệnh nhân chung triệu chứng dày sừng, nứt nẻ bàn tay bàn chân da vùng quanh móng tay, chân dày, bong vảy; da vùng rìa bàn tay, bàn chân kẽ ngón chân dày sừng, thâm đen, không ngứa, không đau, gan bàn chân, tay, lòng bàn tay, chân thâm đen, dày sừng có số men gan tăng, có người tăng – lần, có bệnh nhân tăng tới 10 – 20 lần mức bình thường làm tổn thương gan Nhóm tuổi mắc bệnh xuất nhiều nhóm 15 – 29 tuổi Gây tử vong cho 19 người Một nguyên nhân nhắc đến người dân ăn loại gạo nấm mốc chứa aflatoxin, độc tố vi nấm chứng minh gây ung thư gan thực nghiệm 11 11 ** Hiện aflatoxin tinh khiết sản xuất- đóng vai trị chất nội chuẩn để kiểm tra nhiễm bẩn aflatoxin thực phẩm 11 II.Một số biện pháp phòng ngừa aflatoxin thực phẩm 11 Có nhiều loại lương thực thực phẩm dễ bị nhiễm aflatoxin: .11 -Ngũ cốc: ngơ, đậu, gạo, lúa mì sản phẩm chế biến 11 -Các loại hạt có dầu: lạc, hạt hướng dương, hạt điều, hạt dưa, bí ngơ,… 11 -Các loại sữa sản phẩm từ sữa 11  Vì cần phải có biện pháp thích hợp để tránh xâm nhiễm aflatoxin vào thực phẩm .11 Thực giáo dục truyền thông cho người nông dân .11 Thực hành sản xuất nông nghiệp tốt cơng đoạn từ khâu chọn giống, làm đất, bón phân, sử dụng hợp lí chất bảo vệ thực vật, thu hoạch 11 Nông sản sau thu hoạch phải xử lý, phân loại phơi sấy khơ để đảm bảo có điều kiện bảo quản tốt 11 Trang 26/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Không sử dụng thực phẩm nhiễm mốc cho người kể gia súc Nếu gia súc ăn phải thức ăn bị mốc độc tố thể ta ăn chúng bị nhiễm độc tố nấm mốc Vì phải phịng ngừa từ việc chọn thức ăn cho vật ni 12 Khảo sát kiến thức người sản xuất nông nghiệp tác động độc hại sản phẩm nông nghiệp bị nhiễm nấm mốc ảnh hưởng đến sức khoẻ người 12 Phòng chống nấm mốc cho lương thực trình bảo quản 12 Nước ta nằm vùng nhiệt đới nóng ẩm nên cần quan tâm đặc biệt đến vấn đề đảm bảo an toàn chất lượng cho sản phẩm mà trước hết độc tố vi nấm, A.favus dễ dàng nhiễm vào sinh aflatoxin, khó kiểm tra xử lí kịp thời 12 Phòng nhiễm aflatoxin theo: tránh làm hỏng sản phẩm thu hoạch ngăn ngừa phát triển nấm mốc trình bảo quản: 12 -Xử lý củ: dùng diclofluanit diflolatan, captan, oxinat fantan 12 -Thiabendazol với liều lượng 30 mg/ml ức chế A.flavus 12 -Lựa chọn củ, hạt 12 -Làm khô 12 -Điều kiện tồn trữ: 12 Sự sản sinh aflatoxin bị ức chế điều kiện độ ẩm tương đối 80% với 20% CO2 nhiệt độ 17oC, với 40% CO2 nhiệt độ 25oC Khi nhiệt độ ổn định tăng nồng độ CO2 làm giảm sản sinh aflatoxin 12 - Ngăn ngừa côn trùng, bụi bẩn 12 - Giảm nhiệt độ, độ ẩm, mức oxy hoá kho .12 -Với lương thực gạo, ngơ, mì: giữ khơ, thống mát 12 -Thực phẩm khô lạc, vừng, cà phê…thực phẩm hút ẩm: phơi khơ, bảo quản thiết bị kín, độ ẩm hạt 15% 12 Điều trị bị nhiễm độc 12 Con người sử dụng chất chống ung thư Oltipraz để ngăn chặn gia tăng DNA-aflatoxin 12 Chlorophyllin làm giảm nồng độ aflatoxin cách ngăn chặn hấp thu hợp chất đường tiêu hoá Uống chlorophyllin, ăn loại rau xanh giàu chlorophyllin giảm ung thư gan 12 Trang 27/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Vật nuôi nhiễm aflatoxin cần thay đổi thức ăn 12 Bentonite, NovaSil, zeolite aluminosilicate, đặt biệt HSCAS có hiệu với hàm lượng 10 kg/tấn: loại bỏ tác hại aflatoxin số vật nuôi cách ràng buộc aflatoxin, ngăn ngừa hấp thụ chúng .12 Các phương pháp dùng để khử độc tố aflatoxin 12 a Phương pháp vật lí: .13 -Nhiệt độ: aflatoxin bền với nhiệt độ, bị phân huỷ 250oC Có thể khử aflatoxin với nhiệt độ cao thời gian dài Nhưng biện pháp dễ làm thay đổi tính chất sản phẩm, nhiệt độ khơng đáp ứng khơng thể khử aflatoxin bị nhiều ảnh hưởng khác 13 -Chiếu xạ: .13 Tia γ dùng để tiêu diệt nấm mốc: với hàm lượng nước chất khoảng 22% cần có liều lượng Mrad, thấp khơng có kết quả, đặc biệt với liều lượng 200 krad làm tăng lượng aflatoxin sinh Ngược lại, chiếu xạ với liều lượng cao khiến khả tạo aflatoxin giảm xuống 13 Dưới tác dụng tia tử ngoại, aflatoxin tạo thành sản phẩm suy thoái, số bền vững 13 b Phương pháp hoá học: 13 Nhiều hố chất phá huỷ aflatoxin tinh khiết hay aflatoxin nguyên liệu nhiễm tự nhiên; cụ thể chlorine, ozon, acid hydrochloric, peroxit benzoic, ammoniac, natri hydrochlorit etanolamin Các hoá chất dùng cho việc khử độc tố aflatoxin phải thoả mãn tiêu chuẩn: 13 Phải phá huỷ hay khử aflatoxin 13 Khơng tạo giải phóng dư lượng độc hay gây ung thư sản phẩm cuối 13 Phải phá huỷ bào tử sợi nấm mà điều kiện thuận lợi, chúng tái nhiễm lại sản phẩm 13 Phải giữ giá trị dinh dưỡng tính ăn nguyên liệu ban đầu 13 - Chiết xuất dung môi: dung môi thường sử dụng methanol (trong môi trường nước), aceton, chất izopropanol nước nhiệt độ 60oC chiết xuất aflatoxin khỏi thực phẩm 13 -Làm biến đổi phân tử: Phần lớn kĩ thuật hoá học để làm độc tính aflatoxin nhằm oxy hoá hydroxyl hoá phân tử aflatoxin, phá vỡ nối đôi Trang 28/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin nhân furan Các chất gồm hydrogen peroxit, natrihydroxit, natrihydrochlorit có khả việc khử aflatoxin từ sản phẩm giàu protein Dimetylamin, metylamin hay ammoniac áp dụng cho việc khử độc tố hạt có dầu hay ngô 13 c Phương pháp sinh học: 13 -Cạnh tranh loài nấm .13 -Các chuyển hoá sinh học .13 Aspergillus niger, Penicillium raistrickii Flavobacterium aurantiacum có khả làm thối biến aflatoxin Cấy loài vào thực phẩm nhiễm độc sau 44 phần lớn aflatoxin bị phá huỷ Phương pháp hữu ích khơ lạc, sữa, dầu chưa lọc, lúa mì 14 Một số động vật có khả làm thoái biến aflatoxin động vật nguyên sinh Tetrahymena pyriformis, lồi trùng Trogium pulsatorium 14 III.Phương pháp xác định độc tố Aflatoxin 14 Sắc ký lớp mỏng 14 a Sắc ký lớp mỏng chiều: 14 Chấm lên sắc ký lớp mỏng chấm từ 10 µl đến 20 µl dung dịch thử làm 14 Đặt vào hộp sắc ký lớp mỏng chứa dung dịch sắc ký lớp mỏng chiều Cho sắc ký dung môi đạt đến chiều cao khoảng 10 cm 14 Lấy sắc ký khỏi hộp để khơ khơng khí Đọc điểm chấm thu sử dụng đèn UV bước sóng 365 nm máy đo mật độ quang bước sóng 365nm So sánh cường độ huỳnh quang điểm chấm mẫu thử với cường độ huỳnh quang điểm chấm dung dịch chuẩn làm việc AFM1 Các điểm chấm so sánh với điểm phát sáng cận kề 14 Tính hàm lượng AFM1 phần mẩu thử 14 Nếu huỳnh quang điểm chấm phần mẫu thử mạnh huỳnh quang dung dịch chuẩn làm việc AFM1 cao ước tính mức nhiễm bẩn Dựa vào mức nhiễm này, pha loãng mẫu thử với thể tích thích hợp dung dịch toluen/acetonitril Lặp lai qui trình với phần mẫu thử tinh pha lỗng 14 b Sắc ký lớp mỏng hai chiều: 14 Nếu có nhiễu xuất vạch sắc ký gần với điểm huỳnh quang, tiến hành chạy sắc ký lớp mỏng hai chiều Chấm lên sắc Trang 29/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin ký lớp mỏng 20 µl phần thử tinh Chấm thêm điểm µl, 10 µl 20 µl dung dịch chuẩn làm việc AFM1 để chạy theo hướng điểm chấm µl dung dịch làm việc AFM1 chạy theo hướng 14 Đặt săc ký vào hôp TLC chứa dung dịch TLC chiều Cho sắc ký hướng dung môi đạt đến chiều cao khoảng 7cm Lấy sắc ký khỏi hộp để khơ khơng khí 15 Làm nóng sắc ký khô tủ sấy đặt 50oC phút Để nguội đặt theo hướng thứ hai chiều xuống vào hộp TLC khác có chứa dung dịch TLC hai chiều Cho sắc ký hướng thứ hai dung môi đạt đến chiều cao khoảng cm 15 Lấy sắc ký khỏi hộp để khô khơng khí Đọc điểm chấm thu sử dụng đèn UV bước sóng 365 nm máy đo mật độ quang bước sóng 365nm So sánh cường độ huỳnh quang điểm chấm mẫu thử với cường độ huỳnh quang điểm chấm dung dịch chuẩn làm việc AFM1 Các điểm chấm so sánh với điểm phát sáng cận kề 15 Tính hàm lượng AFM1 phần mẩu thử theo điều 15 Nếu huỳnh quang điểm chấm phần mẫu thử mạnh huỳnh quang dung dịch chuẩn làm việc AFM1 lặp lại qui trình với phần nhỏ mẫu thử tinh 15 Tính tốn kết theo cơng thức: .16 16 Trong đó: 16 Vs giá trị thể tích điểm chấm dung dịch chuẩn làm việc AFM1 dung dich A dung dich B 16 Cs hàm lương AFM1 dung dịch làm việc A B 16 V1 thể tích hịa tan (µl) .16 V2 thể tích điểm chấm phần mẫu tinh (µl) .16 mt thể tích khối lượng mẫu thử (ml mg) 16 10 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao: 16 Là hình thức nâng cao phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) Nó tự động hố bước khác nhau, để tăng độ phân giải đạt cho phép đo định lượng xác 17 Trang 30/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin a Cách tiến hành: .17 Chiết: 17 - Cân 25g mẫu thử đồng hố cho vào bình trộn 17 - Thêm 5g NaCl 125ml dung mơi, đồng hố máy trộn phút tốc độ cao 17 - Lọc hỗn hợp qua giấy lọc.(V1) 17 - Dùng pipet lấy 15ml dịch lọc (V2) cho vào bình nón có nắp đậy thuỷ tinh 17 - Thêm 30ml H2O vào, đậy bình lắc 17 - Lọc dịch chiết pha loãng qua giấy lọc vi sợi thuỷ tinh (V3) cho chạy sắc ký cột lực 17 Làm sạch: .17 - Chuẩn bị cột miễn nhiễm IA Dùng pipet lấy 15ml dịch lọc V3, ta V4 cho vào bình chứa dung mơi cột IA 17 - Cho qua cột tách, sau rửa cột loại bỏ chất rửa giải 17 - Rửa giải aflatoxin 17 - Thu lấy chất rửa giải cho vào bình định mức 2ml 17 - Pha loãng nước định mức đến vạch 17 - Lắc tiến hành theo điều kiện vận hành HPLC 17 Nhận dạng: .17 - Nhận biết pic aflatoxin sắc ký đồ mẫu cách so sánh thời gian lưu chất chuẩn tương ứng .17 Xác định: 17 - Định lượng phương pháp ngoại chuẩn, tính diện tích pic chiều cao pic Chiều cao pic liên quan đến giá trị tương ứng chất chuẩn 17 - Bơm thể tích 50 µl hỗn hợp chuẩn lên vòng bơm (theo hướng dẫn ) .17 - Rửa giải aflatoxin theo thứ tự G2, G1, B2, B1 với thời gian lưu tương ứng khoảng phút, phút, phút 11phút phải có đường phân giải 17 -Bơm 50 µl (V6) dịch chiết mẫu làm vào vòng bơm .17 Trang 31/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin b Tính kết 17 -Tính khối lượng mẫu thử mt theo gam có dịch lọc lần thu từ cột IA theo công thức: 18 mo : khối lượng phần mẫu thử, mo= 25g 18 -Tính phần khối lượng aflatoxin wi theo microgam/kg mẫu theo công thức: 18 18 V5 : thể tích chất rửa giải .18 mi : khối lượng aflatoxin có thể tích bơm 18 Tài liệu tham khảo 19 1.TCVN 7596-2007: Thực phẩm Xác định aflatoxin B1 hàm lượng tổng số aflatoxin B1, B2, G1 G2 ngũ cốc, loại hạt sản phẩm chúng Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao .19 2.TCVN 7930 - 2008: Thực phẩm Xác định aflatoxin B1 tổng aflatoxin B1, B2, G1 G2 ngũ cốc, có vỏ sản phẩm chúng Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao có dẫn suất sau cột làm cột lực miễn dịch .19 3.TCVN 7785 - 2007: SỮA VÀ SỮA BỘT – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AFLATOXIN M1 – LÀM SẠCH BẰNG SẮC KÍ ÁI LỰC MIỄN DỊCH VÀ XÁC ĐỊNH BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG 19 MỤC LỤC 20 Tài liệu tham khảo .19 Mục lục 20 Trang 32/32 .. .Độc tố nấm mốc Aflatoxin MỞ ĐẦU Trên giới nay, vi? ??c nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc độc tố nấm lương thực, thực phẩm vấn đề quan trọng nhằm bảo vệ sức khoẻ người vật nuôi Độc tố aflatoxin. .. Khơng phải tất chủng Aspergillus flavus sinh độc tố Aflatoxin, 73% có khả sinh độc tố, 23% sản sinh Aflatoxin mức cao - Một số lồi nấm mốc khác có khả sinh Aflatoxin với lượng : Penicillium puberulum... Sản phẩm lên men Bia,nước giải khát,rượu vang… Trang 4/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Trang 5/32 Độc tố nấm mốc Aflatoxin Các Aflatoxin có khả phát huỳnh quang hấp thụ tia tử ngoại mức độ khác - Aflatoxin