Đang tải... (xem toàn văn)
Khảo sát khả năng sinh axit lactic và tính kháng của Lactobacillus acidophilus đối với vi khuẩn E.coli dùng để sản xuất chế phẩm Probiotic
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH AXÍT LACTIC VÀ TÍNH KHÁNG CỦA LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐỐI VỚI VI KHUẨN E COLI DÙNG ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC Ngành: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khố: 2003 - 2007 Sinh viên thực hiện: PHẠM ĐÌNH TRÚC LINH Thành phố Hồ Chí Minh - 2007 - BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP.HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH AXÍT LACTIC VÀ TÍNH KHÁNG CỦA LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐỐI VỚI VI KHUẨN E COLI DÙNG ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NIÊN KHOÁ: 2003 - 2007 GVHD: TS NGUYỄN NGỌC HẢI SVTH: PHẠM ĐÌNH TRÚC LINH Thành phố Hồ Chí Minh - 2007 - MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC FACULTY OF BIOTECHNOLOGY Graduation thesis STUDYING THE ABILITY OF ACID LACTIC PRODUCE AND THE ANTAGONISM WITH E COLI OF LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS FOR PROBIOTIC Major: Biotechnology Term: 2003 - 2007 Student: PHAM ĐINH TRUC LINH Ho Chi Minh City - 2007 - LỜI CẢM TẠ Xin chân thành cảm ơn: Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Nông Lâm Tp HCM, ban Chủ Nhiệm môn Công Nghệ Sinh Học tạo điều kiện cho thực thành cơng khóa luận TS Nguyễn Ngọc Hải, người thầy đáng kính tận tình hướng dẫn, giúp đỡ động viên tơi lúc tơi gặp khó khăn Tồn thể Thầy, Cơ trang bị cho tơi kiến thức q báu Các Thầy, Cơ phịng thực tập vi sinh hết lòng giúp đỡ cho tơi kinh nghiệm q báu để tơi thực thành cơng khóa luận Các anh chị, bạn thực tập phòng vi sinh khuyến khích , ủng hộ giúp đỡ để tơi thực tốt khóa luận Cùng tồn thể lớp CNSH29 hỗ trợ, giúp đỡ động viên suốt thời gian làm đề tài Công ơn cha mẹ sinh thành, dưỡng dục hy sinh tất ăn học nên người Con xin cảm ơn gia đình chỗ dựa vững cho vững bước qua khó khăn Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng 07 năm 2007 Phạm Đình Trúc Linh -i- TĨM TẮT LUẬN VĂN PHẠM ĐÌNH TRÚC LINH, Đại học Nông Lâm TP HCM, tháng 9/2007 “ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH AXÍT LACTIC VÀ TÍNH KHÁNG CỦA LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐỐI VỚI VI KHUẨN E COLI DÙNG ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC ” Đề tài thực phòng Vi sinh Khoa CNTY, Đại học Nông Lâm TP HCM từ tháng 3/2007- 7/2007 Giáo viên hướng dẫn: TS NGUYỄN NGỌC HẢI Qua phân lập, khảo sát đặc điểm sinh hố, khả sinh axít lactic tính kháng vi khuẩn Lactobacillus acidophilus E coli Chúng tơi có ghi nhận sau : Chúng phân lập tất 10 chủng vi khuẩn L acidophilus từ chế phẩm Antibio Hàn Quốc sản xuất Khảo sát khả sinh axít lactic 10 chủng phân lập kết chủng số cho hàm lượng axít lactic cao : 0,8055 g/100 ml (tương đương 89,50T) sau ni cấy 24 Thí nghiệm bổ sung saccharose vào môi trường sữa tươi đo hàm lượng axít lactic Kết axít lactic có tăng khơng đáng kể Hàm lượng axít lactic dao động khoảng 0,558 - 1,088 g/100 ml bổ sung 5% saccharose (24 giờ) 0,63 - 0,9 g/100 ml bổ sung 6% saccharose (24 giờ) Chọn chủng L acidophilus sinh axít lactic cao đem thử đối kháng với E coli Kết L acidophilus kháng với E coli có ý nghĩa phương diện thống kê học -ii- SUMMARY PHAM ĐINH TRUC LINH, Nong Lam University, 9/2007 “ STUDYING THE ABILITY OF ACID LACTIC PRODUCE AND THE ANTAGONISM WITH E COLI OF LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS FOR PROBIOTIC ” Thesis was carried out at Microorganism Lab, Faculty of Husbandry and Veterinary, Nong Lam University from March to July in 2007 under the suppervisor of Dr NGUYEN NGOC HAI 10 isolates of Lactobacillus acidophilus was collected from Antibio products manufactured in Korea Surveying the ability of acid lactic produce of 10 isolates, the result showed that these strains could produce acid lactic Among of them, the seventh strain produce highest acid lactic that was about 0,8055 g per 100 ml (eviqualent 89,50T) Adding with 5% and 6% saccharose in fresh milk culture showed an negligible increased of acid lactic production After 24 hours incubation, acid lactic concentration fluctuated from 0,558g/100ml to 1,088g/100ml and from 0,63 g/100ml to 0,9 g/100 ml, respectively The result of antaganism experiment in co-culture L acidophilus and E coli in fresh milk showed that L acidophilus could strongly inhibite the development of E coli The amounts of E coli reduce 203 times (9th strain) and 667 times (7th strain) -iii- MỤC LỤC Trang Lời cảm tạ i Tóm tắt luận văn ii Summary iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt vii Danh sách bảng viii Danh sách hình ix Danh sách sơ đồ ix Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu Chƣơng TỔNG QUAN 2.1 Vi khuẩn lactic 2.2 Tổng quan Lactobacillus 2.2.1 Đặc điểm 2.2.2 Đặc tính chức sinh học Lactobacillus 2.2.3 Ứng dụng vi khuẩn Lactobacillus 2.3 Sơ lược Lactobacillus acidophilus 2.3.1 Đặc điểm phân loại 2.3.2 Đặc tính ni cấy 10 2.2.3 Đặc tính sinh hố 11 2.2.3.1 Phản ứng lên men đường Lactobacillus acidophilus 11 2.2.3.2 Các phản ứng sinh hoá khác 12 -iv- 2.3.4 Lợi ích sức khoẻ 13 2.3.5 Tính chất đối kháng Lactobacillus acidophilus 14 2.3.6 Một số chế phẩm sản xuất từ vi khuẩn 15 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Thời gian địa điểm thực đề tài 16 3.1.1 Thời gian 16 3.1.2 Địa điểm 16 3.2 Vật liệu thí nghiệm 16 3.2.1 Mẫu khảo sát 16 3.2.2 Môi trường 16 3.2.3 Hoá chất 16 3.2.4 Thiết bị dụng cụ 16 3.3 Nội dung đề tài 17 3.4 Phương pháp thực đề tài 17 3.4.1 Phân lập định danh Lactobacillus acidophilus 17 3.4.1.1 Lấy mẫu 17 3.4.1.2 Phân lập 17 3.4.1.3 Khảo sát phản ứng sinh hoá 18 3.4.2 Khảo sát khả sinh axít lactic L acidophilus 18 3.4.3 Khảo sát khả sinh axít lactic chủng 19 3.4.4 Thử đối kháng Latobacillus acidophilus với E coli 19 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Kết phân lập định danh Lactobacillus acidophilus 22 4.1.1 Kết phân lập vi khuẩn Lactobacillus acidophilus 22 4.1.2 Đặc điểm nuôi cấy hình thái vi khuẩn L acidophilus 23 4.1.2.1 Quan sát đại thể 23 4.1.2.2 Quan sát vi thể 24 -v- 4.2 Đặc điểm sinh hoá chủng phân lập 25 4.2.1 Khả lên men loại đường 25 4.2.2 Các phản ứng sinh hoá khác 26 4.2.3 Khả sinh axít lactic vi khuẩn L acidophilus 27 4.3 Kết đo hàm lượng acid lactic môi trường 28 4.4 Khả kháng vi khuẩn Lactobacillus acidophilus 30 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34 5.1 Kết luận 34 5.2 Đề nghị 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 PHỤ LỤC -vi- DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT MRSA: De Man, Rogaso, Sharpe, Agar MRSB: De Man, Rogaso, Sharpe, Broth TSB : Trypticase Soy Agar EC : Enrichement E coli Broth EMB : Eosin Methylene Blue Agar - vii Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Qua phân lập, khảo sát đặc điểm hình thái, sinh hố, khả sinh axít lactic tính kháng Lactobacillus acidophilus vi khuẩn E coli Chúng tơi có kết luận đề nghị sau: 5.1 Kết luận - Từ 10 chủng phân lập, chúng tơi khảo sát chủng số có khả sinh axít lactic cao 0,8055 g/100 ml (tương đương 89,5ºT) - Hàm lượng axít lactic tăng khơng đáng kể bổ sung saccharose vào môi trường sữa tươi Chủng số sinh axít lactic cao bổ sung 5% saccharose 1,008 g/100 ml (sau 24 ni cấy).Chủng số sinh axít lactic cao bổ sung 6% saccharose 0,9 g/100 ml (sau 24 nuôi cấy) - Lactobacillus acidophilus kháng với E coli có ý nghĩa phương diện thống kê học (P = 0,034 P = 0,006) 5.2 Đề nghị - Tìm hiểu điều kiện để gia tăng sinh trưởng, phát triển, khả sinh axít lactic tính kháng vi khuẩn Lactobacillus acidophilus vi khuẩn E coli - Sản xuất thử chế phẩm probiotic có chứa vi khuẩn L acidophilus nhằm ứng dụng vào chăn nuôi thú y - 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TRONG NƢỚC Nguyễn Đức Duy Anh, 2005 Xác định môi trường tối ưu để thu sinh khối enzyme vi khuẩn Bacilulus subtilis, Lactobacillus acidophilus thử nghiệm sản xuất chế phẩm sinh học LVTN Bộ môn CNSH Tủ sách trường Đại học Nông Lâm Tô Minh Châu, 2000 Vi sinh vật ứng dụng chăn nuôi Tủ sách trường Đại học Nông Lâm Chu Văn Cường, 2005 Khảo sát số đặc điểm vi khuẩn Lactobacillus acidophilus dùng sản xuất chế phẩm probiotic LVTN Khoa Chăn nuôi thú y Tủ sách trường Đại học Nông Lâm Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đăng Đức, Đặng Hồng Nguyên, Phạm Văn Ty, Nguyễn Vĩnh Phước, Nguyễn Phùng Tiến, 1976 Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học tập 1, 2, NXB Khoa học kỹ thuât Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, 1998 Vi sinh vật học NXB Giáo Dục Nguyễn Thành Đạt, 2005 Cơ sở sinh học vi sinh vật, tập Tủ sách trường Đại học Nông Lâm Nguyễn Ngọc Hải, 2007 Công nghệ sinh học thú y NXB Nông Nghiệp Nguyễn Vĩnh Phước, 1976 Vi sinh vật gây bệnh th y, tập 1, 2, 3, NXB ú Kim Đồng Phạm Thị Trúc Phương, 2005 Nghiên cứu đặc điểm vi khuẩn Lactobacillus sporogenes nhằm ứng dụng sản xuất probiotic LVTN Khoa Chăn nuôi thú y Tủ sách trường Đại học Nông Lâm 10 Trần Linh Thước, 2005 Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm NXB Giáo Dục TÀI LIỆU NƢỚC NGOÀI 11 W.I.Li, Benjamin G.Brackett and Jaroslava Halper Culture Supernatant of Lactobacillus acidophilus Stimulates Proliferation of Embryonic Cell 12 Lievin-Le Moal, V., R Amsellem, A L Servin, and M.-H Coconnier 2002 Lactobacillus acidophilus (strain LB) from the resident adult gastrointestinal microflora exerts activity against brush border damage promoted by a diarrhoeagenic Escherichia coli in human enterocyte-like cells Gut 50:803-811 13 Bernet-Camard, M.-F., V Lievin, D Brassart, J.-R Neeser, A L Servin, and S Hudault 1997 The human Lactobacillus acidophilus strain LA1 secretes a non-bacteriocin antibacterial substance(s) active in vitro and in vivo Appl Environ Microbiol 63:2747-2753 14 Wagner R.D; Pierson Carey ; Warnet Thomas, 2000.Probiotic effects of feeding heat-killer Lactobacillus acidophilus and Lactobacillus casei to Candida albicans-conolized immunodeficient mice Joural of Food Protection CÁC TRANG WEB 15 http://en.wikipedia.org/wiki/Lactobacillus_acidophilus 16 http://www.umm.edu/altmed/articles/lactobacillus_000310.htm 17 http://www.ivac.com.vn/dsp_product.aspx?CaterogyID=3&ProductID=23 18 http://clwb.unl.edu/Techer/NSF/C11/C11Links/www.bact.wis C.edu/scienceed/Lactobacillus acidophilus.html 19 http://www.fass.org/FASStrack/news_item.asp?news_id=338 20 http://ard.unl.edu/rn/0902/ecoli.html 21 http://www.biopharmachemie.vnn.vn 22 http://ianrnews.unl.edu/static/0310210.shtml 23 http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/druginfo/natural/patientacidophilus.html PHỤ LỤC Cách thực phản ứng sinh hoá Kiểm tra khả lên men đƣờng - Nguyên tắc: Các vi sinh vật sử dụng len men số loại đường sinh axít làm cho pH mơi trường giảm Khi đó, chất thị màu phenol red diện môi trường từ màu đỏ chuyển sang màu vàng - Chuẩn bị: Môi trường loại đường cần kiểm tra (glucose, saccharose, mannitol, maltose, lactose…) ống giống vi khuẩn - Cách tiến hành: Phân mơi trường có loại đường vào ống nghiệm (khoảng 5ml) có ống Durham Hấp khử trùng 1150C/10 phút Sau cấy dịch vi khuẩn vào môi trường, ủ 370C/24 Quan sát đổi màu sinh - Cách đọc kết quả: Lên men đường có sinh hơi: mơi trường chuyển từ màu đỏ sang màu vàng, ống Durham có Lên men đường không sinh hơi: môi trường chuyển từ màu đỏ sang màu vàng, ống Durham không sinh Không lên men đường: môi trường giữ nguyên màu đỏ, ống Durham khơng có Vi khuẩn Lactobacillus acidophilus lên men không sinh loại đường glucose, saccharose, maltose, lactose không lên men đuờng mannitol Kiểm tra khả sinh Indol - Nguyên tắc: Một số vi sinh vật có enzyme tryptophanase làm chuyển hố tryptophan thành indol Indol kết hợp với chất para-dimethylaminobenzaldehyde (có thuốc thử Kowac’c) tạo thành phức chất roindol màu đỏ - Chuẩn bị: Ống giống vi khuẩn, môi trường NB - Cách tiến hành: Cấy vi khuẩn vào môi trường canh NB, nuôi cấy 37 0C/24 giờ, sau thêm vài giọt thuốc thử Kowac’c vào Để yên, quan sát tượng đọc kết Phản ứng dương tính: lớp mặt mơi trường có màu đỏ Phản ứng âm tính: mơi trường có màu vàng (khơng đổi màu) Phản ứng MR (Methyl-Red) - Nguyên tắc: Một số vi sinh vật sử dụng lên men đường glucose có mơi trường làm cho pH mơi trường giảm (sinh axít) Khi đó, thuốc thử methylred giữ nguyên màu đỏ (MR dương tính) Ngược lại, vi sinh vật không sử dụng nguồn glucose mà sử dụng nguồn nitrogen môi trường làm cho pH môi trường trở nên kiềm thuốc thử methyl-red chuyển từ màu đỏ sang màu vàng (MR âm tính) - Chuẩn bị: Môi trường Clark Lubs, thuốc thử methyl-red, ống giống vi khuẩn - Cách tiến hành: Dùng que cấy lấy vòng canh khuẩn cấy vào ống nghiệm chứa môi trường Clark Lubs, nuôi nhiệt độ 370C/24 Sau đó, nhỏ 2-3 giọt thuốc thử methyl-red vào ống nghiệm đọc kết Phản ứng MR dương tính: mơi trường có màu đỏ Phản ứng MR âm tính: môi trường màu vàng Khả khử nitrat - Nguyên tắc: Một số vi sinh vật có khả sinh enzyme nitrat-reductase có tác động khử nitrat thành nitrit (NO3- thành NO2-), tiếp tục khử thành NH3 hay N2 - Chuẩn bị: Môi trường thạch nitrat bán lỏng Dung dịch thuốc thử Griess A (axít sulfanilic) Dung dịch thuốc thử Griess B (α-naphthylamine) Ống giống vi khuẩn - Cách tiến hành: Dùng que cấy thẳng lấy huyễn dịch vi khuẩn cấy sâu vào môi trường thạch nitrat bán lỏng, nuôi 370C/24 Sau 24 nhỏ vào môi rường - giọt thuốc thử Griess A, sau nhỏ tiếp - giọt thuốc thử Griess B Đọc kết Kiểm tra hoạt tính catalase - Nguyên tắc: Một số vi khuẩn hiếu khí tuyệt đối hay hiếu khí tuỳ nghi có khả sinh enzyme catalase phân giải thành H2O2 thành CO2 [O] - Chuẩn bị: Ống nghiệm thạch nghiêng chứa môi trường MRSA cấy vi khuẩn 24 giờ, ủ 370C Lam Lọ H2O2 30% kín - Cách tiến hành: Dùng que cấy vịng lấy vi khuẩn, phết lên lame kính Sau nhỏ giọt H2O2 30% lên vết vi khuẩn Đọc kết sau khoảng 15 giây Phản ứng catalase dương tính: có tượng sủi bọt Phản ứng VP (Voges_Proskauer) - Nguyên tắc: Một số vi khuẩn lên men đường tạo axít pyruvic, sau tiếp tục chuyển hóa thành acetyl metyl carbinol (ACM) Trong mơi trường kiềm ACM bị oxi hóa thành diacetyl Diacetyl kết hợp với nhóm guadinin chứa acid amin arginin thuốc thử α-napton tạo thành hợp chất màu đỏ cam (VP dương tính) - Chuẩn bị: Môi trường Clark Lubs Thuốc thử α-napton 10% NaOH 40% - Cách tiến hành: Cấy vi khuẩn vào ống nghiệm chứa khoảng ml môi trường Clark Lubs, nuôi nhiệt độ 37ºC/24 Sau nhỏ - giọt NaOH 40% - giọt thuốc thử α-napton 10% Sau 15 phút đọc kết Phản ứng VP dương tính: mơi trường chuyển sang màu đỏ cam Phản ứng VP âm tính: mơi trường màu vàng Khả sử dụng citrat - Nguyên tắc: Một số vi sinh vật có khả sử dụng citrat nguồn carbon nhất, tạo ion Na+ làm cho pH môi trường tăng Sự thay đổi pH môi trường nhận biết nhờ chất thị màu bromothylmol blue - Chuẩn bị: Môi trường tổng hợp Simmon’s citrate Ống giống vi khuẩn - Cách tiến hành: Dùng que cấy vòng lấy vi khuẩn ống giống cấy sang ống nghiệm thạch nghiêng Simmon’s citrate có chất thị màu bromothymol blue Cho vào tủ ấm 370C/24 Sau đọc kết Phản ứng citrat dương tính: môi trường chuyển từ màu xanh lục sang màu xanh dương Phản ứng citrat âm tính: mơi trường giữ màu xanh lục (không đổi) Phƣơng pháp nhuộm Gram Kỹ thuật nhuộm: Các bước tiến hành Phết canh khuẩn lên phiến kính Cố định mẫu cách qua lửa đèn cồn lần Đặt giấy lọc lên vết phết vi khuẩn Nhuộm crystal violet phút Rửa nước, thấm khô Đặt giấy lọc lên vết phết vi khuẩn Cố định màu Lugol phút Rửa nước, thấm khô Tẩy cồn 96ºC khoảng 15 giây Rửa nước, thấm khô Đặt giấy lọc lên vết phết vi khuẩn Nhuộm màu dung dịch fuchsine kiềm lỗng Rửa nước, thấm khơ Xem kính hiển vi độ phóng đại x100 (vật kính dầu) Mơi trƣờng Môi trƣờng tăng sinh chọn lọc MRSB (De Man, Rogaso, Sharpe) Cao thịt 8g Pepton bột 10 g Cao nấm men 4g Acetat natri 5g K2HPO4 2g Triamonium citrat 2g MgSO4 0.2 g MnSO4 0.2 g Twen 80 ml Bromocresol ml Nước cất 1000 ml Điều chỉnh pH = 6.2 + 0.2 Đun nhẹ để hoà tan thành phần mơi trường Sau phân vào ống nghiệm khoảng 10ml Hấp khử trùng autoclave 121ºC/20 phút Môi trƣờng tăng sinh chọn lọc MRSA Môi trường MRSB 1000 ml CaCO3 32 g Agar 16 g pH = 6.2 + 0.2 Đun sơi để hồ tan thành phần môi trường Hấp khử trùng autoclave 121ºC/20 phút Môi trƣờng lên men loại đƣờng Cao thịt 5g Pepton bột 10 g Đường 10 g Phenol red Nước cất 0.01 g 1000 ml pH = 7.4 Hấp khử trùng autoclave 121ºC/10 phút Môi trƣờng Clark Lubs Pepton bột 7g Glucose 5g KH2PO4 5g Nước cất 1000 ml pH = 6.9 + 0.2 Hấp khử trùng autoclave 121ºC/20 phút Môi trƣờng thạch nitrat bán lỏng Cao thịt 3g Pepton bột 5g KNO3 1g Agar 5g Nước cất 1000 ml pH = 7.2 +0.2 Hấp khử trùng autoclave 121ºC/20 phút Môi trƣờng Simmons Citrate Agar Sodium citrate 2g NaCl 5g K2HPO4 1g NH4H2PO4 1g MgSO4 Bromothymol blue Agar Nước cất 0,2g 0,08g 15g 1000 ml Đun nóng nhẹ lắc Đun sôi - phút hoà tan Hấp 121ºC/15 phút Trypticase Soy Agar (TSA) Trypticase pepton 15g Phytone pepton 5g NaCl 5g Agar 15g Nước cất 1000 ml Đun nóng để hồ tan agar Hấp khử trùng 121ºC/15 phút pH 7,3 0,2 EC Broth (canh EC) Trypticase tryptose 20g Muối mật No 1,5g Lactose 5g K2HPO4 4g KH2PO4 1,5g NaCl 5g Nước cất 1000 ml Rót mơi trường vào ống nghiệm có chứa ống durham Hấp khử trùng 121ºC/15 phút pH 6,9 0,2 Các bảng Bảng 4.5 Đọc kết môi trƣờng EC Số ml E.coli Pha lỗng mẫu cho vào mơi trường EC cho vào mơi Chủng trường sữa có L 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 + - - - - - - - - - - - 0,1 +++ +++ +++ 0,01 +++ +++ +++ +++ +++ +++ 0,1 +++ +++ +++ 0,01 +++ +++ +++ +++ +++ +++ 0,1 +++ +++ +++ 0,01 + +++ - ++ acidophilus Ghi chú: 10-3, 10-4, 10-5… nồng độ pha loãng + phản ứng dương tính - phản ứng âm tính Bảng 10 Kết thử nghiệm IMViC Số ml E coli Chủng IMViC cho vào mơi trường sữa có 10-6 10-7 10-8 0,1 + - - 0,01 - ++- + + - + 0,1 - - +++ 0,01 +-+ +++ - +++ - - 0,1 + -++ + 0,01 - - L acidophilus 10-3 10-4 10-5 + - - Ghi chú: + kết thử nghiệm IMViC ++ - kết thử nghiệm IMViC ++ Kết xử lý thống kê One-way ANOVA: So luong versus Lo Analysis of Variance for So luong Source DF SS MS Lo 1 20.91 20.91 Error 8.31 2.08 Total 29.21 Level 1-dc 1-tn N 3 Pooled StDev = Mean 10.670 6.936 StDev 0.000 2.038 1.441 F 10.07 P 0.034 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ -( -* ) ( * ) + -+ -+ -+ -5.0 7.5 10.0 12.5 Tukey's pairwise comparisons Family error rate = 0.0500 Individual error rate = 0.0500 Critical value = 3.93 Intervals for (column level mean) - (row level mean) 1-dc 1-tn 0.466 7.000 One-way ANOVA: So luong versus Lo Analysis of Variance for So luong Source DF SS MS Lo 1,2207 1,2207 Error 0,1676 0,0419 Total 1,3883 Level 0.1-dc 0.1-tn N 3 Pooled StDev = Mean 8,8129 7,9108 StDev 0,0000 0,2895 0,2047 F 29,14 P 0,006 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ 8,00 8,50 9,00 Tukey's pairwise comparisons Family error rate = 0,0500 Individual error rate = 0,0500 Critical value = 3,93 Intervals for (column level mean) - (row level mean) 0.1-dc 0.1-tn 0,4381 1,3661 One-way ANOVA: So luong versus Lo Analysis of Variance for So luong Source DF SS MS Lo 3.5 3.5 Error 45.0 11.3 Total 48.5 Level 0.01-dc 0.01-tn N 3 Pooled StDev = Mean 7.000 5.472 StDev 0.000 4.746 3.356 F 0.31 P 0.607 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -( * ) ( -* ) + -+ -+ -3.5 7.0 10.5 Tukey's pairwise comparisons Family error rate = 0.0500 Individual error rate = 0.0500 Critical value = 3.93 Intervals for (column level mean) - (row level mean) 0.01-dc 0.01-tn -6.080 9.135 ... tháng 9/2007 “ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH AXÍT LACTIC VÀ TÍNH KHÁNG CỦA LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS ĐỐI VỚI VI KHUẨN E COLI DÙNG ĐỂ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM PROBIOTIC ” Đề tài thực phòng Vi sinh Khoa CNTY,... sát khả sinh axít lactic tính kháng Lactobacillus acidophilus vi khuẩn E coli dùng để sản xuất chế phẩm probiotic? ?? 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu Khảo sát khả sinh axít lactic vi khuẩn Lactobacillus. .. điều kiện để gia tăng sinh trưởng, phát triển, khả sinh axít lactic tính kháng vi khuẩn Lactobacillus acidophilus vi khuẩn E coli - Sản xuất thử chế phẩm probiotic có chứa vi khuẩn L acidophilus
