Đang tải... (xem toàn văn)
Kỹ thuật Real time PCR chẩn đóan sớm HIV trên trẻ em
1Kỹ thuậtReal time PCR chẩn đóan sớmHIV trêntrẻ emEric NerrienetHIV/Hepatitis LaboratoryIP Cambodia, Phnom PenhAgence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales2Tình nhiễm HIV ở Campuchia•Tần suất nhiễm HIV:•Người lớn ở độ tuổi từ 15-49: 1.9% (2003)•Chủng lưu hành chủ yếu là HIV-1 CRF 01 AE•Phụ nữ mang thai: 2.8%•Đường lây từ mẹ sang con là một trong những đường lây quan trọng trong dịch bệnhAgence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales 23Vấn đề đặt raNếu trẻ không được phát hiện sớm và điều trị thuốc kháng virusTrẻ có nguy cơ tử vong là 50% trong 02 năm đầu tiên của cuộc sốngNếu không có sự tầm sóat sớm nhiễm HIV ở trẻ, BS Nhi Khoa phải chờ đợi đến tháng thứ 15 để có thể biết tình trạng huyết thanh học thực sự của trẻ sinh ra từbà mẹ HIV(+)Agence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites viralesKỹ thuật kinh điển trong chẩn đóan nhiễm HIV ở trẻ-RT PCR/b-DNA-Giá thành đắt-Nested-DNA PCR (gen: Gag, Pol và/hoặcEnv)-Đắt, kỹ thuật phức tạp-Nuôi cấy và phân lập virus-Đắt, kỹ thuật phức tạp, mất nhiều thời gian-Cần labo an tòan mức độ 34Mục tiêuXây dựngChuẩn hóaĐánh giáKỹ thuật real time PCRĐể chẩn đoán sớm, giá thành thấp ở trẻ sinh ra từ mẹ nhiễm HIVAgence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales 3-1.00E-014.00E-019.00E-011.40E+0016111621263136Số chu kỳHuỳnh quang (delta Rn)Phân tích theo thời gian thựcPhân tích điểm cuốiKỹ thuật « Real-time PCR »có độ nhạy, đặc hiệu cao, giá thành thấp so với những kỹ thuật kinh điển, dùng để định tính hay định lượng RNA/DNA HIVCtAgence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales62 106cp/ml2 1052 1042000200Chu kỳ ngưỡng:35 (17 000 cp/ml)Agence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites viralesLượng virus dưới mức phát hiện 47•Xây dựng và chuẩn hóa kỹ thuật• Nhóm nghiên cứu ANRS(AC11/AC12)trong việc định lượng HIV ở các nước phía Nam bán cầu•Trên 10 phòng thí nghiệm virus ở Pháp•Châu Phi: Cote d’Ivoire, Cameroon, Senegal, Burkina Faso, Central African Republic•Đông Nam Á: Việt Nam và Cambodia (bắt đầu từ tháng 1-7/2005)Kết quả• Ứng dụng đầu tiên ở Campuchia•từ 3/2005: Chẩn đoán HIV-1 sớm ở trẻ sinh từ mẹ nhiễm HIV• Đánh giá tại Campuchia•9/2005: Kiểm định củaANRS•11/2005: Kiểm định củaNIHAgence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales8•Phương pháp:• So sánh phương pháp chẩn đoán HIV ở trẻ em•Phương pháp kinh điển nested DNA PCR•So sánh với kỹ thuật real time RT PCR thực hiện trên gene LTR (theo ANRSprotocol)•Mẫu bệnh phẩm:•Huyết thanh của nhóm trẻ được chẩn đoán HIV (+) và nhóm trẻ HIV(-) ởCampuchia (n=226) và Việt Nam (n=38)•145 trẻ em gái và 119 trẻ trai•độ tuổi từ 1-28 tháng, độ tuổi trung bình 7,2 tháng)Tiếp cận kỹ thuậtAgence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales 59101950DNA-069DNA+RNA-RNA +NestedDNAPCRReal RT PCRĐộ đặc hiệu 100% (95% CI, 90 đến 100%)Độ nhạy 100% (95% CI: 97,3 đến100%)Kết quả 2Agence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales264 trẻ sinh ra từ mẹ nhiễm HIV ở Cambodia và ViệtNamKết quả nồng độ HIV định lượng 611•Độ đặc hiệu và độ nhạy tốt so vơíkỹ thuật kinh điển: kỹ thuật nested DNA PCR, RT PCR và kỹ thuật bDNA)•Nguỡng phát hiện : 400 cp/mL*, kỹ thuật thực hiện trên 200 µl huyết thanh•Không cần giai đoạn sau khuếch đại •Độ lặp lại cao : trong cùng lần thử nghiệm, giữa các phòng xét nghiệm khác nhau.•Đơn giản•Nhanh•Giá thành rẻKết luận1Agence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales12•Việc theo dõi chỉ số virus học(nồng độ HIV) bắt đầu thực hiện được ởCampuchiaNhằm chẩn đoán sớm nhiễm HIV ở trẻ em sinh ra từ mẹ nhiễm HIVvà cũng đểđánh giá hiệu quả điều trị kháng virusĐánh giá biến chứng/tuân thủ điều trị bằng HAART của bệnh nhân Phát hiện sớm thất baị điều trị do xuất hiện đột biến kháng thuốcHỗ trợ cho nghiên cứu và trong áp dụng thường quyKết luận2*Giá thành cuả kỹ thuật real times PCR sẽ giảm dần theo thời gian:•Nhờ vào kit thương mại hoá sản suất bởi ANRS•Nhờ vào nhu cầu chẩn đoán ngày càng tăng<25 USD*Agence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales 713Định hướng Phát triển kỹ thuật lấy mẫu trên giấy thấm trong việc xác định nồng độ virus và tìm đột biến kháng thuốc một cách dễ dàng hơn và phổbiến ở vùng quê CampuchiaXác định qui trình chẩn đoán, đóng góp cho việc phát hiện sớm trẻnhiễm HIVAgence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales14Cám ơn sự quan tâm của quí vị.Agence Nationale de recherches sur le Sida et les hépatites virales . 1Kỹ thuậtReal time PCR chẩn đóan sớmHIV trêntrẻ emEric NerrienetHIV/Hepatitis LaboratoryIP Cambodia, Phnom PenhAgence. pháp:• So sánh phương pháp chẩn đoán HIV ở trẻ em Phương pháp kinh điển nested DNA PCR So sánh với kỹ thuật real time RT PCR thực hiện trên gene LTR (theo ANRSprotocol)•Mẫu