Đang tải... (xem toàn văn)
Thuộc giống VibrioPhẩy khuẩn gram âm, kỵ khí tùy nghi, có khả năng di dộngPhát triển ở nhiệt độ 420C, có thể tồn tại cả ở nước mặn và nước ngọt Phát triển nhanh trong thực phẩm ở nhiệt độ thường và trong thực phẩm giữ lạnh đông lạnh nhưng ở điều kiện khô không sống quá 48hRất nhạy với nhiệt nên loại bỏ dễ dàng bằng đun nấu.
BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM Đề tài: ĐỊNH TÍNH VIBRIO CHOLERAE TRONG THỰC PHẨM GVHD: PHAN THỊ KIM LIÊN SVTH: NHĨM GIỚI THIỆU QUY TRÌNH PHÂN TÍCH NỘI DUNG Giới thiệu Vibrio Cholerae - Thuộc giống Vibrio - Phẩy khuẩn gram âm, kỵ khí tùy nghi, có khả di dộng V cholerae gây bệnh dịch tả vệ sinh kém, nguồn nước ô - Phát triển nhiệt độ 420C, tồn nước mặn nhiễm, gây ngộ độc thực phẩm nước Các chủng V.cholerae gây dịch chủ yếu thuộc nhóm huyết - Phát triển nhanh thực phẩm nhiệt độ thường O1 O139 thực phẩm giữ lạnh - đông lạnh điều kiện khô không sống 48h - Rất nhạy với nhiệt nên loại bỏ dễ dàng đun nấu Giới thiệu Vibrio Cholerae Hình ảnh Vibrio cholerae kính hiển vi sau nhuộm màu Cách thức sinh trưởng: Cholerae lên men khơng sinh khí, có khả làm dịch hóa gelatin Có khả khử nitrat thành nitrit phân giải trytophan thành indol Vibrio cholerae phát triển vùng có nồng độ muối cao 3% Có khả lên men đường glucose, sucrose,mannose, khử lysine Cách thức sinh trưởng Vibrio cholerae Nguyên tắc Phát V.cholera thực phẩm thực cách cân lượng mẫu xác định nuôi ủ môi trường chọn lọc Những khuẩn lạc giống V.cholera thử nghiệm phản ứng sinh hóa Phạm vi áp dụng: TCVN 7905-1:2008 Mơi Trường & Hóa Chất Mơi trườ ng hóa chất Mục đích APW ( Alkaline Phosphat Water ) Tăng sinh chọn lọc TCBS ( Thiosulphate citrate bile salt sucrose) Phân lập TSA Phục hồi Đĩa giấy Oxidase Khẳng định sơ Dung dịch NaCl Môi Trường & Hóa Chất Mơi trườ ng hóa chất Mục đích Arginine dehydrolase Thử nghiệm sinh hóa để khẳng định Ornithine decacboxylase Lysine decacboxylase TW (Tryptone Water ) ONPG TSI/KIA Kowac’s Thuốc thử Indol Môi Trường APW Pepton Natri clorua (NaCl) Nước 20,0 g 10,0 g 000 ml Phục hồi sức sống VSV bị tổn thương nhằm gia tăng mật độ tương đối VSV cần phát hiện, ức chế phát triển VSV ko mong muốn Môi Trường TCBS Pepton Dịch chiết nấm men Natri xitrat Natri thiosulfat Sắt (III) xitrat Natri clorua (NaCl) Mật bị khơ Sacaroza Bromothymol xanh Thạch Nước 10,0 g 5,0 g 10,0 g 10,0 g 1,0 g 10,0 g 8,0 g 20,0 g 0,04 g Từ 8,0 đến 18 g 000 ml Phép thử Phản ứng tiêu biểu V.cholera Môi trường ADH - Sáng+ màu vàng ODC + Đục+ màu tím LDC + Đục+ màu tím ONPG + Màu vàng Sinh indol + Vòng tròn đỏ TSI Vàng/Vàng ko sinh H2S ko Sinh khí TN kháng huyết Nhỏ giọt kháng huyết lên lam kính giọt nước muối sinh lý lên vị trí khác lam Dùng que cấy vơ trùng khác chuyển vi khuẩn từ TSA lên hai giọt dung dịch phân tán vi khuẩn Kết luận dương tính có tượng ngưng kết giọt có kháng huyết khơng có tượng ngưng kết giọt nước muối Bảng – Phân biệt V cholerea O1 V cholerae non – O1 Kháng nguyên Kháng huyết đa giá O1 Dung dịch muối sinh lý Kết luận Chủng có kết sinh hóa tương tự V cholera + - V Cholerae O1 Chủng có kết sinh hóa tương tự V cholera - - V Cholerae non – O1 Chủng có kết sinh hóa tương tự V.cholera + + Chủng khơng đặc hiệu với kháng ngun O nhóm Bảng – Phân biệt kiểu chủng huyết chủng V cholerea O1 Kháng nguyên Kháng huyết Inada Kháng huyết Ogawa Dung dịch muối sinh lý Kết luận V Cholerae O1 - + - Chủng Ogawa V Cholerae O1 + + - Chủng Hikojima V.Cholerae O1 - - - Chủng không đặc hiệu Đọc kết V Cholerae + Chủng PhátO1 không phát V.cholera Inaba 25 g mẫu L/O/G/O Thank You! TN sinh hóa sơ TN lên men – oxy hóa Cấy khuẩn lạc từ mơi trường TSA vào ống môi trường bán lỏng Hugh – Leifson glucoza O/F glucoza Phủ khoảng – ml dầu khoáng vô trùng vào ống Ủ ống nghiệm nhiệt độ 370C – ngày V cholerae lên men glucoza làm môi trường Hugh – Leifson từ màu tím chuyển thành vàng Mơi trường O/F từ màu xanh thành vàng TN sinh hóa khẳng định TN phát triển nhiệt độ Mt đục Cấy vi khuẩn từ TSA vào ống canh thang trypton 1% NaCL Ủ nhiệt độ 420C 18 – 24h V cholera phát triển nhiệt độ 420C làm mơi trường đục Mt đầu TN sinh hóa khẳng định TN cacbonhydrat Phản ứng dương tính mơi trường có màu vàng, âm tính mơi trường giữ nguyên màu đỏ V Cholerae cho phản ứng sacaroza, manniton, mannoza dương tính lactoza, cellobiza, arabinoza âm tính Lên men đường manniton (+) vàng vàng với bong bóng khí, (-) đỏ TN sinh hóa khẳng định TN ure Mục đích: xác định diện enzyme urease vi sinh vật thông qua khả phân hủy urea Cơ chế: Urea + H2O CO2 + H2O + NH3 Sản phẩm tạo thành ammonia carbonat làm đổi màu chất thị Tiến hành: Cấy vi khuẩn từ TSA vào canh thang urê, ủ nhiệt độ 37oC 18 - 24 V.cholerae cho phản ứng âm tính mơi trường giữ ngun màu tím hồng TN sinh hóa khẳng định Thử nghiệm ONPG Có thể dùng đĩa ONPQ thay cho thuốc thử ONPQ Hòa tan khuẩn lạc nghi ngờ vào ống nghiệm chứa 0,2 ml nước muối sinh lý Đặt đĩa ONPQ vào đáy ống ủ ẩm đọc kết V cholera cho phản ứng ONPQ dương tính dung dịch có ủ qua đêm màu vàng Lactose agar Chủng VSV 37o C 2ml ONPG broth Màu vàng Pứ (+) Pứ (-) ờNguyên tắc: xác định khả vi sinh vật có khả tổng hợp enzyme khử nhóm carboxyl hay tách hydrogen từ aminoacid ornithin, lysin hay arginin làm kiềm môi trường ni cấy ng & Hóa Chất Thử nghiệm Oxidase + Thử nghiệm indole + Lên men Glucose + Lên men Frutose + Lên men Mannose + Lên men Lactose - H 2S - Thử nghiệm Urease - Enzyme (Catalase, Lysine Orithine decarboxylase) + Enzyme (Arginine dihydrolase) - ONPG + ... tồn nước mặn nhiễm, gây ngộ độc thực phẩm nước Các chủng V .cholerae gây dịch chủ yếu thuộc nhóm huyết - Phát triển nhanh thực phẩm nhiệt độ thường O1 O139 thực phẩm giữ lạnh - đông lạnh điều kiện... indol Vibrio cholerae phát triển vùng có nồng độ muối cao 3% Có khả lên men đường glucose, sucrose,mannose, khử lysine Cách thức sinh trưởng Vibrio cholerae Nguyên tắc Phát V.cholera thực phẩm thực. .. với nhiệt nên loại bỏ dễ dàng đun nấu 1 Giới thiệu Vibrio Cholerae Hình ảnh Vibrio cholerae kính hiển vi sau nhuộm màu Cách thức sinh trưởng: Cholerae lên men khơng sinh khí, có khả làm dịch hóa