Đang tải... (xem toàn văn)
Xác lập chế độ công nghệ sấy thăng hoa cho thủy sản nhóm giáp xác đại diện là tôm sú
T¹p chÝ Khoa häc & C«ng nghƯ - Sè 2(46) Tập 2/N¨m 2008 75NGHIÊN CỨU HỐ HỌC THỰC VẬT CÂY CHĨ ĐẺ RĂNG CƯA PHYLLANTHUS URINARIA L. MỌC HOANG TẠI THÁI NGUN Ngơ Đức Trọng - Phạm Văn Thỉnh (Trường ĐH Sư phạm - ĐH Thái Ngun) 1. Đặt vấn đề Các lồi thực vật thuộc chi Phyllanthus L. họ Thầu dầu phân bố hầu hết ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới. Ở Việt Nam có 44 lồi, các lồi được chú ý nhiều hơn cả là P. niruri L (chó đẻ thân xanh), P. amarus Schum (chó đẻ đắng = diệp hạ châu đắng), P. urinaria L. (chó đẻ răng cưa). Trên thế giới các lồi này đã được Y học cổ truyền sử dụng từ lâu để chữa bệnh gan, bệnh thận, bệnh tiểu đường vv… [1-5]. Cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria L.) trong y học dân tộc được nhân dân dùng để chữa viêm họng, đinh râu, mụn nhọt, viêm da, lở ngứa, sản hậu ứ huyết đau bụng, chàm má, tưa lưỡi, rắn rết cắn, liều lượng khơng hạn chế [3,4]. Về mặt hố học thực vật, từ cây chó đẻ răng cưa đã phân lập được một số chất có tác dụng sinh học cao như các flavonoit, các steroit, các tanin, các glycozit, gần đây người ta đã phân lập được 4 lignan mới có tác dụng chữa bệnh từ cây chó đẻ răng cưa Đài Loan. Ở Việt Nam, cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria L.) đã được sử dụng làm thuốc chữa bệnh từ lâu, nhưng các nghiên cứu hố học thực vật thì mới chỉ bắt đầu từ vài năm gần đây, vì vậy chúng tơi chọn cây chó đẻ răng cưa mọc hoang tại huyện Đồng Hỷ tỉnh Thái Ngun làm đối tượng nghiên cứu với mục đích hiểu rõ và tìm kiếm thêm các ứng dụng làm thuốc chữa bệnh của cây này tại địa phương. 2- Ngun liệu và phương pháp. Ngun liệu và điều chế các phần chiết. Cây chó đẻ răng cưa (Phyllanthus urinaria L.) được thu hái tại vùng giáp danh của huyện Đồng Hỷ với thành phố Thái Ngun vào tháng 11 năm 2007. Mẫu cây được nhận dạng tại khoa Sinh trường ĐH Sư phạm thuộc ĐHTN. Mẫu cây gồm tồn bộ lá và thân (phần ở trên mặt đất), sau khi làm sạch được sấy khơ ở nhiệt độ 60oC đến khối lượng khơng đổi và nghiền thành bột. Mẫu thực vật được chiết bằng etanol 900. Các dịch chiết được gom lại, cất đuổi bớt dung mơi ở áp suất thấp, chiết lần lượt bằng n- hexan, etylaxetat, n-butanol. Các dung dịch n-hexan, etylaxetat và n- butanol thu được tiếp tục cất loại bỏ dung mơi dưới áp suất thấp cho đến khi thu được ở dạng cao khơ. Thiết bị tách và phân tích cấu trúc: Để phân lập các chất sử dụng phương pháp sắc kí cột, chất hấp phụ là silicagel Merck: 63-200 nm, rửa giải bằng các hệ dung mơi có độ phân cực khác nhau. Để phân tích cấu trúc nhờ các phương pháp phổ UV, FT-IR, 1H-NMR, 13C-NMR, phổ DEPS, phổ COSY, phổ EI-MS. 3- Kết quả và thảo luận: 3.1- Phân tích định tính: Trên cơ sở dùng các thuốc thử đặc hiệu để phát hiện các nhóm hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh lý cao trong thực vật [2] chúng tơi thu được kết quả thử định tính với các nhóm chất, kết quả ấy được chỉ ra ở bảng 1: T¹p chÝ Khoa häc & C«ng nghÖ - Sè 2(46) Tập 2/N¨m 2008 76 Bảng 1: Phát hiện các nhóm chất trong cây chó đẻ răng cưa. STT Nhóm chất Thuốc thử đặc hiệu Hiện tượng Kết quả 1 Đường khử Felinh Cho kết tủa màu đỏ gạch ++ 2 Ancaloit Dragendorf Màu vàng da cam + 3 Steroit Liberman-Bourchard Màu xanh vàng ++ 4 Flavonoit Xianidin Từ hồng đến đỏ ++ 5 Polyfenol FeCl3 Xanh thẫm +++ 6 Cumarin Axit và kiềm Kết tủa bông ++ 7 Glycozit tim Kelle-Kiliani Không có hiện tượng gì - 8 Saponin Tạo bọt Bọt bền trong axit ++ Ghi chú: Dấu (+): Phản ứng dương tính, (++): Phản ứng dương tính rất rõ; (-): Không có. Như vậy có thể nhận thấy trong thực vật chó đẻ răng cưa có chứa ít nhất 7 nhóm hợp chất có hoạt tính sinh học cao. 3.2- Các chất tinh khiết được phân lập. Chất PU-1: Từ cặn n-hexan, tiến hành phân chia nhờ sắc kí cột với chất hấp thụ silicagel rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan – etylaxetat (9:1) thu được chất rắn kết tinh có nhiệt độ nóng chảy ở 139-1410C, Rf=0,72 (trong hệ dung môi n-hexan – CHCl3 85:15). Kí hiệu là PU-1. Bảng 2: Phổ 13C-NMR của chất PU-1 và β-Sitosterol Chất PU-1 β-Sitosterol [6] Chất PU-1 β-Sitosterol [6] Vị trí C δ của 13C (ppm) Vị trí C δ của 13C (ppm) Vị trí C δ của 13C (ppm) Vị trí C δ của 13C (ppm) 1 37,2 1 37,2 16 28,3 16 28,2 2 31,7 2 31,6 17 56,2 17 56,1 3 71,8 3 71,7 18 11,9 18 11,9 4 42,3 4 42,3 19 19,4 19 19,4 5 140,8 5 140,7 20 36,2 20 36,1 6 121,7 6 121,7 21 18,8 21 18,9 7 31,9 7 31,9 22 33,9 22 34,0 8 31,9 8 31,9 23 26,1 23 26,1 9 50,1 9 50,1 24 45,8 24 45,8 10 36,5 10 36,5 25 29,2 25 29,2 11 21,1 11 21,2 26 19,1 26 19,8 12 39,8 12 39,8 27 19,4 27 19,5 13 42,3 13 42,3 28 23,1 28 23,08 14 56,8 14 56,7 29 11,9 29 12,0 15 24,3 15 24,3 234510167891312 171621 22 24282926271918HO1114152023 25β-Sitosterol Tạp chí Khoa học & Công nghệ - Số 2(46) Tp 2/Năm 2008 77Cht PU-2 c tỏch t cn etylaxetat cú Rf= 0,8 (trong h dung mụi clorofoc etylaxetat (9:1). Nú l cht du st mu nõu. Ph EI-MS cho bit cht PU-2 cú pic M+ = 126 suy ra khi lng phõn t ca PU-2 bng 126 amu. Ph IR v ph NMR u ch ra trong phõn t cú nhúm cacbonyl max= 1700 cm-1 v chuyn dch hoỏ hc (cdhh) ca cacbon cacbonyl: C-1=177,91 ppm v ca hiro liờn kt vi cacbon cacbonyl H=9,54ppm; Cú cỏc dao ng c trng cho d vũng vựng 1620 cm-1. Cỏc nguyờn t cacbon cha nhúm olefin v cỏc nguyờn t hidro cú cdhh tng ng nh sau: C-3=124,31ppm v cdhh ca hidro trong nhúm =CH vi H = 7,48ppm (1H,d, J=3,7Hz); C-4 =109,62ppm, H= 6,60ppm (1H,d, J=3,6 Hz). Ph DEPT cho thy cht PU-2 cú 2 nguyờn t cacbon bc 4 vi cỏc cdhh bng C-2 =162,14 ppm v C-5=151,70 ppm ú cng l cỏc nguyờn t cacbon tham gia to liờn kt ụi; cú mt nhúm CH2 vi C-6 =55,89 ppm v cdhh ca hidro trong nhúm CH2 vi H = 4,70 ppm, cú 1 nhúm hydroxyl vi võn rng = 3280 cm-1. (Ph NMR ca cht PU-2 xem bng 3). Bng 3: Ph cng hng t 1H-NMR v 13C-NMR ca cỏc U2 v U3. Ph NMR ca U2 (ppm) Ph NMR ca U3(ppm) V trớ cacbon 13C-NMR 1H-NMR V trớ cacbon 13C-NMR 1H-NMR 1 177,91 9,54 1 120,48 - 2 162,13 - 2 108,73 7,09 3 124,33 7,48 3 145,40 - 4 109,62 6,60 4 137,98 - 5 151,70 - 5 145,40 - 6 55,89 4,50 6 108,73 7,09 - - - 7 167,46 - T cỏc thụng tin ch ra nh ph IR, NMR, DEPT v EI-MS cú th quy kt c cht PU-2 l 5- hydroxymetylfufural C6H6O3. Hin nay cht 5- hidroxyfufural ó c phõn lp t mt s cõy thuc dõn gian khỏc nh t cõy a hong, cõy Trinh n hong cung nú cú vai trũ trong quỏ trỡnh chuyn hoỏ cht trong c th sinh vt, cũn trong cõy chú rng ca (Phyllanthus urinaria L.) ln u tiờn c phõn lp v nhn dng cu trỳc phõn t. Cht PU-3 cng c tỏch t cn etylaxetat, l cht rn kt tinh, tinh th hỡnh kim mu vng cú nhit núng chy 249-250oC. Ph IR cho cỏc võn hp th c trng cho nhúm cacboxyl = 1700 cm-1, võn rt tự s súng =2900-3300 cm-1 c trng cho cỏc nhúm OH ca fenol. Ph 1H-NMR cho tớn hiu 7,09 ppm ng vi 2 proton cỏc v trớ C-2 v C-6. Ph 13C-NMR cho thy cỏc cdhh cỏc tớn hiu C-1=120,48 ppm, C-2= C-6= 108,73 ppm, C-3=C-5=145,40 ppm, C-4=137,98 ppm v C-7=167,46 ppm (s liu v ph NMR c ch ra bng 3). Nhng d liu v ph ca cht PU-3 hon ton phự hp vi ph ca axit galic. Nh vy cht PU-3 c tỏch ra t dch chit etylaxetat ca cõy chú rng ca c nhn dng l axit galic. Cú th coi õy l mt n phõn tham gia vo vic to ra cỏc tanin thu phõn v tham gia vo cỏc chuyn hoỏ khỏc to ra cỏc lignan trong cõy chú rng ca. 1COOHOHHOOHOCHH2CHOO123456234567 Hidroxymetylfufural. Axit galic Tạp chí Khoa học & Công nghệ - Số 2(46) Tp 2/Năm 2008 78 Cht PU-4. T cn etylaxetat ngoi cỏc cht PU-2 v PU-3 trỡnh by trờn chỳng tụi cũn thu c mt hn hp cú mu vng, cho mu cam vi phn ng xianiin, mu xanh en vi dung dch FeCl3 1% iu ú núi lờn trong hn hp ny cú flavonoit. Bng phng phỏp sc kớ ct silicagel ra gii bng h dung mụi Toluen: Etylaxetat: Axitfomic (5:4:1) thu c 29mg cht rn mu vng (cú Rf =40 trong h dung mụi trờn), núng chy 276-278oC. Ph khi lng EI-MS cho pic ion phõn t m/z =286 ng vi cụng thc C15H10O6. Ph IR cho võn hp th c trng cho nhúm OH 3640 cm-1, nhúm cacbonyl 1680 cm-1 v ni ụi 1600cm-1 Ph UV ca cht PU-4 cú cc i hp th cú max 265 nm v 365 nm phự hp vi cỏc hp cht flavonoit cú ni ụi v trớ C2- C3. Cỏc ph IR v UV hon ton phự hp vi cỏc d kin ph 1H-NMR v 13C-NMR trờn bng 4. Cỏc tớn hiu =176,58 ppm l ca cacbon cacbonyl C-4, = 147,03 ppm c trng cho C-2 v =136,52 ppm l tớn hiu ca C-3, ú l nhng nguyờn t cacbon cha liờn kt ụi nhng C-2 liờn kt vi oxi v trớ s 1 cũn C-3 liờn kt vi nhúm OH v nhúm C=O. Tớn hiu =157,78 ppm v 164,98 ppm tng ng vi chuyn dch hoỏ hc ca C-5 v C-7 vũng A, cũn =160,16 ppm l tớn hiu 13C-NMR ca C-4/ ca vũng B, 3 nhúm hiroxyl cũn li s liờn kt vo cỏc v trớ 5,7,4/ ca vũng A v B. Tớn hiu cng hng proton ti 8,15 ppm (dd, J=8,2 v 2,2) l ca H-2/ v H-6/ v 7,01 ppm (dd, J=8,2 v 2,2) l tớnh hiu ca H-3/ v H-5/, kt hp vi cỏc thụng tin ph 13C-NMR cú th khng nh vũng B cú 1 nhúm OH v trớ 4/. Tớn hiu cng hng 6,26 ppm (1H,d,J=2,1) v 6,52 ppm (1H,d,J=2,1) l tớn hiu ca proton C-6 v C-8. T tt c cỏc thụng tin v ph EI-MS, NMR, IR, UV v cỏc hng s vt lý cú th quy kt cht PU-4 l Kampherol, cht cú tỏc dng sinh hc quan trng. Bng 4: Ph 1H-NMR v 13C-NMR ca cht PU-4 V trớ cacbon 13C-NMR (-ppm) 1H-NMR (-ppm, J-Hz) V trớ cacbon 13C-NMR (-ppm) 1H-NMR (-ppm, J-Hz) 2 147,03 10 104,15 3 136,52 1/ 123,32 4 176,58 2/ 130,44 8,15 (1H,dd, J=8,2; 2,2) 5 157,78 3/ 116,32 7,01(1H,dd, J=8,2;2,2) 6 99,17 6,26 (1H, d, J=2,1) 4/ 160,16 7 164,98 5/ 116,32 7,01(1H,dd, J=8,2; 2,2) 8 94,49 6,52 (1H, d, J=2,1) 6/ 130,44 8,15 (1H,dd, J=8,2; 2,2) 9 162,30 OOOHOHHOOH123456789101/2/3/4/5/6/ Kampherol hay 3,5,7,4/-tetrahidroxi flavon T¹p chÝ Khoa häc & C«ng nghÖ - Sè 2(46) Tập 2/N¨m 2008 794. Kết luận Từ phần trên mặt đất của cây chó đẻ răng cưa Phyllathus urinaria bằng các phản ứng định tính đã phát hiện có chứa các nhóm chất có hoạt tính sinh lý cao là đường khử, ancanloit, saponin, steroit, flavonoit, cumarin và các chất polyphenol khác. Đã phân lập và sử dụng các phương pháp phân tích hiện đại xác định được cấu trúc của 4 chất có hoạt tính sinh học cao trong cây chó đẻ răng cưa: β-sitosterol, hidroxymetylfufural, axit galic và kampherol. Summary Chemical studies on the constituents of Phyllanthus urinaria L. growing wildly in Thai Nguyen province The n-hexan extract of the plant Phyllathus urinaria was isolatete β-sitosterol, and the ethylacetate extract of the plant Phyllathus urinaria were isolated 5-hidroxyfufural and acid gallic and kampherol. Tài liệu tham khảo [1]- Nguyễn Phương Dung và các cộng sự Tạp chí Y học thực hành 1996, số 11, tr.12-14. [2]- Nguyễn Văn Đàn (1997), Các phương pháp nghiên cứu cây thuốc, Nxb Y- Dược, TP Hồ Chí Minh [3]- Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam (1999). Nxb Y học Hà Nội. [4]- Đỗ Huy Bích và các cộng sự (2004), Cây thuốc và các động vật làm thuốc ở Việt Nam. Nxb KH&KT Hà Nội . [5]- Syamasundar và các cộng sự. J. Ethnopharmacol. 1985, 14 (1). 41-44. [6]- Goat J.L., Akihisa T. Analysis of steroit frest ed., p.324. Chapman & Hall. London. NewYork- Tokyo- 1997. . 249-250oC. Ph IR cho cỏc võn hp th c trng cho nhúm cacboxyl = 1700 cm-1, võn rt tự s súng =2900-3300 cm-1 c trng cho cỏc nhúm OH ca fenol. Ph 1H-NMR cho tớn. dạng tại khoa Sinh trường ĐH Sư phạm thuộc ĐHTN. Mẫu cây gồm tồn bộ lá và thân (phần ở trên mặt đất), sau khi làm sạch được sấy khơ ở nhiệt độ 60oC đến