1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH -------------- VƯƠNG THỊ HIỀN §Æc ®iÓm h×nh th¸i vµ sù h×nh thµnh synnema cña nÊm Isaria tenuipes (Peck.) Samson trªn nhéng t»m d©u Bombyx mori Linnaeus KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NGÀNH: NÔNG HỌC Vinh – 2011 2 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH -------------- §Æc ®iÓm h×nh th¸i vµ sù h×nh thµnh synnema cña nÊm Isaria tenuipes (Peck.) Samson trªn nhéng t»m d©u Bombyx mori Linnaeus KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NGÀNH: NÔNG HỌC Người thực hiện : Vương Thị Hiền Lớp : 48K2 – Nông học Người hướng dẫn : PGS.TS. Trần Ngọc Lân LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là hoàn toàn trung thực, các số liệu được thu thập qua các thí nghiệm do bản thân tiến hành và chưa từng sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam đoan các thí nghiệm để thu thập số liệu trong luận văn đã được chính bản thân tôi tiến hành tại phòng thí nghiệm Công Nghệ Sinh học Nông nghiệp, khoa Nông Lâm Ngư, trường Đại Học Vinh với sự đồng ý và hướng dẫn của PGS. TS Trần Ngọc Lân, giáo viên hướng dẫn và các kĩ thuật viên phụ trách phòng thí nghiệm. Tôi xin cam đoan mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đã được chỉ rõ nguồn gốc. Vinh, ngày 20 tháng 7 năm 2011 Tác giả Vương Thị Hiền 3 LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu đề tài luận văn tốt nghiệp ngành kĩ sư Nông học, tôi đã nhận được nhiều sự giúp đỡ quý báu từ phía thầy cô, bạn bè, người thân. Với tấm lòng chân thành và sự biết ơn sâu sắc nhất, tôi xin được gửi lời cảm ơn đặc biệt tới PGS. TS. Trần Ngọc Lân, Th.S Nguyễn Thị Thúy, KS Trần Văn Cảnh, những người hướng dẫn tôi từ những bước đầu làm nghiên cứu khoa học, đã rất tận tâm và nhiệt tình hướng dẫn tôi suốt thời gian làm đề tài luận văn tốt nghiệp. Tôi xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô giáo trong tổ bộ môn Bảo vệ thực vật, các giáo viên phụ trách, các kĩ thuật viên phòng thí nghiệm đã tạo mọi điều kiện về cơ sở vật chất cũng như sự hướng dẫn, giúp đỡ và góp ý kiến cho tôi trong suốt quá trình làm đề tài. Và tôi xin được chân thành cảm ơn những người thân trong gia đình, bạn bè đã động viên khích lệ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn này. Vinh, ngày20 tháng 7 năm 2011 Tác giả Vương Thị Hiền MỤC LỤC 4 Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Bảng chữ cái viết tắt vi Danh mục các bảng số liệu vii Danh mục các hình vẽ viii MỞ ĐẦU 1 1. Lý do chọn đề tài 1 2. Mục đích nghiên cứu 3 3. Đối tượng, phạm vi và phương pháp nghiên cứu 3 4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 4 CHƯƠNG I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 5 1.1 Nấm ký sinh côn trùng 5 1.1.1. Khái niệm và phân loại 5 1.1.2. Cơ chế lây nhiễm của nấm ký sinh côn trùng 5 1.2. Lược sử nghiên cứu nấm ký sinh côn trùng 9 1.2.1. Lược sử nghiên cứu nấm ký sinh côn trùng trên thế giới 9 1.2.2. Lược sử nghiên cứu nấm ký sinh côn trùng ở Việt Nam (Báo cáo NKSCT) 17 1.2.3. Lược sử nghiên cứu nấm ký sinh côn trùng ở Nghệ An 19 Chương 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 23 2.1. Quy trình nghiên cứu 23 2.2. Thời gian và địa điểm 24 2.3. Vật liệu và đối tượng nghiên cứu 24 2.3.1. Vật chủ 24 2.3.2. Chủng nấm 24 2.3.3. Trang thiết bị, vật tư, hóa chất 24 2.4. Phương pháp nghiên cứu 25 2.4.1. Phương pháp nghiên cứu đa dạng loài nấm ký sinh côn trùng 25 2.4.2. Phương pháp lây nhiễm nấm lên vật chủ 26 2.4.3. Thu thập và xử lý số liệu 29 CHƯƠNG III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 30 3.1. Sự đa hình của Isaria tenuipes. 30 3.2. Ảnh hưởng của môi trường lỏng đến khả năng sinh trưởng của sợi nấm. 32 3.3. Ảnh hưởng của phương pháp lây nhiễm nấm Isaria tenuipes trên nhộng tằm dâu. 33 3.3.1 Ảnh hưởng của phương pháp lây nhiễm đến tỷ lệ nhiếm nấm của nhộng 33 5 3.3.2 Ảnh hưởng của phương pháp lây nhiễm đến thời gian hình thành synnema 34 3.3.3 Ảnh hưởng của phương pháp lây nhiễm đến sản lượng synnema 35 3.4. Lựa chọn nồng độ bào tử cho việc lây nhiễm nấm trên nhộng 37 3.4.1. Ảnh hưởng của nồng độ bào tử đến khả năng lây nhiễm của nấm trong nhộng. 37 3.4.2. Ảnh hưởng của nồng độ bào tử đến thời gian hình thành synnema. 39 3.4.3. Ảnh hưởng của nồng độ bào tử đến sản lượng synnema. 40 3.5. Ảnh hưởng của cường độ ánh sáng đến khả năng hình thành synnema. 42 3.5.1. Ảnh hưởng của cường độ ánh sáng đến thời gian hình thành synnema. 42 3.5.2. Ảnh hưởng của cường độ chiếu sáng đến sản lượng synnema 44 3.6. Chu trình lây nhiễm của nấm ký sinh côn trùng Isaria tenuipes trên nhộng tằm. 48 3.7. Quy trình sản xuất synnema của Isaria tenuipes trên nhộng tằm bằng phương pháp tiêm nhiễm 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Kiến nghị 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC 6 DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nội dung cfu Bào tử CT Công thức CV% Độ biến thiên của mẫu EPF Entomology Pathogenic Fungi - Nấm ký sinh côn trùng I. isaria. KBTTN Khu bảo tồn thiên nhiên KH Kiểu hình LSD 0.05 Phương sai mẫu M Giá trị trung bình PDA Potato Dextrose Agar PDB Potato Dextrose Broth RH Ẩm độ SD Độ lệch chuẩn SDY Sapouraud Dextrose Peptone Yeast extract Agar VQG Vườn Quốc Gia YM Yeast extract, Malat extrac 7 DANH MỤC CẤC BẢNG SỐ LIỆU Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1. Tổng quan phân loại nấm ký sinh côn trùng theo Sung et al. 2007 14 Bảng 3.1. Tần suất bắt gặp các kiểu hình I. tenuipes trong tự nhiên (N=123). 30 Bảng 3.2. Các kiểu hình của Isaria tenuipes. 31 Bảng 3.3. Ảnh hưởng của các loại môi trường lỏng đến khả năng phát triển của sợi nấm. 32 Bảng 3.4. Ảnh hưởng của phương pháp lây nhiễm đến tỷ lệ nhiễm nấm trên nhộng. 34 Bảng 3.5. Ảnh hưởng của phương pháp lây nhiễm đến thời gian hình thành synnema 35 Bảng 3.6. Ảnh hưởng của phương pháp lây nhiếm đến sản lượng synnema của I. tenuipes. 36 Bảng 3.7. Tỷ lệ hình thành synnema trên nhộng bởi phương pháp tiêm nhiễm. 38 Bảng 3.8. Ảnh hưởng của nồng độ bào tử đến thời gian và tỷ lệ hình thành synnema . 39 Bảng 3.9. Ảnh hưởng của nồng độ bào tử đến sản lượng synnema. 41 Bảng 3.10. Ảnh hưởng của cường độ chiếu sáng đến thời gian hình thành synnema. 43 Bảng 3.11. Ảnh hưởng của cường độ chiếu sáng đến tỷ lệ hình thành synnema. 44 Bảng 3.12. Ảnh hưởng của cường độ ánh sáng đến sản lượng synnema. 45 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình Nội dung Trang Hình 1.1. Chu trình xâm nhiễm của nấm ký sinh côn trùng. 06 8 Hình 1.2. Cơ chế xâm nhiễm của nấm ký sinh côn trùng 08 Hình 2.1. Sơ đồ mô tả quy trình nghiên cứu hình thành synnema của Isaria tenuipes trên nhộng tằm 21 Hình 3.1. Sự phát triển của sợi nấm trên môi trường lỏng khác nhau. 33 Hình 3.2. Tỷ lệ lây nhiễm của nấm trên nhộng từ hai phương pháp lây nhiễm. 34 Hình 3.3. Thời gian hình thành synnema trên nhộng bởi hai phương pháp lây nhiễm. 35 Hình 3.4. Ảnh hưởng của phương pháp lây nhiễm đến sản lượng synnema. 36 Hình 3.4a. Kích thước synnema. 36 Hình 3.4b. Kích thước synnema 36 Hình 3.5. Sự hình thành synnema từ hai phương pháp lây nhiễm. 37 Hình 3.6. Ảnh hưởng của nồng độ bào tử đến tỷ lệ nhiễm nấm trên nhộng. 38 Hình 3.7. Ảnh hưởng của nồng độ bào tử đến thời gian và tỷ lệ hình thành synnema 40 Hình 3.8. Ảnh hưởng của nồng độ bào tử đến sản lượng synnema. 41 Hình 3.9. Tỷ lệ nhiễm nấm và hình thành synnema của nhộng tằm ở các nồng độ bào tử. 42 Hình 3.10. Ảnh hưởng của cường độ chiếu sáng đến thời gian hình thành synnema. 43 Hình 3.11a. Ảnh hưởng của cường độ ánh sáng đến kích thước synnema. 46 Hình 3.11b. Ảnh hưởng của cường độ ánh sáng đến sản lượng synnema. 46 9 Hình 3.12. Ảnh hưởng của cường độ chiếu sáng đến sự hình thành synnema. 47 Hình 3.13. Chu trình hình thành synnema của Isaria tenuipes trên nhộng tằm dâu Bombyx mori 48 10 . do trên, chúng tôi lựa chọn nghiên cứu đề tài Đặc điểm hình thái và sự hình thành synnema của nấm Isaria tenuipes (Peck.) Samson trên nhộng tằm dâu Bombyx. synnema. 46 9 Hình 3.12. Ảnh hưởng của cường độ chiếu sáng đến sự hình thành synnema. 47 Hình 3.13. Chu trình hình thành synnema của Isaria tenuipes trên