Khoa Chăn nuôi – Thú y Bộ Môn Khoa Học Sinh Học Thú Y BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ ESCHERICHIA COLI NỘI DUNG TRÌNH BÀY - Lịch sử - Đặc điểm cấu tạo - Đặc điểm nuôi cấy - Sức đề kháng - Khả gây bệnh - Miễn Dịch - Chuẩn Đốn Lịch sử • • • • • Năm 1883, bác sĩ nhi khoa người Đức Theodor Escherich phát Cịn có tên Bacterium coli Escherich Thuộc họ Enterobacteriaceae Giống Escherichia Loài Escherichia coli Đặc Điểm Cấu Tạo • Hình dạng – Là trực khuẩn, Gram âm – Kích thước 0,5x1-3 µm – Khơng có bào tử – Lớp giáp mơ mỏng, có lơng quanh thể, số có lơng bám Đặc Điểm Cấu Tạo • Kháng nguyên Các kháng nguyên e.coli Kháng nguyên F Kháng nguyên O Kháng nguyên H Kháng ngun K Đặc Điểm Cấu Tạo • Đơc tố Độc tố Nội độc tố Chịu nhiệt STa STb Ngoại độc tố Không chịu nhiêt LT1 LT2 Đặc Điểm Nuôi Cấy • • • • Là loại vi khuẩn hiếu khí hay hiếu khí tùy nghi • Trên mơi trường thạch máu có chủng dung huyết β Có thể sinh trưởng 15-40ºC, sống thích hợp 37ºC với pH 7,4 Trong môi trường lỏng, sau 4-5 E.coli làm đục nhẹ Trên môi trường thạch thường, sau 18-24 khuẩn lạc trịn, bờ đều, bóng, khơng màu hay màu xám nhẹ, đường kính 2-3 mm Quan sát thấy khuẩn lạc dạng R M Đặc Điểm Ni Cấy • Trên mơi trường phân lập,vi khuẩn làm thay đổi mơi trường lên men đường lactose Mơi trường Endo ecoli Hình thành khuẩn lạc màu đỏ EMB Hình thành khuẩn lạc màu tím đen Istrat Hình thành khuẩn lạc màu vàng Wilson Blaire Bị kiềm chế Muler Kaufman Không mọc Gelatn Không làm tan chảy gelatn Sức Đề Kháng • Ở điều kiên bình thường e.coli tồn vài tháng Khả Năng Gây Bệnh • Yếu tố gây bệnh – Kháng nguyên : O, H, K F (kháng nguyên lông bám) – Độc tố : nội độc tố ngoại độc tố • Tính chất gây bệnh Nhóm EPEC gồm type : O26:B6, O44, O142, O124… Gồm bốn nhóm Nhóm ETEC thường gặp Nhóm EIEC gồm type : O125, O157, O144… Nhóm VTEC gồm type: O26, O11, O113… Miễn Dịch • • Chỉ hình thành với chủng E coli mắc phải Chủng bệnh Miễn Dịch • Do có nhiều serotype nên ta dựa vào kháng nguyên pili  Pili giống lông mỏng ngắn  Chức pili giúp cho vi khuẩn bám vào mơ - Các Phương Pháp Chuẩn Đốn  Chuẩn đoán 1: Phân lập vi khuẩn Chuẩn đoán 2: huyết học Chuẩn đoán 3: sinh học phân tử Phân Lập Vi Khuẩn  Dùng phân để phân lập • Dùng tăm cấy phân vào Istrat ( 37 C, 24 giờ) • E coli lên men lactoza  axit pH thay đổi • Chỉ thị màu xanh bromtymon  vàng ( để lâu: xanh lục)  Môi trường kiểm nghiệm • Mơi trường Wilson – Blaire: • • Khuẩn lạc E coli nổi, ướt, lúc đầu trong, sau biến thành nâu Môi trường SS (Salmonella Shigella): Khuẩn lạc E.coli có màu đỏ Mơi trường Mark Conkey: Các vi khuẩn lên men lactoza hình thành khuẩn lạc màu đỏ • Mơi trường Kristensen Khuẩn lạc E.coli có màu xanh mạ (thạch lactoza có pH = – 7,2) • Mơi trường EMB (Eosin-Methylen-Blue) Vi khuẩn E coli lên men đường lactoza, sinh axit nên khuẩn lạc có màu đen tím có dung quang vàng • Mơi trường Endo Vi khuẩn E coli lên men lactoza sinh axit, phát triển thành khuẩn lạc có màu đỏ • Mơi trường thạch – sắt – ba đường TSA (Triple – Sugar – Agar) Khuẩn lạc E coli có màu vàng •Mơi trường thạch hai đường Kligler (Kligler - Iron – Agar) E coli khơng sinh H2S  khơng hình thành sunfua sắt màu đen E coli chuyển hố mơi trường có sinh  bọt khí xuất thạch Vi khuẩn E coli lên men hai loại đường glucoza lactoza thạch đứng, thạch nghiêng có màu vàng Huyết Thanh Học • • E Coli có loại kháng nguyên O, H, K  typ khác Tiến hành với kháng huyết chuẩn thuộc typ E coli nghi ngờ (nồng độ /2; /10; 1/40 ) Phản ứng sinh hoá  Thử độc lực (uống canh khuẩn, phản ứng dung huyết, lập kháng sinh đồ) Sinh Học Phân Tử  Nhận diện STEC (VTEC) kỹ thuật PCR • Primers  gen stx - Sử dụng cặp mồi tương ứng khuyếch đại cho gen VT-1 VT-2 (verotoxin) • PCR-RFLP - Sử dụng enzyme cắt khác kết hợp với trình tự ADN cắt khác  sản phẩm cắt khác - Sử dụng thêm cặp mồi cho phép xác định gen eae, stx2e … biến thể chúng - Ba loại riêng biệt: VT-1 (SLT-1), VT-2 (SLT-2), Vte (là biến thể VT-2) -E Coli O91:H21: vtx2ha VT2v-a, vtx2hb  VT2v-b  Cách thực chuẩn đoán gen tiểu phần B biến thể Verotoxin loại (VT2v-b) o Chọn dạng vi khuẩn o Thực phản ứng PCR o Sử dụng Enzyme cắt giới hạn o Điện di o Nhuộm bạc theo phương pháp Sambrook Cảm ơn cô bạn theo dõi! ... Kligler (Kligler - Iron – Agar) E coli khơng sinh H2S  khơng hình thành sunfua sắt màu đen E coli chuyển hố mơi trường có sinh  bọt khí xuất thạch Vi khuẩn E coli lên men hai loại đường glucoza... Mơi trường Kristensen Khuẩn lạc E .coli có màu xanh mạ (thạch lactoza có pH = – 7,2) • Môi trường EMB (Eosin-Methylen-Blue) Vi khuẩn E coli lên men đường lactoza, sinh axit nên khuẩn lạc có màu đen... • Mơi trường Endo Vi khuẩn E coli lên men lactoza sinh axit, phát triển thành khuẩn lạc có màu đỏ • Mơi trường thạch – sắt – ba đường TSA (Triple – Sugar – Agar) Khuẩn lạc E coli có màu vàng •Mơi