Chủ đề: PHÂN TÍCH SACCHARIDE TRONG TỎI ĐEN VÀ HOẠT TÍNH CHỐNG OXI HĨA CỦA NĨ TĨM TẮT • Tỏi thường: nhiệt độ 700C800C/10-15 ngày (khơng xử lí nhân tạo hay chất phụ gia)tỏi đen • Thu dẫn xuất ethanol từ tỏi đen • Đường saccharide chiết xuất xác định theo PP đo màu fenol sulfate, DNS HPLC • Khả chống oxi hóa đánh giá cách đo hoạt động tìm kiếm 1,1-difenyl2-Picrylhydrazyl (DPPH) - Ruồi giấm(Drosophila melanogaster):tuổi thọ số chống oxi hóa * Kết quả: -Hàm lượng đường: 55,5% (monosaccharide, disaccharide polysaccharide), lượng đường khử 25,22%  Chiết xuất từ tỏi đen:  Khả chống oxi hóa mạnh  Tuổi thọ ruồi giấm kéo dài  Lượng MDA giảm GIỚI THIỆU -Tỏi:gia vị, thành phần ăn thuốc cổ truyền điều trị ngăn ngừa bệnh, tỏi đen mềm, chua, giống trái -Gây độc (liều cao) -Tỏi đen sản suất cách lên men tự nhiên tỏi thông thường (to, độ ẩm cao) vài ngày - Tỏi đen có hàm lượng polyphenol tăng gấp lần, acid amin tăng gấp 2,5 lần, carbohydrate tăng 28,7-40%, lượng SAC gấp lần - Hoạt động sinh học: chống oxi hóa, chống ung thư, hạ đường huyết , hạ lipid máu, tính kháng viêm, bảo vệ gan hoạt động miễn dịch, tìm kiếm gốc tự cao so với tỏi tươi - Ruồi giấm: mẫu kiểm tra hiệu chống oxy hóa( tuổi thọ ngắn gen hồn chỉnh) Mục đích: • Kiểm tra thành phần hóa học chiết xuất ethanol tỏi đen • Đánh giá hoạt tính chống oxi hóa • Tác động chất chiết xuất từ tỏi đen tuổi thọ ruồi giấm Vật liệu phương pháp Vật liệu -Tỏi, bột ngô, bột nấm men -Ethanol,phenol, glucosum anhydricum thạch -1,1-Diphenyl-2-Picrilhydrazyl (DPPH), ascorbic acid (Vc) T-series tiêu chuẩn dextran -Thuốc thử Sigma (St Lous, MO, U.S.A.) -Superoxide Dismutase (SOD) khảo nghiệm -Bộ khảo nghiệm Catalase(CAT) -Bộ khảo nghiệm Malondialdehyde (MDA) -Commassie xanh nhuộm KIT Chuẩn bị chiết xuất tỏi đen Cắt, nghiền 100g tỏi đen sạchtrộn ethanol 80% (tỉ lệ 1:3) Chiết ethanol lần/24h Ly tâm, lọc bốc dung môichiết xuất ethanol từ tỏi đen Mơi trường động vật thí nghiệm ĐVTN: ruồi giấm đen hoang dã Lị ấp sinh hóa: độ ẩm tương đối (55±5)%, nhiêt độ(25±0,5)0C,chu kì chiếu sáng:12h Thức ăn: đun sôi ngô72g+ glucosum anhydricum+6g thạch+750ml nước+40ml ethyl p-hydroxybenzoate 1% ethanol 75% thêm 10g bột nấm men giữ cho nấm men sống Cho 8ml/ống nghiệm+ chiết xuất từ tỏi đen với nồng độ là: 18,5; 37,5 75mg/ml Xác định tổng hàm lượng đường Theo phương pháp đo màu phenol sulfate 1ml chiết xuất vào pitpet+1ml nước+1ml phenol 6%+5ml H2SO4 đ đo 490nmlăc nhẹ, để yên 20p(T0 phòng) Chỗ trống thay nước cất có V V dd chiết xuất PT: y = 0.080x - 0.063, R = 0.999 Xác định hàm lượng đường khử Theo phương pháp DNS Sử dụng Fructose: đường chuẩn Thuốc thử DNS cho vào huyết có fructoselắc đềulàm nóng 7plàm lạnh nhanh nước ghi nhận KQ 540nm PT: y = 2.877x - 0.046, R = 0.999 Xác định CAT, hoạt động SOD lượng MDA ruồi giấm Ruồi đực ngày tuổi: 1đối chứng-3 thực nghiệm 25 ruồi/ống; 10 ống/ nhóm Nhóm khác nuôi môi trường khác 30 ngày Loại bỏ mơi trườngruồi đói 2hghi nhận cân nặng trạng thái mê man Đồng ruồi nước muối sinh lí lạnhpha lỗng 2%loại bỏ phần nổily tâm 350rpm/10p 40C So sánh với mẫu đối chứng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Hàm lượng đường từ chiết xuất tỏi đen Trong q trình lão hóa hàm lượng carbohydrat có thay đổi từ 28,7 lên 47,0% Kết từ thí nghiệm: •Hàm lượng đường 55% gồm sucrose, glucose fructose •Hàm lượng đường khử 25,22% Hàm lượng đường khử chiếm tỉ lệ cao tổng hàm lượng đường Kết từ HPLC phép đo phân phối trọng lượng phân tử carbohydrate Hoạt động khử gốc tự DPPH • Khảo nghiệm Hoạt động khử gốc tự DPPH cách đơn giản cách hiệu để đánh giá hoạt động chống oxy hóa phịng thí nghiệm (MacDonald-Wicks et al., 2006).  • Kiểm tra khả cho điện tử chiết xuất tỏi đen đổi màu dung dịch DPPH bước sóng 517nm • hoạt động khử gốc tự nồng độ 0,3125 mg/mL thấp so với Vc • nồng độ 10mg / ml, chiết xuất từ tỏi đen tăng khả khử gốc tự gần Vc ==>chiết xuất từ tỏi đen có hoạt động mạnh mẽ khử gốc tự DPPH liều lượng định Tác dụng chiết xuất từ tỏi đen tuổi thọ ruồi giấm Nhóm Nồng độ Thời gian chết chiết xuất Tuổi thọ trung bình Tuổi thọ tối đa Nhóm đối chứng 43.75±1.16 47.53±2.03 79.40±2.07 nhóm thực nghiệm 18.75 44.82±1.55 49.06±2.82 80.85±1.91 37.5 47.97±1.95** 51.16±2.57* 81.56±1.77 75 49.66±1.45** 51.50±2.18* 82.02±1.92* *Chỉ khác biệt đáng kể với p < 0,05 so sánh với nhóm chứng **Chỉ khác biệt đáng kể với p < 0,01 độ so sánh với nhóm chứng KẾT QUẢ Thời gian chết nhóm sử dụng chiết xuất tỏi đen: kéo dài đáng kể so với nhóm đối chứng Tuổi thọ trung bình tuổi thọ tối đa ruồi sử dụng chiết xuất từ tỏi đen mở rộng Tăng nồng độ cao chiết xuất từ tỏi đen quan sát ba thử nghiệm cách phụ thuộc vào liều Tác dụng chiết xuất tỏi đen hoạt động SOD ruồi giấm Superoxide dismutase(SOD) enzyme chống oxi hóa, phân bố rộng nhiều SV SOD đóng vai trị quan trọng bảo vệ cải thiện bệnh SOD: tế bào có hình thức: CuZn-SOD Mn-SOD Tác dụng tỏi đen SOD ruồi giấm bảng + So với nhóm đối chứng, nhóm thực nghiệm thực hoạt động cao hai hình thức SOD => hoạt động SOD ruồi giấm Drosophila melanogaster tăng cường tỏi đen + T-SOD, CuZn-SOD hoạt động Mn SOD cải thiện, nồng độ tỏi đen tăng phụ thuộc vào liều ảnh hưởng đến hoạt động SOD Ảnh hưởng tỏi đen hoạt động CAT hàm lượng MDA ruồi Catalase(CAT):enzyme hệ thống phòng thủ, sản xuất peroxisome xúc tác phân hủy H202 thành H20 O2 Ức chế tạo chất độc hại phát sinh từ phản ứng H202 với chất thuộc nhóm sắtbảo vệ tế bào khỏi nhiễm độc Malonaldehyde sản phẩm cuối peroxid hóa màng tế bào lipid, phản ánh mức độ peroxy màng tế bào gián tiếp Xác định hàm lượng MDA thường kèm đo hoạt động SOD, hàm lượng MDA hoạt động SOD phản ánh mức độ tế bào bị công gốc tự khả làm gốc oxy tự thể Tác dụng tỏi đen hoạt động CAT hàm lượng MDA ruồi giấm thể Bảng Kết quả: hoạt động CAT nhóm thực nghiệm tăng rõ rệt so với nhóm đối chứng Hàm lượng MDA ruồi giấm giảm rõ ràng tăng nồng độ tỏi đen (sự khác biệt có ý nghĩa với p < 0,05) KẾT LUẬN Kết thực nghiệm tổng hàm lượng đường chất chiết xuất tỏi đen 55,5%, lượng đường khử 25,22% Trong thử nghiệm chất chống oxy hóa, chiết xuất tỏi đen có khả phân hủy gốc tự do, phụ thuộc vào liều, làm kéo dài tuổi thọ ruồi giấm cách rõ rệt, hoạt động SOD CAT cải thiện Nồng độ chiết xuất tỏi đen tăng hàm lượng MDA giảm, chiết suất tỏi đen kéo dài tuổi thọ ruồi giấm qua SOD, kích hoạt CAT ức chế sản xuất MDA Xác nhận: Dự án hỗ trợ dự án Chương trình nghiên cứu phát triển cơng nghệ trọng điểm quốc gia Kế hoạch năm lần thứ 12 (NO 2012BAD33B08) Bộ Giáo dục nước Cộng hòa Nhân dân dự án Trung Quốc (Grant không IRT1166) Các hóa chất mua chủ yếu nước Tài liệu tham khảo Tài liệu gốc: The Analysis of Saccharide in Black Garlic and it’s antioxidant Activity (Mengmeng Lei, Mengying Xu, Zesheng Zhang, Min Zhang and Yunfeng Gao Key Laboratory of Food Nutrition and Safety, Tianjin University of Science and Technology, Ministry of Education, Tianjin 300457, P.R China) Một số trang web tài liệu khác Cảm ơn cô bạn lắng nghe ... hiệu chống oxy hóa( tuổi thọ ngắn gen hồn chỉnh) Mục đích: • Kiểm tra thành phần hóa học chiết xuất ethanol tỏi đen • Đánh giá hoạt tính chống oxi hóa • Tác động chất chiết xuất từ tỏi đen tuổi... đen quan sát ba thử nghiệm cách phụ thuộc vào liều Tác dụng chiết xuất tỏi đen hoạt động SOD ruồi giấm Superoxide dismutase(SOD) enzyme chống oxi hóa, phân bố rộng nhiều SV SOD đóng vai trị quan... truyền điều trị ngăn ngừa bệnh, tỏi đen mềm, chua, giống trái -Gây độc (liều cao) -Tỏi đen sản suất cách lên men tự nhiên tỏi thông thường (to, độ ẩm cao) vài ngày - Tỏi đen có hàm lượng polyphenol