1. Trang chủ
  2. Luận Văn - Báo Cáo

Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

62 583 1
Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN NGỌC GIANG NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN PEPTIT KHÁNG NGUYÊN TỪ PROTEIN VỎ CỦA VIRUT VIÊM NÃO NHẬT BẢN LÀM TIỀN ĐỀ ĐỂ SẢN XUẤT VĂCXIN DÙNG QUA ĐƯỜNG MIỆNG Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.70 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Quỳnh Liên THÁI NGUYÊN – 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN NGỌC GIANG NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN PEPTIT KHÁNG NGUYÊN TỪ PROTEIN VỎ CỦA VIRUT VIÊM NÃO NHẬT BẢN LÀM TIỀN ĐỀ ĐỂ SẢN XUẤT VĂCXIN DÙNG QUA ĐƯỜNG MIỆNG LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN – 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết thí nghiệm tơi làm thực tế chưa có cơng trình cơng bố báo, tạp chí, hay phương tiện thơng tin đại chúng Tác giả Nguyễn Ngọc Giang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Lê Quỳnh Liên tận tình hướng dẫn, động viên, giúp đỡ tơi suốt trình học tập nghiên cứu Trong trình thực hồn thành đề tài tơi nhận giúp đỡ kinh nghiệm quý báu từ GS.TS Lê Trần Bình, TS Chu Hồng Hà, TS Lê Văn Sơn, TS Nguyễn Hữu Cường tập thể cán phịng Cơng nghệ Tế bào Thực vật, Viện Cơng nghệ Sinh học Từ đáy lịng, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc với gúp đỡ để tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy cô môn Sinh, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên dạy dỗ, giúp đỡ suốt quãng thời gian học tập trường Nhân dịp này, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới gia đình, bạn bè người thân bên cạnh động viên khích lệ tạo điều kiện cho tơi hồn thành luận văn Thái Ngun, ngày tháng 10 năm 2009 Học viên Nguyễn Ngọc Giang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Amp: Ampicillin AS: Acetosyringone A Tumefaciens: Agrobacterium Tumefaciens Bp : cặp baze Carbe: Carbenicillin CNSH: Công nghệ sinh học CNTBTV: Công nghệ tế bào Thực vật Da: Dalton Đoạn 27aa: Đoạn gen mã hố cho đoạn peptít 27 axit amin virut viêm não Nhật Bản Đoạn 27aa_LTB: Đoạn gen nối đoạn 27aa gen LTB DNA: Deoxyribonucleic acid E.coli: Escheria Coli EDTA: Ethylen dimine tetra- acetic acid HEPES: N-2-huydroxyethylpiperazine-N’-ethanesulfonic acid IPTG: Isopropylthio-beta-D-glactoside Kana: Kanamycin Kb: kilobaze LB: Luria Bertani LTB: Labile enterotoxin B OD: Mật độ quang học PBS: Phosphate buffer saline PCR: Polymerase chain reaction Rifa: Rifampicin SDS: Sodium dodecyl sulphat Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn SDS- PAGE: SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis Spec: Spectinomycin TE: Tris-EDTA VNNB: viêm não Nhật Bản X-gal: 5-bromo-4 chloro- indolyl-beta-D-glactoside Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU Error! Bookmark not defined Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU Error! Bookmark not defined 1.1 Bệnh viêm não Nhật Bản Error! Bookmark not defined 1.1.1 Nguồn gốc bệnh viêm não Nhật BảnError! Bookmark not defined 1.1.2 Nguồn lây truyền bệnh Error! Bookmark not defined 1.1.3 Đặc điểm biểu bệnh: Error! Bookmark not defined 1.2 Virut viêm não Nhật Bản (virut VNNB) Error! Bookmark not defined 1.2.1 Đặc điểm hình thái tính chất lý hoá virut VNNBError! Bookmark not d 1.2.2 Sự nhân virut Error! Bookmark not defined 1.2.3 Cấu trúc virut VNNB Error! Bookmark not defined 1.2.4 Khả gây đáp ứng miễn dịch đoạn peptit kháng nguyên 27 axit amin virut VNNB Error! Bookmark not defined 1.3 Các loại văcxin phòng bệnh VNNB Error! Bookmark not defined 1.3.1 Văcxin bất hoạt sản xuất từ não chuộtError! Bookmark not defined 1.3.2 Văcxin VNNB bất hoạt sản xuất từ tế bàoError! Bookmark not defined 1.3.3 Văcxin sống giảm độc lực Error! Bookmark not defined 1.3.4 Nghiên cứu phát triển văcxin mớiError! Bookmark not defined Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUError! Bookmark not defined 2.1 Vật liệu Error! Bookmark not defined 2.1.1 Vật liệu thực vật Error! Bookmark not defined 2.1.2 Vật liệu sinh học phân tử Error! Bookmark not defined 2.1.2.1 Mồi Error! Bookmark not defined 2.1.2.2 Plasmid Error! Bookmark not defined 2.1.2.3 Các chủng vi sinh vật nguyên liệu dùng thí nghiệm Error! Bookmark not defined 2.1.2.4 Các loại máy móc Error! Bookmark not defined 2.1.3 Hoá chất Error! Bookmark not defined 2.1.4 Các môi trƣờng nuôi cấy dung dịchError! Bookmark not defined 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2.1 Nhân đoạn 27 aa LTB PCRError! Bookmark not defined 2.2.2 Phƣơng pháp PCR từ khuẩn lạc (colony PCR)Error! Bookmark not defined 2.2.3 Thiết kế vector pET21_27aa_LTB biểu đoạn peptit kháng nguyên E.coli Error! Bookmark not defined 2.2.4 Biểu đoạn peptit kháng nguyên E.coliError! Bookmark not defined 2.2.5 Thiết kế vector pCB_27aa_LTB biểu đoạn peptit kháng nguyên tế bào thực vật Error! Bookmark not defined 2.2.6 Biểu đoạn peptit kháng nguyên tế bào thực vậtError! Bookmark no 2.2.7 Kiểm tra biểu protein tái tổ hợpError! Bookmark not defined Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined 3.1 Nhân đoạn gen 27 aa Error! Bookmark not defined 3.2 Nhân gen LTB nối với gen 27 aa Error! Bookmark not defined 3.3 Thiết kế vector biểu gen 27 aa_LTB E.coliError! Bookmark not defined Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn 3.4 Biểu protein tái tổ hợp E.coli BL21Error! Bookmark not defined 3.4.1 Biến nạp vector tái tổ hợp vào chủng vi khuẩn E.coli BL21Error! Bookmark n 3.4.2 Biểu gen 27aa_LTB E.coli BL21Error! Bookmark not defined 3.5 Biểu tạm thời gen 27aa_LTB thực vậtError! Bookmark not defined 3.5.1 Thiết kế vector biểu gen 27aa_LTB thực vậtError! Bookmark not d 3.5.2 Lai đoạn 27aa_LTB_cmyc_KDEL với vector chuyển gen pCB301 Error! Bookmark not defined 3.5.3 Biến nạp vào A tumefaciens Error! Bookmark not defined 3.5.4 Biểu tạm thời gen 27aa_LTB thuốc láError! Bookmark not defi KẾT LUẬN Error! Bookmark not defined KIẾN NGHỊ Error! Bookmark not defined TÀI LIỆU THAM KHẢO Error! Bookmark not defined PHỤ LỤC Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng Mồi nhân gen 27 aa gen LTB 17 Bảng Các loại plasmid dùng thí nghiệm 18 Bảng Máy móc dùng thí nghiệm 19 Bảng Hóa chất dùng thí nghiệm 19 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ... HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN NGỌC GIANG NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN PEPTIT KHÁNG NGUYÊN TỪ PROTEIN VỎ CỦA VIRUT VIÊM NÃO NHẬT BẢN LÀM TIỀN ĐỀ ĐỂ SẢN XUẤT VĂCXIN DÙNG QUA ĐƯỜNG MIỆNG LUẬN... chọn đề tài: ? ?Nghiên cứu biểu peptit kháng nguyên từ protein vỏ virut viêm não Nhật Bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng ” Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn... Bên cạnh đó, nghiên cứu protein vỏ virut viêm não Nhật Bản cho thấy đoạn 27 axit amin nằm protein vỏ virut viêm não Nhật Bản có khả tạo kháng thể chống lại virut Ngoài ra, nghiên cứu tiểu đơn

Ngày đăng: 06/11/2012, 11:26

Xem thêm: Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng, Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng, Nguồn lây truyền bệnh Đặc điểm biểu hiện của bệnh:, Sự nhân bản của virut Cấu trúc của virut VNNB, Văcxin bất hoạt sản xuất từ não chuột Văcxin VNNB bất hoạt sản xuất từ tế bào Văcxin sống giảm độc lực Nghiên cứu phát triển văcxin mới, Phƣơng pháp PCR từ khuẩn lạc colony PCR Biểu hiện đoạn peptit kháng nguyên trong E.coli, Biểu hiện đoạn peptit kháng nguyên trong tế bào thực vật, Kiểm tra biểu hiện của protein tái tổ hợp, Gen LTB labile enterotoxin-B Nhân đoạn gen 27 aa, Nhân gen LTB và nối với gen 27 aa, Biểu hiện gen 27aa_LTB trong E.coli BL21 Thiết kế vector biểu hiện gen 27aa_LTB trong thực vật, Lai đoạn 27aa_LTB_cmyc_KDEL với vector chuyển gen pCB301

Hình ảnh liên quan

DANH MỤC CÁC BẢNG - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng
DANH MỤC CÁC BẢNG Xem tại trang 10 của tài liệu.
Hình 1.3. Khả năng sinh ra tế bào lympho từ các kháng nguyên khác nhau - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 1.3..

Khả năng sinh ra tế bào lympho từ các kháng nguyên khác nhau Xem tại trang 24 của tài liệu.
Hình 1.4. Khả năng sản sinh ra IFN-γ và IL-4 - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 1.4..

Khả năng sản sinh ra IFN-γ và IL-4 Xem tại trang 24 của tài liệu.
Hình 1.5: Khả năng gây đáp ứng miễn dịch của văcxin thực vật - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 1.5.

Khả năng gây đáp ứng miễn dịch của văcxin thực vật Xem tại trang 28 của tài liệu.
Chƣơng 2 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

h.

ƣơng 2 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Xem tại trang 30 của tài liệu.
Bảng 1: Mồi nhân gen 27aa và gen LTB - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Bảng 1.

Mồi nhân gen 27aa và gen LTB Xem tại trang 30 của tài liệu.
Bảng 2: Các loại plasmid dùng trong thí nghiệm - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Bảng 2.

Các loại plasmid dùng trong thí nghiệm Xem tại trang 31 của tài liệu.
Bảng 4: Hóa chất dùng trong thí nghiệm - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Bảng 4.

Hóa chất dùng trong thí nghiệm Xem tại trang 32 của tài liệu.
Bảng 3: Máy móc dùng trong thí nghiệm - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Bảng 3.

Máy móc dùng trong thí nghiệm Xem tại trang 32 của tài liệu.
Hình 2.1. Sơ đồ quá trình gắn nối đoạn gen 27aa với gen LTB - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 2.1..

Sơ đồ quá trình gắn nối đoạn gen 27aa với gen LTB Xem tại trang 33 của tài liệu.
2.2.2 Phƣơng pháp PCR từ khuẩn lạc (colony PCR) - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

2.2.2.

Phƣơng pháp PCR từ khuẩn lạc (colony PCR) Xem tại trang 35 của tài liệu.
Hình 2.3. Sơ đồ thí nghiệm biểu hiện tạm thời gen 27aa_LTB trong cây thuốc lá - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 2.3..

Sơ đồ thí nghiệm biểu hiện tạm thời gen 27aa_LTB trong cây thuốc lá Xem tại trang 37 của tài liệu.
Hình 3.1: Điện di sản phẩm PCR nhân đoạn gen 27aa - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.1.

Điện di sản phẩm PCR nhân đoạn gen 27aa Xem tại trang 40 của tài liệu.
Hình 3.2. Điện di sản phẩm PCR nhân đoạn LTB và ghép nối 27aa_LTB - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.2..

Điện di sản phẩm PCR nhân đoạn LTB và ghép nối 27aa_LTB Xem tại trang 41 của tài liệu.
Hình 3.3. Điện di sản phẩm cắt plasmid pBT_27aa_LTB A: Sơ đồ vector pBT - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.3..

Điện di sản phẩm cắt plasmid pBT_27aa_LTB A: Sơ đồ vector pBT Xem tại trang 42 của tài liệu.
Hình 3.4: Kết quả so sánh trình tự đoạn 27aa_LTB với trình tự gốc lần - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.4.

Kết quả so sánh trình tự đoạn 27aa_LTB với trình tự gốc lần Xem tại trang 43 của tài liệu.
BamHI và NotI. Kết quả sản phẩm cắt được thể hiện trên hình 3.5B. - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

am.

HI và NotI. Kết quả sản phẩm cắt được thể hiện trên hình 3.5B Xem tại trang 45 của tài liệu.
Hình 3.6: Điện di sản phẩm cắt plasmid pET21_27aa_LTB tách từ E.coli BL21 - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.6.

Điện di sản phẩm cắt plasmid pET21_27aa_LTB tách từ E.coli BL21 Xem tại trang 46 của tài liệu.
Hình 3.7. Điện di sản phẩm biểu hiện protein ở E.coli BL21 - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.7..

Điện di sản phẩm biểu hiện protein ở E.coli BL21 Xem tại trang 47 của tài liệu.
Hình 3.8. Điện di sản phẩm cắt plasmid pTRA_27aa_LTB bằng HindIII - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.8..

Điện di sản phẩm cắt plasmid pTRA_27aa_LTB bằng HindIII Xem tại trang 49 của tài liệu.
Hình 3.9. Điện di sản phẩm cắt plasmid pCB_27aa_LTB bằng HindIII A: Sơ đồ cấu trúc biểu hiện đoạn 27aa_LTB trong tế bào thực vật - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.9..

Điện di sản phẩm cắt plasmid pCB_27aa_LTB bằng HindIII A: Sơ đồ cấu trúc biểu hiện đoạn 27aa_LTB trong tế bào thực vật Xem tại trang 50 của tài liệu.
Hình 3.10. Kết quả điện di sản phẩm PCR colony - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.10..

Kết quả điện di sản phẩm PCR colony Xem tại trang 51 của tài liệu.
Hình 3.11 cho thấy các mẫu plasmid số1 và 2 được PCR đều xuất hiện băng có kích thước ~390bp tương đương với đối chứng (+) ở giếng số 3, điều này chứng tỏ sự có mặt của đoạn 27aa_LTB trong plasmid đã tách. - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.11.

cho thấy các mẫu plasmid số1 và 2 được PCR đều xuất hiện băng có kích thước ~390bp tương đương với đối chứng (+) ở giếng số 3, điều này chứng tỏ sự có mặt của đoạn 27aa_LTB trong plasmid đã tách Xem tại trang 52 của tài liệu.
Hình 3.12. Sơ đồ ảnh các bước Agro-infiltration - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.12..

Sơ đồ ảnh các bước Agro-infiltration Xem tại trang 53 của tài liệu.
Hình 3.13. Mẫu lá tiêm gen Gus được nhuộm bởi X-Gluc - Nghiên cứu biểu hiện peptit kháng nguyên từ protein vỏ của virut viêm não nhật bản làm tiền đề để sản xuất văcxin dùng qua đường miệng

Hình 3.13..

Mẫu lá tiêm gen Gus được nhuộm bởi X-Gluc Xem tại trang 54 của tài liệu.

Từ khóa liên quan

Trích đoạn

Nghiên cứu phát triển văcxin mớ

Phƣơng pháp PCR từ khuẩn lạc (colony PCR)

Biểu hiện đoạn peptit kháng nguyên trong tế bào thực vật

Nhân gen LTB và nối với gen 27aa

đối chứng âm vector pBT 2, 3, 4: các dòng plasmid tái tổ hợp

3: Sản phẩm cắt các dòng plasmid tái tổ hợp

Tài liệu cùng người dùng

Tài liệu liên quan