Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu đặc điểm sinh học của một số chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng Pseudomonas aeruginosa
TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌCTRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌCBỘ MÔN KHOA HỌC SỰ SỐNGBỘ MÔN KHOA HỌC SỰ SỐNGNGUYỄN THỊ LIỄUNGUYỄN THỊ LIỄUNGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN CÓ HOẠT TÍNH KHÁNG Pseudomonas aeruginosaKHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌCKHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌCGiáo viên hướng dẫn: TS. Vi Thị Đoan ChínhGiáo viên hướng dẫn: TS. Vi Thị Đoan ChínhThThái Nguyên ái Nguyên - 2009- 2009 NỘI DUNG BÁO CÁONỘI DUNG BÁO CÁO1. Mở đầu1. Mở đầu2. Đối tượng, vật liệu và phương pháp nghiên cứu 2. Đối tượng, vật liệu và phương pháp nghiên cứu 3. Kết quả và thảo luận3. Kết quả và thảo luận4. Kết luận và kiến nghị4. Kết luận và kiến nghị MỞ ĐẦU1. Đặt vấn đề1. Đặt vấn đề- Nhiễm trùng bệnh viện đang là mối đe dọa đến tính mạng cũng như gây tổn - Nhiễm trùng bệnh viện đang là mối đe dọa đến tính mạng cũng như gây tổn thất nặng nề về kinh tế cho hàng triệu người dân trên thế giới.thất nặng nề về kinh tế cho hàng triệu người dân trên thế giới.- - Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa là một trong những tác nhân gây nhiễm trùng là một trong những tác nhân gây nhiễm trùng bệnh viện hàng đầu.bệnh viện hàng đầu.- Không những thế - Không những thế Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa ngày càng kháng lại nhiều ngày càng kháng lại nhiều CKS sử dụng trong điều trị.CKS sử dụng trong điều trị.- Trong các vi sinh vật có khả năng sinh kháng sinh thì xạ khuẩn đóng vai trò - Trong các vi sinh vật có khả năng sinh kháng sinh thì xạ khuẩn đóng vai trò quan trọng nhất, chiếm tới 80% CKS được mô tả.quan trọng nhất, chiếm tới 80% CKS được mô tả.- Nhằm góp phần tìm kiếm những chủng xạ khuẩn có khả năng sinh kháng - Nhằm góp phần tìm kiếm những chủng xạ khuẩn có khả năng sinh kháng sinh điều trị các bệnh nhiễm trùng bệnh viện nói chung và nhiễm sinh điều trị các bệnh nhiễm trùng bệnh viện nói chung và nhiễm Pseudomonas Pseudomonas aeruginosaaeruginosa nói riêng, chúng tôi thực hiện đề tài nói riêng, chúng tôi thực hiện đề tài:“ Nghiên cứu đặc điểm sinh :“ Nghiên cứu đặc điểm sinh học của một số chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng học của một số chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng Pseudomonas Pseudomonas aeruginosa”.aeruginosa”. 2. Mục tiêu nghiên cứu- Nghiên cứu các đặc điểm sinh học và đặc điểm phân loại của hai chủng xạ khuẩn đã được lựa chọn.- Phân loại đến loài hai chủng xạ khuẩn nghiên cứu.3. Nội dung nghiên cứu- Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, đặc điểm nuôi cấy, đặc điểm sinh lý, sinh hoá của hai chủng xạ khuẩn đã được lựa chọn.- Nghiên cứu các đặc điểm phân loại của hai chủng xạ khuẩn.- Phân loại đến loài đối với hai chủng xạ khuẩn nghiên cứu. ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU2.1. Đối tượng nghiên cứu2.1. Đối tượng nghiên cứu2.1.1. Xạ khuẩn2.1.1. Xạ khuẩnHai chủng xạ khuẩn DT 7.1 và HT 28 có hoạt tính kháng sinh mạnh, Hai chủng xạ khuẩn DT 7.1 và HT 28 có hoạt tính kháng sinh mạnh, kháng được cả vi khuẩn G+, vi khuẩn G-. Đặc biệt là khả năng kháng được một số kháng được cả vi khuẩn G+, vi khuẩn G-. Đặc biệt là khả năng kháng được một số chủng chủng Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa phân lập từ bệnh nhân. phân lập từ bệnh nhân.2.1.2. Vi sinh vật kiểm định2.1.2. Vi sinh vật kiểm định- Pseudomonas aeruginosa- Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145ATCC 10145 do Viện kiểm nghiệm - Bộ Y tế do Viện kiểm nghiệm - Bộ Y tế cung cấp.cung cấp.- Pseudomonas aeruginosa- Pseudomonas aeruginosa 4545 phân lập được từ bệnh nhân do Khoa vi sinh phân lập được từ bệnh nhân do Khoa vi sinh vật, bệnh viện Đa khoa trung ương Thái Nguyên cung cấp.vật, bệnh viện Đa khoa trung ương Thái Nguyên cung cấp. 2.3. Phương pháp nghiên cứu chính2.3.1. Phương pháp giữ giống2.3.2. Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh2.3.3. Nghiên cứu đặc điểm sinh học và phân loại xạ khuẩn2.3.4. Phương pháp xử lí số liệu KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN3. 1. Đặc điểm hình thái của chủng DT 7.1 và HT 283. 1. Đặc điểm hình thái của chủng DT 7.1 và HT 28Cuống sinh bào tử và bề mặt bào tử của chủng DT 7.1Cuống sinh bào tử và bề mặt bào tử của chủng DT 7.1 Cuống sinhCuống sinh bào tử và bề mặt bào tử của chủng HT 28 bào tử và bề mặt bào tử của chủng HT 28 3.2. Đặc điểm nuôi cấy của chủng DT 7.1 và HT 28Bảng 3.1 Đặc điểm nuôi cấy của hai chủng DT 7.1 và HT 28Môi trường Kí hiệu chủng Sinh trưởng Màu KTKS Màu KTCC Màu sắc tố hoà tanISP 1DT 7.1 + Trắng Trắng Không màuHT 28 ++ Xám Trắng xám Không màuISP 3DT 7.1 +++ Vàng Vàng đậm VàngHT 28 +++ Xám Xám Không màuISP 4DT 7.1 +++ Vàng Trắng Không màuHT 28 ++ Vàng Trắng Không màuISP 5DT 7.1 ++ Vàng Trắng Không màuHT 28 ++ Ghi xám Trắng xám Nâu đenISP 6DT 7.1 + Xám Trắng Vàng đậmHT 28 + Xám Trắng ĐenGause 1DT 7.1 +++ Xám Vàng VàngHT 28 +++ Xám Không màu Không màuGause 2DT 7.1 + Ghi xám Vàng VàngHT 28 + Xám Nâu thẫm Nâu79DT 7.1 ++ Trắng Trắng Không màuHT 28 ++ Trắng Nâu Vàng nâuGlycerin nitratDT 7.1 ++ Vàng Vàng đậm VàngHT 28 ++ Nâu xám Đỏ thẫm Đỏ ∗ Khả năng sinh sắc tố melanin- Chủng DT 7.1 không có khả năng làm biến đổi màu môi trường ISP6 từ vàng sang đen chứng tỏ nó không có khả năng sinh sắc tố melanin.- Chủng HT 28 có khả năng làm biến đổi màu môi trường ISP 6 từ vàng sang đen, chứng tỏ chủng này có khả năng sinh sắc tố melanin.Hình 3.5 Khả năng sinh sắc tố melanin của chủng DT 7.1 và HT 28 [...]... nâu xám Đỏ thẫm Đỏ Có sinh melanin Có sinh melanin Chưa rõ Rhodomycine HT 28 KẾT LUẬN 1 Đặc điểm hình thái của hai chủng DT 7.1 và HT 28 - Chủng DT 7.1 có cuống sinh bào tử xoắn (S) , bề mặt bào tử nhẵn (Sm) - Chủng HT 28 có cuống sinh bào tử thẳng (RF), bề mặt bào tử nhẵn (Sm) 2 Một số đặc điểm sinh lý, sinh hoá của hai chủng DT 7.1 và HT 28 - Khả năng đồng hoá đường : cả hai chủng đều có khả năng... ++ Sinh trưởng trung bình - Không sinh trưởng 3.3 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá 3.3.1 Khả năng đồng hoá các nguồn cacbon của chủng DT 7.1 và HT 28 Hình 3.6 Khả năng đồng hoá các Hình 3.7 Khả năng đồng hoá các nguồn đường của chủng DT 7.1 nguồn đường của chủng HT 28 3.3.2 Khả năng chịu muối Bảng 3.3 Khả năng chịu muối của chủng DT 7.1 và HT 28 Nồng độ muối (%) Chủng xạ khuẩn DT7.1 HT28 0 ++ ++ 0,5 ++ +++... +++ Sinh trưởng tốt + Sinh trưởng yếu ++ Sinh trưởng trung bình - Không sinh trưởng 3.3.3 Khả năng chịu nhiệt Bảng 3.4 Khả năng chịu nhiệt của chủng DT 7.1 và HT 28 Nhiệt độ 20oC 25oC 30oC 35oC 40oC 45oC 50oC DT 7.1 ++ +++ +++ +++ ++ + - HT 28 ++ +++ +++ +++ + - - Chủng Ghi chú: +++ Sinh trưởng tốt + Sinh trưởng yếu ++ Sinh trưởng trung bình - Không sinh trưởng 3.3.4 Ảnh hưởng của pH đến sinh trưởng của. .. sinh trưởng của xạ khuẩn Bảng 3.5 Ảnh hưởng của pH đến khả năng sinh trưởng của chủng DT 7.1 và HT 28 Thang pH Chủng 3 4 5 5,5 6 6,5 DT 7.1 - - + ++ ++ +++ HT 28 - - + + ++ +++ Ghi chú: +++ Sinh trưởng tốt + Sinh trưởng yếu 7 7.5 8 8,5 9 9,5 +++ +++ ++ + + - +++ + + - - ++ ++ Sinh trưởng trung bình - Không sinh trưởng 3.3.5 Khả năng sinh enzyme ngoại bào Bảng 3.6 Hoạt tính enzyme của chủng DT 7.1 và...3.3 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá 3.3.1 Khả năng đồng hoá các nguồn cacbon của chủng DT 7.1 và HT 28 Bảng 3 2 Khả năng đồng hoá các nguồn đường của chủng DT7.1 và HT 28 Chủng xạ khuẩn Nguồn đường DT7.1 HT28 Không có đường (Đối chứng âm) - - Glucose + ++ Arabinose +++ +++ Raffinose - ++ Maltose + +++ Lactose +++ +++ Inositol +++ ++ Fructose +++ +++ Ghi chú: +++ Sinh trưởng tốt + Sinh trưởng yếu ++ Sinh. .. là một chủng xạ khuẩn thuộc loài Streptomyces cinereoruber subsp cinereoruber và chủng này có tên gọi là Streptomyces cinereoruber subsp HT 28 Bảng 3.7 So sánh đặc điểm phân loại của chủng DT 7.1 với Streptomyces kursanovii Đặc điểm so sánh Cuống sinh bào tử Bề mặt bào tử KTKS MT ISP 3 KTCC Sắc tố KTKS MT Gause 1 KTCC Sắc tố KTKS KTCC MT Gause 2 Sắc tố KTKS MT Glycerin KTCC nitrat Sắc tố MT ISP 6 Sinh. .. khả năng chịu muối tối đa của chủng DT 7.1 là 9% và chủng HT 28 là 5% - Khả năng chịu nhiệt: Nhiệt độ tối ưu cho sinh trưởng của cả hai chủng là 25oC - 35oC - Xác định pH tối ưu: Chủng DT 7.1 sinh trưởng tốt nhất trên môi trường có pH là 6,5 - 7,5 và chủng HT 28 sinh trưởng tốt nhất trên môi trường có pH là 6,5 - 7 - Khả năng sinh enzyme ngoại bào: cả hai chủng đều có khả năng sinh các enzyme amylase,... amylase, protease, cellulase 3 Định loại hai chủng DT 7.1 và HT 28 - Chủng DT 7.1 có tên gọi Streptomyces kursanovii DT 7.1 - Chủng HT 28 có tên gọi Streptomyces cinereoruber subsp HT 28 KIẾN NGHỊ Hai chủng xạ khuẩn DT 7.1 và HT 28 có khả năng sinh kháng sinh mạnh, kháng được cả vi khuẩn G+ và G-, đặc biệt là khả năng kháng P aeruginosa Vì vậy cần tiếp tục nghiên cứu những vấn đề sau: - Tối ưu hóa điều... mm) Chủng Amylase Protease Cellulase DT 7.1 20,33 ± 0,58 19,67 ± 0,89 20,33 ± 0,89 HT 28 18,67 ± 0,58 14,67 ± 0,33 18,33 ± 0,89 3.3.5 Khả năng sinh enzyme ngoại bào Hình 3.8 Hoạt tính enzyme của chủng DT 7.1 và HT 28 3.4 Định loại hai chủng DT 7.1 và HT 28 - Chủng DT 7.1 có thể xem là một chủng xạ khuẩn thuộc loài Streptomyces kursanovii và có tên gọi là Streptomyces kursanovii DT 7.1 - Có thể xem chủng. .. hợp melanin Sinh tổng hợp CKS DT 7.1 Streptomyces kursanovii Xoắn Nhẵn Vàng Vàng đậm Vàng Xám Vàng Vàng Ghi xám Vàng Vàng Vàng Vàng đậm Vàng Xoắn Nhẵn Vàng Vàng đậm đến vàng cam Vàng Xám Vàng hơi đậm hoặc vàng cam Giống màu KTCC, đôi khi không màu Vàng đến ghi Vàng nâu Vàng Vàng Vàng đậm Vàng Không Chưa rõ Có sinh melanin Ostreogrisine, Fumaramycine Bảng 3.8 So sánh đặc điểm phân loại của chủng HT 28 . tài:“ Nghiên cứu đặc điểm sinh :“ Nghiên cứu đặc điểm sinh học của một số chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng học của một số chủng xạ khuẩn. tiêu nghiên cứu- Nghiên cứu các đặc điểm sinh học và đặc điểm phân loại của hai chủng xạ khuẩn đã được lựa chọn.- Phân loại đến loài hai chủng xạ khuẩn nghiên