Đang tải... (xem toàn văn)
Xác định tác nhân gây bệnh và nghiên cứu thử nghiệm một số loại thảo dược trong phòng trị bệnh vi khuẩn trên tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei)
http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông LâmTRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUẾKHOA THỦY SẢNKHÓA LUẬN TỐT NGHIỆPTÊN ĐỀ TÀI: XÁC ĐỊNH TÁC NHÂN GÂY BỆNH VÀ NGHIÊN CỨU THỬ NGHIỆM MỘT SỐ LOẠI THẢO DƯỢC TRONG PHÒNG TRỊ BỆNH VI KHUẨN TRÊN TÔM THẺ CHÂN TRẮNG (Penaeus vannamei)Sinh viên thực hiện : Nguyễn Thế VươngLớp : Thủy sản 39AĐịa điểm thực tập : Phòng thí nghiệm Khoa thủy sản Trường Đại học nông lâm HuếGiáo viên hướng dẫn : Nguyễn Anh TuấnNăm 2009 http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông LâmLỜI CẢM ƠNĐể hoàn thành khóa luận tốt nghiệp, ngoài sự cố gắng của bản thân, em được sự giúp đỡ của rất nhiều thầy cô giáo. Em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến trường Đại học Nông lâm Huế, Ban chủ nhiệm Khoa Thủy sản, bộ môn Ngư Y, Phòng thí nghiệm Khoa thủy sản đã tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành chương trình thực tập.Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn Thầy giáo Nguyễn Anh Tuấn, đã tận tình hướng dẫn, chỉ dạy trong suốt quá trình thực tập cuối khóa và hoàn thành bài khóa luận. Em cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất cả thấy cô giáo Khoa Thủy sản. Trong thời gian thực hiện đề tài tốt nghiệp, mặc dù đã có rất nhiều cố gắng, tuy nhiên do thời gian có hạn và kiến thức còn hạn chế nên không thể tránh được những sai xót. Rất mong được sự quan tâm, góp ý của thầy cô để khóa luận hoàn thiện hơn.Em xin chân thành cảm ơn!Huế, ngày 25 tháng 5 năm 2009 Sinh viên Nguyễn Thế Vương http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông LâmMỤC LỤCDANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, ĐỒ THỊDANH MỤC CÁC HÌNHPHẦN 1. ĐẶT VẤN ĐỀ . 1 PHẦN 2. TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU . 3 2.1. Tình hình dịch bệnh tôm tại Việt Nam và Thừa Thiên Huế 3 2.1.1. Tại Việt Nam 3 2.1.2. Tại Thừa Thiên Huế 5 2.2. Tình hình nghiên cứu bệnh vi khuẩn trên tôm của thế giới và Việt Nam 6 2.2.1. Trên thế giới 6 2.2.2. Tại Việt Nam 8 2.3. Tình hình sử dụng hợp chất chiết xuất từ thảo dược 10 2.3.1. Trên thế giới 10 2.3.2 Tại Việt Nam 12 2.4. Một số thảo dược sử dụng trong nuôi trồng thủy sản . 14 PHẦN 3. ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu . 16 3.2.1. Tôm Thẻ Chân Trắng Penaeus Vannamei 16 3.2.2. Các loại thảo dược . 17 3.4. Dụng cụ - Hoá chất - Môi trường . 19 3.4.1. Dụng cụ thí nghiệm 19 3.4.2. Môi trường , hoá chất . 19 3.5. Phương pháp nghiên cứu . 21 3.5.1. Sơ đồ nghiên cứu tổng quát . 21 3.5.3. Phương pháp nuôi cấy phân lập, định danh vi khuẩn . 22 3.5.4. Phương pháp xác định mật độ vi khuẩn . 26 3.5.6. Phương pháp thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của thảo dược 27 3.6. Phương pháp xử lý số liệu 28 PHẦN 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 4.1. Trọng lượng, chiều dài tôm thẻ chân trắng bị bệnh 29 4.2. Kết quả phân lập, định danh vi khuẩn gây bệnh. 29 4.2.1 Kết quả quan sát dấu hiệu bệnh lý 29 4.3. Kết quả thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của các loại thảo dược 32 4.3.3. Khả năng kháng khuẩn của diếp cá đối với các chủng vi khuẩn phân lập được 38 4.3.4. Khả năng kháng khuẩn của rau má đối với các chủng vi khuẩn phân lập được 39 4.4. Kết quả so sánh khả năng kháng khuẩn của mỗi loại thảo dược đối với các chủng vi khuẩn phân lập được 41 4.5. Kết quả so sánh khả năng kháng khuẩn giữ các loại thảo dược khác nhau đối với các chủng vi khuẩn phân lập được 42 Trang http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông Lâm5.1. Kết luận . 45 5.2. Kiến nghị . 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 46 http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông LâmDANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU, ĐỒ THỊBảng 4.1. Trọng lượng, chiều dài mẫu tôm bị bệnh .28Bảng 4.2. Kết quả phân lập và định danh vi khuẩn gây bệnh trên tôm thẻ chân trắng .39Bảng 4.3. Khả năng kháng khuẩn của diếp đối với V.alginolyticus 37Bảng 4.4. Khả năng kháng khuẩn của diếp cá đối với Vibrio harvey .37Bảng 4.5. Khả năng kháng khuẩn của rau má đối với Vibrio alginolyticus 38Bảng 4.6. Khả năng kháng khuẩn của rau má đối với Vibrio harvey .39Bảng 4.7. So sánh khả năng kháng khuẩn của thảo dược đối với các chủng vi khuẩn phân lập được 40Sơ đồ 3.1. Sơ đồ nghiên cứu tổng quát .21Sơ đồ 3.2. Sơ đồ xác định mật độ vi khuẩn .26Đồ thị 4.1. Khả năng kháng khuẩn của tỏi đối với Vibrio alginolyticus .32Đồ thị 4.2. Khả năng kháng khuẩn của tỏi ở đối với Vibrio harveyi .32Đồ thị 4.3. Khả năng kháng khuẩn của hợp chất tỏi, lá húng (tỷ lệ 1:1) đối với Vibrio alginolyticus .35Đồ thị 4.4. Khả năng kháng khuẩn của hợp chất tỏi, lá húng ( tỷ lệ 1:1) đối với Vibrio harvey 35Đồ thị 4.5. Khả năng kháng khuẩn của các loại thảo dược khác nhau đối với Vibrio alginolyticus 41Đồ thị 4.6. So sánh khả năng kháng khuẩn của các loại thảo dược đối với Vibrio harvey .42 http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông LâmDANH MỤC CÁC HÌNHHình 3.1. Tôm thẻ chân trắng .16Hình 3.2. Tỏi 17Hình 3.3. Lá húng .17Hình 3.4. Cây rau má .18Hình 3.5. Cây diếp cá 18Hình 3.6. Cân trọng lượng, đo chiều dài tôm bị bệnh .21Hình 3.7. Thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của thảo dược .27Hình 4.1. Dấu hiệu bên ngoài của tôm bị bệnh 28Hình 4.2. Vibrio alginolyticus 30Hình 4.3. Vibrio harveyi .30Hình 4. 4. Khuẩn lạc của vi khuẩn Vibrio alginolyticus trên môi trường TCBS 31Hình 4. 5. Khuẩn lạc của vi khuẩn Vibrio harveyi trên môi trường TCBS 31Hình 4.6. Kết quả tạo vòng kháng khuẩn của tỏi khi thử nghiệm trên V.alginolyticus .33Hình 4.7. Kết quả tạo vòng kháng khuẩn của tỏi khi thử nghiệm trên V.harveyi 33Hình 4.8. Kết quả tạo vòng kháng khuẩn của hợp chất tỏi, lá húng khi thử nghiệm trên V.alginolyticus .36Hình 4.9. Kết quả tạo vòng kháng khuẩn của các thảo dược 43 http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông LâmPHẦN 1. ĐẶT VẤN ĐỀNgành Nuôi trồng thủy sản Việt Nam ngày càng phát triển, trở thành ngành kinh tế mũi nhọn của quốc gia, không chỉ mang lại nhiều ngoại tệ cho đất nước mà còn góp phần đáng kể vào sự thành công trong công tác xóa đói giảm nghèo, bảo đảm an ninh lương thực, làm thay đổi đời sống dân cư các vùng miền núi và ven biển. [4] Tuy nhiên, trong những năm gần đây, dịch bệnh và ô nhiễm môi trường đang trở thành những thách thức lớn đối với ngành Nuôi trồng thủy sản. Thiệt hại do dịch bệnh gây ra trên tôm sú tăng từ 0,5 tỉ USD năm 1995 - 1997 lên đến 1,5 tỉ USD trong giai đoạn 2001 – 2002. Trong số những tác nhân gây bệnh trên động vật thủy sản, bệnh do vi khuẩn gây ra chiếm tỷ lệ khá lớn. Điều này đã cản trở việc phát triển công nghiệp sản xuất giống thủy sản cũng như nuôi thương phẩm. [7], [19]Một khi nuôi trồng thủy sản đã phát triển ở mức công nghiệp, thì kỹ thuật quản lý môi trường và dịch bệnh đã trở thành các bí quyết quan trọng để đảm bảo sự thành công của một vụ nuôi. Thông thường, để hạn chế dịch bệnh do vi khuẩn người nuôi thường sử dụng kháng sinh, các loại hóa chất đặc trị. Tuy nhiên, việc sử dụng hóa chất, kháng sinh không đúng quy cách, không đúng liều lượng đã gây lên tác hại lớn như là tạo ra các dòng vi khuẩn kháng thuốc, làm suy thoái môi trường, ảnh hưởng không tốt tới sức khỏe con người [10], [14], [15]. Hơn nữa hiện nay theo các quy định về an toàn thực phẩm, nghiêm cấm sự tồn dư các loại hóa chất, kháng sinh có trong động vật thủy sản. Chính vì thế chúng ta cần có biện pháp tốt để vượt qua những rào cản này. [7]Những năm gần đây xu hướng sử dụng thảo dược trong chữa trị bệnh trên động vật thủy sản được xem như một giải pháp có biên độ an toàn cao trong bảo quản, điều trị bệnh nấm và vi khuẩn gây ra trên động vật thủy sản [9]1 http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông LâmTừ đó, đề tài “Xác định tác nhân gây bệnh và nghiên cứu thử nghiệm một số loại thảo dược trong phòng trị bệnh vi khuẩn trên tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei)” nhằm mục đích:1. Phân lập và định danh một vài chủng vi khuẩn gây bệnh trên tôm thẻ chân trắng.2. Thử nghiệm một số thảo dược có khả năng phòng trừ bệnh vi khuẩn trên tôm thẻ chân trắng.2 http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông LâmPHẦN 2. TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU2.1. Tình hình dịch bệnh tôm tại Việt Nam và Thừa Thiên Huế2.1.1. Tại Việt NamNăm 1990, Việt Nam có hơn 187.000 ha mặt nước nuôi tôm với sản lượng đạt được khoảng 31.000 tấn. Năm 1995, diện tích nuôi tăng lên 260.000 ha, sản lượng đạt được 52.000 tấn. Nhưng mặt trái của sự phát triển nhanh chóng, không quy hoạch đã dẫn đến dịch bệnh bùng phát ở nhiều nơi. Năm 1994, dịch bệnh bùng phát tại Đồng bằng sông Cửu Long: Trà Vinh, Bến Tre, Sóc Trăng, Long An, Nha Trang … gây thiệt hại hàng chục tỷ đồng cho bà con nuôi tôm. [7]Năm 1996, tại các tỉnh miền Nam (từ Phú Yên đến Cà Mau) dịch bệnh đã xảy ra trên 84.917 ha, trong đó nuôi quảng canh: 52.017 ha, quảng canh cải tiến: 29.011 ha, bán thâm canh: 3.829 ha. Tổng thiệt hại lên đến hàng chục tỷ đồng. Các tỉnh bị dịch bệnh nặng như Cà Mau hơn 70.000 ha, Kiên Giang hơn 4.000 ha, Bến Tre hơn 3.000 ha. [7]Năm 1997, theo ước tính của Nguyễn Việt Thắng (báo cáo nghiên cứu khoa học) tỉnh Bến Tre bị thiệt hại nặng nề nhất với 20% tôm thả bị chết, Trà Vinh với hơn 15% tôm thả bị chết. Cũng trong thời gian này dịch bệnh bùng phát nghiêm trọng ở các tỉnh Miền Trung, đặc biệt vào tháng 2-3. Tổng số diện tích bị bệnh chiếm khoảng 80% tổng diện tích nuôi trồng gây thiệt hại lớn cho các tỉnh miền Trung. [20]Báo cáo kết quả Nuôi trồng thủy sản năm 2003 của ngành đã đưa ra vài con số: Cả nước có 546.757 ha nuôi tôm nước lợ thương phẩm, trong đó diện tích bị bệnh khoảng 30.083 ha. Riêng các tỉnh thành ven biển từ Ðà Nẵng đến Kiên Giang có tới 29.200 ha nuôi tôm bị chết, chiếm 97,06% diện tích có tôm bị chết trong cả nước. Các bệnh xảy ra với tôm chủ yếu là đốm trắng (WSSV), bệnh MBV (Monodon Baculovirus), bệnh do vi khuẩn vibrio, bệnh do ký sinh trùng, gần đây xuất hiện thêm bệnh phân trắng, teo gan ở một vài nơi. Tại các tỉnh Bắc Trung Bộ, theo báo cáo của Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản I cho thấy: Thanh Hóa có hơn 40% diện tích nuôi tôm bị nhiễm virut đốm trắng, tập trung ở vùng nuôi tôm công nghiệp như Khu công nghiệp Hoằng Phụ, với 3 http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Viên Nông Lâm70/110 ha nuôi tôm bị nhiễm bệnh. Nghệ An có 47,8% diện tích nuôi tôm nhiễm virus đốm trắng; 30,4% bệnh MBV; 54,5% bệnh đầu vàng. Ở Hà Tĩnh, trong số 150 ha nuôi tôm bị bệnh, có 67 ha nhiễm bệnh virus đốm trắng, trong đó 27 ha có tôm nuôi chết hoàn toàn. Ở các tỉnh Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên Huế, cũng có từ xấp xỉ trăm ha cho tới vài trăm ha nuôi tôm bị bệnh.[18]Tại các tỉnh miền Trung, Nam Trung Bộ, theo Phòng bệnh học thủy sản -Trung tâm nghiên cứu Thủy sản III, Khánh Hòa có tỷ lệ diện tích nuôi tôm bị bệnh thấp nhất 14,3%, cao nhất ở Ninh Thuận 52,4%. Tỷ lệ nhiễm virus đốm trắng ở tôm nuôi tại khu vực này tuy có giảm nhưng bệnh phân trắng, teo gan lại xảy ra hầu hết ở các vùng nuôi trọng điểm như Ninh Hải, Phan Rang, Ninh Phước có những nơi lên tới 90-95% tôm bị nhiễm bệnh.[18]Theo kết quả nghiên cứu của Viện nghiên cứu Nuôi trồng thủy sản II, tại các tỉnh Nam Bộ tỷ lệ nhiễm bệnh virus đốm trắng trên mẫu tôm ở ao nuôi quảng canh cải tiến chiếm tới 56%, 50% tôm nhiễm bệnh MBV. Bệnh virus đốm trắng gây chết tôm hàng loạt, tác hại lớn đến năng suất, sản lượng tôm của khu vực.[18]Năm 2007, dịch bệnh đã bùng phát trên hơn 30 ha ao nuôi tôm trên cát ở huyện Phù Mỹ (Bình Định). Tôm chết chủ yếu ở giai đoạn 30 - 40 ngày nuôi gây tổn thất hàng chục tỉ đồng. Năm 2005, vùng nuôi tôm trên cát trọng điểm tỉnh Bình Định tập trung tại hai xã Mỹ An, Mỹ Thắng (Phù Mỹ) cũng xảy ra dịch bệnh.[19]Những tháng đầu năm 2008, một số tỉnh nuôi tôm ở Đồng Bằng Sông Cửu Long như: Kiên Giang, Bến Tre, Trà Vinh, Cà Mau bị thiệt hại nặng do tôm chết hàng loạt. Nghiêm trọng nhất tại Cà Mau có khoảng 34.000 ha tôm bị nhiễm bệnh, thiệt hại từ 10% đến 70%. Việc tăng trưởng quá nhanh chóng về diện tích nuôi tôm đã nảy sinh nhiều bất cập về ô nhiễm, kiểm soát dịch bệnh, chất lượng sản phẩm dẫn đến thiệt hại không nhỏ về kinh tế cũng như môi trường. [20]4 [...]... âm từ mẫu tôm bị bệnh đục thân ở Hải Phòng. [22] Gần đây công trình nghiên cứu lớn là đề tài cấp nhà nước mang mã số : KN -04-12 do Hà Ký đã nghiên cứu được 13 loại bệnh vi khuẩn tôm Ông đã công bố đầy đủ các khâu từ phân lập vi khuẩn, tác nhân gây bệnh, dấu hiệu bệnh lý, phân bố và lan truyền, biện pháp phòng trị với một số bệnh được đi sâu nghiên cứu như: bệnh phát sáng ở ấu trùng tôm sú, bệnh đỏ dọc... vi khuẩn cũng là một tác nhân khá nguy hại khác cho tôm nuôi nếu đàn tôm bị nhiễm khuẩn với cường độ cao, số lượng lớn [20] Năm 1996, Đỗ Thị Hoà cùng cộng sự đi sâu vào nghiên cứu các tác nhân gây bệnh trên tôm sú ở khu vực Nam Trung Bộ phát hiện vi khuẩn cảm nhiễm trên tôm, kết quả này mở ra nhiều triển vọng cho nghề nuôi tôm tại Vi t Nam Năm 1997, Đỗ Thị Hòa nghiên cứu và phát hiện ra vi khuẩn vibrio... nghiên cứu một số bệnh do tác nhân vi khuẩn, nấm nguyên sinh, động vật và giun tròn Trong đó một số bệnh gây tác hại lớn được tác giả cho biết đó là: bệnh phát sáng, bệnh đỏ dọc thân trên tôm sú, bệnh mềm vỏ, bệnh do động vật đơn bào Năm 1994, khi dịch bệnh tôm gây chết hàng loạt ở đồng bằng sông Cửu Long Nguyễn Vi t Thắng và cộng tác vi n đã nghiên cứu đề tài “Tìm hiểu nguyên nhân tôm chết ở đồng bằng... isoquexitrin và không chứa quexitrin Độ tro trung bình là 11,4%, tro không tan trong HCl là 2,7% 3.3 Nội dung nghiên cứu Phân lập, định danh vi khuẩn gây bệnh ở tôm thẻ chân trắng Thử nghiệm tác dụng của các thảo dược lên chủng vi khuẩn phân lập được So sánh khả năng kháng khuẩn của các loại thảo dược 3.4 Dụng cụ - Hoá chất - Môi trường 3.4.1 Dụng cụ thí nghiệm Tủ ấm để nuôi cấy vi khuẩn Kính hiển vi có vật... kosam, enkosam có tác dụng điều trị lỵ amip [20] Các kết quả trên chỉ mới bước đầu thử nghiệm sàng lọc các loại thảo dược chưa xác định được thành phần nào trong thực vật có tác dụng trên virus và vi khuẩn 2.3.2 Tại Vi t Nam Từ xa xưa, dân ta đã biết dùng những cây cỏ quen thuộc trong vườn nhà để trị các bệnh thông thường như một số bệnh đường ruột, bệnh đường hô hấp, tiết niệu, trị mụn nhọt, rửa vết... quan đến bệnh do vi khuẩn [20] Nhóm vi khuẩn vibrio, một trong những tác nhân gây bệnh chủ yếu đối với động vật thủy sản Bệnh do vi khuẩn vibrio đã được phát hiện rất sớm từ năm 1970 bởi Tukiash Đến năm 1977, Fisher đã phát hiện ra vi khuẩn vibrio gây bệnh trên các loài tôm hùm châu Mỹ, châu Á Kết quả này cũng được công bố bởi Roald và Bowser, 1981 Năm 1996, Lightner phát hiện các loài tôm he (Penaeus. .. rằng: bệnh vibrio, đặt biệt bệnh phát sáng rất phổ biến trong các trại sản xuất tôm sú giống, trong ao nuôi thương phẩm ở Vi t Nam, có thể gặp bất kỳ một cơ sở sản xuất nào (Đỗ Thị Hòa, 1995-1997).[4], [8] Năm 1991, Nguyễn Trọng Nho cùng cộng sự khi nghiên cứu một số bệnh trên tôm sú ở Khánh Hoà đã thông báo một số dấu hiệu bệnh lý trên tôm sú nuôi Đỗ Thị Hoà năm 1994, với đề tài nghiên cứu một số bệnh. .. loại tác nhân thường cảm nhiễm ở một giai đoạn nhất định của đối tượng nuôi Tôm thẻ chân trắng dễ mẫn cảm với nhiều loại tác nhân gây bệnh khác nhau nên vi c xác định giai đoạn phát triển của tôm sẽ giúp khoanh vùng được tác nhân gây bệnh để đưa ra kết quả chính xác hơn trong quá trình phân lập Kết quả kiểm tra trọng lượng, chiều dài được thể hiện qua bảng 4.1 Bảng 4.1: Trọng lượng, chiều dài mẫu tôm. .. khẳng định rằng nhiều cây có tác dụng kháng khuẩn rất lớn Theo kết quả nghiên cứu của Nguyễn Văn Hưởng và cộng sự (1959), trên 1000 cây thuốc, chỉ ra rằng kháng sinh thực vật sử dụng rất an toàn, có tác dụng mạnh, nhóm nghiên cứu đã đưa ra chế phẩm cây tô mộc trị bệnh tiêu chảy Ở Miền Bắc, Hà Ký (1995) và cộng sự trong chương trình KN 04 - 12 đã nghiên cứu một số loài thảo dược dùng để phòng trị bệnh trên. .. đục 5 lỗ trên mặt thạch với đường kính 3mm/lỗ (mỗi nồng độ thảo dược thử nghiệm được lặp lại 5 lần) Nhỏ vào mỗi lỗ 0.1ml dịch chiết dược liệu rồi giữ ở nhiệt độ 300C – 370C Sau 24 giờ lấy ra xác định độ dài đường 27 Hình 3.7 Thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của các loại thảo dược http://sinhviennonglam.com - Diễn Đàn Sinh Vi n Nông Lâm kính vòng tròn kháng khuẩn Mỗi loại thảo dược được thử nghiệm với . chủng vi khuẩn gây bệnh trên tôm thẻ chân trắng. 2. Thử nghiệm một số thảo dược có khả năng phòng trừ bệnh vi khuẩn trên tôm thẻ chân trắng. 2 http://sinhviennonglam.com. nghiệm một số loại thảo dược trong phòng trị bệnh vi khuẩn trên tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei) nhằm mục đích:1. Phân lập và định danh một vài chủng
