Semina: CNSH VI SINH VẬT KIỂM NGHIỆM VI SINH TRONG NƯỚC SINH HOẠT GVHD:Nguyễn Thị Kim Cúc Nhóm: WAO_One Lớp :50SH TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CNSH & MT Nội dung I./ Vai trò của nước:  Đối với cơ thể sống: - Là một dung môi quan trọng nhất trong tế bào sống. - Nước tham gia như một thành phần rất quan trọng trong cấu trúc của tế bào. - Nước tham gia vào các phản ứng thủy phân & các phản ứng oxy hóa trong tế bào. - Nước như là một bộ xương có tính chất đệm tạo nên khung mềm của tế bào, ở đó các cơ quan tồn tại & hoạt động sinh lý bình thường. - Nước tham gia quá trình điều hòa nhiệt của cơ thể. - Nước tham gia bôi trơn các bộ phận của đường tiêu hóa, đường hô hấp, các khớp xương.  Trong sinh hoạt: Nước là một nhu cầu sống không thể thay thế được. Nước cung cấp cho các hoạt động của tế bào, mô, cơ thể, cũng như cho các nhu cầu về tắm, giặt, vệ sinh nhà cửa…  Trong sản xuất: Nước là một loại nguyên liệu rất đặc biệt, một loại nguyên liệu không thể thay thế. Nước dùng trong sản xuất chủ yếu là dùng vào hoạt động sản xuất nông nghiệp & sản xuất công nghiệp, trong đó nước dùng trong nông nghiệp chiếm trên 70%.  Tóm lại nước rất quan trọng trong đời sống, không thể thiếu được và càng nghiêm trọng hơn nếu nước bị ngộ độc, hay bị ô nhiễm. I./ Vai trò của nước: II./ Những chỉ tiêu tiêu chuẩn trong nước sinh hoạt:  Tiêu chuẩn quốc gia Việt Nam (TCVN 5942-1995) quy định nguồn cấp nước sinh hoạt nhưng phải qua quá trình xử lý giới hạn tối đa coliforms cho phép 5000MPN/100ml.  Tiêu chuẩn bộ y tế (QCVN 02: 2009/BYT): Coliform tổng số vi khuẩn /100ml: 50 E. coli hoặc Coliform chịu nhiệt vi khuẩn /100ml: 0 III./ Đặc điểm sinh lý, sinh hóa của vi sinh vật: 1/Coliforms: - Coliforms là những trực khuẩn gram âm, hình que, không sinh bào tử, hiếu khí hoặc kị khí tùy ý. - Có khả năng lên men lactose sinh acid là sinh hơi ở 37 o C trong 24 - 48h. - Nhóm Coliforms gồm 4 nhóm: + Escherichia (E.coli) + Citrobacter + Klebsiella + Enterobacter 2/ Coliforms chịu nhiệt: - Là những Coliforms có khả năng lên men lactose sinh hơi trong khoảng 24h khi được ủ ở 44 o C trong môi trường EC. 3/ Coliforms phân (E.coli giả định): - Là Coliforms chịu nhiệt có khả năng sinh indole khi được ủ khoảng 24h ở 44.5 o C trong môi trường Trypton. Fecal Coliform III./ Đặc điểm sinh lý,sinh hóa của vi sinh vật: IV/ Phương pháp lấy mẫu và phân tích các chỉ tiêu vi sinh vật 1.1/ Phương pháp lấy mẫu: a/ Đặc điểm của mẫu: • Mật độ của vsv trong nước, thực phẩm và mỹ phẩm thường thấp hơn từ vài chục đến vài triệu lần so với trong bệnh phẩm và phân bố không đều trong mẫu. • Trong quá trình xử lý nước vsv hiện diện thường bị tổn thương ít nhiều và giảm sức sống, do các biện pháp xử lý như lọc, khử trùng (clo, ozon, tia cực tím .).  vì vậy khi kiểm nghiệm nước ta cần có thêm bước phục hồi sức sống và tăng sinh chọn lọc nhằm gia mật độ tương đối của các vsv cần phát hiện, ức chế sự tăng sinh trưởng các vsv không mong muốn khác. IV/ Phương pháp lấy mẫu và phân tích các chỉ tiêu vi sinh vật 1.1/ Phương pháp lấy mẫu: b/ Phương pháp thu mẫu: Nguyên tắc thu mẫu: mẫu thu được có tính đại diện cho khối nước cần kiểm tra. Đối với nước mặt: mẫu nước được thu vào bình thủy tinh dung tích 100-1000ml đã khử trùng. Trên mỗi bình chứa mẫu cần ghi chú rõ ràng, đầy đủ các thông tin cần thiết liên quan đến mẫu (địa điểm, thời gian, mục đích, người thu…) Mẫu nên được phân tích trong vòng 6h sau khi thu mẫu. Chuẩn bị mẫu • Dung dịch muối pepton SPW: hấp khử trùng và được cho vào các ống nghiệm vô trùng mỗi ống 9ml. • Lấy 10ml mẫu cho vào bình tam giác chứa 90ml dung dịch SPW đã khử trùng lắc đều. 1.2/ Phân tích các chỉ tiêu vsv IV/ Phương pháp lấy mẫu và phân tích các chỉ tiêu vi sinh vật Mẫu gốc 1ml 9ml dd SPW 1ml 9ml dd SPW 9ml dd SPW 9ml dd SPW 1ml 1ml Độ pha loãng 10 1 10 2 10 3 10 4 [...]... nghiệm ở 37oC trong 48h Ghi nhận ống có sinh hơi (+) - Cấy dịch mẫu từ các ống LSB dương tính (+) sang các ống chứa canh BGBL - Ủ 37oC ± 1oC trong 48h Ghi nhận số ống (+) có sinh hơi với mỗi độ pha loãng Quy trình phân tích: b/ Định lượng Cliforms chịu nhiệt: • Dùng que cấy vòng, chuyển một vòng dịch từ ống LSB (+) sang môi trường EC • Ủ trong 44.5 ± 0,2oC trong 24h  Đếm các ống có sinh hơi (+),... tổng số) hoặc mt EC (trường hợp khẳng định Coliform phân) - Ủ các ống BGBL ở 37±1oC và các ống EC ở 44oC trong 2448h - Kết quả khẳng định là (+) khi vi khuẩn tăng trưởng làm đục MT & sinh hơi trong ống Durham - Tính tỉ lệ khẳng định là tỉ số giữa số khuẩn lạc cho kết quả (+) với số khuẩn lạc được dùng trong thử nghiệm khẳng định - Trường hợp thử nghiệm khẳng định Coliform phân, các khuẩn lạc cho kết quả... 37oC, 24-48h Cấy vào ống canh EC, ủ ở 44oC, 24-48h Đếm số ống canh(+) (sinh hơi) Tính tỉ lệ khẳng định Coliforms Chọn ống canh (+) (sinh hơi) Thử nghiệm Indol Cấy vào ống canh Trypton, MR-VP, thạch SC Citrate Đếm số ống mt EC(+)& Indol(+), tính tỉ lệ khẳng định Coliform phân Thử nghiệm IMViC Mật độ Coliforms Đếm số ống mt EC(+)&IMViC ++ , tính tỉ lệ khẳng định E.coli Mật độ Coliforms phân Mật độ E.coli... trường EC sang môi trường EMB ủ 37oC trong 24h  khuẩn lạc tròn, dẹt hình đĩa và có ánh kim tím là khuẩn lạc của Colifoms phân (E coli giả định) Quy trình phân tích: c/ Định lượng Coliforms phân: - Chọn khuẩn lạc đường kính lớn hơn 1ml cấy vào canh Tryptone, ủ ở 44,5 ± 0,2oC, trong 24h.Nhỏ thuốc thử Kovac’s vào các ống nghiệm: ống có xuất hiện màu đỏ trong môi trường trong vài phút là ống (+) - Thực hiện... Chọn 5 khuẩn lạc nghi ngờ cấy truyền sang môi trường EC ủ ở 44 ± 0,5oC trong 24h  chọn ống có sinh hơi (+) – Cấy truyền sang các môi trường sau: Tryptone, MR-VP, thạch Simmon Citrate Ủ ở 44 ± 0,5oC trong 24h – Thực hiện thử nghiệm Indol, Methyl Red, Voges Proskauer, Citrate Ghi nhận số khuẩn lạc có thử nghiệm khẳng định E.coli (+) (IMViC là ++ ) Cách tính kết quả • Tính tỷ lệ khẳng định và tính mật độ... Chọn các khuẩn lạc có đường kính lớn hơn 1mm và cấy vào môi trường MRVP, Simmon Citrate Agar để thực thử nghiệm IMViC Quy trình phân tích: (-) (+) •Khuẩn lạc E Coli giả định cho kết quả thử nghiệm IMViC tuần tự là (+ + - -) chính là E coli Quy trình phân tích: -Thực hiện tương tự các ống (+) trong môi trường EC và tạo được được khuẩn lạc E coli gỉa định trên môi trường EMB - Ghi nhận số ống nghiệm có... và pha loãng, sao cho chưa < 100 tế bào Coliforms trong 1ml dd pha loãng - Chuyển 1ml dịch pha loãng mẫu vào đĩa petri, Bổ sung vào mỗi đĩa đã cấy mẫu khoảng 5ml môi trường TSA đã được đun chảy và ổn định trong bể điều nhiệt ở 45oC - Lắc tròn đĩa petri xuôi và ngược chiều kim đồng hồ, mỗi chiều 3-5 lần để trộn đều dd mẫu với mt Để ở nhiệt độ phòng trong 1-2h để hồi phục các tế bào bị tổn thương - Bổ... nghiệm) để tính ra mật độ VSV trong mẫu và biểu diễn dưới dạng trị số MPN/g hay MPN/ml mẫu ban đầu chưa pha loãng Hệ thống MPN 15 ống Định lượng Coliforms, Coliform phân bằng pp đếm khuẩn lạc: Nguyên tắc: Mẫu đã được đồng nhất hóa được cấy một lượng nhất định lên môi trường thạch chọn lọc thích hợp chứa lactose Đếm số khuẩn lạc lên men lactose & sinh acid sau khi ủ ở 37±1oC trong 24-48h Máy đếm khuẩn... Mẫu đã được đồng nhất hóa được cấy một lượng nhất định lên môi trường có chứa lactose, ủ ở 44oC trong 24h, đếm các khuẩn lạc ó hình dạng đặc trưng của coliform Khẳng định các khuẩn lạc đã đếm là E.coli bằng pp thử nghiệm IMViC Môi trường và hóa chất: • Môi trường Tryntone Soya Agar (TSA) và môi trường thạch Violet Red Bile Agar (VRB) • Môi trường E.coli (EC) • Môi trường Lactose tryptone Lauryl Sulphate... phân bằng pp đếm khuẩn lạc: Nguyên tắc: Ngoài lactose mt chọn lọc cho Coliforms còn chứa muối mật ức chế vi khuẩn gram(+) & chất chỉ thị pH như neutral red, crystal violet Trên môi trường này khuẩn lạc Coliforms có màu đỏ đến đỏ đậm, đường kính >0.5mm, xung quanh khuẩn lạc có vùng tủa của muối mật Vi c khẳng định được thực hiện bằng cách nuôi cấy trên mt canh chọn lọc như BGBL Để định lượng Coliforms . Semina: CNSH VI SINH VẬT KIỂM NGHIỆM VI SINH TRONG NƯỚC SINH HOẠT GVHD:Nguyễn Thị Kim Cúc Nhóm: WAO_One Lớp :50SH TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VI N CNSH &. o C trong môi trường Trypton. Fecal Coliform III./ Đặc điểm sinh lý ,sinh hóa của vi sinh vật: IV/ Phương pháp lấy mẫu và phân tích các chỉ tiêu vi sinh