Đang tải... (xem toàn văn)
Mặc dù vaccine HPV đã và đang được đưa vào sử dụng với độ che phủ tăng dần, dự phòng ung thư cổ tử cung vẫn đòi hỏi công tác sàng lọc được thực hiện thường xuyên và rộng khắp. Dựa trên cơ sở các hiểu biết về tác động của HPV lên kiểm soát chu trình tế bào, các test phát hiện ADN HPV, protein tế bào hoặc protein HPV đã được phát triển, đặc biệt các test phát hiện ADN HPV nguy cơ cao đã được nghiên cứu và ứng dụng rộng rãi trên thế giới.
TỔNG QUAN Nguyễn Vũ Quốc Huy XÉT NGHIỆM HPV TRONG SÀNG LỌC UNG THƯ CỔ TỬ CUNG: CẬP NHẬT 2014 Nguyễn Vũ Quốc Huy Trường Đại học Y Dược Huế Tóm tắt Mặc dù vaccin HPV đưa vào sử dụng với độ che phủ tăng dần, dự phòng ung thư cổ tử cung đòi hỏi công tác sàng lọc thực thường xuyên rộng khắp Dựa sở hiểu biết tác động HPV lên kiểm sốt chu trình tế bào, test phát ADN HPV, protein tế bào protein HPV phát triển, đặc biệt test phát ADN HPV nguy cao nghiên cứu ứng dụng rộng rãi giới Hybrid Capture II (HCII, Qiagen, Hoa Kỳ) sử dụng phản ứng lai ADN kèm với khuếch đại tín hiệu test Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) Cộng đồng châu Âu cấp phép lưu hành sử dụng rộng rãi giới để phát phân biệt nhiễm týp số 13 týp HPV nguy cao (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 68) với týp HPV nguy thấp (6, 11, 42, 43, 44) Test cobas HPV (Roche, Thụy Sĩ) test định tính phát xác định hai type HPV 16 18, đồng thời xác định có nhiễm 12 type HPV nguy cao lại (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 68) Nhiều thử nghiệm với cỡ mẫu lớn gần xét nghiệm ADN HPV có giá trị chẩn đốn khơng thấp tế bào cổ tử cung phát tổn thương CIN2+ Đồng thời với tế bào học, xét nghiệm HPV trở thành xét nghiệm sàng lọc sơ cấp dành cho phụ nữ độ tuổi 30 trở lên đường trở thành xét nghiệm sàng lọc độc lập cho phụ nữ từ 25 tuổi trở lên Sự xuất loại test HPV đơn giản có chi phí chấp nhận careHPV (Qiagen, Hoa Kỳ) tương lai gần, phối hợp với phương pháp soi cổ tử cung quan sát cổ tử cung với acid acetic cho phép triển khai chiến lược tiếp cận với độ che phủ cao đạt mục đích phát – chẩn đốn – điều trị cách hữu hiệu Từ khóa: xét nghiệm HPV, ung thư cổ tử cung, dự phịng Tạp chí Phụ Sản 08 Tập 12, số 02 Tháng 5-2014 Abstract HPV TESTING IN CERVICAL CANCER SCREENING: 2014 UPDATES Despite the introduction of HPV vaccines and its clinical application expanded during the last decade with increasing vaccine coverage, screeningfor cervical cancer still requires continuing and widespread screening activity Based on the knowledge about the impact of HPV on cell cycle control mechanisms, tests for detection of HPV DNA, host cellular proteins or HPV proteins have been developed and introduced to clinical application Among them, tests able to detect DNA of high-risk HPVs have been widely used worldwide and start to be evidenced as a valuable screening test in cervical cancer prevention Hybrid Capture II (HCII, Qiagen, USA) using DNA hybridization and signals amplification technique is the FDA and EC approved test, which can detect and differentiated any type from 13 high-risk HPV types (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 and 68) and lowrisk HPV types (6, 11, 42, 43, 44) The cobas HPV test (Roche, Switzerland) is a qualitative in vitro test that amplifies target DNA by polymerase chain reaction and nucleic acid hybridization to specifically detect and identify HPV types 16 and 18 while concurrently detecting the 12 high-risk types (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, and 68) Recent large clinical trials showed the diagnostic validity of HPV DNA testing is equal or even higher than those of cervical cytology in detection of CIN2+ lesions Together with cervical cytology, HPV DNA testing is concurrently recommended as primary screening method for women aged 30 years or older, and potentially become an independent primary screening method for women aged 25 years or older The introduction of a newly developed HPV test using simpler technology and affordable cost - careHPV - and its commercialization in the very near future, in combination with visual inspection with acetic acid and/or colposcopy will allow the implementation of new approaches with higher coverage and a more effective strategy of screening – diagnosis – management Keywords: HPV testing, cervical cancer, prevention Tác giả liên hệ (Corresponding author): Nguyễn Vũ Quốc Huy, email: nvqhuy@huemed-univ.edu.vn Ngày nhận (received): 15/04/2014 Ngày phản biện đánh giá báo (revised): 06/05/2014 Ngày báo chấp nhận đăng (accepted): 09/05/2014 TạP cHí PHụ sảN - 12(2), 08-14, 2014 Mở đầu Điều kiện tiên để hình thành tổn thương tiền ung thư ung thư cổ tử cung khẳng định nhiễm HPV nguy cao Nhiễm HPV mạn tính giai đoạn trung gian đường phát triển ung thư xâm lấn cổ tử cung Đây tình lĩnh vực ung thư học, chưa có ung thư người có mối quan hệ chặt chẽ với virus So sánh với yếu tố nguy khác biết ung thư người hút thuốc (ung thư phổi), nhiễm virus viêm gan B (HBV) (ung thư gan), nguy HPV gây cao nhiều Nguy tương đối ung thư phổi hút thuốc vào khoảng 10 lần, nhiễm HBV ung thư gan khoảng 50 lần lên đến khoảng 300–500 lần nhiễm HPV ung thư cổ tử cung Mối liên hệ chặt chẽ nhiễm HPV ung thư cổ tử cung dẫn đến hai dạng dự phòng: (1) sàng lọc nhiễm HPV dấu điểm tổn thương tiền ung thư cổ tử cung (CIN), (2) tiêm vaccin HPV để phịng ngừa nhiễm HPV dẫn đến hình thành tổn thương [1] Bảng týp HPV sinh dục nguy sinh ung thư HPV nguy thấp 6, 11, 40, 42-44, 53-55, 66 HPV nguy cao 16, 18, 31, 33, 45, 26, 35, 51-52, 56, 58, 61, 67-70 Đặc điểm sinh học phân tử miễn dịch học hpv 2.1 Đặc điểm sinh học phân tử Papillomavirus virus ADN, hình cầu, khơng có vỏ, đường kính 52–55 nm Tiểu thể virus gồm phân tử ADN chuỗi kép có khoảng 8000 cặp base (base-pairs bp) gắn kết với histon nằm capsid protein Capsid tạo thành từ hai protein cấu trúc -L1 (55 kDa; chiếm 80% tổng protein virus) L2 (70 kDa), hai mã hóa gen virus Có thể sản xuất tiểu thể giống virus (virus-like particles-VLPs) cách tạo L1 đơn phối hợp với L2 Bộ gen tất týp HPV chứa khung đọc mở (ORF) ORF chia thành vùng chức năng: vùng giải mã sớm (E) mã hóa protein E1-E7 cần cho nhân lên virus; vùng giải mã muộn (L) mã hóa protein cấu trúc (L1-L2) cần thiết cho tổ hợp hạt virion phần khơng mã hóa, gọi vùng kiểm soát dài (LCR), chứa yếu tố cần thiết cho nhân lên chuyển mã ADN virus Protein E1 E2 HPV có chức yếu tố nhận dạng nguồn gốc nhân lên; E2 yếu tố điều hịa hoạt động chuyển mã gen E4 tham gia vào giai đoạn muộn chu trình đời Hình 1: Bản đồ gen HPV-16 virus, E5 có vai trò hai giai đoạn sớm muộn Các protein E6 E7 tác động đến loạt yếu tố điều hịa âm tính chu trình tế bào, đặc biệt lên p105Rb p53 Trong chu kỳ đời virus, E6 E7 đảm bảo cho việc trì ổn định cấu trúcvà kích thích tế bào biệt hóa vào lại pha S Các protein L1 L2 tổ hợp để tạo thành capsid bao quanh gen giai đoạn hình thành hạt virus Trong trường hợp nhiễm trùng tồn dai dẳng HPV nguy cao, ADN HPV tích hợp vào gen vật chủ, dẫn đến cắt bỏ gen khơng cần thiết, có tác dụng điều hòa virus gen E2, E4, E5, L1 L2 Do E2 mã hóa protein ức chế chuyển mã E6 E7, E2 làm cho E6 E7 trở thành protein giải mã tế bào bị nhiễm Các protein E6 E7 làm bất hoạt gen ức chế khối u p53 retinoblastoma (Rb), phá vỡ điều hòa chu trình tế bào Từ tế bào bị nhiễm HPV nguy cao hình thành ổn định gen, dẫn đến tiến triển thành ung thư 2.2 Đặc điểm miễn dịch học HPV tỏ hữu hiệu việc thoát khỏi hệ thống miễn dịch vật chủ, khơng lưu hành máu, không gây chết tế bào hay nhiễm hệ thống Virus nhiễm vào tế bào đáy biểu mô, trưởng thành thành tế bào biểu mô sau diễn tượng chết tế bào lập chương trình Các virus giải phóng thời điểm chết tự nhiên tế bào, hệ thống miễn dịch khơng ghi nhận kiện vừa diễn dấu hiệu nguy hiểm Kết đáp ứng miễn dịch chỗ không khởi động Mặc dù đa số trường hợp nhiễm HPV thải trừ cách tự nhiên Cơ chế tượng chưa hiểu tường tận, người ta cho miễn dịch qua trung gian tế bào bẩm sinh đóng vai trị ban đầu, sau đáp ứng kháng thể Một thời gian sau nhiễm tự nhiên ban đầu người ta phát kháng thể trung hòa với nồng độ thấp huyết dịch tiết cổ tử cung-âm đạo Tuy nồng độ kháng thể sau nhiễm tự nhiên không đủ để bảo vệ lần nhiễm sau [2] Tạp chí Phụ Sản Tập 12, số 02 Tháng 5-2014 09 Test cobas HPV (Roche, Thụy Sĩ) test định tính, FDA cấp phép sử dụng từ tháng 4/2011 để kết hợp với tế bào cổ tử cung phụ nữ từ 30 TỔNG QUAN tuổi trở lên nhằm sàng lọc nhiễm type HPV nguy cao, sử dụng để Nguyễn Vũ Quốc Huy theo dõi trường hợp có kết tế bào bất thường từ 21 tuổi trở lên Các kỹ thuật xét nghiệm hpv Nguyên lý test khuếch đại ADN đích phản ứng PCR lai acid acid nucleic để phát xác định hai type HPV 16 nucleic để phát xác định hai type HPV 16 18, đồng thời xác định 3.1 Xét nghiệm ADN HPV 18, đồng thời xác định có nhiễm nhiễm12 12 type HPVcòn nguy cao33, còn35, lại 39, (31,45, 33, 35, 39, Do khơng thể ni cấy virus HPV theo kiểu có kinh typemột HPV nguy cao lạicơ (31, điển test huyết có độ nhạy thấp, chẩn 51,56,52, 68)một lần chạytrên duymột bệnh 45, 51, 52, 58,56, 59,58, 66,59, and66, 68)and lần chạy đốn nhiễm HPV địi hỏi phải phát genphẩm Test bệnh phẩm Test thực thực máy cobas 4800, cho phép tự động hóa mẫu bệnh phẩm tế bào từ cổ tử cung Bệnh máy cobas 4800, cho phép tự động hóa hồn hồn tồn bước chuẩn bị acid nucleic, real-time PCR phát sản phẩm cán y tế khách tồn bước chuẩn bị acid nucleic, real-time PCR phẩm phát sản phẩm hàng/bệnh nhân tự lấy Các kỹ thuật phân tử phát ADN HPV có3.2 thểXét nghiệm 3.2.protein Xét nghiệm protein chia thành hai nhóm: có khuếch đại khơng 3.2.1 chu trình tế bào 3.2.1 Điều hịa chuĐiều trìnhhịa tế bào khuếch đại Test dùng nghiên cứu lâm sàng thường chia khuếch đại chínhlàbộtest gen khuếch HPV.đại, Cáccịn testđược đại biểu chothành nhóm2test tín hiệutín hiệu khuếch đại gentíncủa HPV Các testCác đại test biểu chobiểu nhóm nhóm nhỏ khuếch đại đại khuếch đạibộchính bộhiệu gen củakhuếch HPV chotest nhóm test đại Hybrid Capture II (HCII, Qiagen, USA), cobas HPVđạitest HPV Các test đại biểu cho nhóm test khuếch khuếch đại gen đại Hybrid Capture II (HCII, Qiagen, USA), cobas HPV test Hybrid Capture II (HCII, Qiagen, USA), cobas HPV test Thụy Sĩ) [3] khuếch đại Hybrid Capture II (HCII, Qiagen, USA), (Roche,(Roche, Thụy Sĩ) [3] Sĩ) [3] Thụy cobas ybrid Capture II HPV test (Roche, Thụy Sĩ) [3] 3.1.1 Hybrid Capture IICapture 3.1.1 Hybrid 3.1.1 Hybrid Capture II II CII Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) HCII Cơ quan quản lýlýthuốc vàvàphẩm thực HCII quan lýquản thuốc thực Hoa KỳHoa (FDA) HCIICơ Cơquản quan thuốc thựcphẩm phẩm Kỳ (FDA) ng châu ÂuHoa choKỳphép thực phảnchâu ứng lai kèm với thực khuếch (FDA) hiện, Cộnglàđồng Âu cho phép Cộng đồng châu Âu cho phép thực hiện, phản ứng lai kèm với khuếch Cộng đồng châu phépvới thực hiện, đại phảnhiệu, ứng sử lai kèm với khuếch ứngÂu laicho điđể kèm khuếch iệu, sử dụnghiện, hỗn phản hợp mồi ARN phát phân tín biệt nhiễm bất đại tín hiệu, sử dụng hỗn hợp mồi ARN để phát phân biệt nhiễm đại tín 2hiệu, dụng hỗn hiệnbiệt phân biệt bất nhiễm bất dụng hỗnsửhợp mồi ARNhợp đểmồi phátARN hiệnđểvàphát phân sốnhiễm 13 týp bất nguy cao (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, kỳ týp số 13 týp nguy cao (16, kỳ týp số 13 týp nguy cao (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, kỳ týp số 13 týp nguy cao (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 33, 35,thấp 39, 45, 51, 52, 59 68) với5 týp 68) với5 18, týp31, nguy (6,cơ 11,thấp 42,56, 43,58, 44),tuy nhiên việc định việc Hìnhbiến 3: Cácđổi biến đổi chutrình trình tế bào gen thư HPV E6 E7 tạithư tổn HPV E6 58, 59 nguy (6,thấp 11, (6, 42, 11, 43, 42, 44),tuy nhiên định Các chu tế bào sinh cácunggen sinh ung 58,68) 59 với5 68)týpvới5 týp nguy 43,Hình 44),tuy nhiên thương tiềnviệc ung thưđịnh nguy thấp (6, 11, 42, 43, 44),tuy nhiên việc định ính danh xác thường không làm Số ADN virus tối thiểu E7 tạivirus tổn thương ung thư thường khơng Số Số ADN virus tối thiểu danh xác khơng làm ADN tốitrong thiểutiền danhxác xácthường thườnglàm khơng làm Sốbản ADN có test 5.000, ngưỡng tốtngưỡng nhiều so5.000, với phản ứng Sựphản protein HPV làm cắt tượng điều hịa virus tốicó thiểu để có test (+) làvới Sựứng xuất E7 protein E7 HPVngang làm cắt ngang mẫu (+) đểmẫu có test (+) 5.000, tốt nhiều so để test (+) làmẫu 5.000, ngưỡng tốt nhiều soxuất với phản ứng INK4a ngưỡng tốt nhiều so với phản ứng PCR tượng điều hịa G1 – pha S thơng qua tương tác G1 – pha S thông qua tương tác với kết hợp gen E2F-Rb P16 PCR PCR INK4a với kết hợp gen E2F-Rb P16 giải phóng với giải phóng với khối lượng lớn mấ tức chế Rb/E2F Tương tác E6 với khối lượng lớn mấ tức chế Rb/E2F Tương tác p53 làm E6 chovới p53p53 bị thoái biến,p53 thủ bị tiêu hiệnbiến, tượngthủ chếttiêu tế bào lập làm Chất cho thối chương trình (apoptosis) điểm Ki-67 gia tăng, hệ rối tượng lậpra.chương trình (apoptosis) loạn chức năngchết tế bàotếdobào E6 E7 gây Chất điểm Ki-67 gia tăng, hệ rối loạn 3.2.2 Xét nghiệm protein HPV - Test E6 dạng “que thử thai” chức tế bào E6 E7 gây Test E6 dạng “que thử thai” dựa sở protein E6 tất HPV 3.2.2 Xét nghiệm protein HPV - Test E6 dạng “que nguy cơthử caothai” gắn với vùng PDZ- có vai trị tương tác protein-protein Hình 2: Các bước kỹ thuật Hybrid Capture Các bước kỹ thuật Hybrid Capture CácHình bước2.Hình kỹ thuật Hybrid Capture chịu trách nhiệm duydạng trì các“que chứcthử năngthai” ổn định bào, cònsở E6protein HPV nguy Test E6 dựatếtrên Các bước kỹ thuật Hybrid Capture Bước Lai mồi ARN Bước Bắt giữ phức Bước Khuếch đại tín tấtgắn HPV nguy cao gắn với vùng PDZcơ thấp lại không Lai mồi Bước Bắt 2.giữ phức Bước 3.Bước Khuếch đại tín LaiBước mồi 1.Bước ARN BướcARN Bắt giữ2.Bước phức Bước Khuếch đại tín E6 giữ Khuếch đại với tín PDZ Tiềm sinh ung thư E6 phụ thuộc vào với ADN đích.Lai ADN mồi đích ARN hợp lai Các phức hợp laiBắthiệu Cácphức phức hợp 3.có vai trị tương tác protein-protein chịu trách khả gắnhợp vào vùng PDZ Test dạng que thử thai sử dụng kháng ADN hợp lai.hợp Các phức kết hợpđích vớihợp mồi ARN,Các ARN:ADN “bắt giữ” bắtphức giữ sẽhiệu phátCác DN với đích.ADN ADN lai phức hợp hiệu Các phức hợp với ADN đích ADN lai.phức Các hợp hợp hiệu Các phức hợpcác chức ổn định tế bào, cịn E6 nhiệm trì tạo thành phức hợp lai kháng thể đặc kháng thể thể gắn đơn dòng kháng E6 tất typ HPV nguy cao Thiết kế theo hợp vớilai với mồicáclai ARN:ADN bắt giữbắt giữ HPV hợpđích với kết cácđích mồikết ARN:ADN bắt giữ hợp mồicho laiđược ARN:ADN được nguy đượccơ thấp lại không gắn với PDZ Tiềm ARN:ADN hiệu phức hợp phosphatase kiềm qua phản kiểu “que thử thai” cho phép triển khai dễ dàng giảm chi phí, giúp gia tăng ứng hóa phát quang kết sinh tạo “bắt giữ” bởigiữ” kháng phátbằng ung tạo phức thành phức “bắt kháng phátcácbằng thư E6 phụ thuộc vào khả ạo ARN, thành ARN, phứcthành “bắt giữ” kháng phát đọc tự động giá trị dự báo dương tính sàng lọc hợp lai hợp ARN:ADN thể cho đặcthể hiệu thể gắn lai ARN:ADN đặccho hiệuphức cho kháng phức thể gắn ARN:ADN thểcobas đặc hiệu phức kháng thể kháng gắn 3.1.2 HPV Test hợp phosphatase hợp.Thụyphosphatase phosphatase kiềm qua Testhợp cobas HPV (Roche, Sĩ) test định kiềm quakiềm qua tính, FDA cấp phép sử dụng từ thángphản 4/2011ứng để hóa hóa phát phản ứng hóaphản phátứng phát kết hợp với tế bào cổ tử cung phụ nữ từquang 30 tuổivàtrởkết quang kết quảquang đượcvà kết lên nhằm sàng lọc nhiễm type HPVvànguy cao, đọc tự động sử dụng để theo dõi trường có kết đọc quảtự động đọc tựhợp động tế bào bất thường từ 21 tuổi trở lên Nguyên lý 3.1.2 cobas HPV Test 3.1.2 cobas HPV Test bas HPV Test Test protein HPV dạngdạng “que thử“que thai” thử thai” Test4:protein HPV test khuếch đại ADN đích phản ứng PCR Hình lai Hình Tạp chí Phụ Sản 10 Tập 12, số 02 Tháng 5-2014 6 (Arbor Vita’s OncoE6™ Cervical Test) 3.2.3 Xét nghiệm protein tế bào vật chủ - p16INK4a Protein p16INK4a chất điều hịa chu trình tế bào, có quy trình biểu Tạp chí phụ sản - 12(2), 08-14, 2014 gắn vào vùng PDZ Test dạng que thử thai sử dụng kháng thể đơn dòng kháng E6 tất typ HPV nguy cao Thiết kế theo kiểu “que thử thai” cho phép triển khai dễ dàng giảm chi phí, giúp gia tăng giá trị dự báo dương tính sàng lọc (Arbor Vita’s OncoE6™ Cervical Test) 3.2.3 Xét nghiệm protein tế bào vật chủ - p16INK4a Protein p16INK4a chất điều hịa chu trình tế bào, có quy trình biểu kiểm sốt chặt chẽ tế bào bình thường Protein ức chế khối u ức chế men kinase 6, có vai trị phosphoryl hóa protein retinoblastoma (Rb) Thông thường, Rb gắn với E2F ngăn cản hoạt hóa chu trình tế bào vào pha S Trong tế bào bị nhiễm HPV, gen E7 bẽ gãy liên kết protein Rb với yếu tố chuyển mã E2F, dẫn đến gia tăng đáng kể nồng độ p16INK4a Cho đến p16INK4a xem điểm nhạy đặc hiệu tế bào loạn sản cổ tử cungvà chất điểm sinh học hữu ích chẩn đốn sàng lọc tổn thương ung thư cổ tử cung Đã có nhiều kháng thể kháng p16 nghiên cứu, nhiên kháng thể dòng E6H4 (Kit CINtec, mtm laboratories AG, Heidelberg, Germany) dùng sàng lọc tổnphát thươnghiện ung thưp16 cổ tử INK4a cung Đã nhiềuchứng kháng thể cho rộngchẩnrãiđoán Việc códấu kháng p16 nghiên cứu, nhiên kháng thể dịng E6H4 (Kit CINtec, tình trạng nhiễm trùng tồn HPV nguy cao, giúp mtm laboratories AG, Heidelberg, Germany) dùng rộng rãi Việc phân loại trường hợp có tổn thương tế bào khơng phát p16 dấu chứng cho tình trạng nhiễm trùng tồn HPV nguy rõ ràng, tạo điều kiện xác tếtếbàobào thường cao, giúp phân loại trường hợp định có tổn thương khơngbất rõ ràng, tạo điều kiện xác định tế bào bất thường bệnh phẩm tế bào, đồng thời bệnh phẩm tế bào, đồng thời hỗ trợ diễnhỗ giải trợ diễn giải bệnh phẩm mô học [4] bệnh phẩm mô học [4] INK4a CIN CIN CIN hóa mơ miễn dịch p16 CIN 2INK4a Hình Nhuộm CIN CIN Kiểm định chất lượng Hình3.3 5: Nhuộm hóa mơ miễn dịchphịng p16INK4axét nghiệm HPV Các đơn vị xét nghiệm thực test HPV với mục đích phục vụ lâm 3.3 Kiểm định chất lượng phòng xét nghiệm HPV nội kiểm, ngoại kiểm công tác cải thiện chất lượng Các biện pháp bao Các đơn vị xét nghiệm thực test HPV với mục gồm: đích phục vụphòng lâmriêng sàng cho sàng lọc cần thủ - Có biệt dành việc chuẩn bị hóa tuân chất, chuẩn bị nghiệm gồm tách ADN,chất khuếchlượng, đại ADN vàbao phát quymẫu định vềbaođảm bảo gồm nội kiểm, - Cần cóvà quycơng trình chuẩn operationchất procedures - SOP) Các tuânbiện ngoại kiểm tác(standard cải thiện lượng thủ quy trình thực hành tốt phịng thí nghiệm (good laboratory practice pháp bao gồm: GLP) - Có- phịng riêng biệt dành cho việc chuẩn bị Có quy trình giám sát khâu trình xét nghiệm, nội kiểm hóavàchất, chuẩn bị mẫu nghiệm bao gồm tách ADN, ngoại kiểm khuếch đại ADN phát - Cần có quy trình chuẩn (standard operation procedures - SOP) tn thủ quy trình thực hành tốt phịng thí nghiệm (good laboratory practice - GLP) sàng sàng lọc cần tuân thủ quy định đảm bảo chất lượng, bao gồm - Có quy trình giám sát khâu trình xét nghiệm, nội kiểm ngoại kiểm Bằng chứng khoa học giá trị xét nghiệm adn hpv 4.1 Một số nghiên cứu lớn ứng dụng test HPV tronng sàng lọc sơ cấp Trong khảo sát Khan cộng công bố năm 2005 20.000 phụ nữ bệnh viện Kaiser Permanente (Portland, OR, Hoa Kỳ), theo dõi tế bào học vòng 15 năm, bệnh phẩm tế bào học lưu trữ từ lần khám khảo sát định danh HPV nguy cao Nguy ước tính sau điều chỉnh yếu tố dấu theo dõi cho thấy test HPV(-) dự báo nguy hình thành CIN3+ sau thấp, ngược lại test (+) HPV 16, HPV 18 HPV 31 có mối quan hệ chặt chẽ với CIN3+ [5] Mayrand cộng [6] so sánh phương pháp xét nghiệm tế bào học HPV 10.154 phụ nữ độ tuổi 30-69 từ Montreal St John’s, Canada phân ngẫu nhiên vào phương pháp Độ nhạy test HPV cho CIN 94,6% (95%CI, 84,2 - 100), lúc độ nhạy tế bào 55,4% (95% CI, 33,6 – 77,2) Độ đặc hiệu test HPV 94,1% (95% CI, 93,4 – 94,8) tế bào học 96,8% (95% CI, 96,3 – 97,3; P