Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu ảnh hưởng của tỷ lệ S/V tới khả năng tạo màng BC từ vi khuẩn Acetobacter xylinum BHN2
Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật PHẦ MỞ ĐẦU LÝ DO CHỌ ĐỀ TÀI Màng sinh học ( Bacterial cellulose; Biocellulose; BC) có cấu trúc đặc tính giống với cellulose thực vật (gồm phân tử glucose liên kết với liên kết β-1,4 glucorit) cellulose vi khuNn khác với cellulose thực vật chỗ: không chứa hợp chất cao phân tử như: ligin, hemicellulose, peptin sáp nến…do chúng có đặc tính vượt trội với độ dẻo dai, bề chắc.[17] Trên giới màng Bacterial cellulose ứng dụng nhiều lĩnh vực công nghệ khác nhau: dùng làm màng phân tách cho trình xử lí nước, chất mang đặc biệt cho pin lượng cho tế bào,dùng làm chất biến đổi độ nhớt sản xuất sợi truyền quang, làm môi trường chất sinh học, thực phNm hay thay thực phNm Đặc biệt lĩnh vực y học, màng BC ứng dụng làm da tạm thời thay da trình điều trị bỏng, loét da, làm mạch máu nhân tạo điếu trị bệnh tim mạch; làm mặt nạ dưỡng da cho người.[13] Ở Việt Nam, việc nghiên cứu ứng dụng màng BC mức độ khiêm tốn, nghiên cứu ứng dụng dừng lại bước đầu nghiên cứu Các kết ứng dụng màng BC dừng lại điều kiện thí nghiệm Trong năm gần phịng thí nghiệm Thực vật - Vi sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội phân lập tuyển chọn chủng A xylinum BHN có khả tạo màng BC nghiên cứu bước đầu cho thấy màng BC từ chủng A xylinum BHN có khả ứng dụng cho trị bỏng cho thỏ sở để tạo màng trị bỏng cho người SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Với mục đích tìm hiểu diện tích thể tích liên quan đến độ thống khí q trình tạo màng BC điều kiện nuôi tĩnh chọn đề tài: “ ghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ S/V tới khả tạo màng BC từ vi khu n Acetobacter xylinum BH ” Mục tiêu ý nghĩa khoa học đề tài - Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ S/V tới khả tạo màng BC từ vi khuN n A xylinum BHN phân lập từ nguồn ngun liệu từ phịng thí nghiệm - Khảo sát khả tạo màng BC vi khuN A xylinum BHN n - Bổ sung thêm kiến thức vi khuN A.xylinum nhằm ứng dụng tạo n màng BC tốt ội dung nghiên cứu - Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ S/V tới khả tạo màng vi khuN n A xylinum BHN - Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian ni cấy đến tỷ lệ S/V thích hợp đến khả tạo màng BC chủng A xylinum BHN - Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ ni cấy đến tỷ lệ S/V thích hợp đến khả tạo màng BC chủng A xylinum BHN - Nghiên cứu số tính chất vật lý màng BC tạo từ chủng A xylinum BHN từ định hướng cho ứng dụng trị bỏng SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật PHẦ ỘI DU G CHƯƠ G TỔ G QUA TÀI LIỆU 1.1 Đại cương vi khu n A Xylinum màng BC 1.1.1 Phân loại đặc điểm hình thái A Xylinum Theo hệ thống phân loại nhà khoa học Bergey A.xylinum thuộc giống Acetobacter, họ Pseudomonadaceae, Pseudomonadales, lớp Schizommycetes Việc phân loại vi khuN cịn nhiều tranh cãi, có số n tác giả coi A xylinum loài phụ A Aceti.[21] A xylinum có dạng hình que, thẳng hay cong, di động hay khơng di động, không sinh bào tử Chúng vi khuN Gram âm, đặc n điểm nhuộm Gram thay đổi tế bào già hay điều kiện môi trường Chúng đứng riêng lẻ hay xếp thành chuỗi Hình 1: Kết nhuộm Gram A xylinum BHN2 KhuN lạc A.xylinum có kích thước lớn (đường kính khuN lạc đạt n n 2-5mm), trịn, bề mặt nhầy trơn bóng, phần khuN lạc lồi lên, dày n sẫm màu phần xung quanh, rìa mép khuN lạc nhẵn.[18] n SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật 1.1.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá A Xylinum Vi khuN A xylinum phát triển nhiệt độ 25-350C, pH = 4-6 Nhiệt độ n pH tối ưu tùy thuộc vào giống Ở 370C, tế bào suy thối hồn tồn mơi trường tối ưu A xylinum có khả chịu pH thấp, thường bổ sung thêm acid acetic vào mơi trường nuôi cấy để hạn chế nhiễm khuN lạ.[12] n Các đặc điểm sinh hoá dùng định danh A xylinum bao gồm: Oxy hoá ethanol thành acid acetic, CO2, H2O; Phản ứng catalase dương tính; Khơng tăng trưởng mơi trường Hoyer; Chuyển hố glucose thành acid; Chuyển hố glycerol thành dihydroxyaceton; Khơng sinh sắc tố nâu; Tổng hợp cellulose.[12] 1.1.3 Màng BC vi khu n A xylinum Trên môi trường dịch thể, điều kiện nuôi cấy tĩnh, vi khuN A xylinum n hình thành nên lớp màng có chất cellulose, tập hợp bó sợi cellulose liên kết với gọi màng Bacterial cellulose hay màng BC * Cấu trúc màng Bacterial cellulose: Cellulose cấu tạo chuỗi polyme β -1,4 glucopynanose mạch thẳng Có thành phần hoá học đồng với cellulose thực vật, cấu trúc đặc tính lại khác xa Chuỗi polyme β -1,4 glucopynanose hình thành liên kết với tạo thành sợi nhỏ (subfibril) có kích thước 1,5nm Những sợi nhỏ kết tinh tạo sợi lớn hơn- sợi vĩ mô ( microfibril) ( Tonas and Farah, 1998), sợi kết SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật hợp với tạo thành bó cuối tạo dải ribbon (Yamanaka et.al 2000) Dải ribbon có chiều dài khoảng từ 1-9nm Những dải ribbon kéo từ tế bào liên kết với dải ribbon tế bào khác liên kết hiđro lực vandesvan tạo thành cấu trúc mạng lưới hay lớp màng mỏng bề mặt môi trường nuôi cấy.[15] Do dải ribbon màng BC có đường kính nhỏ PC, số kết tinh cao (khoảng 60%), độ polyme hoá lớn nên màng BC có độ bền học cao, khả hấp thụ nước lớn Bacterial cellulose sản xuất vi khuN A xylinum nghiên cứu đầu n tiên Brown năm 1886 Nó thu hút ý từ nửa sau kỷ XX, nghiên cứu tập trung sâu vào chế tổng hợp, cấu trúc đặc tính cellulose.[22] 1.2 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng đến khả tạo màng BC từ vi khu n A.xylinum 1.2.1.Ảnh hưởng hàm lượng glucose Nguồn cacbon có ảnh hưởng mạnh mẽ tới sinh trưởng tổng hợp cellulose Acetobacter xylinum Theo kết nghiên cứu Thạc sỹ Nguyễn Thị Nguyệt chủng Acetobacter xylinum HN5 nguồn cacbon có ảnh hưởng lớn đến hình thành màng Acetobacter xylinum glucose Để tạo màng phục vụ mục đích nghiên cứu, Thạc sỹ Trần Như Quỳnh định sử dụng hàm lượng glucose 20 g/l cho nghiên cứu chủng A xylinum BHN [14] 1.2.2 Ảnh hưởng hàm lượng ( H4)2SO4 SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Vi sinh vật tất thể sống khác cần nitơ trình sống để xây dựng tế bào Nhân tố (NH4)2SO4 nhân tố có ảnh hưởng lớn đến phát triển Acetobacter xylinum, nhân tố quan trọng cung cấp nguồn nitơ cho tế bào phát triển Vì vậy, nguồn nitơ mơi trường q ảnh hưởng đến hoạt động sống tế bào, từ ảnh hưởng đến q trình tạo màng BC Ở nồng độ 2,0 g/l môi trường cho hiệu suất màng BC cao nhất.[14] 1.2.3 Ảnh hưởng hàm lượng MgSO4.7H2O MgSO4 nồng độ g/l cho sản lượng BC cao nhất, theo PGS-TS Đinh Thị Kim Nhung, magie nhân tố tham gia vào việc tạo thành enzim, enzim xúc tác cho phản ứng chuyển hóa chất q trình hình thành màng BC.[14] 1.2.4 Ảnh hưởng hàm lượng KH2PO4 Phospho vai trò tham gia cấu trúc thành phần tế bào, cịn có vai trị quan trọng tổng hợp cellulose vi khuN Acetobacter n xylinum ( Ross et.al, 1991) Sử dụng nồng độ 2g/l KH2PO4 cho sản lượng BC cao nhất.[14] 1.3 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến khả tạo màng BC từ vi khu n A.xylinum 1.3.1 Ảnh hưởng thời gian lên men hàm lượng giống Lượng giống thời gian nuôi cấy yếu tố quan trọng ảnh hưởng trình lên men cellulose vi khuN n SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Độ dai màng phụ thuộc nhiều vào kết tinh màng BC, độ kết tinh màng lại chịu ảnh hưởng lớn thời gian lên men thu nhận màng Vì thu sớm độ polymer hoá kết tinh chưa cao ảnh hưởng đến tính chất học màng BC Ngược lại để lâu môi trường nghèo dinh dưỡng màng chìm xuống, vi khuN tiến hành phân huỷ thu lượng n cung cấp cho hoạt động sống tế bào Đối với loài Actobacte xylinum, trình lên men, phần lơn tế bào liên kết với phân tử glucose để hình thành lớp màng BC bề mặt nuôi cấy Lớp màng ngăn cản tiếp xúc oxy với môi trường dich thể Vì việc nghiên cứu xác định lượng giống bổ sung ban đầu cho phù hợp có ý nghĩa quan trọng để thu màng BC với suất cao Sản lượng cellulose thu trình lên men tăng theo tỷ lệ giống thời gian lên men.[14] 1.3.2 Độ thơng khí Vi khuN A xylinum vi khuN hiếu khí bắt buộc Điều kiện tiên n n lên men tạo sinh khối điều kiện thơng khí Trong chế trình lên men, lượng oxy cần cung cấp tương đối lớn Trong thực tế độ thông khí định suất BC Vì hình thức sục khí cung cấp oxy sử dụng cánh khuấy lên men động phù hợp cho sản lượng BC cao lên men chìm Lên men tĩnh cần sử dụng dụng cụ có bề mặt rộng, thống lớp môi trường mỏng.[19] Wanatabe Yamanaka (1995) phát áp suất oxy ảnh hưởng đến khả hình thành cellulose vi khuN Cellulose hình thành n áp suất oxy thấp có phân nhánh nhiều so với điều kiện áp suất SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật oxy cao Do ảnh hưởng trực tiếp đến hình dạng độ chịu lực lớp màng BC.[20] 1.3.3 hiệt độ Nhiệt độ thích hợp với vi khuN A xylinum từ 25-30 C Ở nhiệt độ thấp n trình lên men xảy chậm Ở nhiệt độ cao ức chế hoạt động đến mức đình sinh sản tế bào hiệu suất lên men giảm.[21] 1.3.4 Độ PH Vi khuN A xylinum phát triển thuận lợi mơi trường có pH thấp n Do mơi trường nuôi cấy cần bổ sung thêm acid acetic nhằm acid hố mơi trường Đồng thời acid acetic cịn có tác dụng sát khuN giúp ngăn chặn n, phát triển vi sinh vật có hại.[21] 1.4 Ứng dụng màng BC 1.4.1 Ứng dụng BC số lĩnh vực Màng BC có nhiều lợi điểm vượt trội như: độ tinh sạch, độ kết tinh, độ bền sức căng, độ đàn hồi, độ co giãn, khả giữ hình dạng ban đầu, khả giữ nước hút nước cao, bề mặt tiếp xúc lớn bột gỗ thường, bề dày vi sợi 100nm, bị phân huỷ sinh học, có tính tương thích sinh học, tính trơ chuyển hố, khơng độc khơng gây dị ứng Màng BC có ứng dụng đa dạng nhiều lãnh vực y học, thực phN mỹ phN bảo m, m, vệ môi trường, công nghiệp.[22] 1.4.2 Ứng dụng màng BC điều trị bỏng Bỏng tai nạn thường gặp lao động sinh hoạt ngày SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Ngoài tổn thương da, trường hợp bỏng nặng gây rối loạn nội tạng, để lại di chứng nặng đến khả vận động, thN mỹ sức khỏe người bệnh m Ở Việt Nam, riêng Viện Bỏng Quốc gia (Hà Nội) năm tiếp nhận khoảng 400 ca bỏng Các tác nhân gây bỏng chủ yếu bỏng nước sơi Ngồi tác nhân khác xăng, dầu, nước canh nóng, acid, vơi tơi nóng.[6] Việc điều trị chỗ vết thương bỏng cơng tác có ý nghĩa đặc biệt quan trọng Đối với vết bỏng nơng điều trị chỗ vết bỏng có tác dụng n, làm giảm đau ngăn chặn biến chứng nhiễm khuN tạo điều kiện tốt cho trình tái tạo phục hồi Đối với trường hợp bỏng sâu, điều trị chỗ có tác dụng lớn việc điều trị dự phòng biến chứng nhiễm khuN chỗ, khơng để nhiễm khuN tồn thân, ngăn ngừa nước n n dịch thể (là nguy dẫn đến tử vong cao), loại bỏ nhanh tổ chức hoại tử, tạo điều kiện tốt cho q trình hình thành mơ hạt biểu mơ hóa hình thành sẹo, chuN bị tốt ghép da phẫu thuật.[6] n 1.5 Tình hình nghiên cứu màng BC Việt am giới 1.5.1 Trên giới Nghiên cứu màng BC từ vi khuN A.xylinum ứng dụng n tiến hành nhiều nước giới Tác giả Brown, 1989, dùng màng BC làm môi trường phân tách cho trình xử lý nước, dùng làm chất mang đặc biệt cho pin lượng cho tế bào Brown (1989), Jonas Farad, 1998, dùng màng chất để biến đổi độ nhớt, để làm sợi truyền quang, làm môi trường chất sinh học, thực phN m thay thực phN Đặc biệt Brown (1989) dùng BC làm vải đặc biệt, m Nogiet cs (2005), Jonas Farad, 1998, Soloknicki cộng (2006) SV: guyễn Duy Khanh Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật dùng màng BC để sản xuất giấy chất lượng cao, làm chất để cố định protêin hay cho sắc kí.[5] Tuy nhiên, ứng dụng thường thấy giới màng BC dùng ngành dược phN mỹ phN Các tác giả: Hamlyn cs (1997), m m Cienchanska (2004), Legeza cs (2004) Wan Millon (2005), Czaja cs, (2006) sử dụng màng BC đắp lên vết thương hở, vết bỏng thu kết tốt Đặc biệt tác giả Wan (Canada) đượng đăng kí quyền làm màng BC từ A.xylinum dùng trị bỏng Các tác giả Jonas Farad (1998), Czaja cs (2006) dùng màng BC làm da nhân tạo, làm mặt nạ dưỡng da cho phụ nữ.[5] 1.5.2 Ở Việt am Tại Việt Nam tình hình điều trị bỏng nước ngày cải tiến Công tác điều trị bỏng bao gồm việc cấy ghép, phẫu thuật, tạo số màng trị bỏng màng ối, trung bì da lợn, da ếch, màng chitosan, sử dụng chất có nguồn gốc từ tự nhiên có tác dụng điều trị bỏng … Từ năm 2000 nhóm nghiên cứu tác giả Nguyễn Văn Thanh cộng có số cơng trình nghiên cứu màng BC từ A xylinum bước đầu nghiên cứu đặc tính màng BC thu sở để chế tạo màng sinh học dùng trị bỏng Việt Nam.[9] Điều trị bỏng thuốc có nguồn gốc từ tự nhiên áp dụng từ lâu phổ biến tất nước Các thuốc có sẵn thiên nhiên có nhiều đặc tính tốt cho điều trị bỏng chữa vết thương, vết loét… Màng BC có nhiều ưu điểm để trở thành chất mang hợp chất có nguồn gốc từ thiên nhiên sử dụng điều trị bỏng.[14] SV: guyễn Duy Khanh 10 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật 2.2.5 Phương pháp thống kê xử lý kết Xử lý thống kê kết thí nghiệm theo số phương pháp “Ứng dụng tin học sinh học” “Thống kê ứng dụng” như: * Số trung bình cộng: Dùng để tính giá trị trung bình lần lặp lại thí nghiệm X= n ∑ Xi n i =1 n ∑(X * Trung bình bình phương sai lệch δ = * Sai số đại diện trung bình cộng * Hệ số biến thiên trung bình cộng: SV: guyễn Duy Khanh 18 ±m = i − X )2 i =1 n −1 δ Cv = n δx100 X Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật CHƯƠ G KẾT QUẢ GHIÊ CỨU VÀ THẢO LUẬ 3.1 Ảnh hưởng tỷ lệ S/V tới khả tạo màng vi khu n A xylinum BH Sau thời gian nghiên cứu lên men bề mặt tạo màng BC từ chủng A.xylinum BHN với tiêu chí: thời gian xuất màng, màu sắc, độ nhẵn, độ dày, độ dai, cân nặng, trọng lượng khô tuyệt đối để tìm S/V thích hợp tạo màng BC tốt nhất, thu kết thể bảng 3.1 sau: Bảng 3.1 ghiên cứu tỉ lệ S/V đến khả tạo màng BC tốt từ vi khu n A xylinum BH (Ảnh hưởng tỷ lệ diện tích bề mặt thể tích lên men) SV: guyễn Duy Khanh 19 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Tỷ Đặc điểm màng lệ Thời Màu sắc, Độ Độ dai Cân Trọng dày (độ bền nặng lượng xuất sau kéo) sau khô khi (g) màng lên gian S/V (cm-1) độ nhẵn Đơn vị ( ) men men (g) (mm) 0,5 Trắng đục, lên 0,50 4,17 0,10 1,5 10 8,54 0,14 1,9 14 8,61 0,15 sần sùi 0,6 Trắng đục, sần sùi 0,7 Trắng đục, sần sùi 0,8 Màng trắng 3,00 18 22,22 0,51 trong, nhẵn 0,9 Màng trắng 2,50 16 18,17 0,35 trong, nhẵn 1,0 Màng trắng 2,00 12 trong, nhẵn SV: guyễn Duy Khanh 20 13,36 0,30 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Biểu đồ 3.1.1 Thể mối quan hệ S/V với khối lượng màng Kh i lư ng màng (g) 25 20 15 10 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 S/V Biểu đồ 3.1.2 Thể mối quan hệ S/V với độ bền kéo màng Độ bền kéo màng ( ) 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0,5 0,6 SV: guyễn Duy Khanh 0,7 0,8 21 0,9 1,0 S/V Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Từ bảng 3.1 biểu đồ 3.1.1 3.1.2 tơi thấy khả hình thành màng tốt tỷ lệ S/V = 0,8 với chiều cao môi trường dụng cụ lên men h =1,25 cm Với tỷ lệ S/V thấp lớn 0,8 độ kết tinh màng không cao, màng dễ bị rách khả chịu lực kéo 3.2 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả tạo màng BC tốt chủng A xylinum BH với tỷ lệ S/V=0,8 Sau thời gian tiến hành thí nghiệm nghiên cứu thời gian từ 1-7 ngày với tỷ lệ S/V=0,8 đến khả tạo màng BC từ chủng A xylinum BHN theo tiêu chí: thời gian xuất màng, màu sắc, độ nhẵn, độ dày, độ dai, cân nặng, trọng lượng khô tuyệt đối từ tìm thời gian để độ kết tinh màng đạt trạng thái tốt thu nhận màng tốt nhất, thu kết thể bảng 3.2 sau: SV: guyễn Duy Khanh 22 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Bảng 3.2 ghiên cứu ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả tạo màng BC tốt từ chủng A xylinum BH với tỷ lệ S/V=0,8 Thời gian (ngày) Xuất - - + + + + + - - Màng Màng Màng Màng Màng trắng trắng trắng trắng trắng trong, trong, trong, trong, trong, nhẵn nhẵn nhẵn nhẵn nhẵn 2,0 2,0 3,0 3,2 màng Màu sắc, độ nhẵn Độ dày sau - - 1,0 - - - - 8,61 13,36 16,47 22,22 23,36 - - 0,12 0,30 0,35 0,51 0,45 lên men (mm) Độ dai(độ 10 14 18 15 bền kéo) ( ) Cân nặng sau lên men(g) Trọng lượng khơ (g) Chú thích: + có SV: guyễn Duy Khanh -: Khơng 23 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Biểu đồ 3.2.1.Thể mối quan hệ thời gian với khối lượng màng Khối lượng màng (g) 25 20 15 10 Thời gian (ngày) Biểu đồ 3.2.2.Thể mối quan hệ thời gian với độ bền kéo màng Độ bền kéo màng ( ) 18 16 14 12 10 2 SV: guyễn Duy Khanh 24 Thời gian (ngày) Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Qua bảng 3.2 hai biểu đồ 3.2.1 3.2.2, thấy sản lượng cellulose thu trình lên men tăng theo thời gian lên men kể từ xuất màng Sau ngày lên men nhận thấy màng bắt đầu có dấu hiệu chìm xuống mơi trường lên men khả sản xuất màng BC bắt đầu giảm dần Các kết trung bình nhiều lần lặp lại, nhận thấy: Sau thời gian ngày độ kết tinh màng đạt trạng thái tốt Với S/V= 0,8 thấy thu nhận màng sau ngày lên men tốt 3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến khả tạo màng BC tốt chủng A xylinum BH với tỷ lệ S/V=0,8 Nhiệt độ yếu tố ảnh hưởng rõ rệt đến khả tạo màng BC từ vi khuN A xylinum BHN n Với khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy với tỷ lệ S/V=0,8 đến khả tạo màng BC tốt chủng A.xylinum BHN thu kết thể bảng 3.3: SV: guyễn Duy Khanh 25 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Bảng 3.3 ghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy với tỷ lệ S/V=0,8 đến khả tạo màng BC tốt từ chủng A xylinum BH hiệt độ (0C) 20 25 30 35 Thời gian 3 xuất 40 - màng(ngày) Độ dày sau Màng Màng Màng trắng trắng trắng trắng trong, nhẵn trong, trong, nhẵn độ nhẵn Màng trong, Màu sắc, nhẵn nhẵn 2,5 3,0 - 2,0 lên men - (mm) Độ dai(độ 10 14 18 15 bền kéo) - ( ) Cân nặng 8,61 16,47 22,22 21 0,12 0,35 0,51 - 0,30 sau lên men (g) Trọng lượng khô(g) SV: guyễn Duy Khanh - 26 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Biểu đồ 3.3.1.Thể mối quan hệ nhiệt độ với khối lượng màng Khối lượng màng (g) 25 20 15 10 20 25 30 35 40 hiệt độ (0C) Biểu đồ 3.3.2.Thể mối quan hệ nhiệt độ với độ bền kéo màng Độ bền kéo màng ( ) 18 16 14 12 10 hiệt độ (0C) 20 25 SV: guyễn Duy Khanh 30 27 35 40 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Qua bảng 3.3 hai biểu đồ 3.3.1 3.3.2 trên, nhận thấy nhiệt độ thích hợp với vi khuN A.xylinum BHN từ 25-30 C nhiệt độ thích hợp n 30 C Ở nhiệt độ thấp trình lên men xảy chậm Ở nhiệt độ cao ức chế hoạt động đến mức đình sinh sản tế bào hiệu suất lên men giảm Với S/V= 0,8, thấy lên men tạo màng BC từ vi khuN A.xylinum BHN n nhiệt độ 300C tốt SV: guyễn Duy Khanh 28 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật PHẦ KẾT LUẬ VÀ ĐỀ GHN Kết luận - Nghiên cứu tỷ lệ diện tích bề mặt thể tích dịch lên men từ chủng A xylinum BHN tạo màng BC tốt S/V= 0,8 - Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian nuôi cấy với tỷ lệ S/V=0,8 đến khả tạo màng BC tốt chủng A xylinum BHN ngày - Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy với tỷ lệ S/V=0,8 đến khả tạo màng BC tốt chủng A xylinum BHN 300C - Nghiên cứu số tính chất vật lý màng BC tạo từ chủng A xylinum BHN màng có độ dày 2-3mm với màu trắng trong, bề mặt nhẵn mịn, dai đáp ứng yêu cầu độ chịu lực màng trị bỏng Từ định hướng cho ứng dụng trị bỏng Đề nghị Trên kết nghiên cứu bước đầu tuyển chọn khảo sát sơ chủng A.xylinum BHN có khả tổng hợp cellulose Để sản phN ứng dụng vào thực tiễn đề nghị: m - Khi lên men tạo màng BC cần lên men nhiệt độ 300C, thời gian thu nhận màng tốt ngày với tỷ lệ S/V=0,8 - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy khác đến tỷ lệ S/V thích hợp đến khả tạo màng BC SV: guyễn Duy Khanh 29 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: Nguyễn Lân Dũng, Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Thanh Hiền, Lê Đình Lương, Đồn Xn Mượn, Nguyễn Đình Quyết, Phạm Văn Ty Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học Nxb khoa học kĩ thuật, 1978 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty Vi sinh vật học, Nxb Giáo dục, 1998 Nguyễn Thành Đạt Cơ sở sinh học vi sinh vật Nxb Giáo dục, 1999 Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo, Vương Trọng Hào Thực hành vi sinh vật học Nxb Giáo dục, 1990 Đặng Thị Hồng Phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuN Acetobacter xylinum chế tạo màng sinh học (BC) Luận án n thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội, 2007 Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuN từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng Tạp n chí Dược học số 361/ 2006 tr 18 – 20 Chu Văn Mẫn Ứng dụng tin học sinh học Nxb ĐHQG Hà Nội, 2003 Đinh Thị Kim Nhung Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuN n Acetobacter ứng dụng chúng lên men axêtic theo phương pháp chìm Luận án phó tiến sĩ khoa học sinh học, 1996 Nguyễn Thị Nguyệt Nghiên cứu vi khuN Acetobacter xylinum cho màng n Bacterial Cellulose làm mặt nạ dưỡng da Luận án thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội, 2008 10 Trần Thị Thanh (2003), Công nghệ Vi sinh, Nhà xuất Giáo dục SV: guyễn Duy Khanh 30 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật 11 Trịnh Hữu Hằng, Đỗ Công Quỳnh, Sinh lý học người động vật, Nxb Khoa học kỹ thuật Hà Nội, 2001, tr 173, 184 -187 12 Nguyễn Đức Lượng (2000), Công nghệ Vi sinh vật tập 1-2-3, Nhà Xuất Đại học Quốc Gia TP.HCM 13 Nguyễn Thúy Hương(2006) Chọn lọc dòng A.xylinum thích hợp cho loại mơi trường dung sản xuất cellulose vi khuN với quy mô lớn n 14 Trần Quỳnh.Nghiên cứu số đặc tính vật lý màng BC từ Acetobacter xylinum, ứng dụng trị bỏng Luận văn thạc sĩ vi sinh học ĐHSP Hà Nội, 2009 Tài liệu tiếng anh: 15 Alina Krystynowicz, Maria Koziołkiewicz, Agnieszka WiktorowskaJezierska, Stanisław Bielecki, Emilia Klemenska, Aleksander Masny, Andrzej Płucienniczak Molecular basis of cellulose biosynthesis disappearance in submerged culture of Acetobacter xylinum Vol 52, 3, http://www.actabp.pl, 2005, p 691–698 16 Bergey H, John G Holt Bergey’s manual of dererminativa bacteriology Wolters Kluwer health, 1992, p.71-84 17 Cazfa, W., Young, D.J Kawechi, M & Brown, R M Tr (2007) The future Prospects of microbial cellulose in bio medical application, Biomacromolecules, 8, – 12 18 Thesis Homles Bacterial cellulose Department of chemical and process Engineering University of Canterbury Christchurch, New Zealand, 2004, p 1-65 19 Cheng H.P., Wang P.M., Chen J.W., Wu W.T (2002), Cultivation of SV: guyễn Duy Khanh 31 Khóa luận tốt nghiệp Chuyên ngành: Vi sinh vật Acetobacter xylinum for bacterial cellulose production in a modified airlift reactor, Biotechnol Appl Biochem 35, p 125-132 20 Walker K T, Toidi.J The ' Catalase test', with special reference to Acetobacter species Vol 37, The College of Technology, The University of Manchester, 1942, p 10-12 21 Dieter Klemm, Dieter Schumann ,Ulrike Udhardt, Silvia Marsch Bacterial synthesized cellulose-artificial blood vessels for microsurgery Vol 26, Inssue 9, Progress in polymer science, 2001, p 1561-1603 22 Brown E Bacterial cellulose/ Themoplastic polymer nanocomposites Master of sience in chemical engineering, Washington state university, 2007 SV: guyễn Duy Khanh 32 ... sát khả tạo màng BC vi khuN A xylinum BHN n - Bổ sung thêm kiến thức vi khuN A .xylinum nhằm ứng dụng tạo n màng BC tốt ội dung nghiên cứu - Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ S/V tới khả tạo màng vi. .. A xylinum BHN - Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian ni cấy đến tỷ lệ S/V thích hợp đến khả tạo màng BC chủng A xylinum BHN - Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ ni cấy đến tỷ lệ S/V thích hợp đến khả tạo. .. lên men từ chủng A xylinum BHN tạo màng BC tốt S/V= 0,8 - Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian nuôi cấy với tỷ lệ S/V= 0,8 đến khả tạo màng BC tốt chủng A xylinum BHN ngày - Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt
