Mơc lơc Trang Lêi cam ®oan i Lêi cảm ơn ii Môc lôc iv Danh mục ký hiệu chữ viết tắt vii Danh môc bảng ix Danh mục hình xi mở đầu Ch−¬ng Tỉng quan 1.1 Tình hình nghiên cứu bảo tồn thuốc giới số vấn đề có liªn quan 1.2 Tình hình nghiên cứu bảo tồn thuốc Việt Nam năm gần 1.2.1 Vài nét trạng nguồn tài nguyên thuốc 1.2.2 Tình hình nghiên cứu bảo tồn thuốc 1.3 Tình hình nghiên cứu Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp, Tam thất hoang giới Việt Nam 12 1.3.1 Tình hình nghiên cứu Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 12 1.3.1.1 Trªn thÕ giíi 12 1.3.1.2 ë ViÖt Nam 18 1.3.2 T×nh h×nh nghiên cứu Sâm vũ diệp Tam thất hoang 22 1.3.2.1 Trªn thÕ giíi 22 1.3.2.2 ë ViÖt Nam 29 Chơng Đối tợng, nội dung phơng pháp Nghiên cứu 36 2.1 Đối tợng nghiên cứu 36 2.2 Néi dung nghiªn cøu 36 2.2.1 Nghiªn cøu vỊ thùc vËt 36 2.2.2 Nghiªn cứu sơ thành phần hóa học 37 2.2.3 Nghiên cứu bảo tồn 37 2.3 Phơng pháp nghiên cứu 38 2.3.1 Phơng pháp nghiªn cøu thùc vËt 2.3.2 Phơng pháp khảo sát sơ thành phần hoá học 2.3.3 Phơng pháp nhân giống phục vụ cho mục đích bảo tồn 2.3.4 Phơng pháp xử lý số liệu 38 2.3.5 Trang thiết bị dung môi hóa chất 41 2.4 Địa điểm nghiên cứu 41 Chơng kết bàn luận 42 3.1 Nghiªn cøu vÒ thùc vËt häc 42 3.1.1 Xác định tên khoa học đặc điểm hình thái loài 42 3.1.1.1 Ngũ gia bì hơng 43 3.1.1.2 Ngị gia b× gai 44 3.1.1.3 S©m vị diƯp 47 3.1.1.4 Tam thÊt hoang 48 3.1.2 Sö dụng thị ADN (RAPD-PCR) để đánh giá đa dạng di truyền góp phần phân biệt loài Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diƯp vµ Tam thÊt hoang 49 3.1.2.1 Kết tách chiết ADN 49 3.1.2.2 Sử dụng thị RAPD-PCR để đánh giá đa dạng di truyền 53 3.1.2.3 Bớc đầu xác định tập hợp số thị RAPD-PCR đặc trng góp phần phân biệt loài Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang……………………………………… 66 3.1.3 Ph©n bè trạng 69 3.1.3.1 Ngũ gia bì hơng 69 3.1.3.2 Ngị gia b× gai 71 3.1.3.3 S©m vị diƯp vµ Tam thÊt hoang 76 3.1.4 Đặc điểm sinh thái, sinh trởng - phát triển tái sinh tự nhiên 3.1.4.1 Ngũ gia bì hơng 79 3.1.4.2 Ngị gia b× gai 82 3.1.4.3 Sâm vũ diệp Tam thất hoang 87 3.2 Nghiên cứu sơ thành phần hoá học 93 3.2.1 Phân tích sơ thành phần hóa học 3.2.1.1 Ngũ gia bì hơng Ngũ gia b× gai 93 38 39 40 79 93 3.2.1.2 Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang 94 3.2.2 Phân tích tinh dầu đối tợng nghiên cứu 95 3.2.2.1 Định lợng tinh dầu 96 3.2.2.2 Phân tích thành phần hóa học tinh dầu dợc liệu nghiên cứu phơng pháp sắc ký khí khối phổ (GC/MS) 96 3.2.3 Bớc đầu xây dựng dấu vân tay hóa học sắc ký lỏng cao ¸p (SKLCA) cđa c¸c d−ỵc liƯu 100 3.2.3.1 Ngị gia b× h−¬ng 101 3.2.3.2 Ngị gia b× gai 102 3.2.3.3 Sâm vũ diệp Tam thất hoang 103 3.3 Nghiên cứu bảo tồn khả nhân trồng, phát triển 105 3.3.1 Nghiên cứu bảo tồn chỗ 105 3.3.1.1 Ngũ gia bì hơng 105 3.3.1.2 Ngị gia b× gai 107 3.3.1.3 Sâm vũ diệp Tam thất hoang 109 3.3.2 Nghiên cứu bảo tồn chuyển chỗ 3.3.2.1 Nghiên cứu khả nhân giống 111 111 3.3.2.2 Sự sinh trởng phát triển loài đợc bảo tồn chuyển chỗ 121 3.3.2.3 Kết bớc đầu nghiên cứu bảo tồn chuyển chỗ trồng thêm 134 3.3.2.4 Triển vọng nhân trồng phát triển chỗ Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thất hoang 141 3.3.2.5 Xây dựng liệu phục vụ bảo tồn loài Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang 146 KÕt luËn 147 đề nghị 149 Danh mục công trình khoa học tác giả liên quan đến luận án 150 Tµi liƯu tham kh¶o 152 C¸c phơ lơc 165 Danh mục ký hiệu chữ viết tắt ADN Axit deoxyribonucleic AFLP Đa hình độ dài phân đoạn ADN đợc khuếch đại (Amplified Fragment Length Polymorphism) BTTN Bảo tồn thiên nhiên CE Điện di mao quản (Capillary Electrophoresis) Cites Công ớc thơng mại quốc tế loài đông thực vật hoang dà bị nguy hiểm (Convention on Internationnal Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora) DAD Xác định phổ kỹ thuật diode array (diode array detector) DĐVN Dợc điển Việt Nam ĐDSH Đa dạng sinh học FAO Tổ chức lơng thực nông nghiệp Liªn hiƯp qc (The Food and Agriculture Orgnization of the United Nations) G MÉu Ngị gia b× gai sư dơng phân tích ADN GC/MS Phơng pháp sắc ký khí khèi phỉ (Gas Chromatography / Mass Spectrophotometry) H MÉu Ngị gia bì hơng sử dụng phân tích ADN HN Bảo tàng thực vật (thuộc Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Khoa học Việt Nam) HNPM Bảo tàng Dợc liệu (thuộc Khoa Tài nguyên dợc liệu, Viện Dợc liệu, Bộ Y Tế) HNU Bảo tàng thực vật (thuộc Khoa Sinh học, Trờng Đại học Khoa học tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội) HPLC Sắc ký lỏng cao áp (High Perfomance Liquid Chromatography, gọi Sắc ký lỏng hiệu cao) IUCN Tổ chức bảo tån thiªn nhiªn quèc tÕ (The International Union for Conservation of Nature and Natural Resouses) KHKT Khoa häc kü thuËt NGBG Ngị gia b× gai NGBGL Ngị gia b× gai lông NGBH Ngũ gia bì hơng NXB Nhà xuất PCR Phản ứng chuỗi trùng hợp ADN (Polymerase Chain Reaction) RAPD-PCR Đa hình phân đoạn ADN khuếch đại ngẫu nhiên (Random Amplified Polymorphic DNA) RFLP Đa hình độ dài đoạn giới hạn (Restricted Fragment Length Polymorphism) RP-HPLC Sắc ký lỏng cao áp đảo pha RTQ Rừng tự nhiên có trồng Thảo SKLM Sắc ký lớp mỏng SSC ủy ban sống sót loài (The Species Survial Commission) SSR Đa hình trình tự lập lại đơn giản (Simple Sequence Repeats) SVD Sâm vũ diệp T MÉu Tam thÊt hoang sư dơng ph©n tÝch ADN To / to Nhiệt độ TB Trung bình tR / TR Thêi gian l−u cña mÉu kü thuËt HPLC (Retention time) TTH Tam thÊt hoang V MÉu S©m vị diệp sử dụng phân tích ADN VMC Vờn mái che VT Mẫu Panax xẻ nông (1 lần) phân tích ADN VQG Vờn Quốc gia WWF Quĩ bảo vƯ ®éng vËt hoang d· thÕ giíi (The World Wildlife Fund) Danh Mục bảng Trang Bảng 3.1 Danh sách kí hiệu mẫu thực vật sử dụng nghiên cứu phân tích ADN (chỉ thị RAPD-PCR) 50 Bảng 3.2 Kết đo quang phổ hấp thụ dịch chiết ADN tổng số mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) 51 Bảng 3.3 Kết đo mật độ quang phổ hấp thụ dịch chiết ADN tổng số mẫu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) 52 Bảng 3.4 Số băng RAPD-PCR đa hình mẫu thuộc hai loài Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai phân tích với 16 mồi ngẫu nhiên 53 Bảng 3.5 Hệ số tơng đồng di truyền mẫu nghiên cứu hai loài Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) 58 B¶ng 3.6 Số băng RAPD-PCR đa hình mẫu thuộc hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang phân tích víi 13 måi ngÉu nhiªn 60 Bảng 3.7 Hệ số tơng đồng di truyền mẫu nghiên cứu hai loài Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) 64 Bảng 3.8 Các thị RAPD-PCR đồng hình đa hình sử dụng góp phần phân biệt hai loài Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 66 Bảng 3.9 Các thị RAPD-PCR đồng hình đa hình sử dụng góp phần phân biệt hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang 68 Bảng 3.10 Các địa phơng Việt Nam đà phát thấy Ngũ gia bì gai 74 Bảng 3.11 Kết định tính mét sè nhãm chÊt chÝnh vá rƠ Ngị gia bì hơng Ngũ gia bì gai 94 B¶ng 3.12 Kết định tính số nhóm chất thân rễ Sâm vũ diệp Tam thất hoang 95 Bảng 3.13 Kết định lợng hàm lợng tinh dầu Ngũ gia bì hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thất hoang 96 B¶ng 3.14 KÕt phân tích thành phần hóa học tinh dầu Ngũ gia bì hơng 97 B¶ng 3.15 Kết phân tích thành phần hóa học tinh dầu Ngũ gia bì gai 98 Bảng 3.16 Kết phân tích thành phần hóa học tinh dầu Sâm vũ diệp Tam thất hoang 99 Bảng 3.17 Tỷ lệ nảy mầm hạt Ngị gia b× gai 112 Bảng 3.18 Mối tơng quan đờng kính hom khả chồi rễ Ngũ gia bình hơng Ngũ gia bì gai 114 B¶ng 3.19 KÕt qu¶ nhân giống Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai hom (thân) năm 2004 - 2006 116 Bảng 3.20 Tỷ lệ nảy mầm hạt Sâm vũ diệp Tam thất hoang 117 Bảng 3.21 Kết thu thập giống Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang 118 B¶ng 3.22 KÕt nhân giống Sâm vũ diệp Tam thất hoang (b»ng th©n rƠ) 119 B¶ng 3.23 Khả chồi Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai sau tháng trồng vờn −¬m 121 Bảng 3.24 Sự phát triển Ngũ gia bình hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trồng vờn ơm 122 B¶ng 3.25 Sự tăng trởng chiều cao chồi Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trång ë v−ên −¬m 122 Bảng 3.26 Sự tăng trởng đờng kính thân Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trồng vờn ơm 124 Bảng 3.27 Sự tăng tr−ëng chiỊu cao vµ chåi míi cđa Ngị gia bì hơng Ngũ gia bì gai sau giai đoạn v−ên −¬m 126 B¶ng 3.28 Tû lƯ hoa, kÕt qu¶ cđa Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai theo dõi qua năm 127 B¶ng 3.29 Sù tăng trởng chiều cao (cm) Sâm vũ diệp trồng từ thân rễ (củ) dới vờn mái che dới tán rừng trồng Thảo 129 Bảng 3.30 Sự tăng trởng chiều cao (cm) cđa Tam thÊt hoang trång tõ th©n rƠ (cđ) d−íi vờn mái che dới tán rừng tự nhiên có trång Th¶o qu¶ 130 B¶ng 3.31 Tû lƯ hoa Sâm vũ diệp Tam thất hoang trồng từ thân rễ (củ) dới vờn mái che dới tán rừng tự nhiên có trồngThảo 131 Bảng 3.32 Tỷ lệ kết Sâm vũ diệp Tam thất hoang trồng từ thân rễ (củ) dới vờn mái che dới tán rừng tự nhiên có trångTh¶o qu¶ 132 B¶ng 3.33 Tû lƯ sèng gieo từ hạt 136 B¶ng 3.34 Tû lƯ sèng nhân giống từ hom thân thân rễ 136 Danh Mục hình Trang Hình 3.1 Ngũ gia bì hơng (cành mang nụ hoa) 44 H×nh 3.2 Ngị gia bì gai lông 46 H×nh 3.3 Ngị gia b× gai (cµnh mang hoa) 46 Hình 3.4 Sâm vũ diệp (cây có qu¶ chÝn) 47 Hình 3.5 Tam thất hoang (cây có chín) 49 H×nh 3.6 ảnh điện di ADN tổng số mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) 51 ảnh điện di ADN tổng số mẫu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) 52 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gai bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPC9 54 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA5 55 Sơ đồ hình quan hệ di truyền mẫu nghiên cứu hai loài Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) 59 Băng đồng hình mẫu Sâm vũ diệp (V) dạng xẻ nông (VT) tơng ứng với mồi OPC1 61 H×nh 3.12 Băng đồng hình mẫu Tam thất hoang (T) tơng ứng với mồi OPA7 61 Hình 3.13 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Sâm vũ diệp (V), dạng xẻ nông (VT) Tam thất hoang (T) đợc khuếch đại mồi OPA8 62 Sơ đồ hình quan hệ di truyền mẫu nghiên cứu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) 65 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA10 67 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA15 68 Hình 3.17 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia bì hơng Việt Nam 70 Hình 3.18 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia b× gai ë ViƯt Nam 71 Hình 3.19 Bản đồ điểm phân bố Sâm vũ diệp Tam thất hoang Việt Nam 77 Hình 3.20 Chồi ngắn Ngũ gia bì hơng 83 H×nh 3.21 Ngị gia bì hơng rụng 83 H×nh 3.7 H×nh 3.8 H×nh 3.9 H×nh 3.10 H×nh 3.11 H×nh 3.14 H×nh 3.15 H×nh 3.16 Hình 3.22 Hoa Ngũ gia bì hơng mọc tõ chåi ng¾n 83 Hình 3.23 Ngũ gia bì hơng có cành mang non 83 H×nh 3.24 Chåi gèc Ngị gia b× gai 86 H×nh 3.25 Ngị gia bì gai rụng 86 H×nh 3.26 Ngị gia b× gai hoa 86 H×nh 3.27 Ngị gia b× gai cã qu¶ chÝn 86 Hình 3.28 Chồi thân Sâm vị diƯp 91 Hình 3.29 Sâm vũ diệp hoa 91 Hình 3.30 Sâm vũ diệp có chín 91 H×nh 3.31 Sâm vũ diệp có thân mang vàng úa tàn lụi 91 Hình 3.32 Chåi th©n cđa Tam thÊt hoang 92 H×nh 3.33 Tam thÊt hoang hoa 92 Hình 3.34 Tam thất hoang có chÝn 92 Hình 3.35 Tam thất hoang có thân mang vµng óa vµ tµn lơi 92 Hình 3.36 Sắc ký đồ SKLCA dịch chiết toàn phần vỏ rễ Ngũ gia bì hơng 101 Hình 3.37 Phỉ UV-VIS cđa pic cã thêi gian l−u tR = 26.83 cđa dÞch chiÕt vá rƠ Ngị gia bì hơng syringin chuẩn 101 Hình 3.38 Sắc ký đồ SKLCA dịch chiết toàn phần vỏ rễ Ngũ gia bì gai 102 Hình 3.39 Sắc ký đồ SKLCA dịch chiết toàn phần Sâm vũ diệp phổ UVVIS pic có tR tơng ứng 38,82 phút 40,69 phút 104 Sắc ký đồ SKLCA dịch chiết toàn phần Tam thất hoang phổ UV-VIS pic có tR tơng ứng 38,02 phút 39,70 phút 104 Ngũ gia bì hơng điểm bảo tồn chỗ (Phó Bảng - Đồng Văn - Hà Giang) 110 Ngò gia bì gai điểm bảo tồn chỗ (Đức Xuân - Thạch An - Cao Bằng) 110 Tam thất hoang điểm bảo tồn chỗ (Bản Khoang - Sa Pa - Lào Cai) 110 Hình 3.44 Hạt Ngũ gia bì gai 112 Hình 3.45 Cây Ngũ gia bì gai mọc tõ h¹t 112 Hình 3.46 Hom giống Ngũ gia bì hơng 115 H×nh 3.47 Hom gièng Ngị gia b× gai 115 H×nh 3.48 Hom gièng Ngị gia bì hơng chồi 115 H×nh 3.40 H×nh 3.41 H×nh 3.42 H×nh 3.43 H×nh 3.49 Hom gièng Ngị gia b× gai chåi 115 Hình 3.50 Hạt Sâm vũ diệp 120 H×nh 3.51 H¹t Tam thÊt hoang 120 Hình 3.52 Cây Sâm vũ diệp mọc từ hạt 120 Hình 3.53 Cây Tam thÊt hoang mäc tõ h¹t 120 Hình 3.54 Thân rễ (củ) Sâm vị diƯp vµ Tam thÊt hoang 120 Hình 3.55 Thân rễ (củ) Sâm vũ diƯp vµ Tam thÊt hoang chåi (sau đ gièng) 120 Sự tăng trởng chiều cao chồi Ngũ gia bình hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trồng vờn ơm 123 Sự tăng trởng đờng kính thân Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai 12 tháng trồng vờn ơm 124 Tû lÖ hoa Sâm vũ diệp trồng vờn mái che (VMC) dới tán rừng tự nhiên có trồng Thảo qu¶ (RTQ) 131 Tû lƯ hoa cđa Tam thÊt hoang trång ë v−ên mái che (VMC) dới tán rừng tự nhiên có trång Th¶o qu¶ (RTQ) 131 Tỷ lệ kết Sâm vũ diệp trồng vờn mái che (VMC) dới tán rừng tự nhiên cã trång Th¶o qu¶ (RTQ) 133 Tû lƯ kÕt qu¶ cđa Tam thÊt hoang trång vờn mái che (VMC) dới tán rừng tự nhiên có trồng Thảo (RTQ) 133 Vờn bảo tồn Ngũ gia bì hơng Trạm nghiên cứu trồng thuốc Sa Pa (Viện Dợc Liệu) 137 Ngũ gia bì hơng đợc trồng thêm để bảo tồn Trung tâm KHKT giống trồng gia súc Phó Bảng (Hà Giang) 137 Trồng bảo tồn Ngũ gia bì hơng vờn gia đình ngời dân (Phó Bảng - Đồng Văn - Hµ Giang) 138 Vờn bảo tồn Ngũ gia bì gai Trạm nghiên cứu trồng thuốc Sa Pa (Viện Dợc LiÖu) 138 Hình 3.66 Ngũ gia bì gai đợc trồng vờn gia đình ngời dân (Sa Pa - Lào Cai) 139 Hình 3.67 Ngũ gia bì gai đợc trồng vờn gia đình ngời dân (xà Bản Khoang Sa Pa - Lµo Cai) 139 Sâm vũ diệp Tam thất hoang đợc trồng bảo tồn vờn có mái che Trạm nghiên cứu trồng thuốc Sa Pa (Viện Dợc Liệu) 140 Sâm vũ diệp Tam thất hoang đợc trồng bảo tồn dới tán rừng tự nhiên có trồng Thảo xà Bản Khoang - Sa Pa - Lµo Cai 140 H×nh 3.56 H×nh 3.57 H×nh 3.58 H×nh 3.59 H×nh 3.60 H×nh 3.61 H×nh 3.62 H×nh 3.63 H×nh 3.64 H×nh 3.65 Hình 3.68 Hình 3.69 Kết phân tích cho thấy, hai loài thuốc Ngũ gia bì gai Ngũ gia bì hơng nớc ta có phạm vi phân bố không rộng lắm, nhng tính đa hình di truyền nhóm cá thể có tơng đối đa dạng Vì vậy, vấn đề bảo tồn đợc tính đa dạng di truyền hai loài thuốc quý thực cần thiết Tuy nhiên, để có đợc sở liệu đầy đủ hoàn thiện hai loài thuốc này, cần tiếp tục mở rộng quy mô nghiên cứu lớn địa điểm thu mẫu số lợng mẫu phân tích * Sâm vị diƯp vµ Tam thÊt hoang Tỉng céng 13 måi ngẫu nhiên đà đợc sử đụng để phân tích cấu trúc di truyền 20 mẫu Sâm vũ diệp Tam thất hoang Danh sách mồi, trình tự, tổng số băng đợc khuếch đại số băng đa hình loài đợc trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6 Số băng RAPD-PCR đa hình mẫu thuộc hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang phân tích với 13 mồi ngẫu nhiên Số băng đa hình/Tổng số băng Mồi Trình tự mồi OPA1 OPA2 OPA3 OPA7 OPA8 OPA12 OPA14 OPC1 OPC6 OPC12 OPC15 OPC16 OPC17 5-CAGGCCCTTC-3’ 5’-TGCCCAGCTG-3’ 5’-AGTCAGCCAC-3’ 5’-GAAACGGGTC-3’ 5’-GTGACGTAGG-3’ 5’-TCGGCGATAG-3’ 5’-TCTGTGCTGG-3’ 5’-TTCGAGCCAG-3’ 5’-GAACGGACTC-3’ 5’-TGTCATCCCC-3’ 5’-GACGGATCAG-3’ 5’-CACACTCCAG-3’ 5-TTCCCCCCAG-3 Tổng số Trung bình Tổng số băng tính loµi SVD TTH 1/7 0/6 0/2 2/4 0/4 1/9 2/8 0/4 4/6 4/7 1/3 0/7 4/6 3/7 1/6 2/4 0/3 3/7 0/9 1/6 0/4 5/5 0/6 1/2 1/8 3/6 9 9 10 13 11 19/73 (26,0%) 1,5/5,6 20/73 (27,4%) 1,5/5,6 101 60 Kết thu đợc cho thấy có 101 băng khuếch đại, tổng số băng khuếch đại Sâm vũ diệp Tam thất hoang 73 băng Trung bình mồi khuếch đại đợc 5,6 băng Phân tích 12 mẫu thuộc loài Sâm vũ diệp xuất 19 băng đa hình tổng số 73 băng khuếch đại, chiếm 26,0% Đối với mẫu Tam thất hoang, thu đợc 20 băng đa hình tổng số 73 băng khuếch đại, chiếm 27,4% tổng số băng Nh vậy, tập hợp cá thể hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang Việt nam có mức độ đa hình di truyền không cao Cả hai loài có đặc điểm chung tính đồng hình thể rõ (hình 3.11 hình 3.12) bp M VT1 VT2 V1 V2 V3 V4 V5 1000 750 600 250 200 OPC1 Hình 3.11 Băng đồng hình mẫu Sâm vũ diệp (V) dạng xẻ nông (VT) tơng ứng với mồi OPC1 Các chữ số (1 - 5) địa điểm thu mÉu kh¸c bp M T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 750 600 250 OPA7 Hình 3.12 Băng đồng hình mẫu Tam thất hoang (T) tơng ứng với mồi OPA7 Các chữ số (1 - 8) địa điểm thu mẫu khác 61 Kết phân tích phổ băng điện di RAPD-PCR mẫu dạng xẻ nông có tơng đồng đáng kể với mẫu Sâm vũ diệp (hình 3.13) Kết góp phần xác định cá thể có kiểu hình xẻ nông thuộc loài Sâm vũ diệp loài Tam thất hoang Hình 3.13 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Sâm vũ diệp (V), dạng xẻ nông (VT) Tam thất hoang (T) đợc khuếch đại mồi OPA8 Các chữ số (1 - 8) địa điểm thu mẫu khác Phổ băng điện di thu đợc cho thấy cấu trúc di truyền hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang có tơng đồng lớn, thể quan hệ gần gũi hai loài Sử dụng phần mềm NTSYSpc 2.02h, đà xây dựng đợc bảng hệ số tơng đồng di truyền (bảng 3.7) quan hệ di truyền 12 mẫu Sâm vũ diệp mẫu Tam thất hoang (hình 3.14) Với mẫu Sâm vũ diệp (bao gồm dạng xẻ nông), hệ số tơng đồng di truyền dao ®éng tõ 0,89 ®Õn 1,00, ®ã mÉu V2 cã cÊu tróc di trun hoµn toµn gièng mÉu V3, tơng tự với hai mẫu V5 V6 Cấu trúc di truyền khác mẫu V2, V3 ,V4 với V7 mẫu VT1 với mẫu VT3 trờng hợp mẫu Tam thất hoang, hệ số tơng đồng di truyền thấp thu đợc mẫu T8 với T1 T2 (0,89) hệ số tơng đồng di truyền cao T1 T2 (1,00) Có thể nhận thấy, hai loài thuốc này, hệ số tơng đồng di 62 truyền mẫu loài cao, thể tính đồng hình tơng đối cao quần thể loài Kết phù hợp với thực tế tự nhiên hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang có vùng phân bố hẹp kích thớc quần thể nhỏ Việc quần thĨ cđa hai loµi nµy ë n−íc ta tù nhiên tình trạng khai thác møc mét thêi gian dµi cịng cã thĨ lµ nguyên nhân dẫn đến tính đa dạng di truyền thấp hai loài Một kết lý thú hệ số tơng đồng di truyền mẫu có kiểu hình xẻ nông so với mẫu Sâm vũ diệp dao động từ 0,90 đến 0,97, so với mẫu Tam thất hoang từ 0,65 đến 0,73 Kết thể cấu trúc di truyền dạng xẻ nông giống với Sâm vũ diệp rõ rệt so với Tam thất hoang Hay nãi c¸ch kh¸c, cã thĨ thÊy cÊu tróc ADN hai dạng xẻ (nông sâu) không phân biệt rõ rệt, dạng không xẻ thể cấu trúc di truyền khác biệt Kết thể quan hệ di truyền (hình 3.14) cho thấy, tất mẫu kết nhóm với thành cụm riêng biệt ứng với hai loài Tất mẫu có kiểu hình xẻ nông kết cụm với mẫu Sâm vũ diệp, phân tách với mẫu Tam thất hoang Điều cho thấy gần gũi cấu trúc di truyền dạng có xẻ nông với Sâm vũ diệp với Tam thất hoang Các mẫu Tam thất hoang nghiên cứu tách thành hai nhãm nhá, nhãm thø nhÊt gåm T1 ®Õn T5, nhãm lại đợc hợp T6, T7 T8 Nh nói cách khác, thị RAPD-PCR không cho thấy cã sù kh¸c biƯt râ rƯt vỊ cÊu tróc di truyền dạng xẻ sâu (Sâm vũ diệp) dạng xẻ nông Những dẫn liệu thu đợc chứng tỏ cá thể có xẻ nông thuộc loài Sâm vũ diệp 63 Bảng 3.7 Hệ số tơng đồng di truyền mẫu nghiên cứu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ n«ng (VT) V1 V2 V3 V4 V5 V6 V7 V8 VT1 VT2 VT3 VT4 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 V1 1,00 V2 0,98 1,00 V3 0,98 1,00 1,00 V4 0,92 0,94 0,94 1,00 V5 0,90 0,92 0,92 0,95 1,00 V6 0,90 0,92 0,92 0,95 1,00 1,00 V7 0,80 0,78 0,78 0,78 0,83 0,83 1,00 V8 0,81 0,79 0,79 0,80 0,85 0,85 0,98 1,00 VT1 0,91 0,92 0,92 0,89 0,88 0,88 0,86 0,87 1,00 VT2 0,92 0,94 0,94 0,90 0,92 0,92 0,85 0,83 0,86 1,00 VT3 0,87 0,86 0,86 0,83 0,81 0,81 0,79 0,81 0,78 0,86 1,00 VT4 0,86 0,88 0,88 0,82 0,83 0,83 0,87 0,89 0,92 0,85 0,86 1,00 T1 0,33 0,32 0,32 0,25 0,30 0,30 0,45 0,43 0,37 0,35 0,33 0,42 1,00 T2 0,33 0,32 0,32 0,25 0,30 0,30 0,45 0,43 0,37 0,35 0,33 0,42 1,00 1,00 T3 0,35 0,33 0,33 0,27 0,31 0,31 0,46 0,44 0,38 0,36 0,35 0,43 0,95 0,95 1,00 T4 0,35 0,33 0,33 0,30 0,32 0,32 0,46 0,44 0,38 0,37 0,38 0,43 0,89 0,89 0,94 1,00 T5 0,38 0,36 0,36 0,30 0,34 0,34 0,46 0,48 0,41 0,36 0,38 0,47 0,92 0,92 0,94 0,94 1,00 T6 0,40 0,38 0,38 0,35 0,33 0,33 0,41 0,43 0,43 0,32 0,37 0,44 0,81 0,81 0,86 0,89 0,89 1,00 T7 0,38 0,36 0,36 0,33 0,32 0,32 0,43 0,44 0,41 0,33 0,38 0,43 0,83 0,83 0,84 0,87 0,91 0,92 1,00 T8 0,31 0,29 0,29 0,26 0,25 0,25 0,38 0,37 0,33 0,29 0,34 0,35 0,78 0,78 0,80 0,83 0,83 0,84 0,89 Các chữ số (1 - 8) địa điểm thu mÉu kh¸c 64 T8 1,00 V1 V2 V3 VT2 V4 V5 V6 VT3 V7 V8 VT1 VT4 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 HÖ sè tơng đồng di truyền Hình 3.14 Sơ đồ hình quan hệ di truyền mẫu nghiên cứu Sâm vũ diệp (V), Tam thất hoang (T) dạng xẻ nông (VT) Các chữ số (1 - 8) địa điểm thu mẫu khác 65 3.1.2.3 Bớc đầu xác định tập hợp số thị RAPD-PCR đặc trng góp phần phân biệt loài Ngũ gia hơng, Ngũ gia bì gai, Sâm vũ diệp Tam thất hoang * Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai Dựa vào kết phân tích, việc xác định đợc số thị RAPD-PCR đồng hình có mặt tất mẫu thuộc hai loài Ngũ gia bì hơng, xác định đợc nhiều thị RAPD-PCR cho phép phân biệt mẫu hai loài với Nghĩa thị RAPD-PCR xuất tất mẫu loài nhng vắng mặt tất mẫu thuộc loài Các băng đợc tạm gọi thị RAPD-PCR có tiềm đặc trng phân biệt hai loài (bảng 3.8) Bảng 3.8 Các thị RAPD-PCR đồng hình đa hình sử dụng góp phần phân biệt hai loài Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai Ngũ gia bì hơng Chỉ thị đặc trng phân biệt (bp) Mồi OPA1 300 OPA4 1500, 400 OPA9 550 OPA10 1500 OPA12 OPA15 Ngò gia bì gai Chỉ thị đồng hình (bp) Mồi Chỉ thị đặc trng phân biệt (bp) Chỉ thị đồng hình (bp) OPA1 500 OPA9 400 OPA12 750 300, 100 OPA15 1000 600 950 OPC5 1200 400 1500, 850 OPC19 700 350 500 400 OPA5 500, 400 OPC7 750, 200 Trong nghiên cứu này, xác định đuợc 11 băng RAPD-PCR đồng hình có mặt tất 26 mẫu thuộc hai loài (bảng 3.8), chẳng hạn nh thị OPA10400 (băng ADN khuếch đại mồi OPA10 có kích th−íc 400 bp) nh− minh häa ë h×nh 3.15 66 OPA10 Hình 3.15 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA10 M: Thang ADN chn kÝch th−íc Kb; LC: Lµo Cai, CB: Cao Bằng, LS: Lạng Sơn, HG: Hà Giang; Các chữ số (1 - 5) địa điểm thu mẫu khác Trong số 14 băng RAPD-PCR có tiềm đặc trng phân biệt hai loài có thị đặc trng cho loài Ngũ gia bì hơng (OPA1300, OPA4400, OPA41500,OPA9550, OPA101500, OPA12950, OPA15850 OPA151500) thị đặc trng cho loài Ngũ gia bì gai (OPA1500, OPA9400, OPA12750, OPA151000, OPC51200, OPC19700) Måi OPA15 lµ måi cho chØ đặc trng phân biệt hai loài cho số băng thị nhiều (3 băng) Trong đó, băng OPA151000 đặc trng cho Ngũ gia bì gai, hai băng OPA151500 OPA15850 đặc trng cho Ngũ gia bì hơng Ngoài ra, có số băng chung (OPA15600) tất mẫu hai loài (hình 3.16) Một số thị đặc trng khác phân biệt hai loài gồm có thị OPA12750 OPA1500 đặc trng cho mẫu thuộc loài Ngũ gia bì gai ; thị OPA12950 OPA1300 đặc trng cho mẫu thuộc loài Ngũ gia bì hơng Mồi OPC5 khuếch đại đợc thị đặc trng cho Ngũ gia bì gai, mồi OPA4 khuếch đại đợc thị đặc trng cho hai loài (xem thêm phụ lục 14) 67 Hình 3.16 ảnh điện di sản phẩm RAPD-PCR mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA15 M: Thang ADN chn kÝch th−íc Kb; LC: Lµo Cai, CB: Cao Bằng, LS: Lạng Sơn, HG: Hà Giang; Các chữ số (1 - 6) địa điểm thu mẫu khác * Sâm vũ diệp Tam thất hoang Cũng giống nh hai loài Ngũ gia bì hơng Ngũ gia bì gai, tìm đợc tập hợp nhiều băng đồng hình phạm vi loài, bên cạnh xác định đợc số băng đa hình có tính đặc trng phân biệt loài Tổng hợp kết từ sử dụng 13 mồi ngẫu nhiên, bớc đầu đà xác định đợc tập hợp số thị RAPD-PCR chung (đồng hình) cho hai loài Sâm vũ diệp Tam thất hoang, nh tập hợp thị RAPDPCR đặc trng (đa hình) giúp phân biệt loài (bảng 3.9 hình 3.13) Bảng 3.9 Các thị RAPD-PCR đồng hình đa hình sử dụng góp phần phân biệt hai loài Sâm vũ diệp Tam thÊt hoang S©m vị diƯp Tam thÊt hoang ChØ thị đặc trng phân biệt (bp) Chỉ thị đồng hình (bp) OPA2 530 1200, 450 OPA8 OPA8 750, 730 1600 OPA12 OPA12 1500, 150 250 OPC1 250 750 Måi ChØ thị đặc trng phân biệt (bp) Chỉ thị đồng hình (bp) 200 OPC1 400, 240 1300, 800, 700, 550 400 OPC12 850 Måi 68 250 750 Nh− vËy, tæng số băng RAPD-PCR có biểu đặc trng cho loài có thị đặc trng cho loài Sâm vũ diệp OPA2530, OPA8750, OPA8730, OPA121500, OPA12150, OPC1250 thị đặc trng cho loài Tam thất hoang lµ OPA8400, OPA8240, OPA121300, OPA12800, OPA12700, OPA12550, OPC1400, OPC12850 Kết thu đợc cho thấy thị RAPD-PCR không giúp phân tích đánh giá xác mức độ đa dạng di truyền mẫu phạm vi loài mà đợc áp dụng hiệu việc giúp phân biệt nhanh số loài dợc liệu có hình thái gần gũi Đây sở cho việc sử dụng thị RAPD-PCR nh công cụ bổ sung cho công tác bảo tồn nguồn gen thuốc nh kiểm định tiêu chuẩn hóa dợc liệu tơng lai 3.1.3 Phân bố trạng Từ năm 1999, đà tiến hành tái điều tra số điểm phân bố đà biết trớc mở rộng điều tra khu vực lân cận đối tợng nghiên cứu Kết điều tra thu đợc nh sau: 3.1.3.1 Ngũ gia bì hơng Loài đà đợc tiến hành điều tra vùng rừng thuộc huyện hai tỉnh, bao gồm huyện Đồng Văn, Yên Minh, Mèo Vạc, Quản Bạ (tỉnh Hà Giang) huyện Sa Pa (tỉnh Lào Cai) Theo tài liệu từ năm 1969 1973 [75] lu giữ Viện Dợc Liệu, Ngũ gia bì hơng trớc đà phát thấy mọc trạng thái hoang dại, bờ nơng rẫy chân núi đá vôi thuộc thị trấn Phó Bảng (Đồng Văn - Hà Giang) Tuy nhiên, đến năm 1998 - 1999 trở lại điều tra thuốc không tìm thấy Ngũ gia bì hơng mọc hoang dại địa điểm trớc Kết điều tra cho thấy, tại, khu vực thị trấn Phó Bảng 69 chỗ có Ngũ gia bì hơng mọc trạng thái hoang dại Tổng số đếm đợc khóm mọc rải rác gần bờ suối, dới tán rừng ẩm núi đá vôi phát triển Bên cạnh quần thể kể trên, Ngũ gia bì hơng đợc vài gia đình dân tộc Hoa HMông thị trấn Phó Bảng xà Phố Là trồng vờn, nhng số lợng không đáng kể Nơi có Ngũ gia bì hơng trồng nhiều Trung tâm giống trồng gia súc Phó Bảng (trực thuộc Sở Nông nghiệp & phát triển nông thông tỉnh Hà Giang) Ngũ gia bì hơng đợc trồng thành dÃy dài 90 m, gåm 126 bơi Bơi lín nhÊt cao tíi 3,9 m Bơi nhá nhÊt cịng cao 1,5 - 2,2 m T¹i tỉnh Hà Giang Hình 3.17 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia bì hơng Việt Nam hai điểm có Ngũ gia bì hơng đợc trồng vờn gia đình Đó xà Mèo Vạc (huyện Mèo Vạc) xà Quyết Tiến (huyện Quản Bạ), nơi có - khóm nhỏ Các sinh trởng kém, không hoa Tại địa điểm có Ngũ gia bì hơng, ngời dân thờng lấy vỏ rễ để làm thuốc Ngoài tỉnh Hà Giang, Việt Nam có tỉnh Lào Cai phát thấy Ngũ gia bì hơng Tại thị trấn huyện Bắc Hµ cã khãm nhá (cao d−íi 1,5 m) trång vờn gia đình vờn Nhà thờ xà Hầu Thào (huyện Sa Pa) có khóm (cao - 1,5 m) NhËn xÐt: Nh− vËy cã thÓ thấy, giới Ngũ gia bì hơng phân bè ë Trung Qc Cßn ë ViƯt Nam, Ngị gia bì hơng thấy vài điểm thuộc tỉnh Hà Giang (Phó Bảng, Phố Là - huyện Đồng Văn; Mèo 70 Vạc - huyện Mèo Vạc ; Quyết Tiến - huyện Quản Bạ) tỉnh Lào Cai (thị trấn Bắc Hà - huyện Bắc Hà ; Hầu Thào - huyện Sa Pa) - vùng sát biên giới phía Bắc (hình 3.17) Cây chủ yếu đợc trồng, sau bị hoang dại hóa Tại hai điểm có Ngũ gia bì hơng Phó Bảng (Hà Giang), sống trạng thái hoang dại, nhng cha xác định đợc chắn nguån gèc Nh−ng dï vÉn cã thÓ cho r»ng, điểm phân bố cuối phía Nam Ngũ gia bì hơng đồ phân bố loài giới Tình trạng kích thớc quần thĨ cđa loµi nµy ë ViƯt Nam hiƯn lµ nhỏ hẹp 3.1.3.2 Ngũ gia bì gai Từ năm 1999 đến nay, đà tiến hành nhiều đợt phúc tra, mở rộng điều tra nghiên cứu phân bố trạng Ngũ gia bì gai Việt Nam Kết đà trực tiếp ghi nhận đợc Ngị gia b× gai cã ë 36 x· thc 19 huyện, tỉnh Trong đó, có tỉnh Lai Châu, Cao Bằng, Lạng Sơn địa phơng vốn đợc coi cã nhiỊu Ngị gia b× gai nhÊt ë ViƯt Nam Cụ thể tiềm trạng Ngũ gia bì gai tỉnh đợc tìm thấy nh sau: Tỉnh Lai Châu: (1) huyện Sìn Hồ: xà thị trấn: Ngải Chồ, Tả Ngảo, Făng Xô Lin, Tả Phìn, Hồng Thu thị trấn Sìn Hồ; (2) Phong Thỉ: x· B×nh L− Ngị gia b× gai mọc rải rác ven rừng núi đá vôi dọc theo bờ suối, bờ nơng rẫy, độ cao phân bố khoảng 1450 - 1550 m Xét tần số thờng gặp, huyện Sìn Hồ (Lai Châu) nơi cã nhiỊu Ngị gia b× gai nhÊt so víi tỉnh đà khảo sát gần 71 Hình 3.18 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia bì gai Việt Nam TØnh Cao B»ng: (1) hun Trïng Kh¸nh (3 xÃ); (2) Hạ Lang (1 xÃ); (3) Trà Lĩnh (1 xÃ); (4) Phục Hòa (1 xÃ); (5) Quảng Uyên (4 xÃ); (6) Thạch An (2 xà thị trấn) Ngũ gia bì gai mọc rải rác ven rừng núi đá vôi, dọc theo bờ suối cửa rừng hay bờ nơng rẫy, độ cao khoảng 300 - 700 m Theo tài liệu lu trữ trớc năm 1990 [51, 75], Cao Bằng tỉnh thờng xuyên khai thác thu mua đợc nhiều Ngũ gia bì gai Việt Nam Từ năm 2000 trở lại đây, thuốc bị khai thác nhiều cho nhu cầu sử dụng địa phơng xuất qua biên giới Ngũ gia bì gai Cao Bằng đợc coi ví dụ điển hình suy giảm nhanh chóng Tỉnh Lạng Sơn: Theo số liệu điều tra trớc năm 1987 [75], Ngũ gia bì gai đà phát thấy hầu hết huyện thị xà Song, đợt tái điều tra khảo sát gần bốn huyện: (1) Tràng Định (3 xà thị trấn); (2) Văn Quan (1 xÃ); (3) Cao Lộc (1 xÃ); (4) Văn LÃng (2 xÃ) cho thấy Ngũ gia bì gai mọc rải rác ven rừng núi đá vôi, dọc theo bờ khe suối cửa rừng bờ nơng rẫy; độ cao dới 600 m So víi tØnh Cao B»ng, Ngị gia b× gai ë Lạng Sơn gặp khóm lớn (cao tới m) Tỉnh Lào Cai: Trớc đà đợc ghi nhận có nhiều Ngũ gia bì gai, nhng qua đợt tái điều tra phát vài khóm nhỏ xà Sa Pả (khu vực Xà Xén) xà Hầu Thào (huyện Sa Pa) Khu vực thị trấn Sa Pa (bao gồm thôn Ô Quí Hồ) xà Tả Phìn trớc có nhiều Ngũ gia bì gai không phát thấy cá thể tự nhiên Hiện nay, số gia đình thị trấn thôn Ô Quí Hồ đà trồng Ngũ gia bì gai làm hàng rào lấy nguyên liệu làm thuốc để bán Tại huyện Bát Xát phát thấy số bụi Ngũ gia bì gai bờ suối thuộc xà Mờng Hum Đây điểm phân bố Ngũ gia bì gai cha đợc ghi nhận tài liệu điều tra trớc 72 Tỉnh Hà Giang: Trong tài liệu điều tra trớc có ghi Ngũ gia bì gai phân bố Phó Bảng (Đồng Văn) Quản Bạ Qua đợt điều tra từ năm 1999 đến nay, không phát thấy Ngũ gia bì gai mọc tự nhiên thị trấn Phó Bảng Tại huyện Quản Bạ có điểm Ngũ gia bì gai đợc trồng vờn gia đình, Đèo Cán Tỷ (xà Cán Tỷ) xà Quyết Tiến Tỉnh Nghệ An: Đà phát lại Ngũ gia bì gai ë x· M−êng Lèng, hun Kú S¬n, tỉng sè chØ có vài khóm đà bị chặt phá bờ suối, sát chân núi đá vôi Tỉnh Quảng Nam: Phát hiƯn bơi Ngị gia b× gai mäc ë ven đờng mòn gần rừng, thuộc xà Trà Cang, huyện Trà My; độ cao khoảng 1200 m Tỉnh Kon Tum: Cũng phát đợc khóm Ngũ gia bì gai mäc ë bê suèi gÇn rõng, thuéc x· M−êng Hoong, huyện Đăk Glei; độ cao khoảng 1300 m Mặc dù phát thấy số cá thể hai điểm Trà Cang (Trà My - Quảng Nam) Mờng Hoong (Đăk Glei - Kon Tum), song khám phá mới, lần thu đợc tiêu Ngũ gia bì gai ë c¸c tØnh phÝa Nam Thùc tÕ, ë c¸c tỉnh đợc tái điều tra Ngũ gia bì gai kể nhiều điểm trớc đà đợc ghi nhận nhng cha có điều kiện khảo sát hết Nhng điểm phân bố đà đợc khảo sát thuộc tỉnh vốn trớc đợc coi nơi tập trung nhiều Ngũ gia bì gai tỉnh gặp phân bố loài Ngoài ra, tỉnh (Điện Biên, Hòa Bình, Sơn La, Thanh Hóa, Yên Bái) đà phát có Ngũ gia bì gai trớc (không đợc ghi nơi trọng điểm), nhng cha có điều kiện phúc tra lại [75] Để cụ thể mặt dẫn liệu vẽ đồ điểm phân bè Ngị gia b× gai (h×nh 3.18) ë ViƯt Nam, tổng hợp tên địa phơng đà phát thấy Ngũ gia bì gai (bảng 3.10) 73 Thank you for evaluating AnyBizSoft PDF Merger! To remove this page, please register your program! Go to Purchase Now>> AnyBizSoft PDF Merger  Merge multiple PDF files into one  Select page range of PDF to merge  Select specific page(s) to merge  Extract page(s) from different PDF files and merge into one ... cấp (CR), Ngũ gia bì gai đợc xếp mức bị nguy cấp (EN) Việt Nam [61] Để góp phần bảo tồn có hiệu loài thuốc bị đe dọa kể trên, đà tiến hành đề tài Nghiên cứu số đặc điểm sinh học bốn loài thuốc quÝ... mẫu Ngũ gia bì hơng (H) Ngũ gia bì gai (G) đợc khuếch đại mồi OPA15 68 Hình 3.17 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia bì hơng Việt Nam 70 Hình 3.18 Bản đồ điểm phân bố Ngũ gia bì gai ë ViƯt Nam. .. bố, đặc điểm sinh học hai loài thứ loài * Về giá trị sử dơng Theo y häc cỉ trun: ë ViƯt Nam, theo kinh nghiệm dân gian loài Ngũ gia bì đợc sử dụng nhiều để làm thuốc Vỏ rễ vỏ thân Ngũ gia bì hơng