THAM KHẢO BÁO CÁO THỰC TẬP BÀI Nhóm: Tên SV: PHIẾU PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG CAFEIN BẰNG SẮC KÍ LỚP MỎNG - Thiết bị: SHIMADZU - Điều kiện sắc kí: Cột pha đảo RP – 18, Nhiệt độ cột 45oC - Detector: PDA, tốc độ dòng: 1mL/phút - Thể tích tiêm: 10 μL - Pha động: nước – methanol – acid acetic băng (69:28:3) - Bước sóng: 273 nm - Tính tương thích hệ thống: Kết cho thấy thời gian lưu, diện tích đỉnh có RSD < 2%; từ cho thấy quy trình đạt tính tương thích hệ thống - Dung dịch phân giải/nguồn gốc/số lơ: PTN - Cách pha: - Hệ số phân giải R o Yêu cầu: Rs > 1,5 - Số đĩa lý thuyết N o Yêu cầu: ≥ 5000 - o Thực tế: Hệ số đối xứng t: o Yêu cầu: 0,8 ≤ Rt ≤ 1,5 - o Thực tế: o Thực tế: Độ lệch chuẩn tương đối lần tiêm RSD = 0,198% Định tính - Thời gian lưu mẫu chuẩn: tR(1) = 6,102 tR(2) =6,120 tR(3) = 6,123 tR(4) = 6,130  𝑡̅ = 6,119 SD = 0,012 RSD = 0,198% (< 2%) - Thời gian lưu mẫu thử: tt = 6,117 - Kết luận: Đúng  Không  Định lượng Chất chuẩn: Cafein - Nguồn gốc: PTN, Số lô: QT028 140320, Hàm lượng: 99,4% - Lượng cân: 0,0157g - Dung mơi pha lỗng: Methanol dùng phân tích HPLC - Nồng độ pha loãng: 15,3 mg 50 𝑚𝐿 x 10 x 99,4% = 0,0314 mg/mL = 30,4 μg/mL Chất thử: - Lượng cân: 0,0157g - Nồng độ pha loãng: - Diện tích đỉnh mẫu chuẩn: Sc(1) = 795955 15,7 mg 50 𝑚𝐿 x 10 = 0,0314 mg/mL = 31,4 μg/mL Sc(2) = 788440 Sc(3) = 789869 Sc(4) = 795925  Sc (TB) = 792547 - Diện tích đỉnh mẫu thử: St = 876755 - Hàm lượng (%) hoạt chất: X= ST SC x P m = 107,16 % x Độ pha loãng x C = 876755 792547 x 15,3 mg 15,7 mg x x 99,4% TRẢ LỜI CÂU HỎI CHUẨN BỊ BÀI Câu Kiểu rửa giải pha động thực tập thuộc loại đẳng dòng hay gradient? TL: Rửa giải đẳng dòng Câu Chất lượng dung môi sử dụng để triển khai HPLC thuộc loại nào? Sử dụng dung môi để chiết xuất khơng? Ngược lại, sử dụng dung môi chiết xuất thông thường để chuẩn bị pha động HPLC hay không? Tại sao? TL: - Dung môi triển khai HPLC phải tinh khiết, loại chuyên dùng để triển khai HPLC - Có thể sử dụng dung môi triển khai HPLC dùng để chiết xuất - Không dùng dung môi chiết xuất thông thường để chuẩn bị pha động khơng tinh khiết, lẫn tạp nhiễu Câu Đầu dò thực tập thuộc lại đầu dò nào? Ưu nhược điểm đầu dò này? TL: Đầu dò dãy diod quang PDA (Photo Diod Aray Detector) - Ưu điểm: dễ dàng sử dụng với độ tin cậy cao, không phá huỷ mẫu thử, tương đối nhạy đặc hiệu, phát nhiều bước sóng khác nhau, thích hợp cho nghiên cứu - Nhược điểm: giá thành đắt nhiều so với đầu dị UV thơng thường Câu Cần ý thơng số sắc kí định lượng đồng thời từ chất trở lên HPLC? TL: Thông số độ phân giải RS ... luận: Đúng  Không  Định lượng Chất chuẩn: Cafein - Nguồn gốc: PTN, Số lô: QT028 140320, Hàm lượng: 99,4% - Lượng cân: 0,0157g - Dung môi pha lỗng: Methanol dùng phân tích HPLC - Nồng độ pha loãng:... dòng Câu Chất lượng dung môi sử dụng để triển khai HPLC thuộc loại nào? Sử dụng dung môi để chiết xuất khơng? Ngược lại, sử dụng dung môi chiết xuất thông thường để chuẩn bị pha động HPLC hay không?... HPLC hay không? Tại sao? TL: - Dung môi triển khai HPLC phải tinh khiết, loại chuyên dùng để triển khai HPLC - Có thể sử dụng dung mơi triển khai HPLC dùng để chiết xuất - Không dùng dung môi chiết