Đang tải... (xem toàn văn)
Báo cáo khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học năm 2020, đề tài: NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG VÂN TAY SẮC KÝ CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI DÂY THÌA CANH (Gymnema R.Br) Tóm tắt nội dung chính: Nghiên cứu xây dựng bộ dữ liệu vân tay sắc ký lớp mỏng từ một số mẫu thuộc 04 loài Dây thìa canh thu được tại Việt Nam (Gymnema sylvestre, Gymnema latifolium, Gymnema inodorum và Gymnema yunnanense), từ đó xây dựng cây phân loại hóa học bằng cách mã hóa sự xuất hiện và màu sắc các vết trên sắc ký đồ giúp đánh giá sự gần gũi về hóa học giữa các loài nghiên cứu. Từ lượng dữ liệu xây dựng được bước đầu nhận biết một số mẫu Dây thìa canh thu được trên thị trường khi phân tích trên cùng điều kiện sắc ký.
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG VÂN TAY SẮC KÝ CỦA MỘT SỐ LOÀI THUỘC CHI DÂY THÌA CANH (Gymnema R.Br) Người thực hiện: Nguyễn Việt Cường Người hướng dẫn: ThS Phạm Thị Linh Giang Nơi thực hiện: Bộ môn Thực vật BỐ CỤC ĐẶT VẤN ĐỀ ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ĐẶT VẤN ĐỀ Ayurveda 2000 năm Đái tháo đường Acid gymnemic Contos o ĐẶT VẤN ĐỀ Gymnema latifolium Gymnema inodorum Gymnema yunnanense Contos o ĐẶT VẤN ĐỀ R R R H R R H R R R OH R1 R1 R3 Khung saponin lồi G latifolium CH 2R OR H H Khung saponin lồi G sylvestre nguồn gốc Việt Nam Khung saponin loài G sylvestre nguồn gốc Ấn Độ 4 OR OH R OR R3 HOOC Khung saponin loài G yunnanense OH O OH R 3O HO O CH 2R OR OR Khung saponin lồi G inodorum Contos o ĐẶT VẤN ĐỀ Contos o ĐẶT VẤN ĐỀ Xây dựng vân tay sắc ký số loài thuộc chi Gymnema phương pháp HPTLC, từ xây dựng phân loại dựa thành phần hóa học (SKĐ) mẫu NC Các mục tiêu: Ứng dụng kết nghiên cứu để so sánh thay đổi thành phần hóa học theo giai đoạn sinh trưởng phân tích sắc ký đồ số mẫu Dây thìa canh thu thị trường Contos o ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mẫu nghiên cứu Chia làm nhóm: N1- Mẫu nghiên cứu XD vân tay sắc ký theo loài: Gồm 12 mẫu thuộc loài: G sylvestre G latifolium G yunnanense G inodorum GS1,GS2,GS3, GS4, GS5 GL1, GL2, GL3, GL4, GS5 GY GI Địa điểm thu mẫu: mẫu GS3 (Hải Hậu, Nam Định), GS4 (Lệ Thủy, Quảng Bình) GS5 (Ngư Thủy, Quảng Trạch, Quảng Bình) thu dạng dược liệu khô; GI thu Kim Bơi, Hịa Bình dạng tươi; mẫu cịn lại thu tươi vùng trồng DTC Phú Lương, Thái Nguyên; gám định tên khoa học; lưu tiêu HNIP Thời điểm thu mẫu: Tháng đầu tháng năm 2020 Contos o ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mẫu nghiên cứu Lá non G sylvestre/ N2- Mẫu nghiên cứu thay đổi thành phần hóa học theo thời kỳ sinh trưởng: 16/5/2020, Yên Ninh, Dây thìa canh Phú Lương, Thái nhỏ Nguyên G latifolium/ Dây thìa canh to 16/5/2020, Yên Ninh, Phú Lương, Thái 10 Nguyên G 11 Bánh tẻ GS1a Non GS1b Bánh tẻ Non Bánh tẻ Non Bánh tẻ Non Bánh tẻ Non Bánh tẻ GL1a GL1b GL2a GL2b GL3a GL3b GL4a GL4b GL5a Non GL5b Bánh tẻ GYa Non GYb Bánh tẻ Non GIa GIb yunnanense/ Dây thìa canh Vân Nam 12 Lá bánh tẻ G inodorum T6/2020, Kim Bơi, Hịa Bình Contos o ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mẫu nghiên cứu N3- Mẫu nghiên cứu xác định loài: Là mẫu thu thị trường STT 13 14 15 16 Thời gian, địa điểm thu mẫu Dạng mẫu lúc thu Ký hiệu mua nghiên cứu T6/2020, sản phẩm Trà dây thìa canh đặc GX1 biệt cơng ty DK natura, Thái Nguyên T6/2020, chợ thuốc Lãn Ông, Hà Nội T5/2020, sản phẩm từ công ty Dược liệu Indochina Herb, Hà Nội T6/2020, mua chợ Kim Bôi, Hịa Bình Dược liệu khơ gồm cành GX2 GX3 GX4 Contos o SKĐ sau thủy phân DTC G inodorum DTC Vân Nam STT vết 10 11 12 13 14 15 16 17 Rf GYa (12) 0,03 0,05 0,08 0,11 0,15 0,17 0,22 0,27 0,29 0,32 0,35 0,47 0,50 0,53 0,57 0,60 0,63 Xám/xám Xám/xám Xám/xám Xám/nâu Xám/xám Xám/xanh Xám/hồng Xám/xám Xám/xám Xám/xám Xám/xám Xám/xám 18 0,71 19 20 0,81 0,89 Xám/xanh Xám/xám GIa (12) Xám/vàng nâu Xám/nâu Xám/nâu Xám/nâu Xám/vàng nâu Xám/nâu Xám/nâu Xám/nâu Xám/nâu Xám/nâu Tím đậm/nâu vàng Xám/nâu Contos Xám/nâu o Với dịch chiết sau thủy phân 0,89 0,22 Nhận thấy: GS2 DTCLT tập trung vùng Rf thấp, G inodorum DTC nhỏ tập trung vùng Rf cao; phù hợp khung olean 5-6 nhóm –OH phân cực nên cho vết Rf vùng cao; 3-4 –OH phân cực thấp cho Rf Contos vùng thấp o 3.2 Kết xây dựng phân loại dựa kết SKLM mẫu Gymnema nghiên cứu Contos o 3.2 Kết xây dựng phân loại dựa kết SKLM mẫu Gymnema nghiên cứu Phạm Hà Thanh Tùng (2018) Contos o 3.2 Kết xây dựng phân loại dựa kết SKLM mẫu Gymnema nghiên cứu Phạm Hà Thanh Tùng (2018) R R R 4 H R R H R R R OH R1 R1 H Khung saponin lồi G sylvestre nguồn gốc Việt Nam H R3 Khung saponin loài G sylvestre nguồn gốc Ấn Độ Khung saponin lồi G latifolium => DTC nhập nội có nguồn gốc từ Ấn Độ có nhiều điểm khác biệt hình thái thực vật TPHH với DTCLN, tương tự TPHH DTCLT Contos o 3.4 Kết so sánh thay đổi thành phần hóa học theo thời kỳ sinh trưởng Mẫu GL1 GL2 GL3 GL4 GL5 GS1 GI (1) (2) (3) (4) Tổng Scác Spic/mcân Tổng Scác Spic/mcân pic GYM pic/mcân pic GYM pic/mcân SKĐ SKĐ SKĐ SKĐ lá bánh tẻ bánh tẻ non (*) non (*) (*) (*) 79615 144075 742057 1003827 64652 90734 684725 965858 131730 149744 1031389 1172771 90245 98884 809652 975749 96282 109361 930556 941583 75511 67725 613056 583781 28984 72221 617785 1083675 Tỷ số hàm lượng (%) 2/1 4/3 181 140 114 110 114 90 249 135 141 114 121 101 95 175 => Có xu hướng cao non, đặc biệt DTCLT => Tương đồng Contos KQ nghiên cứu trước với acid gymnemic II DTCLN o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương đồng GI GX1 tương đồng DTCLN DTCLT Contos o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương đồng GI GX1 tương đồng DTCLN DTCLT Contos o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương đồng GI GX1 tương đồng DTCLN DTCLT Contos o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương đồng GI GX1 tương đồng DTCLN DTCLT Contos o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương đồng GI GX1 tương đồng DTCLN DTCLT Đặc biệt GX1 soi UV 366nm trước phun TT có vết Rf 0,55 mà khơng có vết Rf 0,39 => chưá DL DTCLT DTC nhập nội Contos o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường Đã sơ nhận dạng số mẫu dược liệu thị trường Xây dựng lượng liệu lớn để nhận dạng kết xác Contos o KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Đã khảo sát thông số quy trình phân tích sắc ký HPTLC kết tối ưu hệ dung môi pha động thể tích tiêm mẫu với dịch chiết khác Đã xây dựng vân tay sắc ký số loài chi Gymnema R.Br từ mẫu thu được: gồm xuất hiện, màu sắc, Rf tất vết có SKĐ Đã xây dựng phân loại hóa học dựa việc mã hóa vết SKĐ mẫu nghiên cứu, cho kết nhánh tương đồng chung 0,46 Đã so sánh SKĐ mẫu thời kỳ sinh trưởng, cho kết mẫu thuộc lồi DTCLT có hàm lượng hoạt chất tích lũy non cao già Đã ứng dụng vân tay sặc ký xây dựng sơ nhận biết mẫu dược liệu DTC thị trường có chứa thành phần thuộc chi Gymnema R.Br Contos o KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Đề xuất Tiếp tục xây dựng vân tay sắc ký hóa học đa dạng mẫu/loài khác chi Gymnema R.Br nhằm tập hợp kết thành ngân hàng liệu Tiếp tục nghiên cứu thay đổi hàm lượng mẫu theo thời kỳ sinh trưởng loài DTCLN, DTCVN, DTC inodorum; làm sở lựa chọn loại thu hái dược liệu để thu hàm lượng chất có hoạt tính tối ưu Contos o Xin trân trọng m n Hjm Kim ... tương đồng DTCLN DTCLT Contos o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương đồng GI GX1 tương đồng DTCLN DTCLT Contos o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường... tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương đồng GI GX1 tương đồng DTCLN DTCLT Contos o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương... biệt DTCLT => Tương đồng Contos KQ nghiên cứu trước với acid gymnemic II DTCLN o 3.4 Kết phân tích SKĐ số mẫu DTC thị trường GX2, GX3 tương đồng DTCLN GX4 tương đồng GI GX1 tương đồng DTCLN DTCLT