BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ MINH PHƯỢNG PHÁT HIỆN NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI THỊ MINH PHƯỢNG PHÁT HIỆN NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH VÀ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA A BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA Chun ngành: Hóa sinh Mã sớ: 62720112 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Tạ Thành Văn PGS.TS Trần Vân Khánh HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Lời xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Tạ Thành Văn, PGS.TS Trần Vân Khánh, cán hướng dẫn, tận tình bảo truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu, tạo điều kiện tớt cho tơi śt q trình học tập, nghiên cứu để tơi hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến: Các cán viên chức Trung tâm nghiên cứu Gen-Protein trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ, tạo điều kiện cho thực kỹ thuật nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn: Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Sau Đại học, Bộ mơn Hóa sinh Trường Đại học Y Hà Nội Đảng ủy, Ban Giám hiệu, Phịng chức năng, Bộ mơn-khoa Hóa sinh, Trường Đại học Y Dược Thái Bình tạo điều kiện cho tơi śt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới Nhà khoa học hội đồng đánh giá luận án tiến sỹ cấp sở, cấp trường đóng góp cho tơi nhiều ý kiến q báu để tơi hồn thiện luận án tớt Ći cùng, xin ghi nhớ công ơn sinh thành, nuôi dưỡng tình u thương cha mẹ tơi, cha mẹ chồng ủng hộ, giúp đỡ, động viên chồng hai con, người thân gia đình, bạn bè, đồng nghiệp động viên giúp đỡ tơi tinh thần, vật chất để tơi hoàn thành nhiệm vụ học tập, nghiên cứu Trân trọng cám ơn! Hà Nội, tháng năm 2019 Tác giả Bùi Thị Minh Phượng LỜI CAM ĐOAN Tôi Bùi Thị Minh Phượng, nghiên cứu sinh khóa 34, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa sinh, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn Thầy GS.TS Tạ Thành Văn Cô PGS.TS Trần Vân Khánh Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết này./ Hà Nội, ngày tháng năm 2019 NGƯỜI VIẾT CAM ĐOAN Bùi Thị Minh Phượng DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BMD Becker Muscular Dystrophy BVSKTE Bảo vệ sức khoẻ trẻ em CK Creatine Kinase DMD Duchenne Muscular Dystrophy DNA Deoxyribo Nucleic Acid FISH Fluorescent In Situ Hybridization ICSI Intracytoplasmic Sperm Injection IVF In Vitro Fertilization KB Kilo Base MLPA Multiplex Ligation Probe Amplification NST X Nhiễm sắc thể X NST Y Nhiễm sắc thể Y PCR Polymerase Chain Reaction PGD Preimplantation Genetic Diagnosis RNA Ribo Nucleic Acid RT – RCR Reverse Transcription PCR STR Short Tandem Repeat MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG BỆNH HEMOPHILIA A 1.1.1 Định nghĩa .4 1.1.2 Lịch sử nghiên cứu 1.1.3 Dịch tễ bệnh học 1.1.4 Đặc điểm lâm sàng chẩn đoán bệnh hemophilia A .5 1.2 ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN VÀ CƠ SỞ PHÂN TỬ HEMOPHILIA A 1.2.1 Cơ chế di truyền bệnh hemophilia A .8 1.2.2 Cơ sở phân tử học bệnh hemophilia A 1.3 NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH HEMOPHILIA A 14 1.3.1 Đặc điểm chung người mang gen bệnh 14 1.3.2 Cơ chế di truyền người mang gen bệnh hemophilia A 14 1.3.3 Triệu chứng người mang gen 16 1.3.4 Các phương pháp phát người lành mang gen bệnh .17 1.4 PHƯƠNG PHÁP THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM VÀ QUY TRÌNH CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ 23 1.4.1 Phương pháp thụ tinh ống nghiệm .23 1.4.2 Quy trình chẩn đốn gen trước làm tổ 25 1.4.3 Các phương pháp kỹ thuật sinh học phân tử áp dụng việc chẩn đoán trước làm tổ .30 1.5 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI VỀ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ 38 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới Việt Nam 38 1.5.2 Tình hình nghiên cứu chẩn đoán trước làm tổ bệnh hemophilia A 42 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .46 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU .46 2.2 DỤNG CỤ, TRANG THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT NGHIÊN CỨU 47 2.2.1 Dụng cụ trang thiết bị .47 2.2.2 Hoá chất 48 2.2.3 Trình tự mồi cho phản ứng 51 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .51 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu .51 2.3.2 Địa điểm nghiên cứu 53 2.3.3 Quy trình kỹ thuật sử dụng nghiên cứu .54 2.3.4 Quy trình xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA .57 2.3.5 Quy trình chẩn đốn trước làm tổ 60 2.4 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU TRONG Y HỌC .63 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 64 3.1 KẾT QUẢ PHÁT HIỆN NGƯỜI LÀNH MANG GEN F8 BỊ ĐỘT BIẾN BẰNG KỸ THUẬT MICROSATELLITE DNA 64 3.1.1 Kết xác định marker dị hợp tử gen F8 bệnh nhân người lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite DNA 64 3.1.2 Kết phát người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 68 3.2 KẾT QUẢ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA BẰNG KỸ THUẬT MICROSATTELITE DNA 90 3.2.1 Kết kích thích buồng trứng thực ICSI 90 3.2.2 Kết chẩn đoán tiền làm tổ gia đình hemophilia A 92 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 108 KẾT LUẬN 138 KHUYẾN NGHỊ 139 CÁC DANH MỤC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần hóa chất sử dụng cho điện di mao quản 62 Bảng 3.1 So sánh kết phát người lành mang gen bệnh phương pháp .87 Bảng 3.2 Tỷ lệ phát người lành mang gen bệnh kỹ thuật microsatellite-DNA 88 Bảng 3.3 Kết đánh giá tỷ lệ phôi phát triển sau thụ tinh 90 Bảng 3.4 Kết đánh giá phát triển phôi thu ngày 91 Bảng 3.5 Kết sinh thiết phôi chẩn đốn gen đánh giá phát triển phơi sau sinh thiết ngày 92 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh chảy máu khớp gối bệnh nhân hemophilia A Hình 1.2 Hình ảnh chảy máu bệnh nhân hemophilia A Hình 1.3 Kiểu gen kiểu hình bớ mẹ hệ sau Hình 1.4 Vai trị yếu tớ VIII q trình đơng máu huyết tương .10 Hình 1.5 Vị trí gen mã hóa yếu tớ VIII NST X 10 Hình 1.6 Cấu trúc gen protein FVIII 11 Hình 1.7 Protein yếu tớ VIII với vùng chức .12 Hình 1.8 Sơ đồ di truyền người mẹ mang gen kết với bớ bình thường .15 Hình 1.9 Sơ đồ di truyền người mẹ bình thường kết với bớ bị bệnh .15 Hình 1.10 Sơ đồ phả hệ người mẹ mang gen kết với bớ bình thường 18 Hình 1.11 Sơ đồ di truyền người mẹ mang gen kết hôn với bố bị bệnh 19 Hình 1.12 Quy trình thực thụ tinh ớng nghiệm 25 Hình 1.13 Sinh thiết phơi bào giai đoạn blastomere cho chẩn đốn PGD 28 Hình 1.14 Ứng dụng kỹ thuật FISH chẩn đoán xác định giới tính sớ lượng nhiễm sắc thể 32 Hình 1.15 Kết multiplex PCR sử dụng cặp mồi amel, SYR, FXS1108, DXS 9798, phơi bào sinh thiết chẩn đốn bệnh hemophilia A 37 Hình 1.16 Sơ đồ phả hệ gia đình mang gen đột biến đảo đoạn intron 22 gây bệnh hemophilia A 43 Hình 1.17 Hình ảnh marker dị hợp tử xác định đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia A 44 Hình 1.18 Kết multiplex PCR sử dụng cặp mồi amel, SYR, FXS1108, DXS 9798, phôi bào sinh thiết 45 Hình 2.1 Kết STR lựa chọn marker dị hợp tử 58 Hình 2.2 Kỹ thuật Microsatellite DNA chẩn đoán đột biến gen gây bệnh di truyền lặn liên kết nhiễm sắc thể giới tính X .59 Hình 2.3 Kết STR xác định giới tính 62 Hình 3.1 Kết đồng hợp tử đồng hợp tử STR 64 Hình 3.2 Kết khuếch đại marker DXS9901, FXS1108, F8int22 DXS9897 65 Hình 3.3 Tần suất alen marker FXS 1108 66 Hình 3.4 Tần suất alen marker DXS9897 66 Hình 3.5 Tần suất alen marker F8int22 .67 Hình 3.6 Tần suất alen marker DXS9901 67 Hình 3.7 Sơ đồ phả hệ gia đình HA 61 68 Hình 3.8 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình mã sớ HA61 .69 Hình 3.9 Hình ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi FXS1108, DXS9897 F8int22 gia đình HA61 70 Hình 3.10 Sơ đồ phả hệ gia đình HA37 sau phân tích hai phương pháp 72 Hình 3.11 Ảnh giải trình tự gen gia đình mã sớ HA37 .73 Hình 3.12 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901 DXS9897 gia đình mã sớ HA37 74 Hình 3.13 Sơ đồ phả hệ gia đình HA50 sau phân tích hai phương pháp .75 Hình 3.14 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình HA50 76 Hình 3.15 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901, DXS9897 FXS1108, gia đình bệnh nhân hemophilia A mã sớ HA50 77 Hình 3.16 Sơ đồ phả hệ gia đình HA16 .79 Hình 3.17 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình mã sớ HA16 .80 Hình 3.18 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901 DXS9897 gia đình HA16 81 Hình 3.19 Sơ đồ phả hệ gia đình HA30 sau phân tích 83 Hình 3.20 Hình ảnh giải trình tự gen gia đình bệnh nhân mã sớ HA3084 Hình 3.21 Ảnh điện di vùng trình tự lặp lại sử dụng cặp mồi DXS9901 FXS1108, gia đình bệnh nhân hemophilia A mã sớ HA30 85 24 H S Chen YC, Cheng SN,et.al (2010) Genetic analysis of haemophilia A in Taiwan Haemophilia, 16, 538–544 25 N h l m h a 60-benh-nhan-mau-kho-dong-chua-duoc-dieu-trị., 26 T A Franchini.M, Mannucci.P (2007) The management of hemophilia in elderly patients Clinical Interventions in Aging, (3), 361-368 27 F N Gigarel N, Burlet P,et.al (2004) Single cell co amplification of polymorphic markers for the indirect preimplantation genetic diagnosis of hemophilia A, X-linked adrenoleukodystrophy, X-linked hydrocephalus and incontinentia pigmenti loci on Xq28 Hum Genet., 114, 298–305 28 B R H Hoffman E.P., Kunkel LM (1987) Dystrophin: The protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus Cell, 51, 914-928 29 H.-H B Jochen Graw, Johannes Oldenburg,et al (2005) Heamophilia A: from mutation analysis to new therapies Nature reviews Genetics, , 488501 30 W J Shima M, Yoshioka A,et.al (1989) An arginine to cysteine amino acid substitution at a critical thrombin cleavage site in a dysfunctional factor VIII molecule Blood, 74, 1612-1617 31 L h R Jaquemin M, Benhida A, et al (2000) A novel cause of mild/moderate hemophilia A:mutation scattered in the factor VIII C1 domain reduce factor VIII binding to von Willebrand factor Blood, 96, 958-965 32 G F Bagnall RD, Green PM (2006) Int22h-related inversions causing hemophilia A: a novel insight into their origin and a new more discriminant PCR test for their detection J Thromb Haemost, 4, 591–598 33 M P Franchini M (2009) Multiple gene interaction and modulation of hemostatic balance Clin Chem Lab Med, 47 (2), 1455–1460 34 D S Shrestha S, Zuhua L,et.al (2016) Evaluation of factor VIII polymorphic short tandem repeat markers in linkage analysis for carrier diagnosis of hemophilia A BIOMEDICAL REPORTS, 5, 228 -232 35 W F o Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia.Carriers and women with hemophilia WFH 50 years of advancing treatment for all, 36 N T M Nguyễn Anh Trí (2015) Người mang gen Hemophillia Hội rới loạn đông máu Việt nam, 1-9 37 S J L e al (2005) Carriers of Hemophilia What you need to know J Natl Cancer Inst Monogr, 87-90 38 S R Oldenburg.J , Grimm.T,et.al (1993) Direct and Indirect Estimation of the Sex Ratio of Mutation Frequencies in Hemophilia A Am J Hum Genet, 53, 1229-1238 39 T H T Lưu Vũ Dũng, Tạ Thành Văn, Trần Vân Khánh CS (2015) Phát đột biến gen F8 gây bệnh hemophilia A Tạp chí nghiên cứu y học, 91 (5), 13-18 40 C P R Liliana Carmen Rossetti, Irene Beatriz Larripa, et al (2005) Genotyping the Hemophilia Inversion Hotspot by Use of Inverse PCR Clinical Chemistry, 51, 1154–1158 41 N W Richard D Bagnall, et al (2019) Recurrent inversion breaking intron of the factorVIII gene is a frequent cause of severe hemophilia A Blood, 99 (1), 168 - 174 42 C J M E Jan P Schouten, Raymon Waaijer, et al (2002) Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation-dependent probe amplification Nucleic Acids Res, 30 (12), e57 43 E R Steptoe PC (1978) Birth after the reimplantation of a human embryo Lancet, (8085), 366 44 V S Hamilton BE (2006) Fertility and abortion rates in the United States, 1960-2002 Int J Androl, 29, 34-45, 29, 34-45 45 R S a R V.C (2005) Timing effects on first marriage: twentieth-century experience in England and Wales and the USA Popul Stud (Camb),, 59, 135146 46 N ZP (2000) Sperm centriole disfunction and sperm immotility Mol Cell Endocrinol,, 166, 59-62 47 P K Ziebe S, Lindenberg S (1997) Embryo morphology or cleavage stage: how to select the best embryos for transfer after in-vitro fertilization Hum Reprod, 12 (7), 1545–1549 48 C D S Jones G.M, Song B,et.al (2008) Novel strategy with potential to identify developmentally competent IVF blastocysts Human Reproduction, 23, 1748–1759 49 H J Callahan TL, Ettner SL,et.al (1994) The economic impact of multiple-gestation pregnancies and the contribution of assisted-reproduction techniques to their incidence N Engl J Med, 331, 244-249 50 S C Wenstrom KD, Hammitt DG, Van Voorhis BJ (1993) Increased risk of monozygotic twinning associated with assisted reproduction Fertil Steril, 60, 51 W D V van der Schoot, J.C.F.M Dreesen, et al (2019) Preimplantation genetic testing for more than one genetic condition: clinical and ethical considerations and dilemmas Human Reproduction,, 34 (6), 1146-1154 52 P S Braude P, Flinte F, Ogilvie CM (2002) Preimplantation genetic diagnosis NATURE REVIEWS, 3, 941-955 53 J Baruch S, Kaufman DJ,et.al (2008) Preimplantation genetic screening: a survey of in vitro fertilization clinics Genetics IN Medicine, 10 (9), 685– 690 54 H J C Harton G.L, Coonen E,et.al (2010) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Human Reproduction,, (0), 1-8 55 K E Handyside AH, Hardy K, Winston RM (1990) Pregnancies from biopsied human preimplantation embryos sexed by Y-specific DNA amplification nature, 344, 768–770 56 L J Handyside AH, Tarin JJ,et.al (1992) Birth of a normal girl after in vitro fertilization and preimplantation diagnostic testing for cystic fibrosis N Engl J Med, 327, 905–509 57 H A Griffin D K, Harper JC, et al (1994) Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization J Assist Reprod Genet, 11, 132–143 58 H J C D JD (1996) Detection of chromosomal abnormalities in human preimplantation embryos using FISH J Assist Reprod Genet, 13, 137–139 59 V O Rechitsky S, et al (2002) Preimplantation genetic diagnosis for cancer predisposition Reprod Biomed Online, 5, 148-155 60 V A Van de Velde, Sermon K,et al (2000) Embryo implantation after biopsy of one or two cells from cleavage-stage embryos with a view to preimplantation genetic diagnosis Prenat Diag,, 20, 1030–1037 61 V S A De Vos A (2001) Aspects of biopsy procedures prior to preimplantation genetic diagnosis Prenat Diagn, 21, 767–780 62 C S Chen HS, Ma GC, et al (2017) Preimplantation genetic diagnosis and screening: Current status and future challenges Journal of the Formosan Medical Association, 1-7 63 W L Mertzanidou A, Cheng J, et al (2013) Microarray analysis reveals abnormal chromosomal complements in over 70% of 14 normally developing human embryos Human Reproduction, 28, 256–264 64 A S Fragouli E, Daphnis D.D, et al (2011) Cytogenetic analysis of human blastocysts with the use of FISH, CGH and aCGH: scientific data and technical evaluation Human Reproduction, 26, 480–490 65 B S Vassena R, Gonzalez-Roca E, et al (2011) Waves of early transcriptional activation and pluripotency program initiation during human preimplantation development Development, 38, 3699–3709 66 L M Fragouli E, Ross R , et al (2008) Comprehensive molecular cytogenetic analysis of the human blastocyst stage Human Reproduction, 23, 2596–2608 67 S M Veiga A, Benkhalifa M,et al (1997) Laser blastocyst biopsy for preimplantation diagnosis in the human Zygote, 5, 351–354 68 Sermon (2002) Current concepts in preimplantation genetic diagnosis (PGD): a molecular biologist's view Hum Reprod, 8, 1–10 69 S J Wells D (1998) Strategies for preimplantation genetic diagnosis of single gene disorders by DNA amplification Prenat Diagn, 18, 1389–1401 70 B A Fiorentino F, Nuccitelli A (2006) Strategies and clinical outcome of 250 cycles of Preimplantation Genetic Diagnosis for single gene disorders Hum Reprod, 21 (3), 670–684 71 M K I Woodson A.H, Lin H, et.al (2014) Breast Cancer, BRCA Mutations, and Attitudes Regarding Pregnancy and Preimplantation Genetic Diagnosis TheOncologist, 19, 797–804 72 F F Mullis K, Scharf S,et.al (1986) Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction Cold Spring Harb Symp Quant Biol, 51 (1), 263–273 73 J L Dreesen JC, Bras M, et.al (2000) Multiplex PCR of polymorphic markers flanking the CFTR gene, a general approach for preimplantation genetic diagnosis of cystic fibrosis Mol Hum Reprod, (5), 391–396 74 V M Ray PF, Munnich A (2001) Single cell multiplex PCR amplification of five dystrophin gene exons combined with gender determination Mol Hum Reprod, , (5), 489–494 75 H A Griffin DK, Harper JC, et al (1994) Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization J Assist Reprod Genet, 11, 132–143 76 H J Harton GL, Coonen E, et al (2001) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Hum Reprod, 26 (1), 25–32 77 W I Malmgren.H, Johansson.S,et.al (2006) PGD for dystrophin gene deletions using fluorescence in situ hybridization Molecular Human Reproduction, 12 (5), 353-356 78 E T Colls P, Cekleniak N, et al (2007) Increased efficiency of preimplantation genetic diagnosis for infertility using ‘‘no result rescue" Fertility and Sterility, 88, 53–61 79 Q P Findlay I, Hall J & Rutherford A (1996) Fluorescent PCR: a new technique for PGD of sex and single-gene defects J Assist Reprod Genet, 13, 96–103 80 D V A Sermon K, Velde HV,et al (1998) Fluorescent PCR and automated fragment analysis for the clinical application of preimplantation genetic diagnosis of myotonic dystrophy (Steinert's disease) Mol Hum Reprod 4,791–796 81 M Y Miah G , Rafii,et.al (2013) A Review of Microsatellite Markers and Their Applications in Rice Breeding Programs to Improve Blast Disease Resistance .Int J Mol Sci., 14, 22499-22528 82 A P Raquel M Fernández, et.al (2015) Experience of Preimplantation Genetic Diagnosis for Hemophilia at the University Hospital Virgen Del Rocío in Spain: Technical and Clinical Overview BioMed Research International, 1-9 83 P L A T Trần vân Khánh, Nguyễn Q Hồi,et.al (2016) Chẩn đốn tiền làm tổ bệnh hemophillia A kỹ thuật microssatelite Tạp chí nghiên cứu y học, 100 (2), 10-17 84 D H Hussey ND, Froiland DA,et.al (1999) Analysis of five Duchenne muscular dystrophy exons and gender determination using conventional duplex polymerase chain reaction on single cells Mol Hum Reprod, (11), 1089-1094 85 H A M Laurie.AD, AHarraw.J.M, et.al (2010) Preimplantation genetic diagnosis for hemophilia A using indirect linkage analysis and direct genotyping approaches Journal of Thrombosis and Haemostasis, 8, 783–789 86 H A M Laurie A.D, Harraway, et al (2010) Preimplantation genetic diagnosis for hemophilia A using indirect linkage analysis and direct genotyping approaches J Thromb Haemost 8,783 -789 87 M P S a P M G J R Harrawy (2006) A highly informative, multiplexed assay for the indirect detection of hemophilia A using five-linked microsatellites Journal of Thrombosis and Haemostasis, 4, 587 - 590 88 M.-A E Machado FB (2009) High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect haemophilia A carrier detection Haemophilia, 15 (1), 297-308 89 N S Saha A, mani K.R,et.al (2011) A set of five microsatellite markers linked to F8 gene can detect haemophilia A carriers across India Haemophilia, 17, e928 - e935 90 D S Shrestha.S, Li.Z (2016) Evaluation of factor VIII polymorphic short tandem repea markers in linkage analysis for carrier diagnosis of hemophilia A BIOMEDICAL REPORTS, 5, 228 - 232 91 R Y Slaoui M, Ferrandis M ,et.al (2007) Factor VIII (FVIII) gene mutations in 120 patients with hemophilia A: detection of 26 novel mutations and correlation with FVIII inhibitor development Thrombosis and Haemostasis,, 5, 1469–1476 92 L V Dũng (2014) Nghiên cứu xác định đột biến gen F8 gây bệnh hemophillia A Luận án tiến sĩ y học, 93 L Y L Ding.L.Q, _Dai J,et al (2012) Characterisation and validation of a novel panel of the six short tandem repeats for genetic counselling in Chinese haemophilia A pedigrees Haemophilia, 1-5 94 T H T Bùi Thị Thu Hương, Nguyễn Thị Hà,et al (2014) Phát người lành mang gen bệnh chẩn đoán trước sinh bệnh Hemophilia A Tạp chí nghiên cứu y học, 88 (3), 1-9 95 N T M Nguyễn Anh Trí, Nguyễn Thị Nữ, et al (2012) Nghiên cứu phát hemophilia dựa vào phả hệ gia đình bệnh nhân chẩn đoán viện Huyết học – Truyền máu TW Y học Việt Nam, 8, 566 - 571 96 Goodeve A.C (1998) Advances in carrier detection in haemophilia Haemophilia, 4(4), 358-364 97 Shetty S, Ghosh K, Bhide A cộng (2001) Carrier detection and prenatal ldiagnosis in families with hemophilia Natl Med J India, 14,81–83 98 Machado FB Medina-Acosta E (2009) High-resolution combined linkage physical map of short tandem repeat loci on human chromosome band Xq28 for indirect haemophilia A carrier detection Haemophilia, 15(11), 297308 99 W C E V massaro J.D, Muniz Y.C.n, et.al (2011) Analysis of five polymorphic DNA markers for indirect genetic diagnosis of haemophilia A in the Brazilian population Haemophilia, 17, 936 - 943 100 Bộ trưởng Bộ Y tế (2016) Hướng dẫn chẩn đoán điều trị bệnh Hemophilia A Quyết định số 4984/QD-BYT, Hà nội, ngày 17 tháng 19 năm 2016 101 Josephson N (2013) The hemophilias and their clinical management Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 261-267 102 World Federation of Hemophilia (2012) Carriers and women with hemophilia.WFH 50 years of advancing treatment for all 103 Gill Swallow ( 2013) Guideline for the Obstetric Management of Carriers of Haemophilia A and B, NHS Nottingham University Hospitals Cookie Disclaime 104 Trần Thị Liên Trần Thị Thanh Hương (2014 ) Di truyền đơn gen, Di truyền y học Nhà xuất giáo dục, 146-149 105 Leuer M, Oldenburg J Lavergne JM (2001) Somatic mosaicism in hemophilia A: a fairly common event Am J Hum Genet, Epub 2001 Jun 14, 69(61), 75-87 106 S Lavery (2008) Preimplantation genetic diagnosis of haemophilia British Journal of Haematology, 144, 303 - 307 107 S J Kulkarni R, Lusher J, et al (2009) Haemophilia Treatment Center Network Investigators; Sites of initial bleeding episodes, mode of delivery and age of diagnosis in babies with haemophilia diagnosed before the age of years a report from The Centers for Disease, PHỤ LỤC Bảng mã acid amin Codon TTT TTC TTA TTG TCT TCC TCA TCG TAT TAC TAA TAG TGT TGC TGA TGG CTT CTC CTA CTG CCT CCC CCA CCG CAT CAC CAA CAG CGT CGC CGA CGG Tên axit amin Phenylalanine Phenylalanine Leucine Leucine Serine Serine Serine Serine Tyrosine Tyrosine Termination Termination Cystein Cystein Termination Tryptophan Leucine Leucine Leucine Leucine Proline Proline Proline Proline Histidine Histidine Glutamine Glutamine Arginine Arginine Arginine Arginine Viết tắt Viết tắt (3 chữ cái) Phe Phe Leu Leu Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Ter Ter Cys Cys Ter Trp Leu Leu Leu leu Pro Pro Pro Pro His His Gln Gln Arg Arg Arg Arg (1 chữ Codon cái) F F L L S S S S Y Y X X C C X W L L L L P P P P H H Q Q R R R R Tên axit amin ATT Isoleucine ATC Isoleucine ATA Isoleucine ATG Methionine ACT Threonine ACC Threonine ACA Threonine ACG Threonine AAT Asparagine AAC Asparagine AAA Lysine AAG Lysine AGT Serine AGC Serine AGA Arginine AGG Arginine GTT Valine GTC Valine GTA Valine GTG Valine GCT Alanine GCC Alanine GCA Alanine GCG Alanine GAT Aspartate GAC Aspartate GAA Glutamate GAG Glutamate GGT Glycine GGC Glycine GGA Glycine GGG Glycine Viết tắt Viết tắt (3 chữ (1 chữ cái) Ile Ile Ile Met Thr Thr Thr Thr Asn Asn Lys Lys Ser Ser Arg Arg Val Val Val Val Ala Ala Ala Ala Asp Asp Glu Glu Gly Gly Gly Gly cái) I I I M T T T T N N K K S S R R V V V V A A A A D D E E G G G G Bảng tổng kết sử dụng marker khuếch đại cho 112 thành viên ( bệnh nhân + người nhà bệnh nhân) TT GĐ H3 H4 H28 H9 H13 H14 H15 H16 H17 10 H19 12 H22 Mã số Họ tên H3.0 H3.1 H4.0 H4.1 H28.0 H281 H28.2 H28.3 H9.0 H9.1 H9.2 H13.0 H13.1 H13.2 H14.0 H14.1 Nguyễn Tiến Đ mẹ: Nguyễn Thị H Nguyễn Gia B mẹ: Hoàng Thị Ng Nguyễn Duy A mẹ: Nguyễn Thị Thu H Nguyễn Thị Bích Hường (?) Em gái: nguyễn Hà M Trần Minh T Phạm Thị Thanh V Trần Thị Thanh Nh Nguyễn Đức Tr Mẹ Nguyễn Đức Tr ối nuôi cấy H13.1 H Lê Thị Ch H15.0 H15.1 H16.0 H16.1 H16.2 H16.3 H17.0 H17.1 H19.0 H19.1 H22.0 H22.1 Nguyễn Khánh D mẹ: Bùi Khánh L Vương Đức M Phan thị H Dì: Phan Thị Ph bác: Phan Thị Th Nguyễn Văn Đ Vũ Thị L C Mẹ Nguyễn Thị MinhV Nghuễn Văn A Mẹ Lê Thị Thanh H Đột biến 17 8.7 10,7 15.6 48.1 20.8 c.2777-78, p.907ins 9,8 12,9 34,9 34,4 45,8 12,9 86.5 6545G>A 29.7 c.4996-4997insA, 20.7 41.1 37.8 23.8 8.4 16.7 13.4 58.2 Kich thước Marker (10) FXS1108 (11) DXS9897 (14) F8int22 (15) DXS9901 167 167/178 179 179 167 167/178 167/178 180 178 178/180 178/180 178 168/178 168 167 167/178 256 256 252 252/264 256 256/264 256 264 255 248/255 248/255 257 253/257 253 252 256 213 213 212 214 215 215 215 214 214 214 212/214 216 214/216 214 214 215 202 201 214 214/216 216 216 216 202 202 202/212 194/202 202 202/204 204 208 194/208 167 167/178 167 167 167/178 167 178 178 167 167/178 167 167/178 248 248/260 252 248/252 252/254 256 260 256/260 244 244 252 256 215 215 213 213/217 213/215 213/217 217 215/217 215 215/217 212 215 196 196 195 195/198 212 195/212 202 199/202 202 198/202 202 212 19 H36 20 H37 21 H42 22 H44 23 H46 24 H47 25 H48 26 H49 H50 H36.0 H36.1 H36.2 H37.0 H37.1 H37.2 H37.3 H37.4 H37.5 H42.0 H42.1 H42.2 H44.0 H44.1 H44.2 H46.0 H46.1 H47.0 H47.1 H48.0 H48.3 H48.4 H49.0 H49.1 H49.2 H49.3 H49.4 H50.0 H50.1 H50.2 Tạ Công M mẹ: Nguyễn Thị Ng em gái: Tạ Thị L Vũ Hải Đ mẹ: Nguyễn Thị Thanh Nh Bác Nguyễn T S Bác Nguyễn Thị Y Bác Nguyễn Thanh Ng Chị họ Bùi Diệu H Nguyễn Kiên Q Mẹ Nguyễn Thị Th Bác Nguyễn Thị Th Phạm Hoàng N Mẹ Phạm Hoàng N chị gái: Phạm Lan Phương Trần Sỹ Ph Mẹ Phạm Thị T Nguyễn Đức A Mẹ Phạm Thị L Nguyễn Tuấn M Lưu Thị L(dì BN) Tạ Thị H (bà ngoại BN) Nguyễn Mạnh D Mẹ Nguyễn mạnh D dì: Nguyễn Thị H chị họ: Nguyễn Khánh L dì: Hồng Thị H Lê Trần Tr Mẹ Lê Trần Tr chị họ: Lê Hồng L 9.8 174.6 184.5 5092 T>C 34.8 23.8 30.7 31 21.9 eexon 8G>A 23.8 34.9 9.8 39.5 40.6 21.9 30.3 17.8 57.5 15.9 27.8 30.8 12.9 25.7 34.9 8.6 35.5 4026G>T 24.8 29 166 166/177 166/177 177 177 177 177 177 166 166/177 177 166 166/177 166/177 177 177 177 166/177 166 166 166/177 175 175/177 175/177 175/177 175/177 167 167/178 178 255 251/255 251/255 251 251/255 251/259 247/259 251/255 251/255 252 251 251 251 251/255 251/255 251 251/255 256 256/260 248 248/260 248/256 248 248/259 248 255/259 255/259 256 252/256 252/256 212 214 214 214 214 214 214 214 212 212/214 212/214 214 214/216 214/216 212 212 214 212/214 214 214 214 214 214/216 212/214 214/216 214/216 213 213/215 215 202 202/206 202/206 198 198/202 198/202 198/202 198/215 198/202 198 198/204 198/202 194 194/202 194/202 194 194/202 202 202 208 204/208 208/212 194 194/202 204 194/202 194/202 204 195/204 195/204 H60.0 H60.1 H60.2 H60.3 34 H60 H60.4 H60.5 H60.6 H60.7 35 H61 H61.0 H61.1 Đỗ bá Th1958 Đỗ Thị H 1979 Đỗ Thị H 1978 Đỗ Thị H 1983 Nguyễn Thị Hồng Ng (con H60.1) Nguyễn Thị Minh A 1998 Đỗ Thị Huế 1986 Lê Hương Gi (con H60.3)23,9 Nguyễn Văn H Nguyễn Thị Th 75.5 23.9 34.7 45.9 176 166/176 176 176 252 252 252 252/260 214 212/214 214 214 202 194/202 202/206 202/206 23,9 23.6 14.8 176 176 176 244/252 244/252 252 214 214 214 202 202 202 176 252/260 214 202 23.9 166 255 212 202 56.7 166/177 248/255 212/214 202 ... người lành mang gen bệnh chẩn đoán trước làm tổ bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA? ?? đ? ?a vào nghiên cứu với mục tiêu: Xác định người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite. .. 64 3.1.2 Kết phát người lành mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 68 3.2 KẾT QUẢ CHẨN ĐOÁN TRƯỚC LÀM TỔ BỆNH HEMOPHILIA BẰNG KỸ THUẬT MICROSATTELITE DNA 90 3.2.1... microsatellite DNA Chẩn đoán trước làm tổ cho người mẹ mang gen bệnh hemophilia A kỹ thuật microsatellite DNA 4 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG BỆNH HEMOPHILIA A 1.1.1 Định ngh? ?a Bệnh hemophilia