14-Aug-18 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM NGUYỄN NGỌC HÒA NỘI DUNG CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ SẮC KÝ KHÍ - GC SẮC KÝ LỎNG HiỆU NĂNG CAO -HPLC 14-Aug-18 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH I Phương pháp phân tích cổ điển 1.Chuẩn độ axit-bazơ 2.Chuẩn độ oxi hóa – khử 3.Chuẩn độ tạo phức 4.Chuẩn độ kết tủa III Imunoassay (miễn dịch) 1.Phân tích miễn dịch phóng xạ 2.Phân tích miễn dịch enzym IV Phân tích enzyme II Phân tích dụng cụ (Instrumental Analysis 1.Quang phổ 2.Sắc ký V Phân tích hợp chất sinh học 14-Aug-18 QUANG PHỔ • Phổ hấp thu Phổ Hồng ngoại Phổ UV-VIS Phổ hấp thu nguyên tử • Phổ huỳnh quang • Phổ ghép cặp cảm ứng cao tần (ICP) 14-Aug-18 Phổ hấp thu Nguồn xạ Tách sóng Cell đo mẫu Đầu đò Xử lý liệu Tách sóng Đầu đò Xử lý liệu Tách sóng Đầu đò Xử lý liệu Phổ huỳnh quang Nguồn xạ Cell đo mẫu Phổ phát xạ xạ phát Mẫu Một số thiết bị phân tích Sắc ký khí GCECD/FP D GCQQQ GC- Q TOF Sắc ký lỏng LCUV/FLD LC/Q Routine Analysis LC/QQQ MRM TOF Q-TOF Định tính 14-Aug-18 ICP-OES ICP-MS 14-Aug-18 Nước mắm Julia Roberts – Oscar 2001 Cr (III) and Cr (VI) Speciation in Essential HollyHood Toxic  Slide 12 14-Aug-18 Chương I CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ CHƯƠNG CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ 1.1 Khái niệm 1.2 Các tương tác q trình sắc ký 1.3 Các thơng số đặc trưng cho trình rửa giải 1.4 Lý thuyết sắc ký 1.5 Độ phân giải RS 1.6 Hệ số không đối xứng 14-Aug-18 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Khái niệm SẮC KÝ – KỸ THUẬT TÁCH Mobile phase Mobile phase Stationary phase • Sau làm việc Cơng sở Bợm nhậu Tương tác Ít nhậu Khơng nhậu 17:00 24:00 + 20:00 18:00 16 14-Aug-18 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ PHÂN LOẠI BẢN CHẤT VẬT LÝ PHA ĐỘNG LƯU GiỮ PHA TĨNH SẮC KÝ CỘT Column chromatography SẮC KÝ PHẲNG (planar chromatography SẮC KÝ KHÍ (gas chromatography ) SẮC KÝ LỎNG (Liquid chromatography) CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ KHÍ GC PHA ĐỘNG LỎNG LC (HPLC) Sắc ký phân bố (Partition Chromatography: PC) Sắc ký pha thuận (Normal phase: NP-HPLC) Sắc ký pha đảo (Reverse phase: RP- HPLC), Sắc ký trao đổi ion (Ion exchange IE-HPLC), Sắc ký ghép cặp ion ( IP-HPLC); Sắc ký loại cỡ (Size exclusion chromatography SEC-HPLC) 14-Aug-18 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Sắc ký rửa giải cột Mikhail Tsvet 1872 -1919 1903 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Sắc ký rửa giải cột Chromatography Chroma & Graphy Color writing Peak sắc ký Đầu dò (Detector) khác Sắc ký đồ → ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG Các chất 10 14-Aug-18 Thin Layer Chromatography CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ CÁC TƯƠNG TÁC TRONG QUÁ TRÌNH SẮC KÝ TƯƠNG TÁC TĨNH ĐiỆN Lực phân tán London (London Dispersion force) (non-polar compounds, e.g hydrocarbons) Lực phân cực (Polar force ) (dipole (dipole-dipole/dipole-induced dipole) Lực ion (Ionic force) (ion-ion) 11 14-Aug-18 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Lực phân tán dispersion force Lực tương tác hợp chất không phân cực : HC mạch thẳng nhân thơm molecules interacting and held together by dispersion force Charge fluctuation Cách thức tương tác Lực tương tác tăng theo kích thước phân tử Interacting plane CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Lực phân tương tác hai chất bị phân cực Tương tác lưỡng cực – lưỡng cực + Tương tác lưỡng cực cảm ứng: HO-CH2 – CH2 – OH phân cực, có benzen vào có tương tác lưỡng cực – lưỡng cực cảm ứng + Tương tác lưỡng cực lưỡng cực cảm ứng 12 14-Aug-18 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Lực ion Lực tương tác hai tiểu phân mang điện tích trái dấu Hai phân tử tương tác với lực ion lực phân tán CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Tương tác trình sắc ký Quy luật việc chọn lựa pha tĩnh “ Những chất giống có lực với nhau” SiO2 : polar stationary phase SiO2 : non-polar stationary phase 13 14-Aug-18 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Nguyên tắc trình tách chất Differential affinities (strength of adhesion) of the various components of the analyte towards the stationary and mobile phase results in the differential separation of the components Affinity, in turn, is dictated by two properties of the molecule: ‘Adsorption’ and ‘Solubility’ CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Nguyên tắc trình tách chất Affinity • Higher the adsorption to the stationary phase, the slower the molecule will move through the column • Higher the solubility in the mobile phase, the faster the molecule will move through the column 14 14-Aug-18 MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ Technique Stationary phase Mobile phase Basis of separation Notes Paper chromatography solid (cellulose) liquid polarity of molecules compound spotted directly on a cellulose paper polarity of molecules glass is coated with thin layer of silica on which is spotted the compound Thin layer chromatography (TLC) solid (silica or alumina) liquid 15 14-Aug-18 MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ Technique Stationary phase Liquid column solid (silica chromatogra or alumina) -phy Mobile Basis of phase separation liquid polarity of molecules Notes glass column is packed with slurry of silica MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ Technique Size exclusion chromatogra -phy Stationary phase Mobile Basis of phase separation solid (microporous liquid beads of silica) size of molecules Notes there isn’t any interaction, physical or chemical, between the analyte and the stationary phase 16 14-Aug-18 MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ Technique Stationary phase Mobile Basis of phase separation Ionsolid exchange or liquid chromatogra (cationic anionic resin) phy ionic charge of the molecules Notes molecules possessing the opposite charge as the resin will bind tightly to the resin, and molecules having the same charge as the resin will flow through the column and elute out first MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ Technique Stationary phase Gas liquid or chromatogra solid -phy support Mobile phase gas Argon or Helium Basis of separation Notes boiling point of the molecules Samples are volatilized and the molecule with lowest boiling point comes out of the column first 17 ... 14-Aug-18 Chương I CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ CHƯƠNG CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ 1.1 Khái niệm 1.2 Các tương tác trình sắc ký 1.3 Các thơng số đặc trưng cho trình rửa giải 1.4 Lý thuyết sắc ký 1.5 Độ... IE-HPLC), Sắc ký ghép cặp ion ( IP-HPLC); Sắc ký loại cỡ (Size exclusion chromatography SEC-HPLC) 14-Aug-18 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ Sắc ký rửa giải cột Mikhail Tsvet 1872 -1919 1903 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC... 14-Aug-18 CƠ SỞ LÝ THUYẾT SẮC KÝ PHÂN LOẠI BẢN CHẤT VẬT LÝ PHA ĐỘNG LƯU GiỮ PHA TĨNH SẮC KÝ CỘT Column chromatography SẮC KÝ PHẲNG (planar chromatography SẮC KÝ KHÍ (gas chromatography ) SẮC KÝ LỎNG