Đang tải... (xem toàn văn)
Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6187-2:1996 quy định phương pháp để phát hiện và đếm số lượng vi khuẩn coliform, coliform chịu nhiệt và escherichia coli giả định có trong nước bằng cách nuôi cấy trong một môi trường lỏng ở một hệ gồm nhiều ống nghiệm và tính toán số có xác xuất cao nhất của chúng có trong mẫu thử.
tCvn Tiªu chn ViƯt Nam tcvn 6187-2 : 1996 ISO 9308-2: 1990 (E) Chất lợng nớc - Xác định - Phát đếm vi khuẩn coliform, vi khuẩn coliform chịu nhiệt Escherichia coli giả định Phần phơng ph¸p nhiỊu èng ( sè cã x¸c st cao nhÊt ) Water quality - Detection and enumeration of organisms thermotolerant coliform organisms and presumptive Escherichia coli Part 2: Multiple tube (most probable number) method Hµ Néi - 1996 TCVN 6187-2:1996 Lời nói đầu TCVN 6187-2: 1996 hoàn toàn tơng đơng víi ISO 9308-2: 1990 (E) TCVN 6187-2: 1996 TiĨu ban kü thuËt n−íc tinh läc TCVN/TC/F9/SC1 thuéc Ban kü thuật tiêu chuẩn TCVN/TC/F9 Đồ uống biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn- Đo lờng - Chất lợng đề nghị Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trờng ban hành TCVN 6187-2:1996 Ti ªu chn ViƯt Nam TCVN 6187-2:1996 ChÊt lợng nớc - Xác định - Phát đếm vi khuẩn coliform, vi khuẩn coliform chịu nhiệt Escherichia coli giả định Phần phơng pháp nhiều ống ( sè cã x¸c suÊt cao nhÊt ) Water quality - Detection and enumeration of organisms thermotolerant coliform organisms and presumptive Escherichia coli Part 2: Multiple tube (most probable number) method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phơngpháp để phát đếm số lợng vi khuẩn coliform, coliform chịu nhiệt escherichia coli giả định có nớc cách nuôi cấy môi trờng láng ë mét hƯ gåm nhiỊu èng nghiƯm vµ tÝnh to¸n "sè cã x¸c xt cao nhÊt" cđa chóng cã mẫu thử Phơng pháp áp dụng cho loại nớc, kể loại nớc có chứa lợng đáng kể vật chất lơ lửng Việc lựa chọn phép thử dùng để phát xác nhận vi khuẩn nhóm coliform, kể escherichia coli, đợc xem nh phận dãy liên tiếp Quy mô việc xác nhận với mẫu thử riêng biệt đó, phần tuỳ thuộc vào chất mẫu nớc phần khác vào lý kiểm tra thực tế, việc xác định E.coli giả định nớc đợc nêu điều 3.3 tiêu chuẩn này, thông thờng ®Ĩ cung cÊp mét chøng cø cđa sù « nhiƠm phân Tiêu chuẩn trích dẫn ISO 3696:1987 Nớc dùng cho phòng thí nghiệm phân tích Yêu cầu kỹ thuật phơng pháp thử ISO 5667 -1: 1980 Chất lợng nớc - Lấy mẫu Phần 1: Hớng dẫn xây dựng phơng án lấy mẫu TCVN 5992: 1995 (ISO 5667 -2 Chất lợng nớc - Lấy mẫu Hớng dẫn kü thuËt lÊy mÉu TCVN 6187-2:1996 TCVN 5993: 1995 (ISO 5667 -3 ChÊt l−ỵng n−íc - LÊy mÉu H−íng dẫn bảo quản xử lý mẫu ISO 6887:1983 Vi sinh học - Hớng dẫn chung chuẩn bị dịch pha loãng để kiểm tra vi sinh vật ISO 8199:1983 Chất lợng nớc -Hớng dẫn chung đếm số lợng vi sinh vật cách nuôi cấy Định nghĩa Đối với mục đích tiêu chuẩn này, áp dụng định nghĩa sau: 3.1 Vi khuẩn coliform: Là sinh vật có khả sinh trởng hiếu khí nhiệt độ 350C 0.50C 370C 0.50C mét m«i tr−êng nu«i cÊy cã lactoza thĨ lỏng, kèm theo việc tạo thành axit sinh khí vòng 48 h 3.2 Các vi khuẩn coliform chịu nhiệt: Là vi khuẩn coliform nh mô tả mục 3.1, có đặc tính lên men vòng 24 h, nhiệt độ 440C 0.250C 44,50C 0.250C 3.3 Escherichia coli giả định: Là vi khuẩn coliform chịu nhiệt nh mô tả mục 3.2 mà sinh indol từ tryptophan vòng 24 h, hc 440C ± 0.250C hc 44,50C ± 0.250C Nguyên tắc Cấy phần mẫu thử, đợc pha loãng không pha loãng vào dãy ống nghiệm chứa môi trờng nuôi cấy chọn lọc dạng láng cã lactoza KiĨm tra c¸c èng thư sau 24 h 48 h nuôi nhiệt độ 350C 370C; cấy chuyển tiếp từ ống có biểu đục kèm theo sinh khí vào môi trờng khẳng định chọn lọc muốn tìm E.coli giả định cấy vào môi trờng mà qua quan sát thấy tạo thành indol Nuôi môi trờng khẳng định 48 h nhiệt độ 350C 370C để phát vi khuẩn coliform, 440C khoảng 24 h để phát loại coliform chịu nhiệt E.coli giả định Bằng bảng thống kê, tính toán số xác xuất cao dạng coliform, coliform chịu nhiệt E.coli giả định có mặt 100 ml mÉu thư, tõ sè c¸c èng thư kết xác nhận dơng tính TCVN 6187-2:1996 Dịch pha loãng,môi trờng nuôi cấy thuốc thử 5.1 Các dạng nguyên liệu Hãy sử dụng thành phần có chất lợng đồng hoá chất thuộc loại phân tích để pha chế môi trờng nuôi cấy thuốc thử tuân theo dẫn cho phụ lục B thông tin việc bảo quản, xem ISO 8199 Mặt khác, sử dụng môi trờng hoàn chỉnh dạng khô theo sát dẫn nhà sản xuất Để pha chế mô trờng, sử dụng nớc cất dụng cụ thuỷ tinh nớc loại ion, không chứa chất ức chế sinh trởng vi khuẩn điều kiện thử phù hợp với ISO 3696 5.2 Dịch pha loãng để tạo nên độ pha loãng mẫu thử, sử dụng dịch pha loãng đợc kiến nghị ë phơ luc B Chn bÞ dÞch pha lo·ng theo dẫn cho phụ lục B 5.3 Môi trờng phân lập Sử dụng môi trờng nuôi cấy dới đây, hớng dẫn chuẩn bị môi trờng đa phụ lục A 5.3.1 Canh thang lactoza 5.3.2 Canh thang macConkey 5.3.3 M«i tr−ê2)ng glutamat-lactoza-format cải tiến2) 5.3.4 Canh thang lauryl- tryptoza (lactoza) 5.4 Môi trờng khẳng định Sử dụng môi trờng sau: 5.4.1 Các môi trờng kiểm tra tính sinh khí; 5.4.1.1 Các thang lục sáng-lactoza (mật) 5.4.1.2 Môi tr−êng EC 5.4.2 m«i tr−êng kiĨm tra tÝnh sinh indol: 2) Có sẵn dạng thơng phẩm khô "môi trờng gutamat cải tiến có muối kháng" Thông tin đợc ®−a vi tÝnh tiƯn lỵi cho ng−êi sư dơng tiêu chuẩn không tạo nên xác nhận tiêu chuẩn sản phẩm TCVN 6187-2:1996 Nớc trypton 5.4.3 Môi trờng ống đơn, để kiểm tra tính sinh khí sinh indol: Canh thang tryptoza-mannitol-lauryl cã tryptophan 5.5 Thuèc thö 5.5.1 Thuèc thö kovac ®Ĩ thư indol 5.5.2 Thc thư oxidaza ®Ĩ dïng cho phép thử oxidaza Thiết bị Các thiết bị thông th−êng cđa phßng thÝ nghiƯm vi sinh gåm cã: 6.1 Tủ sấy nóng để khử trùng khô nồi hấp áp lực Ngoài thiết bị vô trùng sẵn, thiết bị thuỷ tinh trang bị khác cần đợc khử trùng theo dẫn nêu ISO 8199 6.2 Tủ ấm bể điều nhiệt, điều chỉnh đợc nhiệt độ 350C 0.50C, hc 370C ± 0.50C 6.3 Tđ Êm hc bĨ ®iỊu nhiƯt, cã thĨ ®iỊu chØnh ®−ỵc ë nhiƯt ®é hc 440C ± 0.250C, hc 44.50C ± 0.250C 6.4 pH mét Lấy mẫu Lấymẫu chuyển phòng thí nghiÖm theo ISO 8199, ISO 5667, TCVN 5992:1995 (ISO 5667-2) TCVN 5993:1995 (ISO 5667-3) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị mẫu thử môi trờng cấy Để chuẩn bị mẫu thử, tiến hành pha loãng mẫu cấyvào môi trờng phân lập phần mẫu thử, theo nh dẫn cho ISO 8199 Đối với phần mẫu thử tích lớn ml, sử dụng ống môi trờng phân lập nồng độ kép 8.2 Nuôi ống thử TCVN 6187-2:1996 Nuôi ống môi trờng cấy mẫu 48 h nhiệt độ 350C 0.50C, 370C ± 0.50C 8.3 KiĨm tra c¸c èng thư KiĨm tra ống mẫu lấy sau 18 ữ 24 h nuôi ấmvà coi có phản ứng dơng tính ống có biểu đục vi khuẩn sinh trởng sinh khí bên ống lộn ngợc (ống Durham), với việc tạo thành axit môi trờng phân lập có chứa thị pH Nuôi tiếp tủ ống ống nghiệm cha có dấu hiệu biến đổi nói kiểm tra lại chúng sau 48 h để tìm phản ứng dơng tính 8.4 Các phép thử khẳng định điều quan trọng cần lu ý phản ứng dơng tính ống môi trờng phân lập kết giả định coliform Do cần phải tiến hành phép thử xác nhận, tốt chủng cấy khiết 8.4.1 Cấy truyền, nuôi ấm kiểm tra Cấy truyền từ ống môi trờng phân lập có kết dơng tính vào ống môi trờng khẳng định (5.4) tìm tính sinh khí sinh indol Chú thÝch: - NÕu m«i tr−êng øc chÕ tèi thiĨu nhÊt (canh thanglactoza) đợc dùng để phân lập, nên cấy truyền tiếp vào hai số môi trờng khẳng định chọn lọc (canh thang lục sáng- lactoza (mật) canh thang EC) để khẳng định 8.4.1.1 Vi khuẩn coliform Để khẳng định có mặt vi khuẩn coliforrm chịu nhiệt, nuôi ống môi trờng EC khác (5.4.1) nhiệt độ 440C 24 h kiểm tra tính sinh khí Để khẳng định có mặt E.coli giả định cấy vào ống trypton (5.4.2) để tạo indol 440C vòng 24h Sau thêm 0.2 ml ữ 0.3 ml thuốc thử kovac (5.5.1) vào ống nớc trypton (đã cấy mẫu): Việc xuất màu đỏ sau lắc nhẹ chứng tỏ cã mỈt cđa indol._ Chó thÝch ViƯc sư dơng canh thang lauryl-trypo-mannit có tryptophan cho phép hình thành indol sinh khí E.coli giả định đợc thể ống đơn; TCVN 6187-2:1996 Việc phát E.coli giả định đợc xem nh chứng cớ đảm bảo ô nhiễm phân nhiên phép thử sâu để khẳng định E.coli phải đợc tiến hành xét thấy cần thiết (xem 8.5); Khi cấy truyền từ khuẩn lạc màng lọc vào ống môi trờng khẳng định, tốt nên cấy lên đĩa môi trờng thạch dinh dỡng để thử oxidaza 8.5 Phép thử oxidaza Một vài chủng vi khuẩn tìm thấy nớc phù hợp với định nghĩa vi khuẩn coliform hầu hết mặt, nhng chúng có khả sinh khí từ lactoza, nhiệt độ dới 370C mà Do chúng cho kết âm tính phép thử khẳng định chuẩn vi khn coliform vµ sù hiƯn diƯn cđa chóng nớc thờng thờng không đợc coi đáng kể Các chủng aeromonas, xuất cách tự nhiên nớc, gây nhiễu cho việc xác định nhiệt độ 370C thấp hơn, việc khẳng định phép thử oxidaza cần đến xác định coliform 8.5.1 Tiến hành phép thử oxidaza với giống khiết từ vi khuẩn lên men lactoza, mọc môi trờng thạch dinh dỡng, nh sau: - nhỏ giọt thuốc thử oxidaza (5.5.2) đợc chuẩn bị lên miếg giấy lọc đĩa Petri; - que cấy thuỷ tinh, tăm que cấy có dây bạch kim (không phải loại Nicrom), dàn mỏng mẫu cấy lên giấy lọc đợc chuẩn bị sẵn (xem thích 4) - quan sát thấy xuất màu xanh-tím sẫm vòng 10 giây phản ứng dơng tính Chú thích - Trong trờng hợp sử dụng thuốc thử oxidaza cần thực hiƯn c¸c phÐp thư kiĨm tra víi mÉu cÊy mét loại vi khuẩn cho phản ứng dơng tính loại cho phản ứng âm tính (E.coli) biết trớc Biểu thị kết Từ số ống môi trờng phân lập phép thử khẳng định cho kết dơng tính, tính toán, cách tham khảo bảng tra thống kê ISO 8199, số xác xuất cao vi khuẩn coliform chịu nhiệt E.coli giả định có 100 ml mẫu thử 10 Báo cáo kết Báo cáo kết gồm thông tin sau: TCVN 6187-2:1996 a) tham khảo tiêu chuẩn b) chi tiết cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử c) kỹ thuật môi trờng phân lập dùng d) môi trờng phép thử khẳng định dùng e) thời gian, nhiệt độ điều kiện nuôi cấy f) kết trình bày phù hợp với điều g) thông tin khác liên quan tới phơng pháp TCVN 6187-2:1996 Phụ lục A (Tham khảo) Thông tin sâu vi sinh học liên quan tíi kiĨm tra n−íc ®èi víi nhãm vi khn coliform Đối với mục đích kiểm tra nớc hàng ngày, nhóm vi khuẩn coliform đợc môtả thuật ngữ vi sinh chung, không mang tính phân loại học, nh sau: Các vi khuẩn coliform vi khuẩn hình que (dạng thẳng), gram âm, bào tử, oxidaza âm tính; chúng có khả sinh trởng hiếu khí kị khí không bắt buộc có mặt muối mật (hoặc yếu tố tác động bề mặt khác có đặc tính ức chế sinh trởng tơngtự) Chúngcũng lên men lactoza (mannit) kèm theo tạo thành axit, khí andehyt vòng 48 h, nuôi cấy nhiệt độ 350C đến 370C Các vi khuẩn coliform chịu nhiệt vi khuẩn coliform cho thấy có khả lên men đặc tính sinh hoá nuôi cấy nhiệt độ 440C đến 44.50C E.coli giả định vi khuẩn coliform chịu nhiệt, chúng có khả sinh indol từ tryptophan E.coli đợc xem E.coli giả định, chúng có kết dơngtính phép thử metyl đỏ loại cacboxyl axit glutamic, nhng chúng khả t¹o metyl axetyl cacbonol, sư dơng xitrat nh− ngn cacbon nhÊt, hc sinh tr−ëng canh thang kali xyanua (KCN) 10 TCVN 6187-2:1996 Phơ lơc B (Than kh¶o) Các môi trờng nuôi cấy, thuốc thử nớc pha loãng Môi trờng phân lập - Canh thang lactoza Môi tr−êng nång ®é kÐp: Pepton 10 g Lactoza 10 g Cao thịt bò g Nớc cất 1000 ml Hoà tan thành phần nớc sôi Nếu cần, chØnh pH cho khö trïng pH = 6.9 ữ 0.2 Pha chế môi trờng nồng độ đơn cách pha loãng môi trờng nồng độ kép với thể tích nớc cất tơng đơng - Canh thang MacConkey Môi trờng nồng độ kép: Muối mật 10 g Pepton 40 g Lactoza 20 g Natri clorua 10 g Bromo cresol (hoặc Cresol) tía dung dịch 1% (thể tích/ thể tÝch) pha lo·ng etanol ml N−íc cÊt 1000 ml 11 TCVN 6187-2:1996 Hoµ tan pepton, natri clorua vµ muối mật nớc cáchđun nóng giữ 40C qua đêm đem lọc dung dịch lạnh, bổ sung lactoza hoà tan Chỉnh pH đến 7,4 0.2 bổ sung bromocresol tía Môi trờng nồng độ đơn: Chuẩn bị môi trờng nồng độ đơn cách pha loãng môi trờng nồng độ kép với thể tích nớc cất tơng đơng, làm riêng cách giảm nửa lợng chất thành phần Phân phối môi trờng nồng độ đơn thành lợng ml/một ống môi trờng nồng độ kép thành lợng 10 ml 50 ml Mỗi ống nghiệm lọ thuỷ tinh đớcử dụng cần có mang ống lên men lộn ngợc (durham) Hấp ¸p lùc ë 1500C 10 - M«i tr−êng format-lactoza-glutamat cải tiến3) Môi trờng nồng độ kép: Lactoza 20 g Canxi clorua(CaCl2.2H2O) 0.02 g L (+) Muèi natri glutamat 12.7 g Vảy sắt(III) Xitrat 0.02 g L (+) Arginin monohidro clorua 0.048 g Thiamin(aneurin hidroclorua) 0.002 g L (-) Aspartic axit 0.04 g Axit nicotic 0.002 g L (-) Xystin 0.04 g Natri format 0.5 g Axit Pantotenic 0.002 g Dikali hidro photphat 1.8 g Bromocressol tÝa Amoni clorua g { dung dịch 1%(khối lợng/khối lợng) Magie sunfat (MgSO4.7H2O) 0.02 g cån etanol} ml N−íc cÊt 1000 ml Tiện lợi cả, nên chuẩn bị môi trờng với lợng 10 lit nhiều Nếu nh không phân phối vào ống nghiệm, để lactoza thiamin ngoài, không pha, vag bổ sung chúng trớc phân phối Để cho tiện hơn, vài thành phần đợc bổ 3) Có bán sẵn dạng khô "môi trờng glutamat điều chỉnh khoáng" Cũng cần điều chỉnh PH 12 TCVN 6187-2:1996 sung vào môi trờng dạng dung dịch riêng rẽ dung dịch naỳ đợc chuÈn bÞ nh− sau: Dung dÞch 1: L (+) Arginin monohidro clorua 0.4 g L (-) Aspartic axit 0.48 g Nớc cất 50 ml Đun nóng để hoà tan hoàn toàn Dung dịch 2: L (-) Xystin 0.4 g Natri hidroxit (5mol/l) 10 g N−íc cÊt 90 ml §un nãng để hoà tan 3) Có bán sẵn dạng khô ''môi trờng glutamat điều chỉnh khoáng" Cũng cần điều chỉnh pH Dung dịch 3: Axit nicotic 0.02 g Axit Pantotenic 0.02 g N−íc cÊt ml Hoµ tan mà không đun nóng Dung dịch 4: Vảy sắt(III) Xitrat 0.2 g Nớc cất 10 ml Đun nóng để hoà tan Dung dịch 5: 13 TCVN 6187-2:1996 Canxi clorua(CaCl2.2H2O) g Nớc cất 100 ml Axit clohtdric đậm đặc 0.1 ml Hoà tan không cần đun nóng, khử trùng 1210C 20 phút Bảo quản để làm dung dÞch gèc Dung dÞch 6: Khư trïng dung dÞch thiamin 0.1% n−íc cÊt Tèt nhÊt, nªn pha chÕ dung dịch cách: Thêm lợng chứa ống ampul (100 ml), cách vô trùng, vào 99 ml vào nớc cất vô trùng Bảo quản dung dịch 40C loại bỏ sau tuần lễ Để chuẩn bị 10 lit môi trờng nồng độ kép, hoà tan lợng tơng ứng L (+) muối natri glutamat, natri focmat, dikali hidro photphat, amoni clorua vµ magie sunphat lit n−íc cÊt nãng Sau ®ã bỉ sung toàn dung dịch 1, 2, 4, ml cđa dung dÞch ChØnh pH tíi 6.8 cao thấy cần thiết, cho pH cuối cùng, sau hoàn chỉnh khử trùng môi trờng, 6.7 Nếu dùng loại thiết bị phơng pháp khử trùng, có thay đổi pH xảy trình khử trùng Có thể cần đến vài phép thử sơ để tạo đợc pH xác trớc khư trïng Sau chØnh pH, thªm 20 ml dung dịch bromo cresol tía 1% etanol vớikhoảng 810 ml nớc cất, bổ sung thể tích cuối 10 lit Nếu lợng môi trờng không cần sử dụng ngay, cho vào chai dung tích 500 ml đem hấp áp lực 1150C 10 phút Khi dùng đến, bổ sung lợng cần thiết cho dung dịch lactoza thiamin (dung dịch 6), tan sau phân phối thành lợng 10 ml 50 ml Mỗi ống nghiệm lọ đợc sử dụng cần mang ống lên men lộn ngợc (ống durham) điều quan trọng cần bảo đảm sau hÊp vµ tr−íc sư dơng, èng Durham nµy chứa đầy môi trờng Nếu không tạo nên kết dơng tính giả mạo tính sinh khí Khử trùng nhiệt độ 1150C 10 phút hoăc đặt vào nồi nớc 1000C ngày, ngày 30 phút Môi trờng nồng độ đơn: Chuẩn bị môi trờng nồng độ đơn cách pha loãng môi trờng nồng độ káp với thể tích mớc cất tơng đơng phân phối thành lợng 5ml/ống nghiệm có chứa ống lên men lộn ngợc (Durham) Khử trùng nhiệt độ 1150C 10 phút, luồng nớc sôi 1000C ngày liên tiếp, ngày 30 phút 14 TCVN 6187-2:1996 Chú thích - ViƯc bỉ sung 0.1% casein thủ ph©n axit vitamin cho kết nhanh - Canh thang lauryl tryptoza (lactoza) Môi trờng nồng ®é kÐp: Tryptoza 40 g Lactoza 10 g Natri clorua 10 g Dikali hidrophotphat 5.5 g Kali dihidrophotphat 5.5 g Natri lauryl sunphat,®é tinh khiÕt cao 0.2 g N−íc cÊt 1000 ml Cho tryptoza, natri clorua, lactoza vµ muèi photphat vào nớc đun nóng để hoà tan Bổ sung natri lauryl sunphat trộn nhẹ nhàng để tránh sủi bọt Chỉnh pH đến 6.8 0.2 Chuẩn bị môi trờng nồng độ đơn cách pha loãng môi trờng nồng độ kép với thể tích nớc cất tơng đơng Phân phối môi trờng nồng độ đơn thành lợng ml, môi trờng nồng độ kép thành lợng 10 ml 50 ml Mỗi ống nghiệm hi\oặc lọ nhỏ đợc sử dụng cần phải có ống lên men lộn ngợc Hấp áp lực 1150C 10 phút Các môi trờng khẳng định - Canh thang lactoza - lục sáng (mật)4) (để kiểm tra tính sinh khí) 4) Môi trờng luôn cho kết lặp lại đợc, nên kiểm tra đặc tính trớc dùng Pepton 20 g Lactoza 10 g 4) Môi trờng luôn cho kết lặp lại đợc nên kiểm tra đặc tính ức chế trớc dùng 15 TCVN 6187-2:1996 Mật bò (khô) 20 g Lục sáng (dung dịch 0.1% khối lợng dung dịch nớc) 13 ml Nớc cất 1000 ml Hoà tan pepton 500 ml n−íc cÊt Bỉ sung 20 g mật bò khô hoà tan 200 ml nớc cất Dung dịch cần có độ ph khoảng 7.0 ®Õn 7.5 Dïng n−íc cÊt ®−a thĨ tÝch dung dịch lên 975 ml Thêm lactoza chỉnh pH đến7.4 Thêm dung dich lục sáng đa thể tích chúng lên đến 1000 ml nớc cất Phân phối vào ống nghiệm có ống lên men lộn ngợc (ống Durham), ống ml, hấp 1150C 10 phút - Môi trờng EC (để kiểm ta tính sinh khÝ) Tryptoza hc tryticaza 20 g Lactoza g Hỗn hợp muối mật số 1.5 g Dikali hidropho 2HPO4) g Kali dihidro photphat (KH2PO4) 1.5 g Natri clorua (NaCl) g Nớc cất 1000 ml Độ pH phải lµ 6.9 sau khư trïng Tr−íc khư trïng, phân phối vào ống nghiệm với lợng đủ để ngập ống lên men (Durham) lộn ngợc, ngập phần sau khử trùng - Nớc trypton (để thử phản ứng indol) Một vài loại pepton cho kết tốt với phép thử 350C đến 370C lại không thoả mãn với phÐp thư indol ë 440C Ng−êi ta thÊy tryptol tho¶ mãn điều kiến nghị dùng Trypton 20 g 16 TCVN 6187-2:1996 Natri clorua g N−íc cÊt 1000 ml Hoà tan thành phần nớc chỉnh pH đến 7.5 Phân phối vào lợng ml vµ hÊp ë 1150C 10 Chó thÝch - ViƯc bỉ sung 0.1% (khèi l−ỵng m/m) L DL tryptophan thể cải thiện tính cđa m«i tr−êng - Canh thang Lauryl -trypto-mannit cã tryptophan (Môi trờng ống đơn để kiểm tra hai đặc tÝnh: sinh khÝ vµ sinh indol) Tryptoza 20 g Natri clorua g Mannitol g Dikali hidropho 2HPO4) 2.75 g Kali dihidro photphat (KH2PO4) 2.75 g Natri lauryl sunphat 0.1 g L (-) Tryptophan 0.2 g N−íc cÊt 1000 ml Cho tryptoza, natri clorua, mannitol, c¸c muèi phot ph¸t tryptophan vào nớc hâm nóng nhẹ để hoà tan Bỉ sung natri lauryl sunphat vµ trén nhĐ nhµng ®Ĩ tr¸nh sđi bät ChØnh pH tíi 6.8 ± 0.2 Phân phối vào ống nghiệm có chứa ống lên men lộn ngợc (Durham) ống ml HÊp ë 1150C 10 C¸c thc thư Thc thư kovac vỊ tÝnh sinh indol: P- dimethylamino g Cån amylic 75 ml Axit clohidric (ρ = 1.18 g/l) 25 ml 17 TCVN 6187-2:1996 Hoà tan andehyt nói cồn amylic Cẩn thận bổ sung axit đặc vào Tránh ánh sáng bảo quản 40C Chú thích - Thuốc thử cần phải có màu vàng nhạt đến nâu nhạt; vài mẫu cồn amylic không thoả mãn đợc cho màu tối với andehyt - Thuèc thö oxidaza Tetramethyl -p -phenylen diamin hidro clorua 0.1 g Nớc cất 10 ml Thuốc thử không giữ đợc cần phải đợc pha chế lợng nhỏ cho lần sử dụng cần ®Õn nã DÞch pha lo·ng - N−íc pepton (0.1%) Pepton 1.0 g N−íc cÊt 1000 g Hoµ tan pepton khoảng 950 ml nớc Chỉnh pH dung dịch NaOH hc HCl (1 mol/l), cho sau khư trïng pH 7.0 0.1 Thêm nớc cất cho đủ 1000 ml, phân phối thành lợng phù hợp khư trïng ë 1210C ± 10C 15 - Dung dÞch pepton muèi: Pepton 1.0 g Natri clorua (NaCl) 8.5 g Nớc cất 1000 ml Hoà tan thành phần khoảng 950 ml nớc nớc đun sôi Chỉnh pH dung dịch NaOH HCl (1 mol/l), cho sau khư trïng pH lµ 7.0 0.1 Thêm nớc cất cho đủ 1000 ml, phân phối thành lợng phù hợp hấp 1210C ± 10C 15 - Dung dÞch Ringer- nång ®é mét phÇn t− Natri clorua (NaCl) 2.25 g 18 TCVN 6187-2:1996 Kali clorua (KCl) 0.105 g Canxi clorua, khan 0.12 g Natri hidro cacbonat 0.05 g N−íc cÊt 1000 ml Hoà tan thành phần phân phối thành lợng phù hợp Khử trùng cách hấp ¸p lùc ë 1210C ± 10C 15 pH cuối phải 7.0 0.1 - Dung dịch ®Öm photphat Kali hidro photphat (KH2PO4) 42.5 mg Magie clorua (MgCl2) 190 mg N−íc cÊt 1000 ml C¸ch pha chÕ: a) dung dịch photphat: Hoà tan 34 g muối photphat 500 ml n−íc cÊt ChØnh pH tíi 7.2 ± 0.5 dung dịch NaOH (1 mol/l) thêm nớc cất đến 1000 ml b) dung dịch magie clorua: Hoà tan 38 g magie clorua 1000 ml n−íc cÊt Dung dịch cuối để sử dụng, thêm 1.25 ml dung dịch photphat a) 5.0 ml dung dịch magie clorua b) vào 1000 ml nớccất Phân phối thành lợng phù hợpvà khử trùng cách hấp áp lực ë 1210C ± 10C 15 pH cuèi cïng phải 7.0 0.1 Môi trờng thạch dinh dỡng: Cao thÞt 1.0 g Pepton 1.0 g Natri clorua g 19 TCVN 6187-2:1996 Thạch 15 g Cho thành phần vào nớc đun nóng để hoà tan Chỉnh pH tới khoảng 8.2 NaOH (1 mol/l), đun sôi 10 phút Làm trongbằng cách lọc chỉnh pH tới 7.2 đến 7.4 Phân phối vào lä dung tÝch 100 ml vµ hÊp ë 1210C ± 10C 15 20 ... TCVN/ TC/F9 Đồ uống biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn- Đo lờng - Chất lợng đề nghị Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trờng ban hành TCVN 6187-2:1996 Ti chuẩn Việt Nam TCVN 6187-2:1996 Chất lợng nớc - Xác định.. .TCVN 6187-2:1996 Lời nói đầu TCVN 6187-2: 1996 hoàn toàn tơng đơng với ISO 9308-2: 1990 (E) TCVN 6187-2: 1996 TiĨu ban kü tht n−íc tinh läc TCVN/ TC/F9/SC1 thc Ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/ TC/F9... có muối kháng" Thông tin đợc đa vi tính tiện lợi cho ngời sử dụng tiêu chuẩn không tạo nên xác nhận tiêu chuẩn sản phẩm TCVN 6187-2:1996 Nớc trypton 5.4.3 Môi trờng ống đơn, để kiểm tra tính