Đang tải... (xem toàn văn)
Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8142:2009. Tiêu chuẩn về Thịt và sản phẩm thịt - Xác định hàm lượng hydroxyprolin. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm bắt nội dung chi tiết.
Lời nói đầu TCVN 8142 : 2009 hồn tồn tương đương với ISO 3496 : 1994; TCVN 8142 : 2009 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F8 Thịt săn phẩm thịt biên soạm, tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8142 : 2009 Thịt sản phẩm thịt - Xác định hàm lượng hydroxyprolin Meat and meat products - Detemlination of hydroxyproline content Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp xác định hàm lượng hydroxyprolin tất loại thịt sản phẩm thịt, kể thịt gia cầm Tiêu chuẩn áp dụng cho thịt sản phẩm it chứa hàm lượng hydroxyprolin nhỏ 0,5 % (khối lượng) Thuật ngữ, định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: Hàm lượng hydroxyprolin thịt sản phẩm thịt (hydroxyproline content of meat and meat products): Hàm lượng hydroxyprolin xác định theo quy trình quy định tiêu chuẩn Hàm lượng hydroxyprolin biểu thị phần trăm khối lượng Nguyên tắc Thuỷ phân phần mẫu thử axit sulfuric 105 oC Lọc Và pha loảng dịch thuỷ phân Oxi hoá hydroxyprolin cloramin-t sau tạo phức màu đỏ với p-dimetyl-aminobenzaldehyt Đo quang phổ bước sóng 558 nm Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử đạt chất lượng phân tích nước cất nước đá khử khống nước có độ tinh khiết tương đương 4.1 Dung dịch axit sulfuric, C(H2SO4) mol/l Cho 750 ml nước vào bình định mức vạch dung tích 21 Vừa thêm từ từ vừa khuấy 320 ml axit sulfuric đậm đặc 2o = ,84 g/ml) Để nguội đến nhiệt độ phòng thêm nước đến vạch 4.2 Dung dịch đệm, p H = 6,8, gồm: 26,0 g axit xitric ngậm phần tư nước (C6H6O7H2O); 14,0 g natri hydroxit; 78,0 g natri axetat khan [Na(CH3CO2)] Hoà tan thuốc thử 500 ml nước chuyển hết vào bình định mức vạch dung tích 11 Thêm 250 ml propan-1-ol thêm nước đến vạch Khi bảo quản oC, nơi tối, dung dịch bền vài tuần 4.3 Thuốc thử Cloramin-T Hoà tan 1,41 g natri N-clo-p-toluen-sulfonamit ngậm ba phân tử nước (cloramin-t) 100 ml dung dịch đệm (4.2) Chuẩn bị dung dịch trước sử dụng 4.4 Thuốc thử màu Hoà tan 10,0 g -dimetylaminobenzaldehyt 35 ml dung dich axit percloric [60 % (khối lượng] sau thêm từ từ 65 ml propan-2-ol Chuẩn bị dung dịch ngày sử dụng Nếu cần tinh p-dimetylaminobenzaldehyt (xem thích 8.4), tiến hành sau: Chuẩn bị dung dịch bão hồ -dimetylaminobenzaldehyt etanol nóng 70 % (thể tích) Làm nguội, nhiệt độ phòng, sau để tủ lạnh Sau khoảng 12 h, lọc phễu Bunchner Rửa etanol 70 % (thể tích) Hồ tan lại etanol nóng 70 % (thể tích) Thêm nước nguội khuấy kỹ Lặp lại thao tác hình thành đủ lượng tinh thể màu trắng sữa Để tủ lạnh qua đêm Lọc phễu Bunchner Rửa etanol 50 % (thể tích) sẩy chân khơng oxit phospho (V) 4.5 Hydroxyprolin, dung dịch chuẩn Chuẩn bị dung dịch gốc cách hoà tan 50 mg axit 4hydroxypyroliđin-a-cacbocnic (hydroxyprolin) nước đựng bình định mức vạch dung tích 100 ml Thêm giọt dung dịch axit sulfuric (4.1) thêm nước đến vạch Khi bảo quản oC dung dịch bền tháng Trong ngày sử dụng, chuyển ml dung dịch gốc vào bình định mức vạch dung tích 500 ml thêm nước đến vạch Sau chuẩn bị bốn dung dịch chuẩn cách pha loãng 10 ml, 20 ml, 30 ml 40 ml dung dịch 100 ml nước để thu nồng độ hydroxyprolin tương ứng 0,5 g/ml, g/ml, ,5 g/ml g/ml Thiết bị dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm, cụ thể sau: 5.1 Máy xay thịt điện, có lưỡi dao nằm ngang, có khả quay tốc độ cao 5.2 Bình thuỷ phân đáy tròn đáy phẳng, có dung tích khoảng 200 ml, cổ rộng 5.3 Tủ sấy, có khả hoạt động 105 oC oC 5.4 Đĩa giấy lọc, đường kính 12,5 cm 5.5 Máy đo pH 5.6 Lá nhôm chất dẻo mở 5.7 Nồi cách thuỷ, có khả trì 60 oC 0,5 oC 5.8 Máy đo phổ, phù hợp sử dụng bước sóng 558 nm nm, máy đo màu quang điện có lọc nhiễu với độ hấp thụ tối đa bước sang 558 nm nm 5.9 Cuvet thuỷ tinh, chiều dài đường quang 10 mm 5.10 Cân phân tích, cân xác đến 0,001 g 5.11 Bình định mức, dung tích 250 ml 5.12 Mặt kính đồng hồ, đường kính từ cm đến cm Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện không bị hư hỏng không bị biến đổi chất lượng trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu không quy định trọng tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo ISO 3100-1 1) Lấy 200 g mẫu đại diện Bảo quản mẫu cho mẫu không bị giảm chất lượng không bị thay đổi thành phần Chuẩn bi mẫu thử 7.1 Thịt nguyên liệu sản phẩm thịt Cắt miếng thịt thành khối lập phương nhỏ (khoảng 0,5 cm nghĩa cạnh dài khoảng mm) cách dùng dao sắc cắt thịt lạnh (dưới oC) Cho mẫu vào vật chứa hàn kín đóng gói chân khơng mẫu màng chất dẻo chịu nhiệt Sau gia nhiệt vật chứa mẫu cho ) ISO 31001:1991 (đã được biên soạn thành TCVN 48331: 2002) Hiện nay, ISO 31001:1991 đã bị huỷ và được thay thế bằng ISO 17604:2003 (được biên soạn thành TCVN 7925:2008 Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn ni Phương pháp lấy mẫu thân thịt tươi để phân tích vi sinh vật) trì nhiệt độ 70 oC 30 Để nguội tiến hành theo 7.2 Trong suốt giai đoạn lại q trình chuẩn bị mẫu thử cân phần mẫu thử, đảm bảo mẫu trộn kỹ, cụ tất chất bảo dich lỏng phân bố đồng Chú thích Việc xử lý nhiệt làm mềm mô liên kết làm độ bền đồng hoà cách xay Tuy nhiên, điều làm tách chất lỏng có chứa gelatin Sự có mặt chất béo phải đặc biệt ý tạo mẫu thử đồng 7.2 Thịt nắp chín sản phẩm thịt nắp chín Đồng hố mẫu máy xay thịt (5.1) Cho đậy mẫu đồng vào vật chứa kín khi, đậy nắp vật chứa bảo quản cho không bị giảm chất lượng thay đổi thành phần Phân tích mẫu sớm tốt, vòng 24 h cách tiến hành 8.1 Phần mẫu thử Cân khoảng g mẫu thử, xác đến 0,001 g vào bình thuỷ phân (5.2) Đảm bảo nguyên liệu mẫu không bị bám dính thành bình 8.2 Thuỷ phân 8.2.1 Cho 30 ml ml dung dịch axit sulfuric (4.1) vào bình Đậy bình mặt kính đồng hồ (5.12) đặt tủ sắt (5.3) 16 h (thích hợp để bình qua đêm) 105 oC 8.2.2 Lọc dịch thủy phân nóng qua giấy lọc (5.4) vào bình định mức vạch (5.11) 250 ml Rửa bình giấy lọc ba lần 10 ml phân dung dịch axit sulfuric nóng (4.1) cho nước rửa vào dịch thuỷ phân Thêm nước đến vạch 8.3 Hiện màu đo độ hấp thụ 8.3.1 Dùng pipet chuyển vào bình định mức vạch 250 ml (5.11) thể tích (V) dịch thuỷ phân (8.2.2) cho sau pha lỗng đến 250 ml nồng độ hydroxyprolin khoảng từ 0,5 g/ml đến g/ml Thêm nước đến vạch Chú thíc Trong hầu hết trường hợp, V từ ml đến 25 ml, tuỳ thuộc vào lượng mơ liên kết có mặt mẫu 8.3.2 chuyền 4,00 ml dung dịch (8.3.1) vào ống nghiệm thêm 2,00 ml thuốc thử cloramin-T (4.3) Trộn để yên nhiệt độ phòng 20 min 8.3.3 Thêm 2,00 ml thuốc thử màu (4.4), trộn kỹ đậy nắp ống nhôm chất dẻo (5.6) 8.3.4 chuyền nhanh ống vào nới cách thuỷ (5.7) 60 oC làm nóng 20 8.3.5 Làm nguội ống vòi nước chảy để nhiệt độ phòng 30 8.3.6 Dùng máy đo phổ máy đo màu quang điện có lọc nhiễu (5.8) để đo độ hấp thụ 558 nm - nm cuvet thuỷ tinh (5.9) chứa nước 8.3.7 Lấy độ hấp thụ thu dung dịch mẫu trừ độ hấp thụ thu dung dịch trắng (8.4) đọc nồng độ hydroxyprolin dịch thuỷ phân pha loảng từ đường chuẩn thu 8.5 8.4 Phép thử trắng Tiến hành lặp lại hai lần quy trình 8.3.2 đến 8.3.7, thay phần dịch thuỷ phân pha lỗng nước Chú thích Nếu độ hấp thụ mẫu trắng vượt 0,40, phải chuẩn bị thuốc thử màu (4.4) -hiimetytaminobenzaldehyt phải tinh (xem thích 4.4) cần 8.5 Đường chuẩn 8.5.1 Tiến hành quy trình 8.3.2 đến 8.3.7, thay dịch thuỷ phân pha loãng bốn dung dịch hydroxyprolin chuẩn pha loãng (4.5), dung dịch 4,00 ml 8.5.2 Vẽ giá trị độ hấp thụ đo được, hiệu chỉnh với giá trị trắng, dựa vào nồng độ dung dịch hydroxyprolin chuẩn Dựng đường thẳng qua điểm gốc toạ độ Chuẩn bị đường chuẩn dãy phân tích Tính tốn Đối với phần mẫu thử, tính hàm lượng hydroxyprolin, biểu thị phần trăm khối lượng theo công thức: wh 6,25c mxV wh hàm lượng hydroxyprolin theo cơng thức, biểu thị phần trăm khối lượng; c nồng độ hydroxyprolin dịch thuỷ phân loãng đọc từ đường chuẩn, tính - microgam mililit ( g/ml); m khối lượng phản mẫu thử (8.1), tính gam (g); V thể tích phần dịch lỏng dịch thuỷ phân lấy để pha loãng đến 250 ml (xem 8.3.1), tính milillt (ml) Lấy kết xác đến 0,01 % 10 Độ chụm Độ chụm phương pháp thiết lập liên phòng thử nghiệm quốc tế, tiến hành thử nghiệm theo ISO 5725 Đối với giá trị thu độ lặp lại độ tái lặp, tính mức xác suất 95 % 10.1 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai lần xác định độc lập, riêng rẽ thu sử dụng phương pháp loại vật liệu thử phòng thử nghiệm, người thao tác, sử dụng thiết bị khoảng thời gian ngắn, không lớn giá trị r cơng thức: r 0,0131 0,0322 wh wh trung bình hai kết thử nghiệm hàm lượng hydroxyprolin, biểu thị theo phần trăm khối lượng Loại bỏ hai kết chênh lệch vượt giá trị tiến hành hai phép xác định riêng rẽ 10.2 Độ tái lặp Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm riêng rẽ thu sử dụng phương pháp loại vật liệu thử phòng thử nghiệm khác nhau, người thao tác khác thực sử dụng thiết bị khác nhau, không lớn giá trị R công thức: R 0,0195 0,0529 wh wh trung bình hai kết thử nghiệm hàm lượng hydroxyprolin, biểu thịt theo phần trăm khối lượng 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: - phương pháp tiến hành lấy mẫu, biết; - phương pháp sử dụng; - kết thử nghiệm thu được, - đáp ứng yêu cầu độ lặp lại, nêu kết cuối thu Báo cáo thử nghiệm cần đề cập đến chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, xem tuỳ ý, với tình bầt thường ảnh hưởng đến kết Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu Phụ lục A (Tham khảo) Thư mục tài liệu tham khảo [1] ISO 3100-1 : 1991 Thịt sản phẩm thịt Lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử Phần 1: Lấy mẫu [2] ISO 5725 : 1986, Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for standard tests methods by interlaboratory tests ... mẫu không quy định trọng tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo ISO 3100-1 1) Lấy 200 g mẫu đại diện Bảo quản mẫu cho mẫu không bị giảm chất lượng không bị thay đổi thành phần Chuẩn bi mẫu thử 7.1 Thịt... Sau gia nhiệt vật chứa mẫu cho ) ISO 31001:1991 (đã được biên soạn thành TCVN 48331: 2002) Hiện nay, ISO 31001:1991 đã bị huỷ và được thay thế bằng ISO 17604:2003 (được biên soạn thành TCVN 7925:2008 Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn ni Phương pháp lấy mẫu thân thịt ... hiệu chỉnh với giá trị trắng, dựa vào nồng độ dung dịch hydroxyprolin chuẩn Dựng đường thẳng qua điểm gốc toạ độ Chuẩn bị đường chuẩn dãy phân tích Tính tốn Đối với phần mẫu thử, tính hàm lượng hydroxyprolin,