Đang tải... (xem toàn văn)
Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6166-1996. Tiêu chuẩn giới thiệu nội dung về phân bón vi sinh vật cố định nitơ. Tiêu chuẩn này áp dụng cho các loại phân bón chứa vi sinh vật sống có khả năng cố định nitơ và qui định các yêu cầu kỹ thuật; phương pháp kiểm tra đánh giá đối với phân bón vi sinh vật cố định nitơ.
tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Tiêu chuẩn việt nam TCVN 6166-1996 Phân bón vi sinh vật cố định nitơ Nitrogen-fixing microbial fertilizer Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn áp dụng cho loại phân bón chứa vi sinh vật sống có khả cố định nitơ qui định yêu cầu kỹ thuật; phơng pháp kiểm tra đánh giá phân bón vi sinh vật cố định nitơ Tiêu chuẩn trích dẫn TCVN 1694-75 Lấy mẫu sản phẩm hoá học TCVN 4833-89 (ISO 4833-1978) Híng dÉn chung ®Õm vi sinh vËt, kü tht ®Õm khn l¹c ë 300C TCVN 4881-89 (ISO 6887-1983) Híng dẫn chung cách pha chế dung dịch pha loãng để kiểm nghiệm vi sinh vật TCVN 5815-1994 Phân hỗn hợp NPK Phơng pháp thử TCVN 6169-1996 Phân bón vi sinh vật -Thuật ngữ Thuật ngữ, định nghĩa Phân bón vi sinh vật cố định nitơ (tên thờng gọi: phân vi sinh vật cố định đạm; phân đạm vi sinh) sản phẩm chứa hay nhiều chủng vi sinh vật sống đợc tuyển chọn với mật độ đạt tiêu chuẩn hành, có khả cố định nitơ (sống tự do, hội sinh cộng sinh) cung cấp hợp chất chứa nitơ cho đất trồng; tạo điều kiện nâng cao suất (hoặc) chất lợng nông sản, tăng độ màu mỡ đất Các chủng vi sinh vật không gây ảnh hởng xấu đến ngời, động, thực vật, môi trờng sinh thái chất lợng nông sản Yêu cầu kỹ thuật 4.1 Phân bón vi sinh vật cố định nitơ phải chứa nhiều chủng vi sinh vật có khả cố định nitơ, sống cộng sinh hay hội sinh với trồng sống tự đất, nớc không khí 4.2 Phân bón vi sinh vật cố định nitơ phải có mật độ vi sinh vật sống phù hợp với qui định bảng tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Bảng 1- Mật độ vi sinh vËt Tªn chØ tiªu Vi sinh vËt cè định nitơ, không nhỏ Vi sinh vật tạp, không lớn Mật độ vi sinh vật CFU*/g hay ml phân bón Chất mang không Chất mang trùng trïng Khi xuÊt xCuèi h¹n Khi xuÊt Cuèi h¹n ởng bảo hành xởng bảo hành 1,0 x 109 1,0 x 108 1,0 x 107 1,0 x 106 1,0 x 106 1,0 x 106 - - *CFU: Đơn vị hình thành khuẩn lạc 4.3 Phân bón vi sinh vật cố định nitơ phải có tác dụng tốt đất trồng Phân bón vi sinh vật cố định nitơ phải đạt đợc tiêu chất lợng nh ghi nhãn đợc xác định phòng thử nghiệm đợc công nhận định 4.4 Độ an toàn chủng vi sinh vật chứa phân bón vi sinh vật cố định nitơ phải đợc xác định công nhận phòng thí nghiệm đợc công nhận hay định 4.5 Thời hạn bảo quản phân bón vi sinh vật cố định nitơ không tháng kể từ ngày xuất xởng 4.6 Hàm lợng chất dinh dỡng độ ẩm phân bón vi sinh vật cố định nitơ đợc đăng ký quan quản lý nhà nớc chất lợng đợc xác định, đánh giá phòng thử nghiệm đợc công nhận định LÊy mÉu 5.1 Qui ®inh chung 5.1.1 ViƯc lÊy mÉu đợc tiến hành cho mẫu kiểm tra phải mẫu đại diện cho lô hàng Ngời lấy mẫu phải đợc huấn luyện có kinh nghiệm việc lấy mẫu 5.1.2 Trong trình lấy mẫu, vận chuyển xử lý mẫu, phải bảo đảm tránh lây nhiễm từ bên phải bảo đảm giữ mẫu đợc nguyên trạng nh ban đầu đem phân tích phòng thí nghiệm 5.1.3 Không đợc bổ sung thêm tác nhân bảo quản, diệt khuẩn diệt nấm vào mẫu kiểm tra 5.1.4 Mẫu đợc lấy phải bao nguyên gói 89 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón 5.1.5 Phải tiến hành lấy mẫu nơi nớc nóng, hoá chất độc hại, ánh nắng gay gắt bụi mẫu đợc đa vào dụng cụ chứa 5.1.6 Các dụng cụ lấy mẫu chứa mẫu phải vô trùng 5.2 Chuẩn bị dơng lÊy vµ chøa mÉu 5.2.1 Dơng lÊy mẫu phải loại đợc làm từ thép không gỉ thủy tinh 5.2.2 Các dụng cụ lấy chứa mẫu vô trùng cách sấy tđ sÊy ë nhiƯt ®é 1700C thêi gian không 1h nồi hấp nhiệt độ 1210C thời gian không 30 đợc bảo quản dụng cụ thích hợp, đảm bảo tránh lây nhiễm từ bên 5.3 Số lợng mẫu 5.3.1 Lô hàng bao gồm bao (túi) sản phẩm phân bón vi sinh vật cố định nitơ đợc sản xuất đợt với nguồn nguyên liệu 5.3.2 Số lợng bao (túi) cần lấy để kiểm tra lô hàng phụ thuộc vào độ lớn lô hàng phù hợp với qui định bảng Bảng 2- Số lợng bao (túi) cần lấy để kiểm tra Cả lô hàng (bao, túi) Số lợng mẫu cần lấy (bao, túi) 11 15 19 Đến 100 Từ 101 đến 1000 Từ 1001 đến 10000 Lớn 10000 5.3.3 Các bao (túi) mẫu đợc lựa chọn ngẫu nhiên theo TCVN 1694-75 Tiến hành lấy mẫu trung bình từ mẫu chung tập hợp mẫu ban đầu lô hàng kiểm tra Chia mẫu trung bình làm phần bao gói phù hợp với yêu cầu sản phẩm Một phần dùng để kiểm tra phần để lu bảo quản điều kiện qui định mà loại sản phẩm yêu cầu để dùng phân tích trọng tài Trên gói mẫu phải có nhãn ghi rõ: - Tên mẫu đối tợng trồng đợc sử dụng; - Tên sở sản xuất, tên khoa häc cđa loµi vi sinh vËt sư dơng; - Thêi gian sản xuất; - Thời gian địa điểm lấy mẫu; - Tên ngời lấy mẫu quan lấy mẫu Tiến hành kiểm tra xác định 6.1 Xác định hiệu phân bón vi sinh vật cố định nitơ 90 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Hiệu phân bón vi sinh vật cố định nitơ đất trồng đợc xác định theo qui trình khảo nghiệm phân bón qui định văn quan có thẩm quyền Chú thích: Trong khảo nghiệm diện hẹp cần thêm công thức đối chứng với phân vi sinh vật đợc diệt hết tế bào VSV sống có phân 6.2 Kiểm tra mật độ vi sinh vËt 6.2.1 Chn bÞ kiĨm tra 6.2.1.1 Trang thiÕt bÞ, dụng cụ kiểm tra Trang thiết bị phòng kiểm nghiƯm vi sinh vËt th«ng thêng, bao gåm: - ThiÕt bị để khử trùng khô (tủ sấy) khử trùng nớc (nồi hấp); - Tủ ấm, điều chỉnh đợc 300C 10C; - Hộp lồng thuỷ tinh chất dẻo, đờng kính từ 90-100mm; - Pipet thuỷ tinh có dung tích 1,0ml; 5,0ml; 10,0ml; - Máy đếm khuẩn lạc có đáy đợc chiếu sáng với tối có gắn thấu kính phóng đại, độ phóng đại 1,5 lần dụng cụ đếm học số điện tử; - Máy đo độ pH có độ xác đến 0,1 đơn vị đo pH; - Nåi c¸ch thủ ỉn nhiƯt; - èng nghiƯm thủ tinh 18mm x 180mm; - Bình tam giác có dung tích thích hợp; - ống đong dụng cụ thuỷ tinh khác Các dụng cụ dùng xác định vi sinh vật phải khử trùng cách: - Giữ từ 170 đến 1750 C không h tủ sấy, - Giữ áp suất 1,0 atmotphe (1210 C) không 30 nồi hấp Các thiết bị pha trộn: - Máy trộn quay có tần số quay từ 8.000 đến 45.000 vòng/min, có bình chứa kim loại thuỷ tinh, chịu đợc điều kiện tiệt trùng; - Dụng cụ trộn nhu động (stomacher) với túi chất dẻo vô trïng; - Dơng trén: cã thĨ trén tõ 1ml ®Õn 2ml mÉu thư; - C©n kü tht cã ®é xác tới 0,01g 6.2.1.2 Dịch pha loãng dung dịch muối ăn (NaCl) 0,85%, không chứa hợp chất nitơ, có độ pH 7,0 sau khử trùng 250 C Lấy 90 ml dịch pha loãng vào bình cầu lọ chất dẻo (cho dịch huyền phù ban đầu), Lấy ml dịch pha loãng vào ống nghiệm (cho dịch pha loãng thập phân) 91 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón Nút lại mỡ, khử trùng nồi hấp áp lực, 1210C 30 NÕu cha sư dơng ngay, dÞch pha loãng cần đợc bảo quản tủ lạnh nhiệt độ từ đến 50C, thời gian bảo quản không tháng kể từ ngày chuẩn bị Chú thích- Để tránh làm ảnh hởng đến vi sinh vật thay đổi nhiệt độ đột ngột, nên điều chỉnh nhiệt độ dịch pha loãng đến nhiệt độ phòng thử nghiệm 6.2.1.3 Chuẩn bị môi trờng kiểm tra Môi trờng dùng để kiểm tra phân vi sinh vật cố định nitơ đợc sử dụng môi trờng hợp chất nitơ thành phần môi trờng phụ thuộc vào chủng loại vi sinh vật mà nhà sản xuất sử dụng Nếu yêu cầu nhà sản xt, kiĨm tra sư dơng m«i trêng theo phơ lục A Môi trờng đợc pha chế theo thứ tự hoá chất thành phần cho chia vào dụng cụ thuỷ tinh chuẩn bị, khư trïng ë ®iỊu kiƯn 1atmotphe (121OC) 30 Phân chia môi trờng vào hộp lồng khử trùng điều kiện vô trùng Kiểm tra độ môi trờng sau ngày để nhiệt độ từ 28 đến 30 oC Chỉ sử dụng hộp lång chøa m«i trêng nu«i cÊy vi sinh vËt kh«ng phát thấy tạp nhiễm Chú thích- Đối với phân vi sinh vật cố định nitơ chứa vi sinh vËt díi d¹ng tiỊm sinh tríc kiĨm tra cần phải hoạt hoá 6.2.2 Tiến hành kiểm tra 6.2.2.1 Pha loãng mẫu a) Đối với mẫu dạng lỏng: dùng pipet vô trùng có nút phần hút, lấy 10 ml mẫu để trộn lắc tay hay thiết bị lắc học, đa vào 90 ml dịch pha loãng theo 6.2.1.2 Chú ý tránh trạm pipet vào dịch pha loãng, trộn cẩn thận mẫu chuẩn bị cách hút - thả lại 10 lần với pipet có nút phần hút vô trùng khác dụng cụ trộn học 5-10 s, nhịp quay dụng cụ đợc chọn cho mẫu trộn nh cuộn xoáy dâng lên cách mép lọ chứa khoảng đến 3cm Dung dịch tạo đợc gọi dung dịch huyền phù ban đầu; b) Đối với mẫu dạng đặc: cân 10g mẫu có độ xác tới 0,01 g cho vào bình chứa vô trùng, thêm 90 ml dịch pha loãng theo 6.1.1.2 Đặt bình vào máy trộn đến cho có đợc dung dịch có phân bố đồng Để lắng phần tử nặng, khoảng 15 min, gạn dung dịch huyền phù ban đầu; c) Dùng pipet vô trùng lấy ml dịch huyền phù ban đầu (a b) cho vào ống nghiệm chứa ml dịch pha loãng (6.2.1.2) chuẩn bị sẵn nhiệt độ phòng, tránh chạm pipet vào dịch pha loãng Trộn kỹ cách hút- thả 92 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón khoảng 10 lần với pipet khác có nút đầu hút vô trùng, để có dịch pha loãng mẫu có nồng độ pha loãng 10 Quá trình đợc lặp lại liên tục để có dịch mẫu có nồng độ pha loãng theo quy định sau: Đối với phân vi sinh vật chất mang trùng sử dụng nồng độ pha loãng 10-7; Đối với phân vi sinh vật chất mang không trïng sư dơng nång ®é pha lo·ng 10-5 6.2.2.2 Cấy mẫu Dùng pipet vô trùng riêng cho độ pha loãng lấy từ dịch mẫu có nồng ®é pha lo·ng 10-5,10-6,10-7 ®èi víi mÉu ph©n vi sinh vËt trªn nỊn chÊt mang trïng; 10-3, 10-4, 10-5 mẫu phân vi sinh vật chất mang không trùng, lợng dịch mẫu 0,05ml, cấy vào hộp lồng chứa môi trờng chuẩn bị sẵn 6.2.1.3 Mỗi mẫu đợc cấy lập lại hai hộp lồng Lắc nhẹ hộp lồng để dịch mẫu dàn trải bề mặt thạch, ý không để dịch mẫu dính vào thành hộp lồng, đợi bề mặt thạch khô, úp ngợc hộp lồng đa vào tủ ấm, điều chỉnh nhiệt độ tủ ấm cho phù hợp với yêu cầu loại vi sinh vật Thời gian nuôi 48 - 72 h cho vi sinh vËt mäc nhanh, 120 h cho lo¹i mäc chËm 6.2.3 Đọc kết Vi sinh vật cố định nitơ đợc tính số khuẩn lạc có tính đặc trng mọc môi trờng nuôi cấy Vi sinh vật tạp tất khuẩn lạc tính đặc trng mọc môi trờng nuôi cấy 6.2.4 Cách tính mật độ vi sinh vật đơn vị kiểm tra (gam hay mililit) Mật độ vi sinh vật đơn vị kiểm tra (A) đợc tính theo công thức: A a.20 d Trong đó: a: Số khuẩn lạc theo yêu cầu có hộp lồng; d: Nồng độ dịch pha loãng Chú thích: Số lợng khuẩn lạc trung bình đợc tính trung bình cộng số khuẩn lạc hộp lồng đợc cấy từ độ pha loãng, tính hộp lồng có chứa từ đến 50 khuẩn lạc; Số lợng khuẩn lạc trung bình đợc tính trung bình cộng số lợng khuẩn lạc hộp lồng ®ỵc cÊy tõ hai ®é pha lo·ng kÕ tiÕp cách tính số khuẩn lạc trung bình cộng độ pha loãng, số khuẩn lạc độ pha loãng 93 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón cao đợc nhân với 10, sau lấy trung bình cộng hai giá trị nêu tỷ số giá trị lớn giá trị nhỏ không lớn Nếu tỷ số lớn lấy giá trị nhỏ làm kết quả; Mật độ vi sinh vật đơn vị kiểm tra đợc biểu thị số 1,00 9,99 nhân với 10n, n số mũ thích hợp 6.3 Xác định hàm lợng chất dinh dỡng 6.3.1 Xác định hàm lợng nitơ (N) Tiến hành theo TCVN 5815 - 1994 6.3.2 Xác định hàm lợng photpho (P2O5 hữu hiệu) Tiến hành theo TCVN 5815 - 1994 6.3.3 Xác định hàm lợng kali (K2O) Tiến hành theo TCVN 5815 - 1994 6.3.4 Xác định hàm lợng chất hữu vi lợng Tiến hành theo phơng pháp qui định hành 6.3.5 Xác định độ ẩm Tiến hành theo TCVN 5815 - 1994 6.4 Báo cáo kết kiểm tra Trong báo cáo kết kiểm tra phải mô tả lại tình trạng mẫu trớc kiểm tra (tất chi tiết cần đủ để xác định mẫu), phơng pháp kiểm tra kết đạt đợc Báo cáo phải nêu tất điều kiện thao tác không qui định tiêu chuẩn đợc coi tuỳ ý lựa chọn nh tình ảnh hởng đến kết Yêu cầu bao gói, ghi nhãn, bảo quản hớng dẫn sử dụng 7.1 Phân vi sinh vật cố định nitơ phải đợc bao gói chất liệu bảo đảm không gây ®éc h¹i tíi vi sinh vËt, ngêi, ®éng, thùc vËt môi trờng sinh thái, đồng thời đảm bảo thời hạn bảo quản phân bón trớc điều kiện bất lợi từ bên 7.2 Trên bao (gói) sản phẩm phân vi sinh vật cố định nitơ phải có nhãn ghi với đầy đủ nội dung sau: - Tên sở sản xuất; - Tên sản phẩm tên khoa học loài vi sinh vật sử dụng; - Thành phần chất mang độ ẩm; - Công dụng; - Ngày sản xuất thời hạn bảo hành; 94 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón - Khối lợng tịnh; - Số đăng ký chất lợng 7.3 Sản phẩm ph¶i cã b¶n híng dÉn sư dơng kÌm theo (in bao bì in riêng) Nội dung hớng dẫn phải ghi đủ liều lợng qui trình sử dụng nh hiệu phân bón trồng hay khả thay loại phân bón khác Phụ lục A (Qui định) A.1 Môi trờng kiểm tra vi sinh vật cố định nitơ sống cộng sinh K2HPO4 MgSO4.7H2O NaCl Mannitol Cao nÊm men Aga Dung dÞch Công gô đỏ 0,5g 0,2g 0,1g 10,0g 0,5g 20,0g 2,5ml 1% Níc cÊt võa ®đ pH 1000ml 6,8 - 7,0 A.2 Môi trờng kiểm tra vi sinh vật cố định nit¬ sèng tù Mannitol K2HPO4 MgSO4.7H2O NaCl K2SO4 CaCO3 Aga Níc cÊt võa ®đ pH 20,0g 0,2g 0,2g 0,2g 0,1g 5,0g 20,0g 1000ml 6,8 - 7,0 95 tuyÓn tËp tiêu chuẩn phân bón A.3 Môi trờng kiểm tra vi sinh vật cố định nitơ sống hội sinh Axit malic KOH K2HPO4 FeSO4.7H2O MnSO4.H2O MgSO4.7H2O NaCl CaCl2 Na2MoO4 Bromotymol blue 0,5% (cån etylic) Aga Níc cÊt võa ®đ 96 5,0g 4,0g 0,5g 0,05g 0,01g 0,1g 0,02g 0,01g 0,002g 2ml 20,0g 1000ml ... tập tiêu chuẩn phân bón 5.1.5 Phải tiến hành lấy mẫu nơi nớc nóng, hoá chất độc hại, ánh nắng gay gắt bụi mẫu đợc đa vào dụng cụ chứa 5.1.6 Các dụng cụ lấy mẫu chứa mẫu phải vô trùng 5.2 Chuẩn. .. ống nghiệm chứa ml dịch pha loãng (6.2.1.2) chuẩn bị sẵn nhiệt độ phòng, tránh chạm pipet vào dịch pha loãng Trộn kỹ cách hút- thả 92 tuyển tập tiêu chuẩn phân bón khoảng 10 lần với pipet khác... nitơ (N) Tiến hành theo TCVN 5815 - 1994 6.3.2 Xác định hàm lợng photpho (P2O5 hữu hiệu) Tiến hành theo TCVN 5815 - 1994 6.3.3 Xác định hàm lợng kali (K2O) Tiến hành theo TCVN 5815 - 1994 6.3.4