Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài được thực hiện với mục tiêu thành lập một công thức hệ vi tự nhũ chứa cefpodoxime proxetil (SMEDDS-CP) bền, ổn định, có độ hòa tan cao để khắc phục những nhược điểm trên, từ đó có thể cải thiện sinh khả dụng của cefpodoxime proxetil.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 NGHIÊN CỨU ĐIỀU CHẾ HỆ VI T NH CHỨ CEFP D XI P XETI Phạm Thị Tuyết*, Huỳnh Trúc Thanh Ngọc*, Nguyễn Thi n Hải* TÓM TẮT Mục tiêu: Cefpodoxime proxetil (CP) kháng sinh cephalosporin hệ ba sử dụng để điều trị c{c bệnh nhiễm trùng Do tan nước v| bị ph}n hủy cholinesterase thể nên sinh khả dụng CP thấp (khoảng 50%) Đề t|i thực với mục tiêu th|nh lập công thức hệ vi tự nhũ chứa CP (SMEDDS-CP) bền, ổn định, có độ hòa tan cao để khắc phục nhược điểm trên, từ cải thiện sinh khả dụng CP Phương pháp Khảo s{t độ tan CP t{ dược tạo hệ vi tự nhũ Chọn pha dầu, chất diện hoạt, đồng diện hoạt dựa v|o độ tan, khả nhũ hóa thơng qua độ truyền qua (T%) Xây dựng giản đồ pha, chọn công thức tạo vi nhũ tương trong mờ để khảo sát tỷ lệ tải - 12,5% CP v| đ{nh gi{ cảm quan, độ bền kích thước giọt Chọn cơng thức (CT) có khả tải cao bền nhất, điều chế lặp lại Hệ đ{nh gi{ sơ tính thấm qua màng ruột chuột nhắt lập ex-vivo v| độ hòa tan in vitro so với chế phẩm đối chiếu Orelox® (Sanofi–Aventis) H|m lượng CP c{c CT v| môi trường khảo s{t định lượng phương pháp quang phổ UV-Vis bước sóng 262 nm v| 243 nm Kết quả: Đã chọn c{c t{ dược tiềm cho hệ SMEDDS-CP Xây dựng giản đồ pha v| đ{nh gi{ khả tải cao hệ Đã x}y dựng CT SMEDDS-CP bền gồm Capmul MCM: Transcutol HP (3/1)/Cremophor RH 40/Labrafil 2125 CS (25: 45 :30), tải 12,5% CP, có kích thước giọt trung bình 53,7 nm, phân bố đỉnh, zeta -8mV Hệ giải phóng hoạt chất nhanh, cao nhiều so với chế phẩm đối chiếu pH 1,2 v| 6,8 v| có tốc độ thấm qua ruột chuột nhắt cô lập khoảng lần Kết luận: Đã x}y dựng công thức SMEDDS chứa 12,5% CP qui mô 50 g Chế phẩm x}y dựng đạt yêu cầu đề ra, có độ hòa tan v| độ thấm cao Qui trình điều chế có tính lặp lại v| có triển vọng ứng dụng v|o thực tiễn Từ khóa: hệ vi tự nhũ (SMEDDS), cefpodoxime proxetil (CP), sinh khả dụng, độ hòa tan cao ABSTRACT FORMULATION OF SMEDDS CONTANING CEFPODOXIME PROXETIL Pham Thi Tuyet, Huynh Truc Thanh Ngoc, Nguyen Thien Hai * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 22 - No 1- 2018: 544 - 556 Objectives: Cefpodoxime proxetil (CP) is a third generation cephalosporin generally used for the treatment of infection The oral bioavailability of CP in humans is only 50% due to its low water solubility and the degradation of its ester side chain by cholinesterase The aim of this study was to formulate a stable SMEDDS (Self-microemulsifying drug delivery system) containing CP (SMEDDS-CP), with high dissolution in order to overcomes the above disadvantages and improve the solubility and bioavailability of CP Methods: Solubility of CP in some excipients that formed SMEDDS was determined Oils, surfactants and co-surfactants were chosen depending on solubility, emulsifying ability via transmission (T%) Phase diagrams were constructed The SMEDDS that formed clear microemulsions were loaded – 12.5% CP and evaluated the appearance, stability and droplet size The most stable SMEDDS-CP having highest drug loading was reprepared * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Nguyễn Thiện Hải ĐT: 0905352679 544 Email: thienhai2002@yahoo.com Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học and investigated the permeation through excised mice intestine and the dissolution test that compared with the reference product Orelox® (Sanofi–Aventis) UV method at 262 nm and 243 nm was used for determination of CP in the experiments Results: Capryol 90, Cremophor RH40, Transcutol HP, and Labrafil 2125CS was chosen as promising excipients for SMEDDS-CP Four phase diagrams were constructed and evaluated for highest CP loading The 12.5% CP loaded SMEDDS was successfully formulated containing Capmul MCM: Transcutol HP (3:1), Cremophor RH 40 and Labrafil 2125CS (25 : 45 : 30) This formula was stable and had droplet size average of 53,7nm, gausian distribution and zeta potential of -8mV The SMEDDS-CP released drug at a higher rate and faster than that of the reference product and the permeation rate was also higher approximately 3-fold Conclusion: The SMEDDS-CP was successfully formulated with a scale up to 50g This product satisfied physico-chemical requirements, has high dissolution and permeation The preparation of the SMEDDS-CP showed a reiteration and can apply in practical Key Words: Self-microemulsifying drug delivery system (SMEDDS), cefpodoxime proxetil (CP), bioavailability, high dissolution kích thước nhỏ, nhờ cải thiện độ ĐẶT VẤN ĐỀ tan, giảm ảnh hưởng số enzym phân Cefpodoxim kháng sinh nhóm hủy thuốc, tăng hấp thu v| l|m tăng sinh khả cephalosporin hệ thứ có hoạt tính kháng dụng thuốc(8,9) SMEDDS chứa CP làm khuẩn mạnh, có độ bền vững cao trước tăng sinh khả dụng giảm liều dùng CP công beta - lactamase khuẩn Gram dẫn đến giảm số tác dụng phụ điển hình }m v| Gram dương tạo Cefpodoxim sử kh{ng sinh tr n đường tiêu hóa(2,6) Ngo|i ra, hệ dụng dạng tiền chất có cấu trúc ester thống lipid SMEDDS chứa CP bảo vệ cefpodoxim proxetil (CP), hấp thu qua đường CP khỏi bị công cholinesterase ti u hóa v| chuyển hóa esterase cholinesterase khơng có khả thủy ph}n khơng đặc hiệu v| giải phóng cefpodoxim cho lipid, đồng thời l|m giảm ảnh hưởng pH t{c động kh{ng khuẩn(4) Do độ tan CP lên khả hấp thu thuốc(3) Đề t|i thực (6) nước thấp (400µg/ml) v| phân hủy CP với mục ti u th|nh lập cơng thức hệ vi enzym cholinesterase có đường ruột tự nhũ chứa CP (SMEDDS-CP) bền, ổn định, có dẫn đến sinh khả dụng thuốc thấp (khoảng độ hòa tan cao để khắc phục nhược điểm 50% CP hấp thu(3)), gây số tác dụng tr n, từ cải thiện sinh khả dụng CP phụ điển hình kh{ng sinh tr n đường tiêu ĐỐI TƢỢNG-PHƢƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU hóa(5) Việc nghi n cứu cải thiện độ tan CP góp phần cải thiện sinh khả dụng thuốc Nguyên vật liệu - trang thiết bị Nhiều nghi n cứu cải thiện độ tan CP Nguyên vật li u thực tạo hạt nano(10), tạo hệ phân Cefpodoxim proxetil USP (Ấn Độ - USP 38), tán rắn với chất mang ure hay PEG 6000(1), tạo cefpodoxim proxetil chuẩn (Viện Kiểm nghiệm phức bao với dẫn chất cyclodextrin(7), tạo hệ siêu Thuốc TP.HCM, số lô QT208040316) C{c t{ dược vi tự nhũ (SNEDDS)(2,6), hệ vi tự nhũ Capryol 90, Labrafac lipophile, Labrafil 1944CS, (SMEDDS - Self emulsifying drug delivery Labrafil 2125 CS, Transcutol HP, Labrasol system) cho thấy có nhiều ưu điểm th|nh (Gattefossé, Pháp) Cremophor RH40, phần đơn giản, dễ b|o chế v| n}ng cỡ lô, {p Cremophor EL, Kolliphor HS15 (BASF), dụng cho dược chất thuộc nhóm II v| propylen glycol, PEG 400, Tween 20, Tween 80, nhóm IV theo hệ thống ph}n loại sinh dược học Span 80 (Trung Quốc) Các dung mơi hóa chất n cạnh thuốc bao hạt dầu có Chuyên Đề Dƣợc 545 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 kh{c đạt yêu cầu phân tích dược dụng Vi n đối chiếu Orelox (viên nén bao phim 100mg, Sanofi Aventis, Pháp), số lô 2016015BT, hạn dùng 08/10/2019 cách cân 100 mg chất cho vào eppendorf chứa 200 mg chất diện hoạt 300 mg pha dầu chọn, tiến h|nh tr n Chọn hỗn hợp cho giá trị T% cao nhất(6) Trang thiết bị Bể đun c{ch thủy có phận lắc (MEMERT WNB 22- Đức), bể si u }m (Sonorex RK 510H Đức), m{y đo số khúc xạ (Mettler Toledo Thụy Sỹ), m{y đo kích thước nano (Horiba L 300 - Nhật), m{y ly t}m (Eppendorf minispin - Đức), máy quang phổ UV-Vis (Shimadzu UV1800 - Nhật Bản), máy thử độ hòa tan (PH RM TEST PTWS3C - Đức), m{y vortex (Labnet VX100 - Mỹ) Xây dựng giản đồ pha Phƣơng pháp nghiên cứu Nghiên cứu bào chế h vi tự nhũ Khảo s{t độ tan CP số môi trường pH v| c{c t{ dược tiềm tạo hệ vi tự nhũ Độ tan CP số môi trường pH v| t{ dược khảo sát phương ph{p bão hòa Cho lượng thừa CP v|o eppendorf chứa ml môi trường pH g t{ dược Vortex phút, siêu âm 15 phút sử dụng máy lắc ngang (48 giờ, 100 vòng/phút) nhiệt độ phòng Ly tâm, thu dịch trong, lọc qua m|ng lọc 0,45 µm, pha lỗng với methanol nồng độ thích hợp x{c định nồng độ CP phương ph{p UV-vis, mẫu trắng l| t{ dược khảo s{t pha loãng điều kiện(6) Giản đồ pha gồm pha dầu, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt xây dựng phương ph{p pha loãng với tỉ lệ thành phần chất đồng diện hoạt (0 - 30%), chất diện hoạt (30 - 60%), pha dầu (10 - 50%) với tổng tỷ lệ ba thành phần 100% Mỗi điểm giản đồ pha đươc điều chế cách cân thành phần công thức (CT), đun c{ch thủy 45 - 60 °C 10 phút, vortex phút đến đồng nhất, để yên 24 nhiệt độ phòng sau pha lỗng 100 lần dung dịch đệm pH 7,4, quan s{t sau 2, Nhũ tương hình th|nh đ{nh giá theo cảm quan với mức l| nhũ tương đục, mờ {nh xanh v| suốt Vùng tạo nhũ tương suốt mờ {nh xanh l| vùng tạo vi nhũ tương Giản đồ pha vẽ phần mềm Chemix School 3.6 Các CT với tỷ lệ pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện hoạt khác nằm vùng tạo vi nhũ tương chọn hệ vi tự nhũ (SMEDDS) tiềm để thực nghiên cứu Nghiên cứu bào chế h vi tự nhũ chứa CP Khảo sát hệ t{ dược dùng để điều chế SMEDDS Khảo sát khả tải CP SMEDDS tiềm Chọn pha dầu, chất diện hoạt v| chất đồng diện hoạt Chọn pha dầu dựa tr n độ tan, chất diện hoạt chất đồng diện hoạt dựa tr n độ tan v| độ truyền qua T% Với chất diện hoạt, độ truyền qua (T%) x{c định cách cân 300 mg chất cho vào eppendorf chứa 300 mg pha dầu Hỗn hợp đun c{ch thủy 45 - 60 °C 10 phút vortex phút Cân 50 mg hỗn hợp cho v|o bình định mức 50 ml ổ sung nước cất đến vạch, lắc kỹ, để ổn định v| đo T% bước sóng 638 nm Tương tự với chất đồng diện hoạt T% x{c định Các CT vùng tạo vi nhũ tương giản đồ pha chọn v| đ{nh gi{ khả tải hoạt chất tỷ lệ 5, 7,5, 10, 12,5% Cân 1g CT SMEDDS chọn cho v|o eppendorf Th m CP theo tỷ lệ tải khảo s{t, vortex, si u }m 30 phút, ly t}m (5000 vòng/phút, phút), loại CT bị kết tủa Để 24 giờ, pha loãng 100 lần dung dịch pH 7,4 X{c định độ truyền qua CT bước sóng 638 nm(11) Quan sát CT sau 2, 4, v| 12 CT chọn hệ tạo vi nhũ 546 Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 tương suốt, mờ xanh, khơng tủa có T% cao Đo kích thước giọt vi nhũ tương tạo thành Đo kích thước giọt phương ph{p t{n xạ ánh sáng (Horiba LA300 - Nhật) sau pha loãng phù hợp nước cất v| để y n Đ{nh gi{ độ bền c{c cơng thức SMEDDS có khả tải CP cao Chu kỳ nóng – lạnh: thực chu kỳ nóng lạnh oC 45 oC sau ly t}m (3500 vòng/ phút, 30 phút) Những cơng thức khơng có tủa, khơng tách lớp chọn cho thử nghiệm đông – rã đông Đông – rã đông: thực ba chu kỳ đông v| rã đông nhiệt độ -20 oC v| nhiệt độ phòng Những cơng thức đạt khơng có tượng váng tách lớp C{c cơng thức đạt độ bền theo dõi ngày cảm quan (màu sắc, tượng) CT đạt khơng có thay đổi màu sắc, váng hay tách lớp C{c công thức đạt y u cầu tiến h|nh lặp lại lần v| n}ng cỡ lô lên khoảng 50 g v| khảo sát lại độ bền c{c tính chất hệ SMEDDS Xây dựng quy trình điều chế SMEDDS-CP quy mơ 50g SMEDDS chứa cefpodoxim proxetil điều chế cách phối hợp hoạt chất vào tá dược có khả hòa tan hoạt chất cao phối hợp với c{c t{ dược lại Sơ đánh giá khả thấm SMEDDS-CP qua tá tràng chuột nhắt c lập đánh giá khả h a tan so với thuốc đối chiếu Sơ đ{nh gi{ khả thấm SMEDDS-CP qua tá tràng chuột nhắt cô lập Tiến hành: Chuột nhắt có khối lượng 20 – 25 g, nhịn ăn, uống nước 20 lựa chọn để nghiên cứu Chuột g}y m khí CO2, mở khoang bụng v| cô lập to|n đoạn ruột non từ đầu t{ tr|ng đến cuối hồi tr|ng có chiều dài - 11cm ngâm Chuyên Đề Dƣợc Nghiên cứu Y học dung dịch lạnh KRP (Krebs-RingerPhosphate- uffer), đoạn ruột sau loại bỏ màng nhầy lộn ngược Một đầu đoạn ruột cột kín, sau cho từ từ, tr{nh tạo bọt khí khoảng - ml dung dịch KRPB lạnh v|o b n ruột cho đoạn ruột có độ căng phồng phù hợp v| cột kín đầu lại Đoạn ruột cho vào becher chứa 50 ml dung dịch thuốc nghiên cứu có nồng độ 100 µg/ml (điều chế từ SMEDDS-CP v| thuốc đối chiếu Orelox ) dung dịch KRPB nhiệt độ 36,5 – 37,5oC(11) Sau 30 phút thu dịch bên ruột v| định lượng h|m lượng thuốc dịch UV-Vis bước sóng 243 nm Lơ thử, lơ chứng so sánh với lô trắng chứa t{ dược SMEDDS Kết thống k đ{nh gi{ phần mềm SPSS 22.0 (Statistical Product and Services Solutions) Độ thấm tương đối thuốc tính sau: C (µg/cm2) = ( C1 x V)/S1 C: Tính thấm tương đối (µg/cm2) C1: Nồng độ thuốc dịch ruột (µg/ml) = [ ATB (lô thuốc) – ATB (lô trắng)] x Cchuẩn/Achuẩn V: Thể tích dịch ruột thu (ml) S: Diện tích ruột (cm2) = (chiều dài ruột x đường kính ruột) x 3,14 Thử nghiệm độ hòa tan hệ SMEDDS-CP Hệ SMEDDS-CP đ{nh gi{ sơ khả phóng thích CP, so s{nh với viên đối chiếu thử nghiệm hòa tan môi trường pH 1,2 pH 6,8 Sử dụng 900 ml môi trường nhiệt độ 37 oC, thiết bị cánh khuấy tốc độ 100 vòng/phút SMEDDSCP đóng v|o nang cứng Trong suốt q trình thử nghiệm, ml mẫu thử lấy c{c thời điểm 15, 30, 45 v| 60 phút để định lượng v| thay ml môi trường đệm 547 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 KẾT QUẢ pha dầu để khảo sát hệ t{ dược tiềm Nghiên cứu bào chế hệ vi tự nhũ Với chất diện hoạt, độ tan CP Khảo sát độ tan CP số m i trường pH vcác tá dược tiềm tạo h vi tự nhũ Labrasol > Kolliphor HS15 > Tween 80 > Kết khảo s{t độ tan CP (Hydrophilic-Lipophilic Balance) cao cho số môi trường pH (hình 1) v| c{c Span 80 > Cremophor RH 40 > Tween 20 Nhìn chung, chất diện hoạt có hệ số HL khả hòa tan CP tốt t{ dược tiềm tạo hệ vi tự nhũ (hình 2) Với chất diện đồng diện hoạt v| chất trợ cho thấy số c{c pH khảo s{t, CP tan tan, kết khảo s{t cho thấy Trancutol HP nhiều pH 1,2 v| tan c{c có khả hòa tan CP cao pH kh{c Môi trường pH 1,2 chọn l|m chất diện đồng diện hoạt v| chất trợ tan môi trường định lượng nghiên cứu khảo s{t Do đó, Transcutol HP dùng Môi trường pH 7,4 có độ tan nhỏ làm chất trợ tan hệ SMEDDS chứa CP theo thực nghiệm có độ truyền n cạnh đó, Labrafil 1994 CS v| Labrafil qua nhỏ nên chọn l|m dung môi tạo vi 2125 CS l| c{c chất đồng diện hoạt dù khả nhũ tương c{c thử nghiệm s|ng lọc độ hòa tan CP khơng cao có gi{ bền hệ vi nhũ tương.Với pha dầu, kết trị HL cho thấy độ tan CP Capryol đồng diện hoạt để khảo s{t c{c thử nghiệm 90 > Capmul MCM > Maisine > Labrafac cao n n chọn l|m chất Capryol 90 v| Capmul MCM chọn l|m Hình 1: Độ tan CP dung dịch đệm pH kh{c 548 Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Hình 2: Độ tan CP c{c t{ dược tạo SMEDDS khác Khảo sát h tá dược dùng để điều chế SMEDDS Labrasol có khả hòa tan CP cao, Độ truyền qua phối hợp thành khả phối hợp với pha dầu Do đó, phần pha dầu, chất diện hoạt, chất đồng diện chọn Cremophor RH 40 làm chất diện hoạt Về hoạt chất trợ tan thể bảng cho lựa chọn chất đồng diện hoạt chất trợ tan, với thấy Capryol 90 có độ truyền qua cao hệ Capryol 90 - Cremophor RH 40, Transcutol Capmul MCM kết hợp với chất diện HP cho kết tốt với hệ Capmul hoạt Ở hai pha dầu khảo s{t, độ truyền qua MCM - Cremophor RH 40, Labrafil M2125 CS v| kết hợp với Cremophor RH 40 cao Labrafil M1944 CS cho kết tốt Bảng 1: Kết phần trăm độ truyền qua (T%) chất diện hoạt chất đồng diện hoạt với pha dầu capryol 90 v| capmul MCM (n = 3) với c{c tỷ lệ khảo s{t chất diện hoạt - pha dầu (1:1) v| chất đồng diện hoạt – pha dầu – chất diện hoạt (1 : : 2) T(%) Chất diện hoạt Twen 20 Twen 80 Span 80 CremophorRH40 Koliphor HS 15 Labrasol Capryol 90 - Cremophor RH 40 Labrafil M1944 CS Labrafil M2125 CS Propylenglycol Transcutol HP PEG 400 Lauroglycol 90 97,1 96,2 99,7 99,7 99,7 94,4 Capryol 90 Capmul MCM 97,7 93,0 74,3 99,7 97,7 51,3 96,1 94,4 61,2 99,2 97,5 49,4 Xây dựng giản đồ pha Với c{c t{ dược chọn, tiến hành xây dựng giản đồ pha hình Nghiên cứu bào chế hệ vi tự nhũ chứa CP Khảo sát khả tải CP SMEDDS tiềm Với hệ Capryol 90-Cremophor RH40- Chuyên Đề Dƣợc T(%) Chất đồng diện hoạt Capmul MCM - Cremophor RH 40 99,7 99,5 96,5 98,5 97,5 98,1 Transcutol HP, kết khảo s{t tỷ lệ tải v| tính chất vi nhũ tương hình th|nh trình b|y bảng cho thấy CT tải 5% CP có tỉ lệ Cremophor RH 40 lớn 50% v| dầu tỉ lệ dầu nhỏ 30% tạo vi nhũ tương v| không tủa 12 CT có tỉ lệ chất diện hoạt cao hệ c|ng v| độ truyền qua cao, hệ tỉ lệ dầu 20% 549 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Các CT có tỉ lệ pha dầu lớn 30% có cơng thức R11 tạo vi nhũ tương v| bền 12 C{c công thức từ R1 đến R11 không tủa 12 nghiên cứu tải 7,5% cho thấy hệ tải tối đa 7,5% CP (CT R2 v| R5) Cần khảo s{t hệ kh{c với tỷ lệ tải cao v| bền Với hệ Capmul MCM- Cremophor RH40Transcutol HP, kết bảng cho thấy hệ không tốt hệ Capryol 90 - Cremophor RH40 Transcutol HP Hệ tải 5% c{c công thức TS1, TS2, TS3, TS4, TS5, TS6, TS7, TS9 Khi tăng tỷ lệ tải l n 7,5%, c{c CT khảo s{t bị tủa sau 12 Nhìn chung, thay dầu Capmul MCM Capryol 90 hệ Capryol 90 - Cremophor RH 40 - Transcutol HP khả tải (Bảng 3) Với hệ Capmul MCM : Transcutol HP (3:1) Cremophor RH 40 - Labrafil 1944 CS, qua 23 CT khảo s{t, kết từ bảng v| bảng cho thấy hệ tải 12% CP với 13 CT Tuy nhi n CT L11 (25: 45: 30) v| CT L12 (25 : 40 : 35) đạt ti u chí đề kích thước hạt, số ph}n t{n (< 0,4) Khi tải l n đến 12,5% hai CT L11 v| L12 bền vững 10 sau pha loãng v| bị tủa sau 12 Ngo|i ra, với hệ Capmul MCM : Transcutol HP (3:1) - Cremophor RH 40 - Labrafil 1944 CS, c{c CT khảo s{t bị đổi m|u (m|u sậm đen lại) sau ng|y bảo quản B A C Đục D Trong mờ, ánh xanh Trong suốt Hình 3: Giản đồ pha: Capryol 90-Cremophor RH40-Transcutol HP (A), Capmul MCM- Cremophor RH40-Transcutol HP (B), Capmul MCM: Transcutol HP (3:1) - Cremophor RH 40 - Labrafil 1944 CS (C), Capmul MCM: Transcutol HP (3:1) – Cremophor RH 40 - Labrafil 2125 CS (D) 550 Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 ảng Nghiên cứu Y học Khả tải CP hệ Capryol 90 - Cremophor RH 40 - Transcutol HP CT Tỷ lệ (Capryol 90 : Cremophor RH 40 : Transcutol HP) R1 R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8 R9 R10 R11 R12 R13 R14 10:60:30 10:50:40 10:40:50 10:30:60 20:60:20 20:50:30 20:40:40 20:30:50 30:60:10 30:50:20 30:40:30 30:30:40 40:50:10 40:40:20 Tính chất vi n tư ng tạo t àn t o t i gian T(%)* 2h 4h 8h 12h 5% 7,5% 5% 7,5% 5% 7,5% 5% 7,5% 5% 7,5% 92,35 92,52 ++ 91,33 90,12 92,12 84,56 ++ ++ 90,21 85,44 + + + 94,32 92,32 95,34 84,33 + + + + 94,11 70,88 + + + + 92,12 50,67 ++ ++ ++ ++ 93,12 87,33 + + + ++ 91,26 70,33 + + ++ ++ 90,22 72,33 + ++ ++ ++ 88,35 ++ ++ 84,32 + + + + 87,12 + + + + (-): Trong, mờ; (+): Đục; (++): Tủa; T*: Độ truyền qua hệ vi nhũ tương pH 7,4 pha loãng 100 lần ảng Khả tải 5% CP hệ Capmul MCM - Cremophor RH 40 - Transcutol HP CT Tỷ lệ (Capmul MCM : Crem.RH 40 : Transcutol HP) TS1 TS2 TS3 TS4 TS5 TS6 TS7 TS8 TS9 TS10 TS11 TS12 TS13 TS14 10:60:30 10:50:40 10:40:50 10:30:60 20:60:20 20:50:30 20:40:40 20:30:50 30:60:10 30:50:20 30:40:30 30:30:40 40:50:10 40:40:20 Tính chất vi n T (%)* 92,23 90,12 90,00 89,23 94.51 93.40 92.01 91.49 95.23 67.56 48.56 42.20 40.20 30.71 tư ng tạo t àn t o t 2h 4h 8h ++ ++ + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ i gi n 12h ++ ++ ++ ++ ++ ++ (-): Trong, mờ; (+): Đục; (++): Tủa; T*: Độ truyền qua hệ vi nhũ tương pH 7,4 pha lỗng 100 lần Vì hệ n|y không phù hợp cho việc x}y dựng CT SMEDDS-CP, cần có nghi n cứu th m thay đổi m|u n|y Với hệ Capmul MCM: Transcutol HP (3:1) – Cremophor RH 40 - Labrafil 2125 CS, việc thay Labrafil 1944 CS Labrafil 2125 CS v| tiếp tục khảo s{t tỷ lệ tải 12,5%, cho thấy hệ tạo th|nh ổn định v| không bị biến m|u sau 10 ng|y bảo quản nhiệt độ phòng Kết khảo s{t trình b|y bảng v| bảng Kết từ bảng cho thấy số 12 CT khảo sát, có CT cho khả tải đến 12,5% CT LL3, LL7, LL11 pha loãng tạo vi nhũ tương mờ, có T(%) cao đo kích thước giọt Chuyên Đề Dƣợc kỹ thuật tán xạ {nh s{ng CT LL3 có kích thước giọt nằm vùng SMEDDS có PDI nhỏ Khi tăng tỉ lệ dầu (LL7, LL11) kích thước giọt vi nhũ tương tăng, gi{ trị nằm giới hạn kích thước hệ SMEDDS, PDI cao cho thấy hệ n|y đồng LL3 Kết từ bảng cho thấy CT LL3 bền vững, đạt ti u chuẩn đề Như vậy, công thức LL3 cho khả tải cao 12,5% bền thời gian theo dõi, có kích thước giọt trung bình 53,7 nm, PDI thấp giải phân bố hẹp 25 100 nm tiếp tục nghiên cứu l| CT tốt số c{c CT v| t{ dược khảo s{t cho điều chế hệ SMEDDS-CP 551 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học ảng CT Khả tải CP hệ Capmul MCM : Transcutol HP (3:1) - Cremophor RH 40 - Labrafil 1944 CS Tính chất vi n T (%)* Tỷ lệ (Capmul MCM- Transcutol HP (3:1) : Cremophor RH 40 : Labrafil 1944CS) 2h @ 7,5 @ 10 @ 12 tư ng tạo t àn t 4h ot 8h i gi n 12h 7,5 10 12 7,5 10 12 7,5 10 12 7,5 10 12 L1 20:60:20 86,3 - L2 20:55:25 91,5 - L3 20:50:30 93,2 88,6 - - L4 20:45:35 90,5 87,9 - - L5 20:40:40 90,7 86,3 - - L6 20:35:45 90,3 - - - - L7 20:30:50 90,4 - - - + L8 25:60:15 93,5 - ++ ++ ++ 87,9 ++ ++ ++ - ++ ++ - - - - - - - ++ - - - - - - - - - - - - - - L9 25:55:20 92,5 88,6 88,6 - - - - - - - - - - - - L10 25:50:25 91,9 87,3 87,3 - - - - - - - - - - - - L11 25:45:30 91,5 86,4 86,4 - - - - - - - - - - - - L12 25:40:35 91,7 85,2 85,2 - - - - - - - - - - - - L13 25:35:40 86,0 - - - - L14 25:30:45 86,3 - ++ ++ ++ L15 30:60:10 93,1 - ++ ++ ++ L16 30:55:15 92,3 84,3 - - - - - - - - L17 30:50:20 90,1 86,8 - - - - - - - - L18 30:45:25 88,4 84,2 84,2 - - - - - - - - - - - - L19 30:40:30 87,6 82,3 82,3 - - - - - - - - - - - - L20 35:60:05 93,5 - L21 35:55:10 94,5 89,4 - - - - - - - - L22 35:50:15 93,5 80,2 - - - - - - - - L23 35:45:20 88,7 84,1 - - - - - - - - 84,1 ++ - ++ - ++ - - @ (-): Trong, mờ; (+): Đục; (++): Tủa; T*: Độ truyền qua hệ vi nhũ tương pH 7,4 pha loãng 100 lần; : Tỷ lệ tải CP ảng Kết ph}n bố kích thước hạt c{c hệ SMEDDS Capmul MCM : Transcutol HP (3:1) - Cremophor RH 40 - Labrafil 1944 CS khảo s{t với tỷ lệ tải 10 v| 12% CT íc t ước hạt trung Số pic # 10% L3 L4 L5 # 12% n (nm) Độ phân bố kíc t ước hạt (nm) PDI 10% 12% 10% 12% 10% 71,0 77,3 0,460 0,504 60 - 200 42,3 0,431 15 - 100 52,4 0,470 40 - 200 12% 10 - 1000 L9 1 33,7 68,5 0,317 0,528 14 - 100 50 - 300 L10 1 38,4 54,8 0,360 0,472 15 -100 20 - 150 L11 1 32,3 35,3 0,165 0,204 15 - 100 10 - 100 L12 1 36,5 38,5 0,189 0,183 18 - 100 15 - 100 L16 L17 L18 1 48,6 L19 1 L23 1 78,0 0,391 69,5 25 - 150 0,515 60 - 200 54,0 0,171 0,472 20 - 110 30 - 220 50,2 61,6 0,454 0,464 20 - 110 10 - 800 42,6 116,6 0,150 0,458 20 - 100 80 - 400 # : Tỷ lệ tải CP 552 Chuyên Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 ảng Khả tải CP hệ Capmul MCM : Transcutol HP (3:1) - Cremophor RH 40 - Labrafil 2125 CS Tỷ lệ (Capmul MCMTranscutol HP (3:1) : Cremophor RH 40 : Labrafil 2125CS) 25:55:20 25:50:25 25:45:30 25:40:35 30:55:20 30:50:25 30:45:25 30:40:30 35:55:10 25:50:15 35:45:20 35:40:25 CT LL1 LL2 LL3 LL4 LL5 LL6 LL7 LL8 LL9 LL10 LL11 LL12 Nghiên cứu Y học Tín c ất vi n tư ng tạo t àn t ot i gi n T(%) 2h 4h 8h 12h 88,9 87,2 90,3 86,6 87,3 91,4 90,2 84,3 86,8 87,2 92,3 85,4 + + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ Kích t ước giọt Trung Dải phân PDI n (nm) bố (nm) Số pic 53,7 0,280 25 - 100 86,93 0,420 15 - 200 97,26 0,337 15 - 200 (-): Trong, mờ; (+): Đục; (++): Tủa ảng Kết đ{nh gi{ độ bền c{c CT SMEDDS c{c hệ có tỷ lệ tải CP cao Khả tải (%) CT (a) L11, L12 (b) LL3 Độ bền nhiệt động Nóng lạnh Ly tâm Đ ng - rã đ ng 12,0 Đ t Đ t Đ t Đổi màu 12,5 Đ t Đ t Đ t ng ổi màu (a) (b) : Hệ Capmul MCM: Transcutol HP (3:1)/ Cremophor RH40/ Labrafil L1944 CS HP (3:1)/ Cremophor RH40/ Labrafil L2125 CS Xây dựng qu tr nh điều chế SMEDDS-CP quy mô 50g Khảo sát lặp lại CT LL3 N}ng quy mô LL3 l n khoảng 50 lần, khảo s{t độ lặp lại v| độ bền Thành phần cho 56,25g SMEDDS-CP LL3 sau: 6,25g CP; 8,00 g Capmul MCM; 4,50g Transcutol HP; 22,50 g Cremophor RH40 v| 15,00 g Labrafil 2125CS Vì SMEDDS l| hệ đồng n n thứ tự điều chế không ảnh gian điều chế nhanh, tránh tác dụng nhiệt ánh sáng ảnh hưởng đến hoạt chất n n hòa tan CP v|o Capmul MCM v| Transcutol HP trước Sau đó, th m Cremophor RH 40 v| Labrafil 2125CS, khuấy m{y khuấy từ 30 phút, thu hệ SMEDDS-CP Sơ đồ quy trình điều chế SMEDDS chứa CP trình Chuyên Đề Dƣợc : Hệ Capmul MCM: Transcutol Kết khảo s{t độ bền CT LL3 qui mô 50 g thể bảng cho thấy n}ng quy mô điều chế sản phẩm ổn định qua thử nghiệm pha loãng pH khác thử nghiệm độ bền nhiệt động CT cho kích thước giọt trung bình 60,99 nm, PDI 0,307 đạt ti u chuẩn SMEDDS, cho thấy có triển vọng ứng dụng v|o thực tiễn ảng Kết khảo s{t độ bền CT LL3 qui mô điều chế 50 g Đặc điểm hưởng nhiều đến tính chất hệ Để thời b|y hình ảo quản t p ng s u ngày Độ bền vi n ũ tương m i trường pH (pha loãng 100 lần) sau 12 Độ bền n iệt ộng SMEDDS-CP Tính chất, thông số pH 1,2 pH 3,0 Trong mờ, không tủa pH 4,5 Trong xanh, không tủa pH 6,8 Trong xanh,khơng tủa pH 7,4 Trong xanh,khơng tủa Nóng-l nh Đ t Đ ng-r Ly tâm í Trong, khơng tủa t c h t (nm) ng Đ t Đ t 60,99 PDI 0,307 Thế zeta (mV) - 8,5 553 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 Nghiên cứu Y học Cepodoxim Capmul MCM Cremophor RH 40 Proxetil (CP) Transcutol HP Labrafil 2125 CS Cân Sơ đánh giá khả thấm SMEDDSCP qua tá tràng chuột nhắt c lập Kết nghiên cứu thử nghiệm ex – vivo hệ SMEDDS thể bảng Cân H n ợp CP - Capmul MCM - Transcutol HP uấ t 15 p t, 60 v p i u âm 15 p t t Cân Dung ịc CP - Capmul MCM - Transcutol HP uấ t 30 p 60 v p t Sơ đánh giá thấm SMEDDSCP qua tá tràng chuột nhắt c lập đánh giá h t n so với thuốc đối chiếu Dữ liệu thu thập xử lý thống kê phần mềm SPSS 22.0 Phân tích kiểm chuẩn Kolomogorow – Smirnow, số liệu thuộc phân phối chuẩn, kết biểu diễn dạng M±SEM So sánh giá trị TB lô Oneway ANOVA với phép kiểm LDS Dunnett´s T3 để so sánh khác biệt lô Với số liệu không phân phối chuẩn, phân tích thống kê test Kruskal Wallis Mann – Whitney U test để so sánh kết lơ Sự khác biệt c{c lơ có ý nghĩa p < 0,05 Kết cho thấy t, p (trắng - đối chiếu) = 0,035464 < 0,05 nên kh{c có ý nghĩa thống kê SMEDDS - CP Hình 4: Sơ đồ qui trình điều chế SMEDDS chứa cefpodoxim proxetil qui mô 50 g p (trắng - thử) = 0,000006 < 0,05 nên khác có ý nghĩa thống kê p (thử - đối chiếu) = 0,000046 < 0,05 nên khác có ý nghĩa thống kê Bảng 9: Kết nghiên cứu thử nghiệm tính thấm ex – vivo SMEDDS-CP từ CT LL3 STT TB Diện tích ruột (cm ) 12,246 13,031 12,090 9,240 23,864 12,460 17,280 25,120 15,666 Lơ th Thể tích ruột (ml) 0,62 0,97 0,51 1,15 1,43 1,30 1,48 1,46 1,115 L đối chiếu Lơ trắng Diện tích Thể tích Diện tích Thể tích Độ hấp thu A Độ hấp thu A Độ hấp thu A 2 ruột (cm ) ruột (ml) ruột (cm ) ruột (ml) 11,1940 13,188 1,12 8,823 17,584 1,21 5,242 12,5560 13,345 1,10 6,465 17,584 1,50 6,304 12,2488 16,391 1,25 6,975 14,318 1,16 8,402 11,480 16,391 1,25 9,278 16,485 1,54 5,256 13,820 18,023 1,24 9,110 19,782 1,57 5,710 11,275 16,014 1,05 7,990 18,683 1,31 5,536 11,740 19,342 1,29 6,365 13,475 25,74 1,45 10,075 12,137 ± 0,325 17,321 1,219 8,135 ± 0,496 17,406 1,38 6,075 ± 0,492 Độ thấm tương đối thuốc thử = 9,141 µg/cm2 Độ thấm tương đối thuốc chứng = 3,071 µg/cm2 Như vậy, lơ thử có độ hấp thu tăng rõ rệt so với lơ trắng lô chứng, cao 2,97 lần so với lô chứng 554 Kết sơ đ{nh gi{ khả thấm SMEDDS-CP qua ruột chuột cô lập cho thấy khả thấm hệ tự nhũ cao gần lần so với thuốc đối chiếu Cần có thử nghiệm đ{nh gi{ sinh khả dụng để khẳng định điều n|y v| kết thu l| tương tự Chun Đề Dƣợc Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 LƯỢNG CP PHĨNG THÍCH TÍCH LŨY (%) Thử nghi m độ hòa tan in vitro h SMEDDSCP từ CT LL Kết thử độ hòa tan viên nang chứa SMEDDS-CP so sánh với viên đối chiếu Orelox hai môi trường pH 1,2 6,8 thể hình cho thấy vi n nang chứa hệ SMEDDS-CP cho khả giải phóng 100 A 90 80 70 60 50 40 30 20 SMEDDS 10 Viên đối chiếu 0 15 30 THỜI GIAN (PHÚT) 45 60 hoạt chất nhanh, tối thiểu 90% hoạt chất hòa tan môi trường pH 1,2 tối thiểu 80% pH 6,8 15 phút đầu thử nghiệm Khả giải phóng hoạt chất hệ SMEDDS hai pH cao so với viên đối chiếu, giải phóng 30% v| 59% CP pH 1,2 6,8 Điều n|y phù hợp với công bố liên quan hệ tự nhũ khả cải thiện độ hòa tan hoạt chất Ngồi ra, hệ vi tự nhũ ph}n t{n tốt so với viên đối chiếu LƯỢNG CP PHĨNG THÍCH TÍCH LŨY (%) vấn đề giảm liều l| cần thiết Việc giảm liều l|m giảm độc tính, giảm lượng t{ dược khối lượng chế phẩm Nghiên cứu Y học 100 B 90 80 70 60 50 40 30 20 SMEDDS 10 Viên đối chiếu 0 15 30 45 60 THỜI GIAN (PHÚT) Hình 4: Đồ thị biễu diễn khả giải phóng hoạt chất SMEDDS-CP v| viên đối chiếu Orelox môi trường pH 1,2 (A) v| mơi trường pH 6,8 (B) hoạt chất thuộc nhóm II v| nhóm IV theo hệ BÀNLUẬN thống ph}n loại sinh dược học C{c kết Kết thử độ hòa tan viên nang chứa nghi n cứu công bố đa số tập trung v|o SMEDDS-CP so sánh với vi n đối chiếu c{c dạng thuốc tim mạch, rối loạn mỡ m{u, Orelox hai môi trường pH 1,2 6,8 tiểu đường với liều lượng dược chất nhỏ thể hình thường 20 mg với tỷ lệ tải chủ yếu l| Viên nang chứa hệ SMEDDS-CP cho khả 10% Trong nghi n cứu n|y, với hoạt giải phóng hoạt chất nhanh, tối thiểu chất l| kh{ng sinh cefpodoxim proxetil với cỡ 90% hoạt chất hòa tan mơi trường pH liều cao 50, 100 v| 200 mg, qua khảo s{t với 1,2 tối thiểu 80% pH 6,8 15 phút số t{ dược tiềm s n có, tìm đầu thử nghiệm Khả giải phóng cơng thức SMEDDS gồm pha dầu l| hỗn hợp hoạt chất hệ SMEDDS hai pH Capmul MCM - Transcutol HP (3:1), chất diện cao so với vi n đối chiếu, giải phóng 30% v| hoạt Cremophor RH 40 chất đồng diện hoạt 59% CP pH 1,2 v| 6,8 Điều n|y phù hợp Labrafil 2125 CS với tỷ lệ c{c pha l| 25% với công bố liên quan hệ tự nhũ khả 45% - 30%, cho thấy khả tải đến 12,5% cải thiện độ hòa tan hoạt chất Ngoài hoạt chất Đ}y l| tỷ lệ tải kh{ cao ra, hệ vi tự nhũ ph}n t{n tốt so hệ tự nhũ Hệ cho vi nhũ tương có kích thước với vi n đối chiếu trung bình khoảng 60 nm, với dải phân bố hẹp, zeta -8,5 mV Kết tốt Hệ vi tự nhũ ứng dụng kh{ nhiều hệ si u vi nhũ tương chứa CP nghiên cải thiện độ tan v| sinh khả dụng c{c Chuyên Đề Dƣợc 555 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 22 * Số * 2018 cứu Date cộng năm 2007 (160 nm)(6) v| tương đương với kết thu nhóm nghiên cứu ajaj v| cộng năm 2013 (60 nm, zeta -4 -12mV)(2) Quy trình b|o chế l| hòa tan đơn giản, có độ lặp lại v| dễ d|ng n}ng cỡ lơ KẾT UẬN Nghiên cứu xây dựng cơng thức qui trình bào chế SMEDDS- CP có thành phần gồm 25% Capmul MCM - Transcutol HP (3:1), 45% chất diện hoạt Cremophor RH 40 v| 30% chất đồng diện hoạt Labrafil 2125 CS tải 12,5% hoạt chất đạt yêu cầu độ ổn định c{c môi trường pH khác nhau, bền nhiệt động, phân bố kích thước giọt đạt u cầu có độ hòa tan cao vi n đối chiếu Qui trình cho thấy có độ ổn định, lặp lại với cỡ lơ 50 g v| có triển vọng ứng dụng v|o thực tiễn 10 TÀI LIỆU THAM KHẢO 556 Arora SC, Sharma PK, Irchhaiya R, Khatkar A, Singh N, Gagoria J (2010) Development, characterization and solubility study of solid dispersion of cefpodoxime proxetil by solvent evaporation method International Journal of ChemTech Research, (2), pp.1156-1162 Bajaj A, Rao MR, Khole I, Munjapara G (2013) Selfnanoemulsifying drug delivery system of cefpodoxime proxetil containing tocopherol polyethylene glycol succinate Drug Development and Industrial Pharmacy, 39(5), pp 635-645 Borin MT (1991) A review of the pharmacokinetic of cefpodoxim proxetil Drugs, 42 (3), pp.13-21 11 Bộ Y tế (08 - 2006), Chuyên luận riêng Cefpodoxim - Dược thư quốc gia Việt Nam, Bộ Y Tế, Hà Nội, CD – ROM Crauste-Manciet S, Brossard D, Decroix MO, Farinotti R, Chaumeila JC (1998) Cefpodoxim proxetil protection from intestinal lumen hydrolysis by oil-in-water submicron emulsion International Journal of Pharmaceutics, 165, pp.97-106 Date AA, Nagarsenker MS (2007) Design and evaluation of self nano emulsifying drug delivery systems (SNEDDS) for cefpodoxime proxetil International Journal of Pharmaceutics, 329 (1-2), pp.166-172 Gupta S, Chandel P, Bagga K (2014) Formulation and Evaluation of Cefpodoxime Proxetil Dispersible Tablet International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 27(2), pp 250-255 Preethi S, Nishanth K, Satish P, Uma SMS, Thakur RS (2012) Approaches to development of solid - self micron emulsifying drug delivery system: Formulation techniques and dosage forms: a review Asian Journal of Pharmacy and Life Science, (2), pp 214, 225 Rahman A, Hussain A, Hussain S, Mirza MA, Iqal Z (2013) Role of excipients in successful development of selfemulsifying/microemulsifying drug delivery system (SEDDS/SMEDDS) Drug Development and Industrial Pharmacy, 39 (1), pp.1-19 Singh C, Tiwari V, Mishra CP, Shanka R, Sharma D, Jaiswal S (2015) Fabrication of cefpodoxime proxetil nano particles by solvent anti-solvent precipitation method for enhanced dissolution International Journal of Research in Pharmaceutical and Nano Sciences, 4(4), pp.217–235 Vijaya C, Nilesh M.K (2014) Formulation Studies on Novel Self – Solidifying Self-Nanoemulsifying Drug Delivery Systems of Nebivolol Hydroclorid Phamaceutical Nanotechnology, (2), pp.87-100 Ngày nhận báo: 18/10/2017 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2017 Ng|y b|i b{o đăng: 15/03/2018 Chuyên Đề Dƣợc ... diện hoạt khác nằm vùng tạo vi nhũ tương chọn hệ vi tự nhũ (SMEDDS) tiềm để thực nghiên cứu Nghiên cứu bào chế h vi tự nhũ chứa CP Khảo sát hệ t{ dược dùng để điều chế SMEDDS Khảo sát khả tải... liên quan hệ tự nhũ khả 45% - 30%, cho thấy khả tải đến 12,5% cải thiện độ hòa tan hoạt chất Ngoài hoạt chất Đ}y l| tỷ lệ tải kh{ cao ra, hệ vi tự nhũ ph}n t{n tốt so hệ tự nhũ Hệ cho vi nhũ tương... so với vi n đối chiếu, giải phóng 30% v| 59% CP pH 1,2 6,8 Điều n|y phù hợp với công bố liên quan hệ tự nhũ khả cải thiện độ hòa tan hoạt chất Ngồi ra, hệ vi tự nhũ ph}n t{n tốt so với vi n đối