Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu tiến hành với mục tiêu: Xác định tỷ lệ nhiễm Adenovirus trong năm 2016 ở trẻ em điều trị tại Bệnh viện Nhi Trung ương và một số đặc điểm dịch tễ của trẻ có nhiễm Adenovirus. Nghiên cứu thưc hiện với 2409 trẻ có độ tuổi từ 1 tháng đến 15 tuổi điều trị tại các khoa lâm sàng Bệnh viện Nhi Trung ương. Sử dụng kỹ thuật real-time PCR trong việc xác định virut Adenovirus trong mẫu bệnh phẩm dịch hô hấp.
TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM ADENOVIRUS BẰNG KỸ THUẬT REALTIME PCR VÀ MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ Ở TRẺ EM ĐIỀU TRỊ TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG Phùng Thị Bích Thuỷ Bệnh viện Nhi Trung ương Viêm phổi, viêm phế quản phổi nhiễm virut đường hơ hấp cấp nhóm bệnh phổ biến trẻ em, đặc biệt trẻ tuổi Đặc điểm lâm sàng chung biểu viêm đường hô hấp kèm theo triệu chứng riêng biệt đặc trưng virut gây Bệnh nhiễm Adenovirus bệnh virut cấp tính với hội chứng lâm sàng đa dạng, trường hợp viêm phổi Adenovirus thường nặng, có tỷ lệ tử vong cao, đặc biệt trẻ em người suy giảm miễn dịch Chính nghiên cứu tiến hành với mục tiêu: Xác định tỷ lệ nhiễm Adenovirus năm 2016 trẻ em điều trị Bệnh viện Nhi Trung ương số đặc điểm dịch tễ trẻ có nhiễm Adenovirus Nghiên cứu thưc với 2409 trẻ có độ tuổi từ tháng đến 15 tuổi điều trị khoa lâm sàng Bệnh viện Nhi Trung ương Sử dụng kỹ thuật real-time PCR việc xác định virut Adenovirus mẫu bệnh phẩm dịch hô hấp Nghiên cứu phát 428 trường hợp trẻ dương tính (17,8%) Nhóm tuổi có tỷ lệ cao trẻ từ 12 tháng đến 60 tháng (42,52%) đặc biệt trẻ từ 12 đến 24 tháng chiếm 19,15% Tỷ lệ dương tính trẻ nam cao trẻ nữ (64,95% so với 35,05%) Mùa hay gặp mùa thu đơng với khí hậu lạnh ẩm (60,04%) Đề tài nghiên cứu cho thấy tỷ lệ trẻ nhiễm virut Adenovirus chiếm đa số mùa thu đơng nhóm trẻ từ 12 đến 60 tháng Kỹ thuật real-time PCR phát Adenovirus có giá trị chẩn đốn sớm bệnh phẩm lâm sàng thực bệnh viện Từ khố: realtime PCR, Adenovirus, nhiễm trùng hơ hấp trẻ em I ĐẶT VẤN ĐỀ Virut nguyên nhân gây viêm phổi, viêm phế quản phổi nhiễm virut đường hô hấp cấp phổ biến trẻ em, đặc biệt trẻ tuổi Một phân tích cộng gộp dựa 51 nghiên cứu với 56.091 trẻ viêm phổi phải nhập viện cho thấy có 50,4% trường hợp xác định nguyên virut, ghi nhận 5,8% viêm phổi virut Adenovirus [1] Adenovirus nhóm virut gây bệnh mắt, đường tiêu hoá, đường tiết niệu, gặp hệ thần kinh đặc biệt phổ biến nhóm bệnh đường hô hấp Tuy tác nhân thường gặp trường hợp thường nặng, có tỷ lệ tử vong cao, để lại di chứng, đặc biệt trẻ nhỏ người suy giảm miễn dịch [2; 3] Di chứng xảy sau nhiễm trùng đường hô hấp Adenovirus gồm: giãn phế quản, xơ hoá phổi mãn viêm phổi Đặc biệt, Adenovirus type 1, 3, 4, 7, 21 thường gây viêm tiểu phế quản tắc nghẽn (dẫn đến hội chứng phổi tăng sáng bên hay hội chứng Swyer-James), tác nhân gây viêm phổi nặng tối cấp trẻ nhỏ Nhiễm trùng đường hơ hấp cấp tính Adenovirus thường gặp vào thu (từ tháng đến tháng 10), đông (tháng 11 đến tháng 1) Địa liên hệ: Phùng Thị Bích Thủy, Bệnh viện Nhi đầu xuân (tháng 3) thời tiết giao mùa Trung ương với khí hậu lạnh, ẩm Email: thuyphung.nhp@gmail.com Ngày nhận: 31/7/2018 Ngày chấp thuận: 05/9/2018 TCNCYH 115 (6) - 2018 Hiện nay, chẩn đốn nhiễm Adenovirus sử dụng số phương pháp ni 73 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC cấy tế bào, phát kháng nguyên trực tiếp, real-time PCR Hầu hết type Adenovirus phát triển tốt nuôi cấy tế bào, nhiên phương pháp thường đòi hỏi từ đến ngày thường áp dụng sở nghiên cứu khơng thể giúp ích cho chẩn đốn nguyên sớm bệnh viện Kỹ thuật miễn dịch thường phát giai đoạn muộn sau - 10 ngày nhiễm Adenovirus hạn chế chẩn đoán sớm Real-time PCR kỹ thuật sinh học phân tử cho kết nhanh (4 - giờ) với độ nhạy, độ đặc hiệu cao (trên 97%) [4], hỗ trợ bác sĩ lâm sàng Vật liệu phương pháp Mẫu bệnh phẩm: Dịch tỵ hầu, dịch nội khí quản dịch rửa phế quản phế nang bệnh nhi khoa lâm sàng chuyển tới khoa Nghiên cứu sinh học phân tử bệnh truyền nhiễm để thực xét nghiệm real time PCR Adenovvirus Mẫu dịch hô hấp sau thu thập tiến hành tách chiết RNA/DNA tổng số (MagNA Pure LC Total Nucleic acid Isolation Kit- Roche) hệ thống máy tách chiết tự động MagNA Pure LC 2.0 (Roche) việc chẩn đốn sớm, mang lại hiệu Q trình chạy real-time PCR thực điều trị cao, giảm chi phí thời gian nằm viện hệ thống ABI 7500 Fast xác định cho người bệnh, đặc biệt đối tượng trẻ em Adenovirus [5].Trình tự mồi xi: GCC ACG Chính vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu với mục tiêu xác định Adenovirus mẫu bệnh phẩm dịch hô hấp bệnh nhi việc sử dụng kỹ thuật real-time PCR tìm hiểu số đặc điểm dịch tễ trẻ nhiễm Adenovirus điều trị Bệnh viện Nhi Trung ương II ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP GTG GGG TTT CTA AAC TT, mồi ngược: GCC CCA GTG GTC TTA CATGCA CAT C Probe: FAM – TGC ACC AGA CCC GGG CTC AGG TAC TCC GA – TAMRA Thành phần phản ứng gồm: 0,625µl nồng độ 10pM primer loại 0,5 µl nồng độ 10pM probe, 12,5 µl 2X PCR master mix (Qiagen), 5µl DNA H2O bổ sung tổng phản ứng 25µl Chương trình phản ứng: 500 - phút, 950 - 15 phút 45 chu kỳ 950 - 15 giây 580 - phút Mẫu chứng dương Đối tượng sử dụng từ plasmid trường đại học Goth- 2409 trẻ có độ tuổi từ 01 tháng đến 15 tuổi có chẩn đốn nhiễm trùng đường hô hấp nghi enburg - Thụy Điển mẫu chứng âm Adenovirusvới triệu chứng sốt, viêm long đường hô hấp trên, biểu viêm PCR Xét nghiệm real-time PCR chẩn đoán thành phần nước hỗn hợp phản ứng Adenovirus sử dụng mồi oligonucleotide phổi: ho, suy hô hấp s.điều trị Bệnh viện Nhi Trung ương probe thủy phân đánh dấu kép (dual la- Thời gian thực nghiên cứu: Từ nguyên lý real-time PCR nhằm phát định tháng 01 năm 2016 đến tháng 12 năm 2016 beled hydrolysis probes) (Taqman) theo tính in vitroAdenovirus Taqman probe Nghiên cứu mơ tả, hồi cứu dựa thu gắn với reporter đầu 5’ thập số liệu thống kê số liệu theo hồ sơ bệnh án bệnh nhi điều trị bệnh viện quencher đầu 3’ Khi trạng thái nguyên Nhi Trung ương hiệu ứng quencher Tuy nhiên, suốt 74 vẹn, reporter không phát huỳnh quang TCNCYH 115 (6) - 2018 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC q trình phản ứng PCR, Taqman probe tín hiệu huỳnh quang cho máy real-time PCR gắn với mạch khuôn DNA bổ sung tiếp Thời gian ước tính cho việc chạy mẫu khoảng bị phân hủy DNA polymerase, giải 125 phút, kết đọc phân tích phóng reporter từ quencher, nhờ phát hệ thống máy real-time ABI 7500 Fast III KẾT QUẢ Kết phân tích real-time PCR phát Adenovirus Hình Kết phân tích real-time PCR phát Adenovirus Trên đồ thị này, số chu kỳ PCR thể trục x tín hiệu huỳnh quang từ phản ứng, tỷ lệ với lượng sản phẩm khuếch đại ống, thể trục y Giá trị ngưỡng biểu đường thẳng nằm ngang, mẫu dương tính biểu đồ thị hình sin vượt giá trị ngưỡng, ngưỡng phát tương đương với giá trị chù kỳ trục x mẫu âm tính đường giá trị ngưỡng Chúng tiến hành phân tích kết mẫu bệnh phẩm dịch hô hấp 2409 bệnh nhi Chứng âm chứng dương chạy lần thực Các mẫu có tín hiệu tương tự mẫu chứng dương vượt qua tín hiệu chu kỳ 38 xem dương tính với virut Adeno (hình 1) Tỷ lệ nhiễm Adenovirus bệnh nhân nhiễm trùng đường hô hấp Biểu đồ Tỷ lệ phát trẻ dương tính với Adenovirus TCNCYH 115 (6) - 2018 75 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Áp dụng kỹ thuật real-time PCR phát 428 trường hợp trẻ dương tính, chiếm 17,8% tổng số 2409 mẫu bệnh phẩm dịch hô hấp (biểu đồ 1) Dựa số liệu dương tính với Adenovirus nghiên cứu tiến hành tìm hiểu số đặc điểm dịch tễ trẻ nhiễm Adenovirus điều trị bệnh viện Nhi Trung ương Tỷ lệ trẻ nhiễm Adenovirus theo giới tính Biểu đồ Tỷ lệ trẻ nhiễm Adenovirus theo giới tính Theo kết biểu đồ 2, tổng số 428 trẻ phát dương tính với Adenovirus có 278 trẻ nam 150 trẻ nữ Như tỷ lệ trẻ nam nhiễm virut adeno cao hẳn trẻ nữ (64,95% so với 35,05%) Phân bố trẻ dương tính Adenovirus theo mùa Biểu đồ Phân bố trẻ dương tínhAdenovirus theo mùa Nghiên cứu chúng tơi cho thấy, 428 bệnh nhi chẩn đoán nhiễm trùng đường hơ hấp phát 93 trường hợp dương tính vào mùa xuân, 78 trường hợp vào mùa hạ, mùa thu đông xấp xỉ 130 trường hợp 76 TCNCYH 115 (6) - 2018 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC Phân bố trẻ dương tính Adenovirus theo nhóm tuổi Bảng Phân bố trẻ dương tính vớiAdenovirustheo nhóm tuổi Dưới tháng - 12 tháng 12 - 60 tháng Trên 60 tháng Tổng Số trẻ (N) 100 126 182 20 428 Tỷ lệ (%) 23,36 29,43 42,52 4,69 100 200 182 150 126 100 100 50 20 < tháng - 12 tháng 12 - 60 tháng > 60 tháng Biểu đồ Sự phân bố trẻ dương tính với Adenovirus theo nhóm tuổi Bảng hình mơ tả phân bố trẻ nhiễm Adenovirus theo nhóm tuổi, chúng tơi thấy trẻ có tỷ lệ Adenovirus dương tính cao từ 12 tháng đến 60 tháng với 182/428 trẻ (chiếm 42,52%) đặc biệt trẻ từ 12 tháng đến 24 tháng 82 trẻ (19,15%) Ở nhóm trẻ tháng từ tháng đến 12 tháng tỷ lệ phát thấp 100/428 trẻ 126/428 Tỷ lệ trẻ mắc thấp nhóm trẻ 60 tháng (4,69%) IV BÀN LUẬN so với nghiên cứu tác giả giới Theo tác giả Ko DH cộng sử Real-time PCR kỹ thuật cho phép phát dụng real-time PCR đa mồi phân tích 3446 ca định lượng tích luỹ DNA khuếch nhiễm khuẩn đường hơ hấp Hàn Quốc năm đại phản ứng xảy So với 2017 cho thấy tác nhân Adenovirus chiếm PCR truyền thống, real-time PCR có ưu điểm 12,5% [6] Tác giả Jonnalagadda nghiên cứu lớn khả xác định số lượng tác nhân gây viêm phổi nặng 406 trẻ khuôn mẫu ban đầu với xác độ Ecuador cho thấy có đến 15,3% trẻ dương nhạy cao phạm vi biến thiên rộng tính với virut adeno Tại Châu Mỹ La Tinh nói Hơn nữa, liệu real-time PCR chung Ecuador nói riêng, viêm phổi cộng đánh giá trực tiếp mà không cần điện di đồng nguyên nhân gây tử vong gel, giúp tiết kiệm thời gian làm giảm nguy bệnh tật trẻ em có nghiên ngoại nhiễm, loại bỏ thao tác sau cứu khảo sát nguyên nhân dẫn đến viêm phổi phản ứng khuếch đại nơi [7] Ở Việt Nam, tác giả Do AHL Kết phù hợp TCNCYH 115 (6) - 2018 năm 2011 cộng nghiên cứu 309 77 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC trẻ từ tháng đến 13 tuổi khu vực phía mặt niêm mạc phế quản trẻ chưa Nam phát tỷ lệ trẻ nhiễm virut hoàn chỉnh nên khả chống chịu Những trường hợp viêm phổi Adenovirus adeno 5% [8] Như thấy, việc phát kịp thời tác nhân gây nhiễm khuẩn đường hô hấp, tránh để lại biến chứng nguy hiểm thực cần thiết, đặc biệt đối tượng trẻ nhỏ Nghiên cứu tương ứng với kết nghiên cứu số tác Gilles Guerrier năm 2012 cho thấy có đến 58% trẻ mắc nam giới [9] Năm 2016 LjubinSternak S nghiên cứu nguyên nhân đặc điểm lâm sàng nhiễm trùng hô hấp trẻ em Croatia tỷ lệ tương ứng trẻ nam/trẻ nữ 1,4/1 năm 2010 1,5/1 năm 2015 [10] Hiện chưa có tài liệu thống kê nguyên nhân nhiễm Adenovirus theo giới tính nhiên lý giải Việt Nam nguyên nhân nam giới chiếm tỷ lệ cao nữ giới xem yếu tố cân giới tính với tỷ lệ nam giới ngày tăng đặc biệt số 2409 trẻ nhập viện tỷ lệ nam vượt trội hẳn so với nữ (1,85/1) Nghiên cứu cho thấy nhiễm Adenovirus chủ yếu vào mùa thu đông, nguyên nhân phần tính chất khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa đặc trưng nước ta Khi thời tiết giao mùa từ thu sang đơng với khí hậu lạnh, ẩm thấp thấy tháng này, có song song bệnh nhân bị nhiễm trùng hô hấp cấp tăng cao Hơn tỷ lệ xác định virut dương tính bệnh nhân nhiễm trùng hô hấp cao hẳn Tác giả Gilles Gurrier năm 2012 đưa kết nghiên cứu phân bố chung virut đạt đỉnh vào mùa thu đông [9] thời kỳ thường nặng tử vong [11] Từ 12 tháng đến 60 tháng giai đoạn trẻ mắc cao ngồi đáp ứng miễn dịch chưa tốt, trẻ chịu ảnh hưởng thêm yếu tố nguy bên lây nhiễm từ nhà trẻ, trường học, mơi trường sinh sống Đa phần trẻ em bị mắc bệnh lại bị nhiễm týp Adenovirus khác Hiện đến chưa có nghiên cứu rõ vai trò thời gian miễn dịch sau mắc Adenovirus, nhiên có đến 70-80% trẻ tuổi có kháng thể trung hòa kháng ngun Adenovirus type 2, 50% với type 5, gần 100% người lớn có kháng thể đặc hiệu với nhiều týp Adenovirus [11] V KẾT LUẬN Kỹ thuật realtime PCR có giá trị chẩn đốn nhanh, xác phát Adenovirus dịch hô hấp triển khai thành xét nghiệm thường quy bệnh viện Nhi Trung ương Nghiên cứu phát 428 trẻ nhiễm Adenovirrus (chiếm 17,8%) tổng số 2409 trường hợp nhiễm trùng hô hấp điều trị bệnh viện Nhi Trung ương Dựa số liệu dương tính với Adenovirus cho thấy số đặc điểm dịch tễ sau: nhóm trẻ có tỷ lệ nhiễm Adenovirus cao từ 12 - 24 tháng số trẻ 60 tháng Tỷ lệ trẻ nam phát dương tính cao trẻ nữ Mùa hay gặp mùa thu đông với khí hậu lạnh ẩm Lời cảm ơn Trẻ giai đoạn từ đến tháng phát dương tính với Adenovirus, thấy Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể cán lứa tuổi thân trẻ chưa có miễn khoa Nghiên cứu Sinh học phân tử bệnh dịch chủ động, chủ yếu kháng thể từ mẹ truyền sang, lượng IgA dịch tiết bề truyền nhiễm, Bệnh viện Nhi Trung ương nơi 78 thực thu thập số liệu nghiên cứu TCNCYH 115 (6) - 2018 TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌC TÀI LIỆU THAM KHẢO Ivana L (2013) Viral etiology of hospitalized acute lower respiratory infections in children under years of age – a systematic review and meta-analysis Croat Med J, 54, 122 - 134 Jung-Y H (2001) Lower Respiratory Tract Infections due to Adenovirus in Hospitalized Korean Children: Epidemiology, Clinical Features and Prognosis Clinical Infectious Diseases, 32, 1423 - 1429 John C.H (1992) Adenoviruses in the Immunocompromised Host, Clinical microbiology review, 262 - 274 Sağlık I1(2013) Investigation of adenoviruses in children with lower respiratory tract infections Mikrobiyol Bul, 47(2), 282 - 294 Albert Heim (2003) Rapid and quantitative detection of human adenovirus DNA by real-time PCR, J.Med.Virol, 70, 228 - 239 Ko DH (2017) Analysis of Respiratory Viral Infections Detected Using Multiplex RealTime PCR in Hwaseong, Korea from 2013 to 2015, Clin lab, 63(5), 1003 - 1007 Jonnalagadda (2017) Etiology of severe pneumonia in Ecuadorian children Plos one, 12(2) Do AHL (2011) Viral Etiologies of Acute Respiratory Infections among Hospitalized Vietnamese Children in Ho Chi Minh City 2004 - 2008 Plos one, 6(3) Gilles Guerrier, MD (2012) Acute viral lower respirsatory tract infections in Cambodian children: Clinical and epidemiologic characteristics 10 Ljubin-Stenark S (2016) Etiology and Clinical Characteristics of Single and Multiple Respiratory Virus Infections Diagnosed in Croatian Children in Two Respiratory Seasons, Journal of pathogens 11 Cherry JD (2014) Adenoviruses Textbook of pediatric infectious diseases, 7th ed, WB Saunders Philadelphia, 1888 - 1911 Summary DETERMINATION OF ADENOVIRUS INFECTION IN CHILDREN BY REAL TIME PCR AND DESCRIPTION OF ITS CHARACTERISTICS AT THE NATIONAL PEDIATRICS HOSPITAL Pneumonia, bronchopneumonia and acute respiratory infections are common in children, especially children under years old The clinical characteristics of the disease are inflammation of the respiratory tract accompanied by specific symptoms characterized by each virus Adenovirus infection is an acute virus infection coupled with a variety of clinical syndromes such as severe cases of Adenovirus pneumonia and high mortality rates, particularly in children and people with immunodeficiency The purpose of this study is to determine the rate of Adenovirus infection in 2016 in children treated at the National Hospital of Pediatrics The study detected 428 Adenovirus infection in 2409 children from month to 15 years old who were admitted at the Clinical department of the National Pediatrics Hospital We use real-time PCR technique to identify Adenovirus in respiratory specimens The study found 428 positive cases (17.8%) The highest rates are in children from 12 months to 60 months old (42.52%), especially children 12 to 24 months accounting for 19.15% The prevalence of positive is higher in boys than that of girls (64.95% versus 35.05%) The most common season is cold and humid winter (60.04%) The study showed that the prevalence of adeno-infected children is predominantly in the winter-fall period for children aged from 12 to 60 months Real-time PCR positive detection techniques for Adenovirus have early diagnostic value in the hospital setting Key word: real time PCR, Adenovirus, respiratory infection for children TCNCYH 115 (6) - 2018 79 ... với mục tiêu xác định Adenovirus mẫu bệnh phẩm dịch hô hấp bệnh nhi việc sử dụng kỹ thuật real-time PCR tìm hiểu số đặc điểm dịch tễ trẻ nhi m Adenovirus điều trị Bệnh viện Nhi Trung ương II ĐỐI... Adenovirus điều trị bệnh viện Nhi Trung ương Tỷ lệ trẻ nhi m Adenovirus theo giới tính Biểu đồ Tỷ lệ trẻ nhi m Adenovirus theo giới tính Theo kết biểu đồ 2, tổng số 428 trẻ phát dương tính với Adenovirus. .. quy bệnh viện Nhi Trung ương Nghiên cứu phát 428 trẻ nhi m Adenovirrus (chiếm 17,8%) tổng số 2409 trường hợp nhi m trùng hô hấp điều trị bệnh viện Nhi Trung ương Dựa số liệu dương tính với Adenovirus