Đang tải... (xem toàn văn)
Sự tạo chồi in vitro đã được nghiên cứu khá rộng rãi trên nhiều đối tượng thực vật. Trong nghiên cứu này, chúng tôi nghiên cứu ảnh hưởng của cường độ ánh sáng, myo-inositol và adenin sulphate lên khả năng tạo chồi in vitro chuối Laba. Các chồi đơn in vitro được cấy vào môi trường MS có bổ sung 5 mg/l BA (6-benzylaminopurine) kết hợp với myo-inositol (0; 100; 300; 500; 700 mg/l) hoặc adenin sulphate (0; 80; 100; 130; 160 mg/l). Sau 4 tuần nuôi cấy, môi trường MS bổ sung 5 mg/l BA + 100 mg/l adenin sulphate hoặc 100 mg/l myo-inositol cho số lượng chồi cao nhất (6,9 chồi/mẫu ở nồng độ adenin sulphate là 100 mg/l và 8 chồi/mẫu ở nồng độ myo-inositol là 100 mg/l). Khi nuôi cấy dưới cường độ ánh sáng 18,70 ± 1,00 mol m-2 s -1 cho kết quả hình thành chồi cao nhất (4,33 chồi/mẫu) trong các điều kiện khảo sát: Khuếch tán, 18,70 ± 1,00; 26,20 ± 1,00; 42,00 ± 1,00 mol m -2 s -1.
TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 180-187 TĂNG HỆ SỐ NHÂN NHANH CHỒI CHUỐI LABA (MUSA SP.) NUÔI CẤY IN VITRO BẰNG CÁCH SỬ DỤNG ÁNH SÁNG, MYO-INOSITOL VÀ ADENIN SULPHATE Đỗ Đăng Giáp*, Phạm Ngọc Vinh, Trần Trọng Tuấn, Nguyễn Thị Huyền Trang, Phạm Ngô Ánh Thư, Thái Xuân Du Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam, (*)dodanggiap@gmail.com TĨM TẮT: Sự tạo chồi in vitro nghiên cứu rộng rãi nhiều đối tượng thực vật Trong nghiên cứu này, nghiên cứu ảnh hưởng cường độ ánh sáng, myo-inositol adenin sulphate lên khả tạo chồi in vitro chuối Laba Các chồi đơn in vitro cấy vào mơi trường MS có bổ sung mg/l BA (6-benzylaminopurine) kết hợp với myo-inositol (0; 100; 300; 500; 700 mg/l) adenin sulphate (0; 80; 100; 130; 160 mg/l) Sau tuần nuôi cấy, môi trường MS bổ sung mg/l BA + 100 mg/l adenin sulphate 100 mg/l myo-inositol cho số lượng chồi cao (6,9 chồi/mẫu nồng độ adenin sulphate 100 mg/l chồi/mẫu nồng độ myo-inositol 100 mg/l) Khi nuôi cấy cường độ ánh sáng 18,70 ± 1,00 mol m-2s-1 cho kết hình thành chồi cao (4,33 chồi/mẫu) điều kiện khảo sát: Khuếch tán, 18,70 ± 1,00; 26,20 ± 1,00; 42,00 ± 1,00 mol m-2s-1 Từ khóa: Musa, adenin sulphate, chồi in vitro, chuối, cường độ ánh sáng, myo-inositol MỞ ĐẦU Chuối tên gọi cho loài thuộc chi Musa, họ Musaceae đánh giá lương thực hàng triệu người nước phát triển Theo thống kê Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên hiệp quốc (FAO) năm 2005, chuối trồng 107 quốc gia, chủ yếu khắp vùng nhiệt đới Việc nghiên cứu hệ thống nhân giống chuối năm 1983 lần đưa vào sản xuất thương mại nhằm cung cấp giống kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Hwang et al (1984) [8] Sau có nhiều nghiên cứu nhân giống lồi từ vật liệu khác thân hành, chồi rễ [3], chồi đỉnh [16] nhiều nghiên cứu khác nhằm cải tiến quy trình nhân giống loài Việc khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng 6--dimethyl-aminopurine (2-iP) [4], BAP [3,19], 6(4-hydroxy-3-methyl-trans-2 butyl amino purine) (zeatin) [18], BAP thidiazuron (TDZ) [6] vi nhân giống, giống chuối khác tiến hành Ở Việt Nam, diện tích trồng chuối đạt khoảng 100.000 với sản lượng 1,2 triệu tấn/năm Theo đề án quy hoạch phát triển rau hoa, cảnh đến năm 2010, tầm nhìn 2020 Bộ Nơng nghiệp Phát triển nông thôn, chuối nhiều địa phương chọn làm 180 trồng chủ lực Trong đó, chuối Laba biết đến đặc sản riêng, loài trồng tạo nên thương hiệu riêng tỉnh Lâm Đồng Tuy nhiên, giống chuối Laba có nguy bị dần quan tâm khâu nhân giống nên trở nên già cỗi, thối hóa kéo theo suất giảm, chất lượng sa sút nghiêm trọng Trước tình trạng này, Sở Khoa học Cơng nghệ Lâm Đồng có nhiều cơng trình nghiên cứu bảo tồn phát triển giống chuối Bước đầu, người ta thành công việc nhân giống chuối Laba phương pháp nuôi cấy mô Nhằm làm tăng hệ số nhân nhanh, báo tiến hành khảo sát ảnh hưởng yếu tố cường độ ánh sáng, hàm lượng myoinositol, andenine sulphate tác động lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba nuôi cấy in vitro PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu Nguyên liệu chồi chuối Laba in vitro có chiều cao từ 1-2 cm có cặp phòng thí nghiệm CNTBTV (Viện Sinh học nhiệt đới) Các chồi đơn cắt giữ lại phần gốc có chiều cao 3-5 mm, bỏ hết phần lá, phần mô bị đen sử dụng làm mẫu cấy cho thí nghiệm Mơi trường ni cấy Do Dang Giap et al Môi trường nuôi cấy môi trường MS [13] có bổ sung 30 g/l sucrose, g/l agar, 15% nước dừa thành phần chất khảo sát nghiên cứu Các môi trường chỉnh pH khoảng 5,7-5,8 trước hấp khử trùng nhiệt độ 121ºC, áp suất atm 15 phút Bố trí thí nghiệm Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba nuôi cấy in vitro Các chồi đơn in vitro ni cấy mơi trường có bổ sung BA nồng độ thay đổi (0; 1; 3; 5; mg/l) nhiệt độ 25 ± 2ºC, thời gian chiếu sáng 12 giờ/ngày, cường độ ánh sáng 18,70 ± 1,00 mol m-2 s-1 nhằm tìm nồng độ BA thích hợp cho việc nhân chồi chuối Laba Kết nồng độ BA thích hợp cho cảm ứng tạo chồi sử dụng cho thí nghiệm Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba nuôi cấy in vitro Các chồi đơn in vitro ni cấy mơi trường có bổ sung BA nồng độ thích hợp cho cảm ứng tạo chồi thu khảo sát nồng độ BA điều kiện phòng sáng với nhiệt độ 25 ± 2ºC, thời gian chiếu sáng 12 giờ/ngày cường độ ánh sáng khảo sát là: khuếch tán, 18,7 ± 1,0; 26,2 ± 1,0; 42,0 ± 1,0 mol m-2 s-1 Kết cường độ ánh sáng hiệu tạo chồi sử dụng cho khảo sát Khảo sát ảnh hưởng adenin sulphate lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba nuôi cấy in vitro Các chồi đơn in vitro nuôi cấy mơi trường có bổ sung BA nồng độ thích hợp khảo sát trên, kết hợp với adenin sulphat nồng độ 0; 80; 100; 130; 160 mg/l Khảo sát ảnh hưởng myo inositol lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba nuôi cấy in vitro Các chồi đơn in vitro nuôi cấy mơi trường bổ sung myo-inositol có nồng độ khác (0; 100; 300; 500; 700 mg/l), kết hợp với BA nồng độ thích hợp Xử lý thống kê số liệu Các tiêu theo dõi: số chồi, số hình thành, trọng lượng tươi, chiều cao trung bình hàm lượng chlorophyll (ở khảo sát cường độ ánh sáng) chồi thu nhận sau tuần nuôi cấy Số liệu ghi nhận xử lý phần mềm SPSS theo phương pháp Duncan [5] mức ý nghĩa 0,05 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba nuôi cấy in vitro Đối với phát sinh hình thái thực vật cytokinin nhóm chất điều hòa sinh trưởng thực vật, ảnh hưởng đến phân chia tế bào, thay đổi ưu phân hóa chồi Trong nhân giống in vitro, BA cytokinin sử dụng nhiều nghiên cứu sản xuất [19] Arinaitwe et al (2000) [1] nghiên cứu ảnh hưởng BA, zeatin, 2-iP, kinetin cho rằng, giống chuối Musa spp cảm ứng BA tốt so với loại cytokinin khác Trong thí nghiệm này, chúng tơi khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA khác đến hình thành phát triển chồi in vitro chuối Laba Kết thu sau tuần nuôi cấy trình bày bảng Bảng Ảnh hưởng nồng độ BA đến khả tạo chồi in vitro chuối Laba sau tuần nuôi cấy BA Số chồi Trọng Chiều cao trung bình Số (mg/l) hình thành lượng tươi (g) chồi (mm) 1,45b* 2,91c 0,36c 22,91a 3,09a 5,91b 0,74b 17,64bc 4,09a 6,18b 0,85ab 19,36ab 4,64a 10,00a 1,19a 18,73abc 4,09a 8,45ab 0,91ab 14,36c *a, b c thể khác biệt có ý nghĩa mức tin cậy P = 0,05 theo phương pháp Duncan 181 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 180-187 Từ số liệu thu nhận cho thấy, nồng độ BA mg/l có số lượng chồi hình thành, số trọng lượng tươi đạt cao so với nồng độ BA khác khảo sát (4,64 chồi/mẫu, 10,00 lá/mẫu 1,19 g/mẫu) (bảng 1) Kết tương tự với kết nghiên cứu Cronauer & Krikorian (1984) [3] Vuylsteke (1989) [19], khảo sát nồng độ BA môi trường nhân giống kết luận tỷ lệ phát sinh chồi nhiều với nồng độ BA mg/l Trong báo cáo Wong (1986) [19] khảo sát ảnh hưởng nồng độ BA cho kết cảm ứng tạo chồi tốt nồng độ cao từ đến 10 mg/l (số lượng chồi hình thành trung bình 2,6 đến 4,3 chồi/mẫu) Tuy nhiên, sử dụng nồng độ BA cao gây biến dị, rối loạn sinh lý, thay đổi hình thái sau [18] Vuylsteke (1989) [19] khuyến cáo rằng, nồng độ BA thích hợp cho nhân giống in vitro chuối khoảng mg/l Sự khác biệt số lượng chồi hình thành báo cáo Wong (1986) [19] kết mà thu nhận cho thấy cảm ứng tạo chồi mẫu chuối không phụ thuộc vào nồng độ cytokinin ngoại sinh mà phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác, khác biệt nguồn gốc mẫu cấy Quan sát hình thái mẫu nhận thấy, có tác dụng việc kích thích tăng số lượng chồi hình thành mẫu BA khơng có tác dụng việc kéo dài chồi Tất mẫu ni mơi trường có bổ sung BA có chiều cao trung bình thấp so với mẫu đối chứng (hình 1) Điều lý giải có mặt BA nên ức chế tượng ưu ngọn, BA cảm ứng hình thành chồi Còn mơi trường đối chứng khơng có có mặt diện BA, chồi đơn tiếp tục kéo dài tượng ưu xảy Qua kết thu được, nhận thấy rằng, nồng độ BA thích hợp bổ sung vào mơi trường nuôi cấy mg/l, nồng độ sử dụng cho khảo sát nghiên cứu Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba ni cấy in vitro Sự phát sinh hình thái thực vật bị ảnh hưởng nhân tố môi trường nhiệt độ, CO2, chất dinh dưỡng… Trong đó, chất lượng ánh sáng, cường độ ánh sáng đóng vai trò quan trọng, ảnh hưởng đến tăng trưởng chồi, bên cạnh vai trò quang hợp Trong thí nghiệm này, chúng tơi khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng khác đến hình thành phát triển chồi chuối Laba in vitro sau tuần ni cấy Kết thu trình bày bảng Bảng Ảnh hưởng cường độ ánh sáng đến khả tạo chồi in vitro chuối Laba sau tuần nuôi cấy Cường độ ánh sáng Số chồi Trọng lượng Chiều cao trung bình Số hình thành tươi (g) chồi (mm) (mol m-2 s-1) Khuếch tán 3,57a* 5,00a 0,61a 14,14a 18,70 ± 1,00 4,33a 7,40a 0,82a 13,53a 26,20 ± 1,00 3,67a 6,13a 0,64a 14,73a 42,00 ± 1,00 3,87a 6,07a 0,56a 12,27a *a thể khác biệt có ý nghĩa mức tin cậy P = 0,05 theo phương pháp Duncan Bảng Ảnh hưởng cường độ ánh sáng đến hàm lượng chlorophyll mẫu sau tuần nuôi cấy Cường độ Tổng số Tỷ số Chlorophyll a Chlorophyll b ánh sáng chlorophyll chlorophyll (mg/g lá) (mg/g lá) (mg/g lá) a/b (mg/g lá) (mol m-2 s-1) Khuếch tán 0,96a* 0,56a 1,53a 2,15a 18,70 ± 1,00 1,41a 0,63a 2,04a 2,26a 26,20 ± 1,00 1,09a 0,52a 1,60a 2,10a 42,00 ± 1,00 1,07a 0,52a 1,59a 2,02a 182 Do Dang Giap et al Sau tuần nuôi cấy, nhận thấy mẫu phát triển đồng điều kiện ánh sáng Ở cường độ ánh sáng 18,70 mol m-2 s-1 cho kết số chồi số hình thành cao (4,33 chồi/mẫu; 7,40 lá/mẫu), điều kiện ánh sáng khác, số chồi, số hình thành đạt 3,57 đến 3,87 chồi/mẫu 5,00 đến 6,07 lá/mẫu Ngoài ra, hàm lượng chlorophyll tổng tỷ lệ chlorophyll a/b mẫu cường độ ánh sáng 18,70 mol m-2s-1 cao so với công thức khác (bảng 3) Cường độ ánh sáng nhân tố quan trọng quang hợp Cường độ ánh sáng cao hay thấp ảnh hưởng đến tăng sinh chồi hàm lượng chlorophyll chồi Khi gặp điều kiện ánh sáng yếu hay cường độ ánh sáng thấp, thường có xu hướng tổng hợp nhiều chlorophyll để đáp ứng khả quang hợp Nhận xét hoàn toàn phù hợp với kết mà thu Trong điều kiện ánh sáng khuếch tán cường độ ánh sáng 18,70 mol m-2s-1, hàm lượng chlorophyll cao so với điều kiện ánh sáng lại Ngồi ra, cường độ ánh sáng cao làm tổn thương cấu trúc máy quang hợp, phá hủy hệ thống sắc tố Điều giải thích nuôi điều kiện chiếu sáng mạnh 42,00 mol m-2s-1 lại cho hàm lượng chlorophyll mẫu thấp màu sắc bạc so với công thức lại (hình 2d) Khảo sát ảnh hưởng myo-inositol lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba nuôi cấy in vitro Myo-inositol thành phần chủ yếu môi trường nuôi cấy mô thực vật Ngồi tác dụng kích thích tăng trưởng tế bào myo-inositol liên quan đến vận chuyển cytokinin [7] Trong thí nghiệm này, chúng tơi khảo sát ảnh hưởng nồng độ myo-inositol khác đến hình thành phát triển chồi in vitro chuối Laba Kết ghi nhận sau tuần nuôi cấy trình bày bảng Bảng Ảnh hưởng nồng độ myo-inositol đến khả tạo chồi in vitro chuối Laba sau tuần nuôi cấy Myo-inisitol (mg/l) 100 300 500 700 Số chồi hình thành 4,10b* 8,00a 5,00b 6,00ab 6,00ab Số Trọng lượng tươi (g) 8,60a 12,30a 10,13a 12,71a 9,60a 1,33a 1,36a 0,73b 0,99ab 0,55b Chiều cao trung bình chồi (mm) 14,10a 14,00a 12,13a 9,43b 6,80c *a thể khác biệt có ý nghĩa mức tin cậy P = 0,05 theo phương pháp Duncan Ở nồng độ 100 mg/l, thu số chồi cao (8 chồi/mẫu), nồng độ khác có gia tăng số lượng chồi, nhiên, khơng khác biệt mức ý nghĩa 0,05 so với mẫu đối chứng (bảng 4) Bên cạnh đó, myo-inositol ảnh hưởng đến hình thành chồi Các mẫu ni cấy mơi trường có bổ sung myo-inositol có số nhiều so với mẫu đối chứng (hình 3) Tuy nhiên, myo-inositol lại khơng có tác động đến gia tăng trọng lượng tươi chồi (bảng 4) Theo nghiên cứu chúng tôi, nồng độ myo-inositol ảnh hưởng rõ rệt lên tiêu số chồi số hình thành Sự diện myo- inositol môi trường nuôi cấy đặc biệt quan trọng làm tăng hàm lượng cytokinin mơi trường [11] Myo-inositol có ảnh hưởng đến gia tăng số lượng lá, chất lượng chồi [5] Điều thể tiêu số chồi/mẫu công thức có bổ sung myoinositol, tất nồng độ khảo sát cao mẫu đối chứng Kaul & Sabharwal (1975) [9] nhận thấy có gia tăng chồi rễ ni cấy Haworthia có bổ sung myo-inositol Còn Lee (2003) [10], nhân chồi in vitro chuối Cavendish, sử dụng mơi trường ni cấy có bổ sung 100 mg/l myo-inositol Những nhận định phù hợp với kết mà chúng tơi 183 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 180-187 thu được, điều cho thấy, myo-inositol có tác động tích cực đến hình thành chồi số đối tượng chuối Laba đặc biệt nồng độ 100 mg/l Khảo sát ảnh hưởng adenin sulphate lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba ni cấy in vitro Ngồi myo-inositol, adenin sulphate thường bổ sung vào môi trường nuôi cấy in vitro Adenin sulphate tiền chất cytokinin, thường sử dụng nuôi cấy in vitro giống chuối Musa sp Adenin sulphate sử dụng nuôi cấy in vitro chất bổ sung kích thích tăng trưởng tế bào, tỷ lệ phát sinh chồi ghi nhận Nandagopal et al (2006) [14] cảm ứng tái sinh chồi từ mô sẹo rau diếp (Cichorium intybus L.cv Focus) nhận thấy tỷ lệ tái sinh chồi cao mơi trường có bổ sung 0,5 mg/l adenin sulphate Nghiên cứu Bantawa et al (2009) [2] ảnh hưởng adenin sulphate lên tạo chồi Picrorhiza scrophulariiflora cho thấy, mơi trường có bổ sung 100 mg/l adenin sulphate cho tỷ lệ chồi cao Trong thí nghiệm này, khảo sát ảnh hưởng nồng độ adenin sulphate khác đến hình thành phát triển chồi in vitro chuối Laba Kết sau tuần ni cấy trình bày bảng Bảng Ảnh hưởng nồng độ adenin sulphate đến khả tạo chồi in vitro chuối Laba sau tuần nuôi cấy Adenin sulphate (mg/l) 80 100 130 160 Số chồi hình thành 4,10b* 3,80b 6,90a 5,67ab 4,00b Số Trọng lượng tươi (g) 8,60a 6,50a 7,20a 7,22a 5,80a 1,33a 0,68bc 0,92b 0,64bc 0,42c Chiều cao trung bình chồi (mm) 14,10ab 14,90a 14,10ab 09,44c 11,70bc *a thể khác biệt có ý nghĩa mức tin cậy P = 0,05 theo phương pháp Duncan Kết thu nhận sau tuần nuôi cấy cho thấy, adenin sulphate có ảnh hưởng đến hình thành chồi in vitro chuối Laba Ở nồng độ 80 mg/l, adenin sulphate chưa có ảnh hưởng rõ rệt đến hình thành chồi Tuy nhiên, tăng nồng độ lên 100 mg/l, số chồi hình thành đạt 6,9 chồi/mẫu, cao so với mẫu đối chứng (bảng 4) Kết phù hợp với nghiên cứu Bantawa et al (2009) [2], nghiên cứu ảnh hưởng adenin sulphate lên tạo chồi Picrorhiza scrophulariiflora cho thấy, mơi trường có bổ sung 100 mg/l, adenin sulphate cho tỷ lệ chồi cao Ramesh et al (2006) [15] báo cáo kết tương tự bổ sung adenin sulphate 60 mg/l kết hợp với chất điều hòa sinh trưởng thực vật khác có hiệu việc hình thành chồi Trong nhân giống in vitro chuối, Lee (2003) [10] sử dụng adenin sulphate với nồng độ 80 mg/l tiến hành cấy chuyền chồi in vitro chuối Cavendish trình nhân chồi Đối với giống chuối Laba, bổ sung adenin 184 sulphate với nồng độ 100 mg/l, số lượng chồi đạt cao Tuy nhiên, tăng nồng độ adenin sulphate lên 130 160 mg/l ảnh hưởng adenin sulphate giảm xuống thể số chồi hình thành, trung bình 5,67 chồi 4,00 chồi mẫu cấy, ngang với mẫu đối chứng Số hình thành mẫu ni mơi trường có bổ sung adenin sulphate thấp so với mẫu đối chứng cho thấy, andenin sulphate khơng có vai trò làm gia tăng số lượng hình thành (hình 4) Ảnh hưởng adenin sulphate lên khả tạo chồi tính chất cytokinin Khi có mặt adenin sulphate mơi trường, chồi đơn sử dụng adenin sulphate làm tiền chất để tổng hợp cytokinin nội sinh Cytokinin nội sinh tác động lên khả hình thành chồi mẫu Gubbuk & Pekmezci (2004) [6] cho rằng, nồng độ cytokinin ngoại sinh yếu tố ảnh hưởng đến phát sinh chồi nhân giống in vitro Thêm vào đó, Do Dang Giap et al theo chúng tôi, cytokinin nội sinh có tác động lên khả phát sinh chồi Sự kết hợp cytokinin ngoại sinh nội sinh giúp cải thiện khả hình thành chồi Số chồi nghiệm thức bổ sung adenin sulphate xấp xỉ cao so với công thức đối chứng Tương tự, Shrivastava & Banerjee (2008) [17] báo cáo ảnh hưởng adenin sulphate lên khả hình thành chồi hiệu kết hợp với cytokinin khác Hình Chồi in vitro sau tuần ni cấy nồng độ BA khác Hình Chồi in vitro sau tuần nuôi cấy điều kiện ánh sáng khác a mg/l; b mg/l; c mg/l; d mg/l; e mg/l a Ánh sáng khuếch tán; b 18,7 mol m-2 s-1; c 26,2 mol m-2 s-1; d 42 mol m-2 s-1 Hình Chồi in vitro sau tuần ni cấy nồng độ myo-inositol khác Hình Chồi in vitro sau tuần nuôi cấy nồng độ adenin sulphate khác a 700 mg/l; b 500 mg/l; c 300 mg/l; d 100 mg/l; e Đối chứng a 160 mg/l; b 130 mg/l; c 100 mg/l; d 80 mg/l; e Đối chứng 185 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 180-187 Việc sử dụng kết hợp adenin sulphate với BA cho kết tạo chồi tăng giải thích qua vai trò tiền chất đường sinh tổng hợp cytokinin adenine Như vậy, việc bổ sung adenine vào môi trường cảm ứng tạo chồi giúp làm tăng hệ số nhân nhanh chồi chuối Laba đạt hiệu nồng độ adenine sulphate 100 mg/l KẾT LUẬN Sau tuần nuôi cấy, nồng độ BA cảm ứng tạo chồi khảo sát, môi trường MS bổ sung mg/l BA cho hiệu tạo chồi cao (4,33 chồi/mẫu) Cường độ ánh sáng hiệu cho giai đoạn nhân nhanh chồi 18,70 ± 1,00 mol m-2s-1 cho kết hình thành chồi cao (4,33 chồi/mẫu) Sự kết hợp BA nồng độ mg/l với 100 mg/l adenin sulphate giúp làm tăng hiệu nhân chồi đạt 6,9 chồi/mẫu Ở tất nồng độ myo-inositol khảo sát bổ sung vào môi trường có chứa mg/l BA làm gia tăng hệ số nhân chồi đặc biệt nồng độ 100 mg/l (8 chồi/mẫu) Lời cảm ơn: Nhóm tác giả xin chân thành cảm ơn Phòng thí nghiệm trọng điểm Quốc gia Công nghệ tế bào thực vật (Viện Sinh học nhiệt đới) hỗ trợ trang thiết bị để hoàn thành đề tài TÀI LIỆU THAM KHẢO Arinaitwe G., Rubaihayo P R and Magambo M J S., 2000 Proliferation rate effects of cytokinins on banana (Musa spp.) cultivars Sci Hortic-Amsterdam, 86: 13-21 Bantawa P., Roy O S., Ghosh P and Mondal T K., 2009 Effect of bavistin and adenin sulphate on in vitro shoot multiplication of Picrorhiza scrophulariiflora Plant Tiss Cult Biotech., 19(2): 237-245 Cronauer S S and Krikorian A D., 1984 Multiplication of Musa from excised stem tips Annals Bot., 53: 321-328 Dore S R., Srinivasa R N K and Chacko E K., 1983 Tissue culture propagation of banana HortScience, 18: 247-252 186 Duncan D B., 1955 Multiple range and multiple F tests Biometrics, 11(1): 1-5 Gamborg O L., Miller R A and Ojima K., 1968 Nutrient requirements of suspension culture of soybean root cells Exp Cell Res., 50: 155-158 Gubbuk H and Pekmezci M., 2004 In vitro propagation of some new banana types (Musa spp.) Turk J Agr Forest, 28: 355-361 Gur A., Altman A., Stern R., Sigler T and Wolowitz B., 1987 Interactions between myo-inositol and cytokinins: Their basipetal transport and effect on peach roots Physiol Plant, 69: 633-638 Hwang S C., Chen C L., Lin J C., and Lin H L., 1984 Cultivation of Banana using plantlets from meristem culture HortScience, 19: 231-233 10 Kaul K and Sabharwal P S 1975 Effect of inositol on growth and differentiation Am J Bot., 62: 655-659 11 Lee S W., 2003 Micropropagation of Cavendish banana in Taiwan Taiwan Banana Research Institute 12 Letham D S., 1963 Purification of factors inducing cell division extracted from plum fruitlets Life Sci., 2: 152-157 13 Ma S S., and Shii C T., 1972 In vitro formation of adventitious buds in banana shoot apex following decapitation J Chinese Soc Hor Sci., 18: 135-142 14 Murashige T and Skoog F., 1962 A revised medium for rapid growth and Bio-assays with tobacco tissue cultures Phys Plant, (15): 473-497 15 Nandagopal S and Kumari B D R., 2006 Adenine sulphate induced high frequency shoot organogenesis in callus an in vitro flowering of Cichorium intybus L cv Focus a potent medicinal plant Acta Agr Slov., 87(2): 415-425 16 Ramesh M., Saravanakumar R M and Pandain S K., 2006 Benzyl amino purine and adenine sulphate induced multiple shoot and root induction from nodal explants of Brahmi, Bacopa monnieri (Linn.) Nat Prod Rad., 5: 44-51 Do Dang Giap et al 17 Robinson J C., 1996 Bananas and Plantain CAB International, Cambridge, New York 18 Shrivastava S and Banerjee M 2008 In vitro clonal propagation of physic nut (Jatropha curcas L.) Infl Addit, 3: 73-79 19 Vuylsteke D., 1989 Shoot-tip culture for the propagation, conservation and exchange of Musa germplasm IBPGR, Rome 20 Vuylsteke D and De Langhe E., 1985 Feasibility of in vitro propagation of bananas and plantains Trop Agr (Trinidad), 62: 323-328 21 Wong W C., 1986 In vitro propagation of banana (Musa spp.): Initiation, proliferation and development of shoot-tip cultures on defined media Plant Cell Tiss Org Cult., 6: 159-166 HIGH-FREQUENCY SHOOT MULTIPLICATION OF LABA BANANA (Musa sp.) CULTURED IN VITRO BY USING LIGHT, MYO-INOSITOL AND ADENIN SULPHATE Do Dang Giap*, Pham Ngoc Vinh, Tran Trong Tuan, Nguyen Thi Huyen Trang, Pham Ngo Anh Thu, Thai Xuan Du Institute of Tropical Biology, VAST SUMMARY The present paper describes the effect of light intensity, myo-inositol and adenin sulphate on in vitro shoot formation of Laba banana (Musa sp.) In vitro shoots were cultured on MS medium supplemented with mg l-1 BA (6-benzylaminopurine) and different concentrations of myo-inositol (0, 100, 300, 500, 700 mg l -1) or adenin sulphate (0, 80, 100, 130, 160 mg l-1) After weeks, the best multiple shoots were formed on MS medium with mg l-1 BA + 100 mg l-1 adenin sulphate (6.9 shoots per explant) and on MS medium containing mg l-1 BA + 100 mg l-1 myo-inositol (8.0 shoots per explant) Explants on MS medium with suitable concentration of BA were maintained under 12-hphotoperiod with different intensities of light: Diffuse light, 18.70 ± 1.00, 26.20 ± 1.00 and 42 ± 1.00 µmol m-2s-1 The best shoot formation rate (4.33 shoots per explant) was achieved on MS medium supplemented BA with a light intensity of 18.70 ± 1.00 µmol m-2s-1 Keywords: Musa sp., adenin sulphate, in vitro shoot, Laba banana, light intensity, myo-inositol Ngày nhận bài: 21-6-2012 187 ... Ngoài myo-inositol, adenin sulphate thường bổ sung vào môi trường nuôi cấy in vitro Adenin sulphate tiền chất cytokinin, thường sử dụng nuôi cấy in vitro giống chuối Musa sp Adenin sulphate sử dụng. .. thấy, myo-inositol có tác động tích cực đến hình thành chồi số đối tượng chuối Laba đặc biệt nồng độ 100 mg/l Khảo sát ảnh hưởng adenin sulphate lên khả nhân nhanh chồi chuối Laba nuôi cấy in vitro. .. hành cấy chuyền chồi in vitro chuối Cavendish trình nhân chồi Đối với giống chuối Laba, bổ sung adenin 184 sulphate với nồng độ 100 mg/l, số lượng chồi đạt cao Tuy nhiên, tăng nồng độ adenin sulphate