Đang tải... (xem toàn văn)
Aniline là những hợp chất hữu cơ độc hại gây ô nhiễm môi trường, nhất là môi trường nước, và gây hại đến sức khỏe con người cũng như các loài thủy sinh vật. Trong số 7 dòng vi khuẩn được phân lập từ bùn và nước cống rãnh của phòng thí nghiệm Đại học Đồng Tháp có khả năng sử dụng aniline như là nguồn carbon và nitrogen duy nhất để sinh trưởng. Mời các bạn tham khảo!
SCIENCE & TECHNOLOGY DEVELOPMENT JOURNAL: NATURAL SCIENCE, VOL 1, ISSUE 6, 2017 Khảo sát phân hủy aniline vi khuẩn Pseudomonas moraviensis AN-5 Hà Danh Đức Trường Đại học Đồng Tháp Email: hadanhduc@gmail.com (Bài nhận ngày 03 tháng 11 năm 2017, nhận đăng ngày 20 tháng 09 năm 2017) TĨM TẮT trưởng, Pseudomonas moraviensis AN-5 có hiệu Aniline hợp chất hữu độc hại gây cao P moraviensis AN-5 phân hủy hồn nhiễm mơi trường, mơi trường nước, tồn aniline sau ngày nồng độ ≤ 4,0 mM Sự bổ gây hại đến sức khỏe người loài sung yeast extract succinate nguồn dinh thủy sinh vật Trong số dòng vi khuẩn phân dưỡng thứ làm kích thích sinh trưởng phân lập từ bùn nước cống rãnh phòng thí nghiệm hủy aniline AN-5 Nghiên cứu đường Đại học Đồng Tháp có khả sử dụng aniline phân hủy aniline AN-5 thấy vi khuẩn nguồn carbon nitrogen để sinh phân hủy aniline theo đường ortho-cleavage Từ khóa: aniline, Pseudomonas moraviensis AN-5, ortho-cleavage thể làm chết cá, tơm lồi thủy sinh khác MỞ ĐẦU Tuy nhiên, chưa có cơng bố Aniline chất hữu độc hại sử dụng nghiên cứu phân hủy aniline Việt Nam rộng rãi cơng nghiệp nhiều ngành Phòng thí nghiệm Hóa học, Sinh học Khoa khác liên quan Aniline ngun liệu để sản học mơi trường Trường Đại học Đồng Tháp xuất phẩm nhuộm azo, sử dụng công nghiệp nơi sinh viên thường xuyên làm thí nghiệm Quá chế biến cao su, sản xuất verni, thuốc chữa bệnh trình làm thí nghiệm có lượng aniline thuốc diệt cỏ [3, 15] rò rỉ mơi trường ngồi, qua hệ thống cống Việc sử dụng rộng rãi aniline công rãnh Trong báo này, vi khuẩn phân hủy aniline nghiệp gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến môi phân lập từ rãnh nước phòng thí nghiệm trường đất, nước khơng khí Aniline hóa chất khảo sát khả sử dụng aniline độc hại, gây ung thư bệnh khác Vì độc tính nguồn dinh dưỡng đường cao khó phân hủy, aniline coi chất gây phân hủy chất chúng ô nhiễm môi trường quan trọng [14] Chúng VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP liệt kê nhóm hợp chất độc hại Vật liệu 76/464/CEE Châu Âu danh sách chất gây ô nhiễm quan trọng Cơ quan Bảo vệ Môi trường Hoa Kỳ [16] Trên giới có nhiều nghiên cứu tồn dư loại aniline đất nước Thí dụ aniline nước thải từ công ty dược phẩm lên tới 2.480 mg/L [11] hay nước ngầm 17 mg/L [4] Các nghiên cứu phân hủy aniline vi sinh vật giới công bố [11-13, 20] Sự tồn dư chất làm ô nhiễm hệ sinh thái, nguồn nước nuôi thủy sản, có Trang 32 Vi khuẩn ni cấy dung dịch khống chất có thành phần sau: 1.419,6 mg/L Na2HPO4; 1.360,9 mg/L KH2PO4; 98,5 mg/L MgSO4; 5,88 mg/L CaCl2 2H2O, 1,16 mg/L H3BO4; 2,78 mg/L FeSO4.7H2O; 1,15 mg/L ZnSO4.7H2O; 1,69 mg/L MnSO4.H2O, 0,38 mg/L CuSO4.5H2O; 0,24 mg/L CoCl2.6H2O 0,10 mg/L MoO3 [5] pH điều chỉnh khoảng 7,0 ± 0,1 Môi trường khử trùng nhiệt độ 120 oC thời gian 15 phút trước ni cấy vi khuẩn (riêng mơi trường có glucose khử TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ: CHUYÊN SAN KHOA HỌC TỰ NHIÊN, TẬP 1, SỐ 6, 2017 trùng nhiệt độ 110 oC để tránh biến tính chúng) Mơi trường đặc dùng để cấy vi khuẩn thêm vào g/L agar trước khử trùng Phân lập nhận diện vi khuẩn Mẫu bùn nước cống rãnh từ phần xả thải phòng thí nghiệm Trường Đại học Đồng Tháp thu bảo quản nước đá tiến hành thí nghiệm 5,0 g mẫu cho vào bình tam giác thêm mơi trường dung dịch khoáng chất 100 mL 10,0 mM aniline thêm vào mẫu Sau ngày ủ nhiệt độ phòng (28 – 32 oC), 1,0 mL dung dịch chuyển vào 100 mL mơi trường dung dịch khống chất 10,0 mM aniline bổ sung Quá trình lặp lại sau 30 ngày, vi khuẩn phân lập đĩa agar với aniline chất cung cấp nguồn nitrogen carbon Các dòng vi khuẩn phân lập khảo sát khả phân hủy aniline để đánh giá hiệu chúng Dòng vi khuẩn có hiệu cao định danh dựa vào phân tích 16S rDNA theo phương pháp mô tả Li [11] 1466 bp 16S nhân lên với cặp mồi đặc hiệu 27f (5’AGAGTTTGATYMTGGCTCAG-3’) 1.492r (5’-TACGGHTACCTTACGACT-3’) Quá trình tiến hành với tổng cộng 20,0 mL PCR buffer chứa 2,0 mmol/l MgCl2; 10,0 ng DNA; 0,2 mmol/l x4 dNTP; 1,0 mmol loại primer; 1,0 U Taq polymerase Sự phản ứng thực thermal cycler (PTC 220, Bio-Rad Inc., USA) 94 oC 5,0 phút cho pha khởi đầu, trình nhân lên 35 chu kỳ 94 oC 1,0 phút, sau chuyển sang 1,0 phút 55 oC 1,5 phút 72 oC Giai đoạn cuối tiến hành 72 oC 5,0 phút Sản phẩm PCR làm UNIQ-10 EZ Spin Column PCR Production Purification Kit (Shanghai Sangon Co Ltd.) Cuối trình đọc mã 16S tiến hành Trình tự 16S rDNA phân tích NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih gov/BLAST/) Cây di truyền thể phân loại dòng vi khuẩn thiết lập dựa trình tự 16S rDNA, sử dụng phần mềm MEGA 7.0 16S rRNA dòng vi khuẩn xếp CLUSTAL X Quá trình thực phương pháp neighbor-joining [17] Sự phân tích Bootstrap thực với 1000 resamplings [6] Kiểm tra khả phân hủy aniline vi khuẩn môi trường lỏng Vi khuẩn ni mơi trường khống, sử dụng aniline nguồn carbon nitrogen nhất, bổ sung thêm nguồn chất dinh dưỡng khác (glucose, succinate, (NH4)2SO4, NaNO3 Yeast extract (YE)) Lượng vi khuẩn chủng vào môi trường ban đầu với khoảng 3,5x106 cfu/ml Aniline pha chế dạng stock cồn tuyệt đối Thí nghiệm tiến hành với tốc độ lắc 150 vòng/phút nhiệt độ phòng Mẫu lấy theo chu kì lần (mỗi lần 1,0 ml) bảo quản oC phân tích Các thí nghiệm khả phân hủy aniline nguồn hữu thực nồng độ aniline khác nhau, thí nghiệm ảnh hưởng chất dinh dưỡng đến phân hủy aniline hay sinh trưởng vi khuẩn thực nồng độ 10,0 mM aniline Nồng độ aniline môi trường lỏng xác định phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC - High Performance Liquid Chromatography), với cột (5 μm, 250 mm×4,6 mm; Hyperclone, Phenomenex, USA) đầu dò quang phổ tử ngoại 240 nm Pha động hỗn hợp acetonitrile (70 %) nước tinh khiết (30 %) Sự sinh trưởng lũy thừa vi khuẩn xác định phương pháp đo độ đục tán xạ ánh sáng quang phổ kế (spectrophotometer) bước sóng 600 nm (OD600) Sự sinh trưởng vi khuẩn tính theo phương pháp Zeyer [22] Tất thí nghiệm tiến hành lần lặp lại, Đại học Chulalongkorn (Bangkok, Thái Lan) Phân tích mức độ khác nghiệm thức thực phần mềm SPSS phiên 22 Sự khác biệt thể chữ Các chữ giống thể giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Trang 33 SCIENCE & TECHNOLOGY DEVELOPMENT JOURNAL: NATURAL SCIENCE, VOL 1, ISSUE 6, 2017 nghiệm thức với P < 0,05 Các chữ khác thể khác biệt có ý nghĩa thống kê nghiệm thức dựa hình thành sản phẩm trung gian 2hydroxymuconic semialdehyde 375 nm [18] muconic acid 260 nm [10] Xác định cách thức phân hủy vòng benzene vi khuẩn phân hủy aniline KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Phân lập vi khuẩn phân hủy aniline Việc xác định cách thức phân hủy aniline dựa vào việc phát enzyme catechol 2,3dioxygenase catechol 1,2-dioxygenase trích ly từ vi khuẩn ủ mơi trường có aniline Phương pháp xác định enzyme thực theo mô tả Liu [13] Vi khuẩn nuôi mơi trường có 10,0 mM aniline sau 12 giờ, mẫu ly tâm tốc độ 10.000 rpm phút, rửa lại dung dịch Tris-HCl buffer (pH = 7,8) cho vào dung dịch Tế bào sau phá hủy nhờ French (Thermo Electron Corporation) 12.000 psi Mẫu ly tâm 10.000 rpm phút, phần dung dịch phía sử dụng để phân tích 3,0 mL bao gồm 2,0 mL phosphate buffer; 0,6 mL mM catechol; 0,2 mL nước khử ion 0,2 mL dung dịch trích ly từ tế bào Các enzyme catechol 1,2-dioxygenase chlorocatechol 1,2-dioxygenase phân tích Từ mẫu bùn – nước từ hệ thống cống rãnh dã phân lập tổng cộng dòng vi khuẩn đặt tên theo thứ tự từ AN-1 đến AN7 Trong số có dòng vi khuẩn Gram âm dòng vi khuẩn Gram dương Dòng vi khuẩn AN-5 có khả phân hủy aniline cao (qua phân tích HPLC, số liệu so sánh đây) sử dụng để tiến hành thí nghiệm Dòng vi khuẩn AN-5 có Gram âm, định danh qua phân tích 16S rDNA Kết cho thấy vi khuẩn có 99,99 % giống với Pseudomonas moraviensis, đặt tên P moraviensis AN-5 Qua phân tích phả hệ dựa trình tự 16S rDNA MEGA 7.0 cho thấy, dòng vi khuẩn có quan hệ gần với P moraviensis (Hình 1) Hình Cây phả hệ thể dòng vi khuẩn phân hủy aniline P moraviensis AN-5 Trang 34 TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ: CHUYÊN SAN KHOA HỌC TỰ NHIÊN, TẬP 1, SỐ 6, 2017 Kiểm tra khả phân hủy aniline nồng độ khác aniline thấp, vi khuẩn khơng có lượng dinh dưỡng dồi để sinh trưởng, nồng độ cao chúng lại ức chế sinh trưởng Ở nồng độ ≤ 4,0 mM, aniline hoàn toàn biến sau ngày ủ Ở nồng độ 20,0 mM, vi khuẩn cần pha lag bắt đầu phân hủy aniline, chúng phân hủy 67 % sau ngày Thí nghiệm tiếp tục ngày nồng độ này, chúng khơng hồn tồn phân hủy hết chất Có lẽ thiếu khống chất ảnh hưởng chất trung gian trình sinh trưởng ức chế phân hủy hoàn toàn aniline nồng độ Ở nghiệm thức đối chứng, aniline thay đổi không đáng kể sau thời gian ủ Đánh giá khả sử dụng aniline nguồn hữu tiến hành với nồng độ chất khác Kết cho thấy, nồng độ cao tốc độ phân hủy aniline giảm (Hình 2) Sự phân hủy chất sinh trưởng vi khuẩn hoàn toàn bị ức chế nồng độ 25,0 mM Sự giảm tốc độ aniline chất độc, chúng ức chế vi khuẩn tăng nồng độ Sự sinh trưởng vi khuẩn đánh giá đồng thời với trình phân hủy aniline Ở nồng độ aniline thấp (1,0 hay 2,5 mM), hay cao (15,0 20,0 mM) lượng vi khuẩn môi trường không nhiều nồng độ 10,0 mM Khi nồng độ 0.4 40 0.2 20 0.0 12 24 36 48 60 72 Thời gian ủ (giờ) 1.0 mM 2.5 mM 4.0 mM 6.0 mM 0.8 80 0.6 60 0.4 40 0.2 20 0.0 12 24 36 48 60 Thời gian ủ (giờ) 10.0 mM 15.0 mM 25.0 mM 10.0 mM Sự sinh trưởng vi khuẩn (OD600) 0.6 60 1.0 100 Aniline lại (%) Aniline lại (%) 0.8 80 Sự sinh trưởng vi khuẩn (OD600) 1.0 100 72 20.0 mM 15.0 mM Hình Sự phân hủy aniline vi khuẩn P moraviensis AN-5 nguồn hữu (nét liền) sinh trưởng chúng (nét đứt) nồng độ khác Các nghiên cứu phân hủy aniline giới công bố trước Psedomodas sp [2, 7, 9], Erwinia amylovora HSA6 [11] hay Delfria sp [12, 13] So với chúng, P moraviensis AN-5 thể phân hủy aniline tốt môi trường không cần nguồn hữu khác aniline lượng vi khuẩn ban đầu Pseudomonas sp K1 phân hủy aniline với nồng độ 8,0 mM mơi trường có sẵn nguồn nitrogen [9] Ở nghiên cứu khác, Delftia sp XYJ6 bị ức chế nồng độ 3.000 mg/L [21] Phát có ý nghĩa quan trọng ứng dụng AN-1 để làm mơi trường aniline có nồng độ cao Ảnh hưởng chất dinh dưỡng đến sinh trưởng phân hủy aniline vi khuẩn Các chất dinh dưỡng bao gồm nguồn carbon (glucose succinate) nitrogen (NaNO3, (NH4)2SO4, YE) thêm vào trình ủ vi khuẩn Kết cho thấy, có mặt nguồn dinh dưỡng kích thích sinh trưởng vi khuẩn (Bảng 1) Vi khuẩn sử dụng chất dinh dưỡng bổ sung để sinh trưởng nguồn chất aniline Sự bổ sung glucose Trang 35 SCIENCE & TECHNOLOGY DEVELOPMENT JOURNAL: NATURAL SCIENCE, VOL 1, ISSUE 6, 2017 NaNO3 không thay đổi đáng kể tốc độ sử dụng aniline Trong đó, bổ sung YE succinate kích thích sinh trưởng phân hủy aniline Succinate vừa nguồn carbon, vừa nguồn lượng YE nguồn carbon, nitrogen chứa nhiều chất cần thiết khác giúp cho vi khuẩn phát triển tốt Công bố trước cho thấy, bổ sung 1,0 g/L glucose hay (NH4)2SO4 làm tăng nhẹ tốc độ phân hủy aniline Candida tropicalis AN1 [19] Bảng Sự sinh trưởng phân hủy aniline (10.0 mM) P moraviensis AN-5 điều kiện dinh dưỡng khác (số liệu tính tốn sau ngày ủ) Chất bổ sung (0,05% chất) Khơng có Glucose Succinate NaNO3 (NH4)2SO4 YE YE + (NH4)2SO4 YE + Succinate Sự phân hủy aniline (µM/giờ) 171.7 ± 10.0a 187.5 ± 11.2a 284.2 ± 21.2c 199.2 ± 16.1ab 262.5 ± 18.3c 279.2± 22.2c 283.3± 24.3c 325.0 ± 22.3cd Sinh trưởng vi khuẩn/giờ 0.015 ± 0.000a 0.017 ± 0.001b 0.019 ± 0.001c 0.015 ± 0.001a 0.016 ± 0.002ab 0.016 ± 0.001ab 0.018 ± 0.002bc 0.023 ± 0.002d Ghi chú: Các chữ khác (a, b, c d) thể khác biệt có ý nghĩa thống kê nghiệm thức cột (p > 0,05) YE succinate kích thích sinh trưởng phân hủy aniline AN-5 khảo sát để tìm nồng độ chất dinh dưỡng phù hợp Trong thí nghiệm này, việc bổ sung nhiều chất dinh dưỡng sinh trưởng vi khuẩn cao 1.0 Aline lại (%) 100 0.8 80 0.6 60 40 0.4 20 0.2 0.0 12 18 Thời gian ủ (giờ) 24 Sự sinh trưởng vi khuẩn (OD600) (Hình 3) Nồng độ 0,05 % YE 0,05 % succinate môi trường dẫn đến phân hủy aniline cao Ở nồng độ chất dinh dưỡng thấp, sinh trưởng vi khuẩn thấp, nên số lượng vi khuẩn chưa đủ nhiều để phân hủy nhanh aniline Nhưng nồng độ chúng cao, vi khuẩn sử dụng chất dinh dưỡng để sinh trưởng thay aniline nên phân hủy aniline giảm xuống Ảnh hưởng nồng độ dinh dưỡng đến sinh trưởng phân hủy aniline vi khuẩn 0.02% YE + 0.02% succinate 0.05% YE + 0.05% succinate 0.07% YE + 0.07% succinate 0.10% YE + 0.10% succinate Hình Ảnh hưởng nồng độ YE succinate đến phân hủy aniline (10,0 mM) (nét liền) sinh trưởng (nét đứt) vi khuẩn P moraviensis AN-5 Trang 36 TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ: CHUYÊN SAN KHOA HỌC TỰ NHIÊN, TẬP 1, SỐ 6, 2017 Xác định đường phân hủy aniline P moraviensis AN-5 Enzyme 1,2-dioxygenase catechol 2,3dioxygenase dịch trích từ tế bào vi khuẩn khảo sát để xác định phương thức phân hủy aniline AN-5 Kết cho thấy, hoạt động emzyme 1,2-dioxygenase chủ yếu (3,1 μmol/min/g vi khuẩn tươi), 2,3-dioxygenase không đáng kể (0,6 μmol/min/g vi khuẩn tươi) Trong trình chạy HPLC, biến aniline (Retention time = 3,2 phút), có xuất chất trung gian trùng với phổ xuất với catechol (Retention time = 2,6 phút) Điều chứng tỏ P moraviensis AN-5 phân hủy aniline vị trí ortho (ortho cleavage pathway) chủ yếu Từ đó, đường phân hủy aniline đề xuất Hình Nghiên cứu trước cho thấy kết tương tự Pseudomonas Ki [22] phân hủy aniline theo hướng ortho Trái lại, nhiều nghiên cứu khác cho thấy phân hủy aniline Pseudomonas sp theo đường meta [1, 9, 8, 14], hay Delftia sp AN3 [23] Delftia sp XYJ6 [20] phân hủy aniline theo meta-cleavage Một nghiên cứu khác cho thấy phân huỷ diễn theo ortho metacleavage [1] Sự phân hủy theo đường metacleavage có nhược điểm khơng phân hủy triệt để sản phẩm cuối chất hữu [22] OH NH2 OH + O2 + O2 COOH COOH CO2 + H2 O - NH3 Aniline Catechol Cl Cis-cis-muconic acid Hình Sơ đồ thể phân hủy aniline theo đường ortho-cleavage P moraviensis AN-5 KẾT LUẬN P moraviensis AN-5 phân lập từ bùn nước hệ thống cống rãnh có tiềm nhiễm aniline Vi khuẩn phân hủy aniline mà khơng cần bổ sung thêm nguồn hữu khác Thí nghiệm phân tích vai trò chất dinh dưỡng bổ sung đến hoạt động vi khuẩn thấy rằng, bổ sung thêm YE succinate kích thích sinh trưởng phân hủy aniline chúng Sự xác định đường phân phân hủy aniline AN-5 cho thấy chúng phá vỡ vòng benzene vị trí ortho Nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng việc ứng dụng vi khuẩn để tẩy aniline nhiễm bẩn nước hay đất tương lai Trang 37 SCIENCE & TECHNOLOGY DEVELOPMENT JOURNAL: NATURAL SCIENCE, VOL 1, ISSUE 6, 2017 Examing the aniline degradation by Pseudomonas moraviensis AN-5 Ha Danh Duc Đồng ThápUniversity ABSTRACT highest efficiency The aniline-degrading P Aniline is a toxic aromatic compound causing moraviensis AN-5 utilized aniline completely after environmental pollution, especially water days at concentrations ≤ 4.0 mM The addition problems, which harmfully affect to human and of yeast extract and succinate stimulated the aquatic species Seven bacterial strains were growth and aniline degradation of the strain The isolated from the sewerage of biological and investigation of aniline degraration pathway of P chemical laboratories using aniline as a sole moraviensis AN-5 showed that aniline was carbon and nitrogen source Among them, degraded by AN-5 via the ortho-clevage pathway Pseudomonas moraviensis AN-5 showed the Keywords: aniline, Pseudomonas moraviensis AN-5, ortho-cleavage TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] N.Y Aokik, S Murakami, R Shinke, Microbial metabolism of aniline through a meta-cleavage pathway: Isolation of strains and production of catechol 2,3-dioxygenase, Agricultural and Biological Chemistry, 54, 1, 205–206 (1990) [2] S Bathe, Conjugal transfer of plasmid pNB2 to activated sludge bacteria leads to 3chloroaniline degradation in enrichment cultures, Letters in Applied Microbiology, 38, 6, 527–531 (2004) [3] N Boon, J Goris, P De Vos, W Verstraete, E.M Top, Genetic diversity among 3chloroaniline- and aniline-degrading strains of the Comamonadaceae, Applied and Environmental Microbiology, 67, 3, 1107– 1115 (2001) [4] E.M Boyd, K Killham, J Wright, S Rumford, M Hetheridge, R Cumming, Toxicity assessment of xenobiotic contaminated groundwater using lux modified Pseudomonas fluorescens, Chemosphere, 35, 9, 1967–1985 (1997) [5] W Dejonghe, E Berteloot, J Goris, N, Boon, K Crul, S Maertens, M Hofte, P De Trang 38 [6] [7] [8] [9] Vos, W Verstraete, E.M Top, Synergistic degradation of linuron by a bacterial consortium and isolation of a single linurondegrading Variovorax, Applied and Environmental Microbiology, 69, 3, 1532– 1541 (2003) J Felsenstein, PHYLIP (Phylogeny Inference Package), version 3.6a Distributed by the author Department of Genome Science, University of Washington, Seattle; 2002 F Fukumori, C.P Saint, Nucleotide sequences and regulational analysis of genes involved in conversion of aniline to catechol in Pseudomonas putida UCC22(pTDN1) Journal of Bacteriology, 179, 2, 399–408 (1997) N Kodama, S Murakami, R Shinke, K Aoki, Production of catechol by transpositional mutants of anilineassimilating Pseudomonas species AW-2, Journal of Fermentation and Bioengineering, 82, 5, 480–483 (1996) A Konopka, D Knight, R.F Turco, Characterization of a Pseudomonas sp TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ: CHUYÊN SAN KHOA HỌC TỰ NHIÊN, TẬP 1, SỐ 6, 2017 [10] [11] [12] [13] [14] [15] [16] capable of aniline degradation in the presence of secondary carbon sources, Applied and Environmental Microbiology, 55, 2, 385–389 (1989) O Hayaishi, M Katagiri, S Rothberg, Studies on oxygenases, The Journal of Biological Chemistry, 229, 905–920 (1957) J Li, Jin Z, B Yu, Isolation and characterization of aniline degradation slightly halophilic bacterium, Erwinia sp strain HSA 6, Microbiological Research, 165, 5, 418–26 (2010) Q Liang, M Takeo, M Chen, W Zhang, Y Xu, M Lin, Chromosome-encoded gene cluster for the metabolic pathway that converts aniline to TCA-cycle intermediates in Delftia tsuruhatensis AD9, Microbiology, 151, 10, 3435–3446 (2005) Z Liu, H Yang, Z Huang, P Zhou, S.J Liu, Degradation of aniline by newly isolated, extremely aniline-tolerant Delftia sp AN3, Applied and Environmental Microbiology, 58, 5, 679–782 (2002) N.L Meyers, Molecular cloning and partial characterization of the pathway for aniline degradation in Pseudomonas sp strain CIT1, Current Microbiology, 24, 303–310 (1992) U Meyer, Biodegradation of synthetic organic colorants, Academic Press Ltd, London, England (1981) F Register, Priority Pollutant List (promulgated by the U.S Environmental Protection Agency under authority of the Clean Water Act of 1977), Federal Register, 44, 233 (1979) [17] N Saitou, M Nei, The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees, Molecular Biology and Evolution, 4, 406–425 (1987) [18] J.M Sala-Trepat, W.C Evans, The metacleavage of catechol by Azobacter species, European Journal of Biochemistry, 20, 400– 413 (1971) [19] D Wang, G Zheng, S Wang, D Zhang, L Zhou, Biodegradation of aniline by Candida tropicalis AN1 isolated from aerobic granular sludge, Journal of Environmental Sciences (China), 23,12, 2063–2068 (2011) [20] L Wang, S Barrington, J.W Kim, Biodegradation of pentyl amine and aniline from petrochemical wastewater, Journal of Environmental Management, 83, 2, 191–197 (2007) [21] C Xiao, J Ning, H Yan, X Sun, J Hu, Biodegradation of Aniline by a newly isolated Delftia sp XYJ6 Chinese Journal of Chemical Engineering, 17, 3, 500–505 (2009) [22] J Zeyer, A, Wasserfallen, K.N Timmis, Microbial mineralization of ring-substituted anilines through an ortho-cleavage pathway, Applied and Environmental Microbiology, 50, 2, 447–453 (1985) [23] T Zhang, J Zhang, S Liu, Z Liu, A novel and complete gene cluster involved in the degradation of aniline by Delftia sp AN3 Journal of Environmental Sciences (China), 20, 6, 717–724 (2008) Trang 39 ... Xác định cách thức phân hủy vòng benzene vi khuẩn phân hủy aniline KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Phân lập vi khuẩn phân hủy aniline Vi c xác định cách thức phân hủy aniline dựa vào vi c phát enzyme catechol... mM Sự sinh trưởng vi khuẩn (OD600) 0.6 60 1.0 100 Aniline lại (%) Aniline lại (%) 0.8 80 Sự sinh trưởng vi khuẩn (OD600) 1.0 100 72 20.0 mM 15.0 mM Hình Sự phân hủy aniline vi khuẩn P moraviensis. .. Sơ đồ thể phân hủy aniline theo đường ortho-cleavage P moraviensis AN-5 KẾT LUẬN P moraviensis AN-5 phân lập từ bùn nước hệ thống cống rãnh có tiềm nhiễm aniline Vi khuẩn phân hủy aniline mà