UV 365 UV 254 Dragendorff SẮC KÝ LỚP MỎNG (Thin layer chromatography, TLC) GVHD: Ths Đỗ Văn Mãi Sinh viên thực Nhóm II- Lớp ĐH Dược VB2-12A Nội dung báo cáo Kiến thức tổng quát Các bước chuẩn bị Tiến hành sắc ký lớp mỏng Ứng dụng công dụng Các tượng ngoại ý thường gặp cách khắc phục KIẾN THỨC TỔNG QUÁT VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG (SKLM) Nhà bác học Mikhail Tswett (1872-1919) Dãy màu Xanthophyll Cholorophyll 1938, Izmailov Schraiber: SKLM (Al2O3, bảng thủy tinh) 1958, Stahl hồn thiện chuẩn hóa phương pháp SKLM (silicagel, CaSO4, 0.25mm, cách phát hiện) 1965, hãng Merck điều chế thành công mỏng tráng sẵn KIẾN THỨC TỔNG QUÁT VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG (SKLM) ĐỊNH NGHĨA Đường kính lỗ xoang (40,60,80,100) hạt silica gel, Angstrom 25 nhôm tráng sẵn 20x20 cm Trộn chất phát huỳnh quang 254 nm Pha tĩnh Pha động Cơ Cơchế chếcủa củasự sựtách táchcác cácchất chấttrong trongdung dungdịch dịchmẫu mẫuthử thử Cơ chế hấp phụ Cơ chế trao đổi ion Cơ chế phân bố Cơ chế sàng lọc phân tử Phối hợp chế KIẾN THỨC TỔNG QUÁT VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG (SKLM)  Trường hợp 1: xác định tuyến dung môi khoảng cách di chuyển chất phân tích x, y z khoảng cách di chuyển dung mơi tính từ điểm chấm mẫu Rf Sắc ký đồ sắc ký mỏng có giá trị từ ÷ KIẾN THỨC TỔNG QUÁT VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG (SKLM)  Trường hợp 2: sắc ký liên tục không xác định tuyến dung môi b a : khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm vết mẫu chuẩn a b: khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm vết mẫu thử C T Điểm xuất phát Rr: lớn nhỏ KIẾN THỨC TỔNG QUÁT VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG (SKLM) Qui tắc tam giác Stahl (1960’) Mẫu thử Phân cực Chất hấp phụ (SP) Hệ dung môi khai triển (MP) Phân cực mạnh Phân cực cực (silica gel, oxyd (PE, n – hexan, Tol, BZ, Cf, nhôm ) EtOAc…) Phân cực mạnh Phân cực (silica gel RP…) Phân cực mạnh (ACN, Me, H2O) CÁC BƯỚC CHUẨN BỊ DỤNG CỤ CÁC BƯỚC CHUẨN BỊ Hoạt hóa mỏng Sấy mỏng 105 ÷ 110 0C / 30 phút Ðể nguội bảo quản bình hút ẩm 10 CƠNG CƠNG DỤNG DỤNG Cơng bố đặc điểm hợp chất vừa chiết tách cô lập Chuẩn bị cho việc sắc ký cột Cơ lập hợp chất Tìm hiểu sơ tính chất mẫu khảo sát Theo dõi, tối ưu hóa phản ứng Bán định lượng Kiểm tra xem hai hợp chất có giống nhau? Kiểm tra biết hợp chất có bền 23 CÁC HIỆN TƯỢNG NGOẠI Ý THƯỜNG GẶP VÀ CÁCH KHẮC PHỤC 23 Nguyên nhân Mẫu nhiều tạp phân cực Vết di chuyển khơng hồn tồn Khắc phục Loại tạp kỹ trước tiến hành 24 Nguyên nhân Chọn d ung mô i sắc ký Dung m chưa tố ôi chiết t không c huyên b iệt VẾT TRẢI DÀI KHƠNG TÁCH Khắc phục Thăm dó lại hệ, chọn dung môi chiết mẫu chuyên biệt 25 XÉO Bản mỏng bị mẻ hai bờ, thành mỏng tiếp xúc dung mơi, hở bình sắc ký Thay mỏng khác Thay bình sắc ký khác 26 VẾT HÌNH MĨNG NGỰA Ngun nhân Vết chấm hình tròn q lớn Khắc phục Chấm nhỏ với nồng độ cao chấm vạch 27 Các vết lân cận trùng vào Nguyên nhân: chấm vết gần Khắc phục: chấm khoảng cách vết theo quy định 28 Vết hình lửa nhiều đầu Khắc phục Chấm kỹ mỏng khác Nguyên nhân Chấm vết không trùng 29 VẾT LOANG Nguyên nhân Vết khuyếch tán bay để lâu nhúng thuốc thử lâu Khắc phục Vẽ, chụp hình sau màu xong 30 Bản mỏng bị phồng rộp Khắc phục Chờ mỏng khô dung môi, thật khô thuốc thử màu (AV,VS) 31 Nguyên nhân: Chấm vết không trùng Vết hình móng ngựa nhiều đầu Tuyến dung mơi bị lệch Khắc phục: Chấm kỹ lại mỏng khác Lớp mỏng tráng khơng đều, hở bình sắc ký Thay mỏng khác 32 TỔNG HỢP CÁC BƯỚC TRONG SKLM 33 Tài liệu tham khảo Bộ Y tế (2018), Dược điển Việt Nam V tập II, Sắc ký lớp mỏng Phụ lục 5.4 trang PL 149-151, Hà Nội Nguyễn Ngọc Vinh, ctv (2016), Kiểm nghiệm 116 Dược Liệu phương pháp thực vật học & phương pháp sắc ký lớp mỏng, NXB Y học, trang ÷ 10, Hà Nội 34 Bộ mơn Dược liệu (2014), Giáo trình Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Đại học Y dược TPHCM, trang 71 ÷ 78 Thành phố HCM CHÂN THÀNH CẢM ƠN 36 DANH SÁCH SINH VIÊN NHÓM         Nguyễn Văn Lợi Em Võ Ngọc Duyên Nguyễn Thị Thanh Hương Đặng Phương Loan Đặng Quốc Lượm Thái Thành Nhân Lê Thanh Nhàn Ngô Hồng Nhung         Nguyễn Quốc Phương Nguyễn Thị Mai Thảo Trương Thị Thanh Thảo Phan Thị Minh Thư Châu Võ Hoàng Trâm Lý Ngọc Trinh Võ Hồng Sử Lâm Song Bảo Uyên 37 ...Nội dung báo cáo Kiến thức tổng quát Các bước chuẩn bị Tiến hành sắc ký lớp mỏng Ứng dụng công dụng Các tượng ngoại ý thường gặp cách khắc phục KIẾN THỨC TỔNG QUÁT VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG (SKLM)... gian triển khai Dung mơi bão hòa 15 BÁO CÁO KẾT QUẢ Để khô tự nhiên 16 Sắc ký đồ ƛ = 254 nm Sắc ký đồ ƛ = 366 nm Sắc ký đồ phun thuốc thử vanilin/ H2SO4 BÁO CÁO KẾT QUẢ UV 365 UV 254 Dragendorff... QUÁT VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG (SKLM)  Trường hợp 1: xác định tuyến dung mơi khoảng cách di chuyển chất phân tích x, y z khoảng cách di chuyển dung mơi tính từ điểm chấm mẫu Rf Sắc ký đồ sắc ký mỏng có