VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT Nguyễn Văn Nhị “Đa dạng di truyền thụ phấn chéo loài Dầu Song nàng (Dipterocarpus dyeri Pierre) Khu Bảo tồn Thiên nhiên - Văn hóa Đồng Nai, tỉnh Đồng Nai” Luận văn thạc sĩ: Sinh học thực nghiệm Hà Nội, 11/2018 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Mục tiêu, nội dung, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan họ Dầu loài Dầu Song nàng 1.1.1 Tổng quan họ Dầu (Dipterocarpaceae) 1.1.2 Loài Dầu Song nàng (Dipterocarpus dyeri Pierre) 1.1.3 Đa dạng di truyền thụ phấn chéo quần thể loài 1.1.4 Quản lý bảo tồn 12 1.2 Tổng quan ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử nghiên cứu đa dạng di truyền tiến hóa phân tử 13 1.2.1 Quần thể tính đa dạng di truyền quần thể 13 1.2.2 Một số kỹ thuật sinh học phân tử thƣờng đƣợc dùng nghiên cứu đa dạng di truyền thực vật 15 1.2.3 Kỹ thuật RAPD 16 1.2.4 Kỹ thuật RFLP 17 1.2.5 Kỹ thuật AFLP 17 1.2.6 Kỹ thuật SSR 17 1.2.7 Kỹ thuật ISSR 19 1.3 Tình hình nghiên cứu giới 19 1.4 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 21 CHƢƠNG II ĐỊA ĐIỂM, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Địa điểm nghiên cứu 23 2.2 Vật liệu nghiên cứu 23 2.2.1 Thu thập bảo quản mẫu DNA 23 2.2.2 Trình tự mồi sử dụng nghiên cứu di truyền loài Dầu Song nàng 24 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Phƣơng pháp tách chiết DNA tổng số 25 2.3.2 Phƣơng pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) 26 2.3.3 Phƣơng pháp điện di 28 2.3.3.1 Điện di gel agarose 28 2.3.3.2 Điện di gel Polyacrylamide 28 2.4 Phân tích số liệu 29 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết tách chiết DNA tổng số 31 3.2 Đánh giá hiệu thị SSR 31 3.3 Kết phân tích đa dạng di truyền loài Dầu Song nàng 34 3.3.1 Tần số allele quần thể trƣởng thành 34 3.3.2 Đa dạng di truyền loài Dầu Song nàng 37 3.3.3 Phân tích AMOVA 43 3.4 Kết phân tích thụ phấn chéo trội quần thể 44 3.5 Một số giải pháp bảo tồn loài Dầu Song nàng 46 CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 4.1 Kết luận 51 4.2 Kiến nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 Tài liệu tiếng Việt 53 Tài liệu tiếng Anh 56 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Ảnh Dầu Song nàng Hình 3.1 Kết điện di DNA tổng số từ vỏ số mẫu Dầu Song nàng 31 Hình 3.2 Kết điện di sản phẩm PCR đa hình với cặp mồi Dipt02 (A) Dipt08 (B) MK: marker 50 bp; SN1, 2, ,14:mẫu 32 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Trình tự nucleotide cặp mồi SSR dùng nghiên cứu 24 Bảng 2.2 Công thức pha đệm rửa (washing buffer) 10 ml 25 Bảng 2.3 Công thức pha đệm tách chiết (CTAB) 10 ml 26 Bảng 2.4 Thành phần phản ứng PCR 27 Bảng 2.5 Chu kỳ phản ứng PCR 27 Bảng 3.1 Số allele giá trị PIC, PD, Rp, MI cho locus đa hình 33 Bảng 3.2 Tần số allele cho locus trƣởng thành 35 Bảng 3.3 Đa dạng di truyền loài Dầu Song nàng 39 Bảng 3.4 Đa dạng di truyền số loài thuộc chi Dầu Việt Nam 42 Bảng 3.5 Phân tích AMOVA lồi Dầu Song nàng 43 Bảng 3.6 Thông số sinh sản Dầu Song nàng 44 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt Nội dung, chi tiết Variance components in the analysis of molecular AMOVA AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism ISSR Interal simple sequence repeat MI Marker index PCR Polymerase Chain Reaction PD Discrimination power PIC Polymorphic Information Content RAPD Random Amplified Polymorphism DNA RFLP Restriction fragment length Polymorphism 10 RP Resolving power 11 SSR Simple sequence repeat 12 FAO Tổ chức Lƣơng thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc variance MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Họ Dầu (Dipterocarpaceae) họ thực vật phổ biến vùng nhiệt đới Hiện gỗ loài họ Dầu chiếm thị phần lớn thị trƣờng gỗ giới Vì chúng đóng vai trò quan trọng nhiều quốc gia, chủ yếu quốc nƣớc Châu Á đặc biệt Đơng Nam Á Ngồi việc cung cấp gỗ, lồi họ Dầu đem lại nhiều loại sản phẩm có giá trị khác phục vụ đời sống ngƣời nhƣ nhựa chai (Shorea guiso), nhựa cứng (Neobalanocarpus sp., Hopea sp.), nhựa mủ (Dipterocarpus costatus), mỡ bơ (Shorea robusta), camphor (Dryobalanops aromatica), tannin (Dipterocarpus tuberculatus, Hopea odorata) Cronquist (1981) [35] phân chia họ Dầu (Dipterocarpaceae) thành phân họ gồm Dipterocarpoideae, Pakaraimoideae Monotoideae Việt Nam có 40 lồi họ Dầu thuộc chi (Anisoptera, Hopea, Parashorea, Vatica, Dipterocarpus, Shorea), hầu hết loài địa đặc hữu [12] Do giá trị thƣơng mại nhu cầu ngƣời dân địa phƣơng, loài họ Dầu bị khai thác mức Số lƣợng cho lồi khơng nhiều Nơi sống chúng bị thu hẹp suy giảm Trong năm 1980 1990, khai thác nhanh ngƣời dân địa phƣơng doanh nghiệp lâm nghiệp, với nơi sống loài Dầu bị thu hẹp phân cắt Do đó, việc đánh giá mức độ đa dạng di truyền môi trƣờng sống lồi Dầu đƣợc xem xét nhƣ cơng việc ƣu tiên hoạt động bảo tồn Dầu Song nàng (Dipterocarpus dyeri Pierre) phân bố rộng rừng nhiệt đới Đông Nam Bộ Tây Nguyên, bao gồm Khu bảo tồn Thiên nhiên - Văn hóa Đồng Nai, rừng phòng hộ Tân Phú, Vƣờn Quốc gia Cát Tiên (Đồng Nai), Vƣờn Quốc gia Bù Gia Mập (Bình Phƣớc), Lò Gò – Xa Mát (Tây Ninh), khu Bảo tồn Thiên nhiên Bình Châu - Phƣớc Bửu (Bà Rịa - Vũng Tàu) số tỉnh khác Tây Nguyên đảo Phú Quốc (Kiên Giang) Loài nằm Sách Đỏ Thế giới [59] Việt Nam [3] cần phải đƣợc bảo vệ: CR A1 cd, B1 + 2C Phạm vi nghiên cứu đề tài tập trung đánh giá mức độ đa dạng di truyền thụ phấn chéo quần thể Dầu Song nàng rừng nhiệt đới núi thấp Mã Đà (Vĩnh Cửu, Đồng Nai) sở phân tích cặp mồi thị Microsatellite để khám phá chất di truyền hạt giống tốt đáp ứng đƣợc yêu cầu chất lƣợng giống phục vụ công tác bảo tồn phát triển bền vững Mục tiêu, nội dung, ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài - Mục tiêu đề tài: + Xác định đƣợc đa dạng di truyền thụ phấn chéo loài Dầu Song nàng (Dipterocarpus dyeri Pierre) Khu bảo tồn Thiên nhiên - Văn hóa Đồng Nai, tỉnh Đồng Nai + Mục tiêu bảo tồn loài quý sở nghiên cứu sâu chất di truyền quần thể lồi + Có sở khoa học xác giúp nhà quản lý đƣa sách, biện pháp bảo tồn phục hồi loài hữu hiệu Việt Nam - Nội dung nghiên cứu + Phân tích đa dạng di truyền loài Dầu Song nàng sở phân tích cặp mồi Microsatellite + Xác định thơng số thụ phấn chéo lồi Dầu Song nàng Khu bảo tồn Thiên nhiên - Văn hóa Đồng Nai + Đề xuất số phƣơng án bảo tồn loài họ Dầu loài Dầu Song nàng - Ý nghĩa khoa học thực tiễn: Khoa học: Kết nghiên cứu dẫn liệu khoa học di truyền loài tuyển chọn trội đáp ứng đƣợc chất lƣợng giống phục vụ công tác bảo tồn phục hồi loài Kinh tế - xã hội: Các trội đƣợc tuyển chọn có nhiều đặc tính đáp ứng cho cơng việc phục hồi lồi Các giống từ trội đƣợc tuyển chọn đáp ứng yêu cầu nhƣ khỏe, phát triển nhanh, sức đề kháng tốt với dịch bệnh có khả thích nghi với biến đổi mơi trƣờng, giảm chi phí nhân giống Cơ chế sách: Các nhà quản lý có cách nhìn khoa học từ đƣa giải pháp phục hồi hữu hiệu loài bị đe dọa phạm vi toàn quốc 55 18.Trừng Văn Thái, 1999 Những hệ sinh thái rừng nhiệt đới Việt Nam NXBKHKT, HCM, 298 tr 19.Nguyễn Đức Thành, (2003) Đa dạng di truyền số loài thuộc họ Dầu (Dipterocarpaceae) Việt Nam Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 167-172 20.Nguyễn Đức Thành, Nguyễn Thúy Hạnh, Nguyễn Hoàng Nghĩa (2005) Nghiên cứu quan hệ di truyền số loài thuộc họ Dầu (Dipterocarpaceae) Việt Nam dựa đa hình ADN genome lục lạp Kỷ yếu Hội nghị toàn quốc “Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống” Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, 1379-1382 21.Nguyễn Đức Thành, Nguyễn Thúy Hạnh, Trần Quốc Trọng (2007) Kết sử dụng số chuỗi gen lục lạp nghiên cứu đa dạng di truyền xuất xứ lâm nghiệp Công nghệ sinh học, 5(1): 77-83 22.Nguyễn Đức Thành, Nguyễn Văn Phƣợng, Nguyễn Hoàng Nghĩa, 2009 Đa dạng di truyền loài Sao mạng (Hopea reticulate Tardicu) dựa phân tích số chuỗi DNA lục lạp thị RAPD Công nghệ sinh học,7(2): 203-210 23.Nguyễn Thị Phƣơng Trang, Trần Thu Hƣơng, L Triest, Nguyễn Minh Tâm (2014) Đặc điểm di truyền ba loài (Hopea) bị đe dọa tuyệt chủng Việt Nam Tạp chí Sinh học, 36(3): 316-322 24.Bùi Trung (2010) Tìm hiểu tác động auxin gibberelline đến khả rễ hom giâm Sao đen Tạp chí Khoa học lâm nghiệp 1: 1-7 56 Tài liệu tiếng Anh 25.Abasolo MA, Fernando ES, Borromeo TH and Hautea DM (2009) Crossspecies amplification of Shorea microsatellite DNA markers in Parashorea malaanonan (Dipterocarpaceae) Philippine Journal of Science 138(1): 2328 26.Aigner PA (2004) Ecological and genetic effects on demographic processes: pollination, clonality and seed production in Dithyrea maritima, Biol Cons., 116(1): 27-34 27.Ashton PS (1982) Dipterocarpaceae In: Van Steenis CGGJ (ed.) Flora Malesiana I (9): 237-552 28.Barrett SCH and Kohn JR (1991) Genetic and evolutionary consequences of small population size in plants: implications for conservation, In: Falk DA and Holsinger KE, Genetics and conservation of rare plants, Oxford University Press, pp 3-30 29.Bawa KS and Ashton PS (1991) Conservation of rare trees in tropical rain forests: a genetic perspective, In: Falk DA and Holsinger KE, Genetics and conservation of rare plants, Oxford University Press, pp 62-71 30.Beardmore JA (1983) Extinction, survival and genetic variation, In: Schonewold-Cox CM, Chambers SM, MacBryde B and Thomas L, Genetics and conservation, Cummings Pub Company INC, pp 125-151 31.Byers DL and Meagher TR (1992) Mate availability in small populations of plant species with homomorphic sprophytic self-incompatibility, Heredity, 68: 353-359 32.Chin Hong Ng, Chai Ting Lee, Soon Leong Lee, Lee Hong Tnah and Kevin Kit Siong Ng (2013), Isolation and characterization of microsatellite 57 markers for Shorea Platyclados (Dipterocarpaceae), Applications in Plant Sciences (7) 33.Changtragoon S (2001) Evaluating genetic diversity of Dipterocarpus alatus genetic resources in Thailand Using isozyme gene markers, In: Thielges BA, Sastrapradja SD, Rimbawanto A, (eds) In-situ and ex-situ conservation of commercial tropical trees, Yogyekarta, Japan, 349-354 34.Cheng-Chiu H (1987) An enumeration of Dipterocarpaceae from China In: Kostermans AJGH (ed.) Proceedings of third round table conference on dipterocarps, Mulawarm Univ Samarinda East Kalimantan, Indonesia, 16-20 April 1985: 528-580 35.Cronquist A (1981) An integrated system of classification of flowering plants Columbia University Press, New York 36.Crow JF and Denniston C (1988) Inbreeding and variance effective population numbers, Evolution, 42: 482-495 37.Doyle JJ and Doyle JL (1987) A rapid DNA isolation procedure for small qualities of fresh leaf tissue Phytochem Bull 19: 11-15 38.Excoffier L, Laval G and Schneider S (2005) Arlequin (version 3.0): an integrated software package for population genetics data analysis Evol Bioinform Online 1: 47-50 39.Fifi Gus Dwiyanti, Lucy Chong, Bibian Diway, Lee Ying Fah, Iskandar Zulkarnaen Siregar, Atok Subiakto, Koichi Kamiya, Ikuo Ninomiya, Ko Harada (2015) Population Genetic Diversity in The Genus Dryobalanops Gaertn f (Dipterocarpaceae) Based on Nuclear Microsatellite Markers International Journal Sustainable Future for Human Security J-SustaiN Vol 3, No 12-20 58 40.Ghazhoul J, Liston KA and Boyle TJB (1998) Disturbance induced density dependent seed set in Shorea siamensis (Dipterocarpaceae), a tropical forest tree J Ecology 86: 462-473 41.Godt MJW, Johnson BR and Hamrick JL (1996) Genetic diversity and population for multiple size of four southern Appalachian plant species, Cons Biol., 10: 796-805 42.Falk DA and Holsinger KE (eds.) (1991) Genetic and conservation of rare plants, Oxford University Press, New York, 283pp 43.FAO (1985) Final report FAO/UNEP Project on the Conservation of Forest Genetic Resources Rome, Italy 44.Finger A, Kettle CJ, Kaiser-Bunbury CN, Valleletin T, Mougal J, Ghazoul J (2012) Forest fragmentation genetics in a formerly widespread island endemic tree: Vateriopsis seychellarum (Dipterocarpaceae) Mol Ecol 21, 2369-2382 45.Frankham R (1995) Relationship of genetic variation to population size in wildlife, Cons Biol., 10: 309-317 46.Fukue Y, Kado T, Lee SL, Ng KKS, Muhammad N and Tsumura Y (2007) Effects of flowering tree density on the mating system and gene flow in Shorea leprosula (Dipterocarpaceae) in Peninsular Malaysia Journal of Plant Resources 120: 413-420 47.Ismail SA, Ghazoul JG, Ravikanth, Kushalappa CG, Uma Shaanker R and Kettle CJ (2014) Fragmentation Genetics of Vateria indica: implications for management of forest genetic resources of an endemic dipterocarp Conserv Genet Published on line, DOI: 10.1007/s10592-013-0559-7 48.Kathrin S and Malcolm H (eds.) (1991) Economic and ecological sustainability of tropical rain forest management, UNESCO, Paris 59 49.Kitamura K, Rahman MYBA, Ochiai Y and Yoshimaru H (1994) Estimation of the outcrossing rate on Dryobalanops aromatic Gaertn F in primary and secondary forests in Brunei, Borneo, Southeast Asia Plant Species Biology 9: 37-41 50.Hamilton WD (1982) Pathogens as causes of genetic diversity intheir host population biology of clonal organisms, Proceedings of the Royal Society of London, pp 232: 35-57 51.Maury-Lecon G and Curtet L (1998) Biogeography and evolutionary systematic of Dipterocarpaceae In: Appanah S and Turnbull JM (eds) A review of dipterocarps: Taxonomy, Ecology and Siviculture CIFOR, Bogor 5-44 52.Millar IC and Libby JW (1991) Strategies for conserving clinal, ecotypic and disjunct population diversity in widespread species, In Falk DA and Holsinger, KE (eds.), Genetic and conservation of rare plants Oxford University Press, New York, pp.149-170 53.Murawski DA, Gunatilleke IAUN and Bawa KS (1994) The effect of selective logging on inbreeding in Shorea megistophylla (Dipterocarpaceae) fromSri Lanka Conserv Biol 8:997-1002 54.Lee SL (2000) Mating system parameters of Dryobalanops aromatic Gaertn f (Dipterocarpaceae) in three different forest types and a seed orchard Heredity 85: 338-345 55.Lim LS, R Wickneswari, Lee SL and Latiff A (2001) Genetic structure of natural populations of Dryobalanops aromatic Gaertn F (Dipterocarpaceae) in Peninsular Malaysia using microsatellite DNA markers In: Thielges BA, Sastrapradja SD and Rimbawanto A (eds.), In-situ and ex-situ conservation of commercial tropical trees, Yogyekarta, Japan 309-324 60 56.Naito Y, Konuma A, Iwata H, Suyama Y, Seiwa K, Okuda T, Lee SL, Norwati M and Tsumura Y (2005) Selfing and inbreeding depression in seeds and seedings of Neobalanocarpus heimii (Dipterocarpaceae) J Plant Research 118: 423-430 57.Peakall R and Smouse PE (2006) Genalex 6: genetic analysis in excel Population genetic software for teaching and research Mol Ecol Notes 6: 288-295 58.Obayashi K, Tsumura Y, Ihara-Ujino T, Niiyama K, Tanouchi H, Suyama Y,Washitani I, Lee CT, Lee SL and Muhammad N (2002) Genetic diversity and outcrossing rate between undisturbed and selectively logged forests of Shorea curtisii (Dipterocarpaceae) using microsatellite DNA analysis Int J Plant Sci, 163: 151-158 59.Oldfield S, Lusty C and Mackinven A (1998) The World list of Threatened Trees World Conservation Press, Cambridge, UK 650pp 60.Prevost A, Wilkinson MJ (1999) A new system of comparing PCR primers applied to ISSR finger of potato cultivars Heor Appl Genet 98: 107-112 61.Rachmat HH, Kamiya H and Harada K (2012) Genetic diversity, population structure and conservation implication of the endemic Sumatran lowland dipterocarp tree species (Shorea javanica) Inter J Biodivers and Conserv, 4(14): 573-583 62.Rojo JP (1994) Species diversity and conservation status of Philippine dipterocarps In Drysdale RM, John SET, Yapa AC (eds) Proceedings: International Symposium on genetic conservation and production of tropical forest tree seed Thailand, 248-256 63.Smitinand T and Santinuk T (1981) Dipterocarpaceae of Thailand with special reference to silvicultural ecology In Ng FSP (eds.) Proceedings of 61 the second international round table conference on Dipterocarps Malaysian Forester 44: 377-385 64.Soulé ME (1983) Thresholds for survival: maintaining fitness and evolutionary potential, In: Soule ME and Wilcox BA (eds.), Conservation Biology: An Evolutionary-Ecological Perspective Sanderland, Masschusets, pp 151-69 65.Nguyen Minh Tam, Vu Dinh Duy, Nguyen Minh Duc, Vu Dinh Giap and Bui T Tuyet Xuan (2014) Genetic variation in and spatial structure of natural populations of Dipterocarpus alatus (Dipterocarpaceae) determined using single sequence repeat markers Genetics and Molecular Research, ISSN 1676-5680, 13(3): 5378-86 66.Nguyen Minh Tam, Phan Ke Loc, Vu Dinh Duy (2015) Genetic diversity in Xuan nha pine (Pinus armandii subsp xuanhaensis L.K Phan) Research J Biotechnology, 10(3): 30-36 67.Tam N M., Hoa N T and Trang N T P., Genetic variation in threatened conifer Cunninghamia lanceolata var konishii using ISSR markers: Implications for conservation, 2009, J Biol 31(2), pp 66-72 68.Tam NM, Duy VD, Duc NM, Giap VD and Xuan BTT (2014) Genetic variation in and spatial structure of natural populations of Dipterocarpus alatus (Dipterocarpaceae) determined using single sequence repeat markers Genetics and Molecular Research 13 (3): 5378-5386 69.Nguyen Thi Phuong Trang, Tran Thu Huong, Nguyen Minh Duc, Sierens Tim and Triest L (2014) Genetic population of threatened Hopea odorata Roxb in the protected areas of Vietnam Journal of Vietnamese Environment 6(1): 69-76 62 70.Wickneswari R, Ho WS, Lee KS and Lee CT (2004) Impact of disturbance on population and genetic structure of tropical forest trees For Genet 11, 193-201 71.Terauchi R (1994) A polymorphic microsatellite marker from the tropical tree Dryobalanops lanceolata (Dipterocarpaceae) Jpn J Genet 69: 567576 Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 16(3): 1-7, 2018 ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ THỤ PHẤN CHÉO TRONG QUẦN THỂ DẦU SONG NÀNG (DIPTEROCARPUS DYERI PIERE) Ở RỪNG NHIỆT ĐỚI NÚI THẤP MÃ ĐÀ (ĐỒNG NAI) Nguyễn Minh Đức1,5, Nguyễn Minh Tâm2,4, Vũ Đình Duy2, Bùi Thị Tuyết Xuân1, Đặng Phan Hiền1, Cao Thị Việt Nga3, Nguyễn Văn Nhị4 Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Bảo tàng Thiên nhiên Việt Nam, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Đại học Lâm nghiệp Việt Nam Học Viện Khoa học Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Center for Nutraceutical and Pharmaceutical Materials, Myongji University, Hàn Quốc  Ngƣời chịu trách nhiệm liên lạc E-mail: ngmtam58@gmail.com Ngày nhận bài: 23.3.2018 Ngày nhận đăng: 20.9.2018 TĨM TẮT Dầu song nàng (Dipterocarpus dyeri) lồi thực vật phân bố rộng rừng nhiệt đới núi thấp Nam Việt Nam bị đe dọa mức độ quốc gia quốc tế liên quan đến nơi sống bị suy giảm thu hẹp Để bảo tồn loài Dầu song nàng, đánh giá đa dạng di truyền mức độ thụ phấn chéo rừng nhiệt đới Mã Đà thuộc Khu Bảo tồn Thiên nhiên – Văn hóa Đồng Nai sở phân tích cặp mồi microsatellite từ trội chúng có ý nghĩa quan trọng cần thiết Kết phân tích mức độ đa dạng di truyền loài Dầu song nàng rừng nhiệt đới Mã Đà cao Tất locus đa hình số allele trung bình cho locus 4,1 Hệ số gen dị hợp tử quan sát kỳ vọng tƣơng ứng 0,461 0,543 Tƣơng tự, hệ số thụ phấn chéo đa locus trung bình locus lồi Dầu song nàng Mã Đà cao tƣơng ứng 0,884 0,645 Mức độ tự thụ phấn 0,12 Các kết thu đƣợc phản ánh nơi sống loài Dầu song nàng khu vực Mã Đà đƣợc phục hồi số lƣợng cá thể khu vực cao Tuy nhiên, khơng tìm thấy tái sinh lồi rừng nhiệt đới Mã Đà việc bảo tồn chuyển vị có vai trò quan trọng để bảo tồn bền vững loài Dầu song nàng khu vực Từ k óa: Bảo tồn, Dầu song nàng, Dipterocarpus dyeri, đa dạng di truyền, thụ phấn chéo, SSR MỞ ĐẦU Họ Dầu (Dipterocarpaceae) họ thực vật phổ biến vùng nhiệt đới Hiện nay, gỗ loài họ Dầu chiếm thị phần lớn thị trƣờng gỗ giới, chúng đóng vai trò quan trọng nhiều quốc gia, chủ yếu nƣớc châu Á đặc biệt vùng Đông Nam Á Ngoài việc cung cấp gỗ, loài họ Dầu đem lại nhiều loại sản phẩm có giá trị khác phục vụ đời sống ngƣời nhƣ nhựa chai (Shorea guiso), nhựa cứng (Neobalanocarpus sp., Hopea sp.), nhựa mủ (Dipterocarpus costatus), mỡ bơ (Shorea robusta), camphor (Dryobalanops aromatica), tannin (Dipterocarpus tuberculatus, Hopea odorata) Cronquist (1981) phân chia họ Dầu (Dipterocarpaceae) thành phân họ gồm Dipterocarpoideae, Pakaraimoideae Monotoideae Việt Nam có 40 lồi họ Dầu thuộc chi (Anisoptera, Hopea, Parashorea, Vatica, Dipterocarpus, Shorea), hầu hết loài địa đặc hữu (Nguyễn Hoàng Nghĩa, 2005) Trong năm 1980 1990, giá trị thƣơng mại nhu cầu ngƣời dân địa phƣơng, loài họ Dầu bị khai thác mức Việc khai thác nhanh ngƣời dân địa phƣơng doanh nghiệp lâm nghiệp, Tạp chí Công nghệ Sinh học 16(3): 1-7, 2018 với nơi sống loài Dầu bị thu hẹp phân cắt, làm số lƣợng cho lồi lại khơng nhiều Nơi sống chúng bị thu hẹp suy giảm mạnh Do đó, việc đánh giá mức độ đa dạng di truyền mơi trƣờng sống lồi Dầu đƣợc xem xét nhƣ công việc ƣu tiên hoạt động bảo tồn Dầu song nàng (Dipterocarpus dyeri) phân bố rộng rừng nhiệt đới Đông Nam Bộ Tây Nguyên, bao gồm khu Bảo tồn Thiên nhiên - Văn hóa Đồng Nai, rừng phòng hộ Tân Phú, Vƣờn Quốc gia Cát Tiên (Đồng Nai), Vƣờn Quốc gia Bù Gia Mập (Bình Phƣớc), Lò Gò – Xa Mát (Tây Ninh), Khu Bảo tồn Thiên nhiên Bình Châu – Phƣớc Bửu (Bà Rịa – Vũng Tàu) số tỉnh khác Tây Nguyên đảo Phú Quốc (Kiên Giang) Loài nằm Sách Đỏ Thế giới (Ashton, 1998) Việt Nam (Bộ Khoa học Công nghệ, 2007) cần phải đƣợc bảo vệ: CR A1 cd, B1 +2C Trong phạm vi nghiên cứu báo này, tập trung đánh giá mức độ đa dạng di truyền thụ phấn chéo quần thể Dầu song nàng rừng nhiệt đới núi thấp Mã Đà (Vĩnh Cửu, Đồng Nai) sở phân tích cặp mồi thị microsatellite để khám phá chất di truyền hạt giống tốt đáp ứng đƣợc yêu cầu chất lƣợng giống phục vụ công tác bảo tồn phát triển bền vững VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP Vật liệu Dầu song nàng gỗ, cao đến 30 m, đƣờng kính lớn đạt đến 97 cm (40-97 cm), thân thẳng, tròn (Hình 1) Tán hình nón, phân cành cao Vỏ ngồi xù xì, bong thành mảnh nhỏ Hình Quả Dầu (A) (B) song nàng Mã Đà (Đồng Nai) Gỗ màu nâu đỏ, cứng Lá đơn mọc cách, phiến hình bầu dục thn, kích thƣớc to dài 15-25 cm, đỉnh nhọn, gốc tù Đối với có lơng mặt dƣới Cụm hoa đơn nách lá, có lơng, dài 10-18 cm, 6-8 hoa khơng cuống, 30 nhị Quả hình nón, thn dài cm, rộng 2,8 cm, cạnh rõ Quả cánh lớn, dài 20-23 cm, rộng 3-4 cm Quả chín vào cuối tháng hàng năm Mỗi chứa hạt Cây hoa vào khoảng tháng hàng năm chín vào tháng tiếp theo, cuối tháng tháng Địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu đƣợc tiến hành rừng nhiệt đới núi thấp Mã Đà (Vĩnh Cửu, Đồng Nai), độ cao 129 m, tọa độ 11o12’ Bắc 107o09’ Đông Đây khu rừng đặc dụng có diện tích tự nhiên nƣớc ta, với hệ sinh thái đặc trƣng Đông Nam Bộ Khu rừng đƣợc thiết lập năm 2004 trực thuộc Ủy ban nhân dân tỉnh Đồng Nai, với di tích lịch sử nhƣ Trung ƣơng cục Đông Nam Bộ, Khu ủy miền Đông Nam Bộ Địa đạo Suối Linh Về thảm thực vật gồm kiểu rừng kín nửa rụng ẩm nhiệt đới, rừng kín rụng ẩm nhiệt đới với loài họ Dầu nhƣ Dầu rái (Dipterocarpus alatus), Dầu song nàng (D dyeri), Dầu lông (D initricatus), Sao đen (Hopea odorata) số loài khác thuộc họ nhƣ họ Bồ hòn, họ Sim kiểu rừng kín thƣờng xanh mƣa nhiệt đới Rừng thuộc rừng thứ sinh phục hồi sau khai thác chọn vào năm 1980 1990 Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 16(3): 1-7, 2018 Phƣơng pháp Kh s ực đ a Để đánh giá thông số đa dạng di truyền thụ phấn chéo Dầu song nàng rừng nhiệt đới núi thấp Mã Đà, hạt chín trội đƣợc chọn, thu thập gieo ƣơm Vƣờn ƣơm Biên Hòa (Trung tâm Lâm nghiệp Biên Hòa, Đồng Nai), đƣợc đánh số từ SN01 đến SN09 Cây trội đƣợc chọn ngẫu nhiên theo khoảng cách địa lý tiêu chí đặc điểm hình thái (Quyết định Bộ Lâm nghiệp ban hành Quy phạm kỹ thuật xây dựng rừng giống vƣờn giống (QPN 15-93)) Hạt từ trội đƣợc thu thập vào tháng Sau tháng nẩy mầm, đƣợc sử dụng để phân tích tính đa dạng di truyền thụ phấn chéo trội T c c ết DNA tổng số n ứng PCR DNA tổng số đƣợc tách chiết từ phƣơng pháp CTAB (Doyle Doyle, 1990) có cải tiến cho phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm Chín mƣơi bảy mẫu từ trội đƣợc sử dụng để phân tích thơng số thụ phấn chéo Dầu song nàng Mã Đà Mẫu đƣợc nghiền cối sứ có sử dụng nitrogen lỏng Nồng độ DNA đƣợc xác định máy quang phổ kế điện di gel agarose 0,8% Sau loại RNA enzyme RNase, nồng độ DNA đƣợc pha lỗng đến 10ng/µL Tám cặp mồi SSR đƣợc sử dụng cho đánh giá đa dạng di truyền khả thụ phấn chéo quần thể (Bảng 1) PCR đƣợc tiến hành với thể tích phản ứng 25 µL chứa thành phần gồm dung dịch đệm 1x PCR; 2,5 m MgCl2, mM dNTPs; 0,5 pmol cho mồi xuôi ngƣợc; 50 ng DNA tổng số 0,5 U Taq polymerase Quá trình nhân đƣợc tiến hành máy GeneAmp PCR System 9700 theo chu trình nhiệt sau: (1) Biến tính ban đầu: 94oC phút; (2) Biến tính: 94oC phút; (3) Bắt cặp: 5456oC phút (tuy thuộc vào cặp mồi); (4) Kéo dài: 72oC phút; (5) Lặp lại (2) đến (4): 40 chu kỳ; (6) Phản ứng kết thúc hoàn toàn: 72 oC 10 phút; (7) Giữ sản phẩm 4oC điện di Điện di sản phẩm gel polyacrylamide 8% 40 mL dung dịch đệm 1xTAE điện di Sequi-Gen (BIO-RAD, Mỹ), nhuộm GelRedTM Nucleotic Acid Gel Stain chụp ảnh máy soi gel BioDocAnalyze (BIOMETRA, Đức) Kích thƣớc allele đƣợc xác định phần mềm Gel-Analyzer GenoSens1850 (Clinx Sci Instruments Co Ltd, Trung Quốc) với thang marker 50 bp DNA (Invitrogen, Đức) Bảng Trình tự cặp mồi SSR đa dạng di truyền Dầu song nàng từ Mã Đà Mồi SSR Trình tự nucleotide cặp mồi (5’-3’) Số nucleot ide lặp lại Tm (OC) Kích thƣớc allele (bp) N Dipt1 F: CTTCCCTAAATTCCCCAATGTT R: TAATGGTGTGTGTACCAGGCAT (AG)15 55 193-211 Dipt2 F: AGTTTTATACATCACCGCCAA (GA)17 R: GAAGCCCCTAAGAATTAACCTGA 56 114-142 Dipt3 F: ACAATGAAACTTGACCACCCAT R: CAAAAGGACATACCAGCCTAGC (GA)24 56 224-256 Dipt4 F: TAGGGCATATTGCTTTCTCATC R: CTTATTGCAGTCATCAAGGGAA (AG)15 55 Dipt5 F: CAGGAGGGGAATATGGAAAA R: AAGTCGTCATCTTTGGATTGC (AC)9 54 HO HE Nguồn trích dẫn 0,312 0,354 Isagi al., 2002 Isagi al., 2002 Isagi al., 2002 Isagi al., 2002 Isagi al., 2002 A 0,527 0,451 0,474 0,603 214-256 0,511 0,566 120-150 0,506 0,579 et et et et et Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 16(3): 1-7, 2018 Dipt6 Dipt Dipt8 F: ATGCTTACCACCAATGTGAATG R: CTCGCAGCAGAACAACTTTCTA F: TGGCAAACAAGCTACTGTTCAT R: CATGGGTTTAGCAACCTACACA (GA)6 55 170-270 0,521 0,608 Terauch i, 1994 (TA)8 56 258-286 0,447 0,516 F: ATGTC CATGT TTGAG TG R: CATGG ACATA AGTGG AG (CT)8C 55 A(CT)5 CACCC (CTCA) 3CT(CA )10 170-230 0,468 0,59 Isagi et al., 2002 Ujino et al., 1998 4, 0.461 0.543 Trung bình Ghi chú: Tm: Nhiệt độ bắt cặp, NA: Số allele cho locus, HO: Hệ số gen dị hợp tử quan sát, HE: Hệ số gen dị hợp tử kỳ vọng Nhƣ vậy, đa dạng di truyền lồi Dầu song nàng Phân tích số liệu Mã Đà cao so với lồi dầu khác Việt Để xác định tính đa dạng di truyền Nam, nhƣ Dầu rái (D alatus) với HO = 0,209 HE = bao gồm số allele cho locus (NA), hệ số gen dị 0,239 (Nguyen Minh Tam et al., 2014); Sao đen (H hợp tử quan sát (HO) gen dị hợp tử kỳ vọng (HE), odorata) với HO = 0,366 HE = 0,356 (Nguyen Thi sử dụng phần mềm GenALEx (Peakall Phuong Trang et al., 2014) Kết tƣơng Smouse, 2006) Phần mềm MLTR (Ritland, 2002) đƣơng với số loài Dầu khác khu vực Đông đƣợc sử dụng để xác định thông số thụ phấn, Nam Á nhƣ loài Shorea leprosula (HO = 0,63 - 0,66, bao gồm hệ số thụ phấn chéo đa locus (tm), hệ số thụ HE = 0,69 - 0,71; Ng et al., 2004), Parashorea phấn chéo locus (ts),hệ số tự thụ phấn (s), hệ số malaanonan (HO = 0,26, HE = 0,46; Abasolo et al., tƣơng quan hai hệ (rp), hệ số thụ phấn cận 2009) Tuy nhiên, số allele cho locus (NA) lồi nỗn (F) Dầu song nàng thấp so với S leprosula (NA = 11,0 – 11,4; Ng et al., 2004), Dryobalanops KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN aromatic (NA = 5,1; Lim et al., 2001) Kết đa dạng di truyền thấp đƣợc tìm thấy cho lồi Dầu rái Ba mƣơi ba allele khác từ cặp mồi (D alatus) Thái Lan, với HO = 0,088, HE = 0,092 microsatellite, với kích thƣớc dao động từ 114 bp (Changtragoon, 2001) Nhƣ vậy, ảnh đến 286 bp, từ 97 non trội Dầu song hƣởng vào năm 1990, nơi sống bị suy giảm, nàng rừng nhiệt đới núi thấp Mã Đà tỉnh Đồng Nai mức độ đa dạng di truyền quần thể Dầu song đƣợc xác định Tám locus nghiên cứu cho kết nàng rừng nhiệt đới núi thấp Mã Đà trì mức đa hình (Hình 2) Số allele trung bình 4,1 cho cao Điều lý giải số cá thể locus, dao động từ allele locus Dipt1 quần thể cao, khoảng 500 cá thể trƣởng đến allele locus Dipt2, Giá trị đa dạng thành Tuy nhiên, khơng có tái sinh tự nhiên di truyền trung bình lồi Dầu song nàng rừng nhiệt đƣợc tìm thấy thời gian khảo sát thực địa có đới Mã Đà HO = 0,461 HE = 0,543 Giá trị NA, thể ảnh hƣởng độ che phủ tán rừng cao HO HE cho locus đƣợc trình bày Bảng sức sống nẩy mầm yếu Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 16(3): 1-7, 2018 Hình Kết điện di sản phẩm PCR đa hình Dầu song nàng Mã Đà với cặp mồi Dipt2 (A) Dipt8 MK: marker 50 bp; SN1, 2, , 14: mẫu Trên sở phân tích cặp microsatellite 97 giống từ trội thông số thụ phấn loài Dầu song nàng rừng nhiệt đới núi thấp Mã Đà (Bảng 2) Kết hệ số thụ phấn chéo cao mức độ đa locus locus có ý nghĩa Ở mức độ cá thể, giá trị thụ phấn chéo đa locus dao động từ 0,815 trội số đến 1,0 trội số Giá trị locus dao động từ 0,489 trội đến 0,873 trội Ở mức độ quần thể, giá trị thụ phấn đa locus 0,884 locus 0,645 Kết nghiên cứu tƣơng tự với số lồi khác đƣợc cơng bố Shorea congestiflora (tm = 0,87; Murawski et al., 1994), Dryobalanops aromatica (tm = 0,82; Kitamura et al., 1994), Stemonporus oblongifolius (tm = 0,84; Murawski, Bawa, 1994), Shorea leprosula (tm = 0,84; Lee et al., 2000) Kết lồi Dầu song nàng gồm hình thức thụ phấn chéo nhờ trùng gió, tự thụ phấn Thụ phấn chéo chiếm ƣu Ngoài ra, hệ số tự thụ phấn thấp loài Dầu song nàng Mã Đà (s) 0,116 Hệ số tƣơng quan quan hệ hệ (cha con) 0,316 hệ số cận noãn trội Mã Đà 0,185 Bảng Thông số sinh sản Dầu song nàng Mã Đà Mức độ cá thể: Cây trội Số Hệ số thụ phấn chéo đa locus (tm) (SE) Hệ số thụ phấn chéo locus (ts) (SE) Cây trội 0,852 (0,029) 0,783 (0,043) Cây trội 12 0,914 (0,034) 0,612 (0,026) Cây trội 1,0 (0,003) 0,757 (0,028) Cây trội 10 0,827 (0,044) 0,596 (0,019) Cây trội 10 0,901 (0,05) 0,779 (0,053) Cây trội 11 0,815 (0,022) 0,489 (0,034) Cây trội 13 0,903 (0,018) 0,608 (0,064) Cây trội 11 0,825 (0,049) 0,669 (0,055) Cây trội 12 0,924 (0,071) 0,516 (0,081) Mức độ quần thể: Hệ số thụ phấn đa locus (tm) 0,884 Hệ số thụ phấn locus (ts) 0,645 Hệ số tự thụ phấn (s=1-tm) 0,116 Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 16(3): 1-7, 2018 Hệ số tƣơng quan quan hệ hai hệ (cha con) (rp) 0,316 Hệ số cận noãn trội (F) 0,185 Ghi chú: SE: Độ lệch chuẩn KẾT LUẬN Kết nghiên cứu sinh sản lƣỡng tính xuất lồi Dầu song nàng (Dipterocarpus dyeri) với thụ phấn chéo chiếm ƣu trì tính đa dạng di truyền cao rừng nhiệt đới núi thấp Mã Đà Tuy nhiên, không xuất tái sinh rừng Mã Đà, để bảo tồn phát triển bền vững loài Dầu song nàng, thu thập hạt từ trội có mức độ thụ phấn chéo cao nhân giống yêu cầu cần phải đƣợc tiến hành Lời cám ơn: Đề tài hỗ trợ kinh phí Quỹ Nafosted, mã số 106.06-2017.14 TÀI LIỆU THAM KHẢO Abasolo MA, Fernando ES, Borromeo TH, Hautea DM (2009) Cross-species amplification of Shorea microsatellite DNA markers in Parashorea malaanonan (Dipterocarpaceae) Philippine J of Sci 138(1): 23–28 Ashton P (1998) Dipterocarpus dyeri The IUCN Red List of Threatened Species 1998: e.T33011A9748202 http://dx.doi.org/10.2305/IUCN UK.1998.RLTS.T33011A9748202.en.Downloaded on 13 February 2017 Bộ Khoa học Công nghệ (2007) Sách đỏ Việt Nam, Phần II: Thực vật Changtragoon S (2001) Evaluating genetic diversity of Dipterocarpus alatus genetic resources in Thailand using isozyme gene markers, In In-situ and Ex-situ conservation of commercial tropical trees (Thielges BA, Sastrapradja SD and Rimbawanto A, eds) Gadjah Mada Univ Yogyekarta 349–354 Isagi V, Kenta T, Nakashizuka T (2002) Microsatellite loci for a tropical emergent tree, Dipterocarpus tempehes V S1 (Dipterocarpaceae) Mol Ecol Not 2(1): 12–13 Kitamura K, Rahman MYBA, Ochiai Y, Yoshimaru H (1994) Estimation of the outcrossing rate on Dryobalanops aromatica Gaertn F In primary and second forests in Brunei, Borneo, southeast Asian Pl Sp Biol 9: 37–41 Lee SL, Wickneswari R, Mahari MC, Zakri AH (2000) Mating system parameters in a tropical tree species, Shorea leprosula Miq (Dipterocarpaceae) from Malaysian Lowland Dipterocarp forest Bitropica 32: 693–702 Lim LS, Wickneswari R, Lee SL, Latiff A (2001) Genetic structure of natural populations of Dryobalanops aromatic Gaertn F (Dipterocarpaceae) in Peninsular Malaysia In Insitu and Ex-situ conservation of commercial tropical trees (Thielges BA, Sastrapradja SD and Rimbawanto A, eds.) Gadjah Mada Univ Yogyekarta, 309–324 Murawski D, Bawa KS (1994) Genetic structure and mating system of Stemonoporus oblongifolius (Dipterocarpaceae) in Sri Lanka Am J Bot 81: 155– 157 Murawski DA, Dayanandan B, Bawa KS (1994) Outcrossing rates of two endemic Shorea species from Sri Lankan tropical rain forests Biotropica 26(1): 23–29 Cronquist A (1981) An integrated system of classification of flowering plants Columbia Univ Press, New York Ng KKS, Lee SL, Koh CL (2004) Spatial structure and genetic diversity of two tropical tree species with contrasting breeding systems and different ploidy levels Mol Ecol Doi: 10.1046/j.1365294X.2004.02094.x Doyle JJ, Doyle JL (1990) Isolation of plant DNA from fresh tissue Focus 12: 13–15 Nguyễn Hoàng Nghĩa (2005) Cây Họ Dầu Việt Nam Nhà xuất Nông nghiệp Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 16(3): 1-7, 2018 Nguyen Minh Tam, Vu Dinh Duy, Nguyen Minh Duc, Vu Dinh Giap, Bui Thi Tuyet Xuan (2014) Genetic variation in and spatial structure of natural populations of Dipterocarpus alatus (Dipterocarpaceae) determined using single sequence repeat markers Genet Mol Res 13(3): 5378–5386 Nguyen Thi Phuong Trang, Tran Thi Huong, Nguyen Minh Duc, Sierens T, Triest L (2014) Genetic population of threatened Hopea odorata Roxb In the protected areas of Vietnam J Viet Env 6(1): 69–76 Ritland K (2002) Extensions of models for the estimation of mating systems using n independent loci Heredity 88: 221–228 Terauchi R (1994) A polymorphic microsatellite marker from the tropical tree Dryobalanops lanceolata (Dipterocarpaceae) Japan J Genet 69(5): 567–576 Ujino T, Kawahara T, Tsumara Y, Nagamitsu T, Yoshimaru H, Ratnam W (1998) Development and polymorphism of simple sequence repeat DNA markers for Shorea curtisii and other Dipterocarpaceae species Heredity 81: 422–428 Peakall R, Smouse PE (2006) Genalex 6: genetic analysis in excel Population genetic software for teaching and research Mol Ecol Not 6: 208–295 GENETIC DIVERSITY AND OUTCROSSING RATE OF DIPTEROCARPUS DYERI IN MA DA LOWLAND TROPICAL FOREST (DONG NAI) Nguyen Minh Duc1,5, Nguyen Minh Tam2,4, Vu Dinh Duy2, Bui Thi Tuyet Xuan1, DangPhan Hien1, Cao Thi Viet Nga3, Nguyen Van Nhi4 Institute of Ecology and Biological Resources, Vietnam Academy of Science and Technology Vietnam National Museum of Nature, Vietnam Academy of Science and Technology Vietnam National University of Forestry Graduate University of Science and Technology, Vietnam Academy of Science and Technology Center for Nutraceutical and Pharmaceutical Materials, Myongji University, Korea SUMMARY Human activities often lead to the disturbed and fragmented habitat and consequently threated species Dipterocarpus dyeri (Dipterocarpaceae) is widely distributed in lowland rainforests in southeast Vietnam Due to over- exploitation and habitat destruction in the 1980s and 1990s, the species is listed as threatened Understanding the genetic variation and mating rate within D dyeri population that occurs in forest patches is necessary to establish effectively conservation strategies for this species To conserve the species in tropical forests, genetic diversity and mating rate were investigated on the basis of eight microsatellites (single sequence repeat, SSR) All of the eight loci were polymorphic A total of 33 different alleles were observed across the screened loci The SSR data indicated high genetic diversities (NA = 4.1; HO = 0.461 and HE = 0.543) and the inbreeding value was high (0.185) The mating system parameters were determined using the mixed mating model and indicated high outcrossing rates (tm = 0.884 and ts = 0.645) The differences of significant tm - ts value indicated that inbreeding contributed to selfing rate for this species in lowland tropical forests of Ma Da This study also indicated the importance of conserving the genetic resources of Dipterocarpus dyeri species in Ma Da rainforests Genetic conservation should derive from correlated outcrossing The conservation strategy should be established an ex-situ conservation site with new big population for this species from all genetic groups, which might improve its fitness under different environmental stresses Keywords: Conservation, Dipterocarpus dyeri, genetic diversity, outcrossing rate, SSRs ... bảo vệ loài Dầu Song nàng khu rừng cấm, khu bảo tồn thiên nhiên phát triển khu rừng giống để bảo tồn nguồn gen loài 9 1.1.3 Đa dạng di truyền, thụ phấn chéo quần thể lồi Dẫn liệu phân tích đa. .. (Dipterocarpus dyeri Pierre) Khu bảo tồn Thiên nhiên - Văn hóa Đồng Nai, tỉnh Đồng Nai + Mục tiêu bảo tồn loài quý sở nghiên cứu sâu chất di truyền quần thể loài + Có sở khoa học xác giúp nhà quản... Song nàng Khu bảo tồn Thiên nhiên - Văn hóa Đồng Nai + Đề xuất số phƣơng án bảo tồn loài họ Dầu loài Dầu Song nàng - Ý nghĩa khoa học thực tiễn: Khoa học: Kết nghiên cứu dẫn liệu khoa học di truyền