VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI dP rm ac y, KHOA Y DƯỢC ed ici ne an ĐINH THỊ NGUYỆT ÁNH CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ M XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT (Eclipta alba) Sc ho ol of TRONG CÂY CỎ NHỌ NỒI Co py rig ht @ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2019 VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ac y, KHOA Y DƯỢC dP rm Người thực hiện: ĐINH THỊ NGUYỆT ÁNH CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ ed ici ne an XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CÂY CỎ NHỌ NỒI M (Eclipta alba) : QH.2014.Y Sc Khóa ho ol of KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH DƯỢC HỌC PGS.TS Dương Thị Ly Hương Co py rig ht @ Người hướng dẫn: Ths Nguyễn Thị Hồng Anh Hà Nội – 2019 VN U LỜI CẢM ƠN Khóa luận kết cho trình học tập, rèn luyện em Khoa Y ac y, Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trình nghiên cứu, thực hành Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận văn này, em nhận dP rm nhiều giúp đỡ quý báu từ Thầy, Cô giáo, nhà khoa học Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Viện Dược Liệu gia đình bạn bè Em xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể Ban Giám hiệu Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng tạo điều kiện cho em làm khóa luận tốt nghiệp ed ici ne an Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Dương Thị Ly Hương, PGS.TS Đỗ Thị Hà, Ths Nguyễn Thị Hồng Anh, TS Trần Thanh Hà cán nghiên cứu Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu giúp đỡ em q trình thực khóa luận Hà Nội, ngày 23 tháng năm 2019 Sinh viên Co py rig ht @ Sc ho ol of M Em xin chân thành cảm ơn! Đinh Thị Nguyệt Ánh 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 C-NMR VN U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton H-NMR ac y, (Cacbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) Sắc ký cột (Column Chromatography) DCM Dicloromethan DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer DM Dung môi DMSO Dimethyl sulfoxide DL/DM Tỉ lệ dược liệu/dung mơi ESI-MS Phổ khối ion hóa phun mù điện tử ed ici ne an dP rm CC (Electronspray Ionization Mass Spectrum) Etylacetat HMBC Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết of M EtOAc (Heteronuclear Multiple Bond Connectivity) Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết ol HSQC @ MS Sc MeOH ho (Heteronuclear Single Quantum Coherence) ht SKĐ rig TLC Co py UV-Vis Methanol Phổ khối lượng (Mass Spectroscopy) Sắc ký đồ Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography) Phổ tử ngoại (Ultra violet- Visible) VN U DANH MỤC CÁC BẢNG, CÁC HÌNH Bảng 3.1 Dữ liệu phổ hợp chất N01 wedelolacton 19 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất N02 quercetin 20 ac y, Bảng 3.3 Dữ liệu phổ hợp chất N03 methyl gallat 22 dP rm Hình 1.1 Cây Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) Hình 1.2 Cấu trúc hợp chất Alkaloid Hình 1.3 Cấu trúc hợp chất Coumestan Hình 1.4 Cấu trúc hợp chất Flavonoid an Hình 1.5 Cấu trúc hợp chất Sterol ed ici ne Hình 1.6 Cấu trúc hợp chất Saponin triterpen Hình 1.7 Cấu trúc hợp chất Saponin triterpen Hình 1.8 Cấu trúc dẫn xuất thiophen polyacetylen Hình 3.1 Sơ đồ phương pháp chiết xuất phân đoạn Cỏ nhọ nồi 15 M Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao phân đoạn EtOAc Cỏ nhọ of nồi 16 ol Hình 3.3 SKĐ TLC N01 cao EtOAc 17 ho Hình 3.4 SKĐ TLC N02 cao EtOAc 17 Sc Hình 3.5 SKĐ TLC N03 cao EtOAc 17 Hình 3.6 Cấu trúc hợp chất N01 (Wedelolacton) 18 @ Hình 3.7 Cấu trúc hợp chất N02 (Quercetin) 21 Co py rig ht Hình 3.8 Cấu trúc hợp chất N03 (Methyl gallat) 23 VN U MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ac y, DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH dP rm ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vài nét họ Cúc (Asteraceae) 1.2 Tổng quan Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.1 Vị trí phân loại Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) an 1.2.2 Đặc điểm thực vật Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) ed ici ne 1.2.3 Thành phần hóa học Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.4 Tác dụng sinh học Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tượng 12 M 2.2 Hoá chất, thiết bị 12 2.2.1 Hoá chất 12 of 2.2.2 Thiết bị 12 2.3 Phương pháp chiết xuất phân lập xác định cấu trúc hợp chất tinh khiết 13 ol 2.3.1 Phương pháp chiết xuất phân lập 13 ho 2.3.2 Phương pháp xác định nhận dạng cấu trúc 14 Sc CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 15 @ 3.1 Chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi phân lập hợp chất từ cao phân đoạn etyl acetat 15 3.1.1 Kết chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi 15 ht 3.1.2 Kết phân lập hợp chất Cỏ nhọ nồi 16 rig 3.2 Biện luận cấu trúc hợp chất phân lập từ Cỏ nhọ nồi 18 Co py 3.2.1 Biện luận cấu trúc N01 18 3.2.2 Biện luận cấu trúc N02 20 3.2.3 Biện luận cấu trúc N03 21 3.3 Bàn luận 23 VN U 3.3.1 Về chiết xuất 23 3.3.2 Về phân lập xác định cấu trúc hợp chất 23 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 ac y, TÀI LIỆU THAM KHẢO Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm PHỤ LỤC VN U ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam quốc gia có khí hậu nhiệt đới thuận lợi cho phát triển ac y, nhiều loại thuốc Với đa dạng, phong phú thuốc tạo nguồn tài nguyên dược liệu vô quý báu cho nước ta Từ xa xưa, ông cha ta sử dụng thuốc cổ truyền từ loại để chữa trị số bệnh thường gặp như: cảm, sốt, chảy máu, đau bụng,… Đó thuốc sử dụng phổ biến dP rm truyền lại từ đời sang đời khác Tuy nhiên thuốc dựa kinh nghiệm cha ơng ta mà chưa có sở khoa học Ngày nay, khoa học kỹ thuật phát triển người sâu vào nghiên cứu làm sáng tỏ thành phần, cấu trúc, tác dụng,… loài thường ed ici ne an sử dụng thuốc dân gian Trong nghiên cứu y dược đại, hợp chất hữu từ thuốc flavonoid, saponin, alkaloid, coumarin,… nguồn cung cấp hợp chất có tiềm để thử hoạt tính sinh học, phục vụ cho nhiều lĩnh vực khoa học, đặc biệt y học of M Một số loài sử dụng phổ biến thuốc cổ truyền cỏ nhọ nồi hay gọi cỏ mực Cỏ nhọ nồi dược liệu nghiên cứu nhiều nước quốc tế Trung Quốc, Nhật Bản, Ấn Độ, Thái Lan,…với nhiều tác dụng kháng viêm, kháng nấm, cầm máu, chống ung thư… sử dụng thuốc cổ truyền để điều trị bệnh như: nôn, chảy máu cam, rụng tóc, suy nhược thần kinh, nấm, viêm loét, lở ngứa, ban chẩn,…[2] Sc ho ol Trước đa dạng cấu trúc lý hóa, hoạt tính sinh học mối tương quan cấu trúc tác dụng, để hiểu rõ vai trò hợp chất có cỏ nhọ nồi đặt sở khoa học cho việc sử dụng thuốc, ta cần tiếp tục tiến hành tách chiết xác định cấu trúc thành phần hóa học đặc biệt thành phần chưa phân lập cây, từ đặt tiền đề để nghiên cứu thêm tác dụng, hoạt tính sinh học hợp chất ht @ Để góp phần nghiên cứu thành phần hóa học Cỏ nhọ nồi, thực đề tài: “Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc số hợp chất Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba)” với mục tiêu: Co py rig Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn Ethyl acetat Xác định cấu trúc chất phân lập phân đoạn Ethyl acetat CHƯƠNG 1: VN U TỔNG QUAN 1.1 Vài nét họ Cúc (Asteraceae) ac y, Trong lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida), họ Cúc (Asteraceae hay Compositae) họ lớn lớp này, với 1.600 chi 23.000 loài Chúng thường tập trung chủ dP rm yếu đồng cỏ thảm thực vật núi, gặp vùng rừng nhiệt đới ẩm với độ cao thấp Họ Cúc họ thực vật bật số loài thực vật sử dụng dân tộc văn hóa địa tất nơi giới, đặc biệt cho mục đích y học [8] Các lồi thuộc họ Cúc có đặc điểm: cụm hoa dạng đầu, bao phấn hữu tính, ed ici ne an chùm lông quả, loại bế tạo thành từ nỗn khơng nẻ chín [1] Họ Cúc có chứa chất chuyển hóa thứ cấp phong phú đa dạng, phát triển M hợp chất quan trọng tiến hóa họ Nguồn thơng tin hợp chất có giá trị việc phân loại; xuất vắng mặt hợp chất hóa học cụ thể nhóm hợp chất thường biểu thị mối quan hệ phân loại phân họ cấp thấp [8] ol of 1.2 Tổng quan Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) 1.2.1 Vị trí phân loại Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) ho Cây Cỏ nhọ nồi hay gọi cỏ mực, hạn liên thảo có tên khoa học Eclipta alba Eclipta prostrata (L.), thuộc họ Cúc Asteraceae (Compositae) [1], [2] Sc Theo “Từ điển thuốc Việt Nam” tác giả Võ Văn Chi [1], Cỏ nhọ nồi có vị trí phân loại sau: @ Giới Thực vật: Plantae Co py rig ht Ngành Ngọc lan: Magnoliophyta Lớp Ngọc lan: Magnoliopsida Phân lớp Cúc: Asteridae Bộ Cúc: Asterales Họ Cúc: Asteraceae Loài: Eclipta alba 1.2.2 Đặc điểm thực vật Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) [2] VN U Mô tả: Cây thảo mọc năm, thân cao 10-60 cm, phân nhánh, màu lục, đỏ tía, phủ lơng cứng Lá mọc đối, phiến hình giáo tới bầu dục – thuôn, dài 3-10 cm, rộng 0,5-2,5 cm, mép ngun khía răng, có lơng tơ dày hai mặt Cụm hoa hình bán cầu, đường kính 1-1,2 cm, cuống dài 1,5 mm, nách ac y, cành Tổng bao gồm hàng bắc hình bầu dục, có lông tơ mặt lưng Đế hoa lồi, rộng cm Các hoa mép hoa có tràng dạng lưỡi nhỏ, màu Hình 1.1 Cây cỏ nhọ nồi (Eclipta alba) [12] @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm trắng, đầu có hai thùy; hoa lưỡng tính giữa, hình ống, đầu có 4-5 thùy Quả bế dẹt, có cạnh màu đen Bộ phận dùng: Phần mặt đất Có thể thu hái quanh năm, dùng tươi ht hay phơi khô py rig Phân bố: Ra hoa kết từ tháng đến tháng 11 Mọc hoang chỗ ẩm mát ven làng, đồng ruộng từ vùng thấp lên tới độ cao 1800m Phân bố phổ biến khắp nơi từ Bắc vào Nam phân bố nước nhiệt đới khác thuộc châu Á, châu Co Phi ht rig py Co Phụ lục 1.11 Phổ HMBC hợp chất N01 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U ht rig py Co Phụ lục 1.12 Phổ HSQC hợp chất N01 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U ht rig py Co Phụ lục 1.13 Phổ HSQC hợp chất N01 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm ac y, VN U Phụ lục Phổ hợp chất N02 (Quercetin) Phụ lục 2.1 Phổ 1H-NMR hợp chất N02 ht rig py Co Phụ lục 2.2 Phổ 1H-NMR hợp chất N02 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U VN U ac y, dP rm an ed ici ne M of ol ho Sc @ ht rig py Co Phụ lục 2.3 Phổ 13C-NMR hợp chất N02 VN U ac y, dP rm an ed ici ne M of ol ho Sc @ ht rig py Co Phụ lục 2.4 Phổ 13C-NMR hợp chất N02 ht rig py Co Phụ lục 2.5 Phổ DEPT hợp chất N02 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U ht rig py Co Phụ lục 2.6 Phổ DEPT hợp chất N02 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ici ne an dP rm ac y, VN U Phụ lục Phổ hợp chất N03 (Methyl gallat) Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR hợp chất N03 ht rig py Co Phụ lục 3.2 Phổ 1H-NMR hợp chất N03 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U VN U ac y, dP rm an ed ici ne M of ol ho Sc @ ht rig py Co Phụ lục 3.3 Phổ 13C-NMR hợp chất N03 VN U ac y, dP rm an ed ici ne M of ol ho Sc @ ht rig py Co Phụ lục 3.4 Phổ 13C-NMR hợp chất N03 ht rig py Co Phụ lục 3.5 Phổ HMBC hợp chất N03 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U ht rig py Co Phụ lục 3.6 Phổ HMBC hợp chất N03 @ ol ho Sc of M ed ici ne ac y, dP rm an VN U ... học Cỏ nhọ nồi, thực đề tài: Chiết xuất, phân lập, xác định cấu trúc số hợp chất Cỏ nhọ nồi (Eclipta alba)” với mục tiêu: Co py rig Chiết xuất phân lập số hợp chất từ phân đoạn Ethyl acetat Xác. .. Kết chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi 15 ht 3.1.2 Kết phân lập hợp chất Cỏ nhọ nồi 16 rig 3.2 Biện luận cấu trúc hợp chất phân lập từ Cỏ nhọ nồi 18 Co py 3.2.1 Biện luận cấu trúc N01 ... BÀN LUẬN 3.1 Chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi phân lập hợp chất từ cao phân đoạn ac y, etyl acetat 3.1.1 Kết chiết phân đoạn Cỏ nhọ nồi dP rm Lấy kg cỏ nhọ nồi xay mịn chiết nóng với MeOH, chiết lần 700C,