13.4 PHÉP THỬ CHẤT GÂY SỐT Phép thử xác định cách đo tăng thân nhiệt thỏ sau tiêm tĩnh mạch dung dịch vô khuẩn chất cần kiểm tra Lựa chọn động vật thí nghiệm Dùng thỏ trưởng thành, khỏe mạnh, giống, cân nặng khơng 1,5kg, ni dưỡng thức ăn khơng có chứa kháng sinh thỏ khơng có dấu hiệu giảm cân q trình thử nghiệm Khơng dùng để thử nghiệm nếu: (a) Thỏ dùng thử chất gây sốt có kết âm tính vòng ngày trước đó, (b) Thỏ dùng thử chất gây sốt có kết dương tính vòng tuần Khu vực lưu giữ động vật Thỏ nuôi giữ riêng khu vực yên tĩnh, có nhiệt độ ổn định Cho thỏ nhịn ăn từ đêm trước thử, khơng cho uống nước q trình thử Tiến hành phép thử phòng n tĩnh, khơng có tiềng ồn, nhiệt độ phòng chênh lệch khơng q oC so với khu vực nuôi giữ, thỏ phải lưu giữ điều kiện phòng thí nghiệm khoảng 18 trước thử nghiệm Dụng cụ, bơm kim tiêm: Tất dụng cụ, bơm kim tiêm phải rửa tráng nước cất, sấy nhiệt độ 250oC 30 phút 200oC Hộp/ giá giữ thỏ: Các hộp/ giá giữ thỏ cho trường hợp đo nhiệt độ thiết bị điện thiết kế để giữ cổ vật không chật quá, phần thể lại thoải mái để thỏ ngồi tư bình thường Khơng giữ thỏ loại kẹp giá gây đau khó chịu cho vật Thỏ phải cho vào hộp giá trước thử giữ suốt q trình thử nghiệm Nhiệt kế: Nhiệt kế thiết bị điện dùng để ghi nhiệt độ có độ xác 0,1 oC đưa vào trực tràng thỏ với độ sâu 5cm Độ sâu nhiệt kế trực tràng phải giống thỏ Nếu dùng thiết bị điện, đầu đo nhiệt độ phải đặt trực tràng suốt trình thử Thử nghiệm sơ Chỉ nên tiến hành thử sơ với thỏ lần dùng thử chất gây sốt Trong vòng đến ngày trước kiểm tra mẫu thử, tiêm tĩnh mạch tai 10ml/ kg thỏ dung dịch natri clorid 0,9% khơng có chất gây sốt, làm ấm đến khoảng 38 o5 trước tiêm Ghi nhiệt độ thỏ, bắt đầu 90 phút trước tiêm tiếp tục sau tiêm Khơng dùng thỏ có nhiệt độ thay đổi q 0,6oC vào thử nghiệm thức Thử nghiệm thức Mỗi mẫu thử nhóm thỏ Chuẩn bị tiêm mẫu thử: Mẫu thử hòa tan dung mơi khơng có chất gây sốt, dung dịch natri clorid 0,9% chất lỏng qui định chuyên luận riêng Làm ấm dung dịch thử lên khoảng 38o5 trước tiêm Tiêm chậm dung dịch thử vào tĩnh mạch tai thỏ khoảng thời gian khơng q phút, trừ có dẫn khác chuyên luận riêng Lượng mẫu thử tiêm thay đổi tùy theo chế phẩm cần kiểm tra qui định chuyên luận riêng Thể tích tiêm khoảng 0,5 – 10ml/ kg thể trọng thỏ Theo dõi nhiệt độ xác định đáp ứng Ghi nhiệt độ thỏ 30 phút lần, 90 phút trước tiêm tiếp tục sau tiêm Theo dõi nhiệt độ trước tiêm, khơng dùng vào thử nghiệm nếu: - Thỏ có chênh lệch nhiệt độ ≥ 0,2oC lần ghi liên tiếp, - Thỏ có nhiệt độ ban đầu cao 39o8 thấp 38oC, - Nhiệt độ thỏ nhóm khác 1oC “Nhiệt độ ban đầu” thỏ trung bình giá trị nhiệt độ ghi cách 30 phút, xác định khoảng 40 phút trước tiêm dung dịch thử “Nhiệt độ tối đa” thỏ nhiệt độ cao ghi cho thỏ vòng sau tiêm Chênh lệch “nhiệt độ ban đầu” “nhiệt độ cao nhất” gọi đáp ứng Khi chênh lệch âm, kết coi đáp ứng Đánh giá kết quả: Đầu tiên thử nhóm thỏ, tùy thuộc vào kết thu được, thử thêm nhóm thỏ khác tổng cộng nhóm, cần Nếu tổng đáp ứng nhóm khơng vượt q số ghi cột bảng đây, mẫu thử đạt yêu cầu Nếu tổng đáp ứng vượt số ghi cột không vượt số ghi cột lặp lại phép thử nhóm khác nêu Nếu tổng đáp ứng lớn số ghi cột mẫu thử không đạt yêu cầu Số thỏ 12 Mẫu thử đạt tổng đáp ứng không vượt 1,15 2,80 4,45 6,60 Mẫu thử không đạt tổng đáp ứng vượt 2,65 4,30 5,95 6,60 Những thỏ có nhiệt độ tăng cao 1,2 oC loại khơng dùng lại cho phép thử chất gây sốt