17.3 ĐỒ ĐỰNG VÀ NÚT BẰNG CHẤT DẺO Chất dẻo hay nhựa dẻo hợp chất cao phân tử thiên nhiên tổng hợp Đồ đựng chất dẻo dùng cho chế phẩm dược vật dụng chế tạo theo khuôn mẫu phù hợp để đựng thuốc mặt chúng tiếp xúc trực tiếp với thuốc Nếu đồ đựng chai, lọ, ống loại tương tự thường phải có nút kèm Nút để đậy kín đồ đựng phần đồ đựng, đồng thời phải có biện pháp thích hợp xi sáp, hàn, để đóng nút đồ đựng phải có độ kín đạt u cầu Ở phạm vi rộng hơn, đồ đựng chế tạo chất dẻo có loại khác khơng cần có nút để làm kín,như túi, ống hàn kín nhiệt, Nguyên liệu chất dẻo dùng chế tạo đồ đựng thuốc hay phối chế từ nhiều polymer thêm số chất Những chất thêm vào chất chống oxy hoá, chất ổn định, chất làm dẻo, chất làm bóng, chất mầu Đồ đựng nút làm chất dẻo dùng để đựng nhiều dạng thuốc theo đường dùng khác nhau: Đựng thuốc tiêm chai, túi, ống Đựng thuốc nhỏ mắt, thuốc tra mắt lọ, ống Đựng thuốc uống thuốc dùng chai, lọ, vài loại đặc biệt khác Các chất dẻo để chế tạo đồ đựng thuốc thường dùng polyethylen (loại tỷ trọng thấp cao) ký hiệu là:PE, polypropylen ký hiệu PP, polyvinyl clorid ký hiệu PVC, ethylen vinyl acetat copolymer, polyethylen terphtalat Đồ đựng nút làm chất dẻo có nhiều ưu điểm nhẹ, bền, rẻ tiền, có nhược điểm thấm nước, thấm khí từ mơi trường, chống tia cực tím khơng cao, nhả chất phụ gia gây độc cho người sử dụng, làm ô nhiễm môi trường Yêu cầu chất lượng chung: Đồ đựng nút làm chất dẻo phải có chất lượng riêng biệt cho đồ đựng thuốc tiêm, đồ đựng thuốc nhỏ mắt, thuốc tra mắt đồ đựng thuốc uống thuốc dùng hay đồ đựng cho dạng thuốc đường tiêm Những ngun liệu làm đồ đựng khơng có thành phần chiết lượng chất làm giảm hoạt lực giảm tính ổn định làm tăng độc tính thuốc Những chất giảm tĩnh điện, chất giải phóng khn dùng cho đồ đựng thuốc dùng phép Những nguyên liệu làm chất phụ gia phép dùng phải mơ tả đặc tính ghi Dược điển; chất phụ gia khác dùng quan có thẩm quyền cho phép trường hợp Để chọn đồ đựng chất dẻo thích hợp đánh giá khả rủi ro cần phải biết đầy đủ cơng thức sản xuất chất dẻo đó, bao gồm tất nguyên liệu cho thêm vào trình sản xuất đồ đựng Đồ đựng chất dẻo lựa chọn cho chế phẩm đặc biệt phải đảm bảo yêu cầu sau: Khi đựng thuốc, chất dẻo không hấp thụ hoạt chất thuốc lên bề mặt không thuốc thấm vào chất dẻo Chất dẻo không tạo lượng chất đủ để làm ảnh hưởng đến bền vững thuốc đựng tạo khả gây độc Để kiểm tra tương hợp đồ đựng chất đựng trong, đảm bảo khơng có thay đổi có hại đến chất lượng chế phẩm phải thực nhiều phép thử khác như: Kiểm tra khơng có thay đổi tính chất lý học; xác định chất bị chất thêm thấm hút, phát thay đổi pH; đánh giá thay đổi gây ánh sáng; thử nghiệm hóa học thử nghiệm sinh học cần thiết Những đồ đựng sản xuất hàng hoạt phải phù hợp với mẫu vật phương diện Chúng phải đảm bảo thay đổi thành phần, phương pháp sản xuất quan trọng không dùng nguyên liệu phế loại Những mẫu lấy từ nơi sản xuất phải kiểm tra để đảm bảo phù hợp với vật mẫu Quy trình thử nghiệm hóa học, sinh học mơ tả áp dụng cho đồ dựng chất dẻo dùng cho chế phẩm dược Phải thấy thử nghiệm chưa đủ để xác định độ an tồn thích hợp đồ đựng chất dẻo mà cần thiết phải xem xét kết qủa thử nghiệm kết hợp với thông tin Nếu có rủi ro, nhà sản xuất phải xem xét lại tiêu chuẩn đồ đựng thành phần chất dẻo chất lượng thành phần bị hư quy trình sản xuất chế biến bị thay đổi 17.3.1 ĐỒ ĐỰNG BẰNG CHẤT DẺO DÙNG CHO NHỮNG CHẾ PHẨM KHÔNG PHẢI THUỐC TIÊM Những thử nghiệm chung Độ kín Đóng đầy 10 bình với nước, đậy bình nút thích hợp, lộn ngược bình giữ nhiệt độ phòng 24 Bất bình cűng khơng có tượng rõ rỉ Độ gấp uốn Phép thử áp dụng cho đồ dựng bóp để lấy chất đựng Khi bóp ống phải lấy 90% thể tích hay khối lượng chứa danh định với tốc độ chảy qui định nhiệt độ phòng Những thử nghiệm áp dụng cho đồ đựng thuốc lỏng để uống Gồm thử nghiệm độ nước chiết cắn không bay Độ nước chiết Chọn phần khơng có nhãn, khơng có vết in không dát mỏng từ đồ đựng thích hợp theo cách lấy tự nhiên đủ diện tích tổng cộng mẫu yêu cầu phải tính diện tích hai mặt Cắt phần thành miếng hẹp dài, để khơng có mảnh có diện tích tổng cộng lớn 20 cm2 Rửa mảnh cho hết chất bên ngồi cách lắc chúng lần riêng biệt với nước cất, lần 30 giây,sau để Chọn phần cắt rửa mẫu thử,với diện tích bề mặt tổng cộng 1250 cm , cho vào bình (vừa làm với hỗn hợp acid cromic (TT) rửa nhiều lần với nước cất) thêm 250ml nước cất Đậy bình cốc hấp 1210C 30 phút Làm mẫu trắng để so sánh, dùng 250ml nước cất Để nguội quan sát nước chiết Nước chiết phải không màu, không đục mẫu trắng Cắn không bay Bốc 100ml nước chiết từ phép thử “Độ nước chiết” tới khô, sấy 105 0C tới khối lượng không đổi Cắn không nhiều 12,5mg Độ thấm nước Độ thấm nước hay độ ngấm nước qua bao bì có ảnh hưởng lớn đến thuốc cần mức độ chống ẩm cao thuốc nang, thuốc bột thuốc nhạy cảm khác Do tuỳ yêu cầu thử nghiệm đặc tính cho đồ đựng nhựa dẫn mục: Đồ đựng chất dẻo cho chế phẩm tiêm (Phụ lục 17.3.2) 17.3.2.ĐỒ ĐỰNG BẰNG CHẤT DẺO DÙNG CHO CHẾ PHẨM THUỐC TIÊM Yêu cầu chung Nguyên liệu: Chỉ chất dẻo tinh khiết, không màu, không mùi, dùng làm nguyên liệu để chế tạo đồ đựng thuốc tiêm Đồ đựng thuốc tiêm chế tạo từ hay nhiều polymer polyethylen, polypropylen, polyvinyl clorid thêm chất phụ gia để chống oxy hoá, làm trơn, hoá dẻo, ổn định không dùng chất để tạo màu Đặc tính: Đồ đựng phải đủ để kiểm tra mắt thường thuốc chứa bên Đồ đựng đóng thuốc phải chịu tiệt khuẩn nhiệt phương pháp tiệt khuẩn khác Sau tiệt khuẩn, đồ đựng khơng có dấu hiệu bị co lại, méo mó, biến màu, độ trong, rạn nứt, chảy dính hư hỏng khác Đồ đựng phải không cho vi sinh vật thâm nhập vào thuốc sau hàn kín Đồ đựng túi chai có kích thước, hình dáng thích hợp cho việc sử dụng (có thể thêm nút gắn, dây treo tiêm truyền) Thử nghiệm tính chất đồ đựng Thử độ kín, độ gấp uốn: Phải đáp ứng thử nghiệm chuyên luận: " Đồ đựng chất dẻo cho chế phẩm không phi thuc tiờm" Độ đồ đựng Hỗn dịch chuÈn: Hoµ tan 1,0 g hydrazin sulfat (TT) mét nớc, thêm nớc vừa đủ 100 ml, để yên Thêm 25,0 ml dung dịch hexamin 10% (TT) vào 25 ml dung dịch này, trộn kỹ để yên 24 Hỗn dịch thu đợc bền khoảng tháng Pha loãng 15 ml hỗn dịch với n ớc vừa đủ 1000 ml Hỗn dịch chuẩn dùng vòng 24 Pha loãng hỗn dịch chuẩn để thu đợc hỗn dịch có độ hấp thụ bớc sóng khoảng 640 nm 0,37 đến 0,43 (pha loãng khoảng 16 lần) Cho thể tích hỗn dịch thu đợc dung tích qui định vào đồ đựng Độ đục hỗn dịch nhìn qua đồ đựng phải đục so với nớc cất đựng đồ đựng tơng ứng Độ ngấm nớc Cho nớc vào đồ đựng theo dung tích qui định hàn kín miếng polyethylen, nhôm mỏng hay cách khác thích hợp Cân xác bình để yên (không phủ trên) 14 ngày độ ẩm tơng đối 60 5% nhiệt độ khoảng 20oC 25oC Cân lại bình Khối lợng giảm không đợc vợt 0,2% Những đồ đựng chất dẻo polyvinyl clorid (PVC) dùng cho thuốc tiêm (tiêm truyền tĩnh mạch) phải đạt thêm phép thử sau: Chất di (2-ethylhexyl) phthalat chiết đợc: Không 0,010% (kl/tt) Dùng ống cấp, kim phận nối thích hợp Cho vào đồ đựng thể tích dung môi chiết khoảng nửa dung tích Hút hết không khí hàn kín ống cấp Đặt đồ đựng theo hớng nằm ngang vào nồi cách thuỷ giữ nhiệt độ 36oC - 38oC 60 phút, không lắc Lấy bình khỏi nồi cách thuỷ, đảo ngợc bình cẩn thận 10 lần chuyển dịch chứa sang bình thuỷ tinh Đo độ hấp thụ cực đại khoảng 272 nm (Phụ lục 3.1) Tính phần trăm di (2- ethylhexyl) phthalat theo đờng chuẩn Dung môi chiết: Ethanol pha loãng để có tỷ trọng tơng đối từ 0,9373 đến 0,9378 làm ấm tới 37oC bình có nút kín Đờng chuẩn di (2-ethylhexyl) phthalat: Pha dung dÞch chuÈn cã chøa 0,020%; 0,010%; 0,0050%; 0,0020%; 0,0010% (kl/tt) di (2-ethylhexyl) phthalat dung môi chiết Đo độ hấp thụ điều kiÖn Thử nghiệm chất liệu đồ đựng Dùng phần đồ đựng khơng có nhãn, khơng có vết in không bị dát mỏng hạt chất dẻo trường hợp đồ đựng chế tạo đồng thời với q trình đóng thuốc hàn kín Bari Làm ẩm g mẫu thử với acid hydrocloric (TT)và nung chén bạch kim Hoà tan tro 10 ml dung dịch acid hydrocloric 1M, lọc thêm ml dung dịch acid sulfuric 1M (TT) vào dịch lọc Độ đục không lớn hỗn dịch đục chuẩn thu cách cho 1ml dung dịch acid sulfuric 1M (TT) vào hỗn hợp 10 ml dung dịch bari chuẩn (10 phần triệu Ba) 10 ml dung dịch acid hydrocloric 1M (TT) Kim loại nặng Cho 2,5 g mẫu thử vào bình đáy tròn, cổ dài, thêm 20 ml acid sulfuric (TT) đốt thành than khoảng 10 phút Thêm giọt nước oxy già (100 thể tích) vào dung dịch nóng hết màu, đun nóng sau lần thêm có khói trắng bay lên Để nguội, dùng 10 ml nước cất để chuyển hết cắn từ bình sang đĩa bạch kim bốc đến khơ.Hòa tan cắn vào 10 ml dung dịch acid hydrocloric 1M (TT) Lọc cần, thêm nước cất để 25 ml (dung dịch A) Thêm 1,2 ml dung dịch thioacetamid (TT) vào hỗn hợp gồm 10 ml dung dịch A ml đệm acetat pH 3,5(TT), lắc trộn để yên phút Nếu dung dịch tạo thành có màu vàng, màu phải không đậm màu vàng thu cách dùng 10 ml dung dịch cadmi chuẩn (10 phần triệu Cd) (TT) thay cho dung dịch A Nếu màu nâu phải không đậm màu nâu thu cách dùng hỗn hợp ml dung dịch chì chuẩn (10 phần triệu Pb) (TT) ml nước thay cho dung dịch A Thiếc Thêm ml dung dịch acid sulfuric 20% (TT), ml dung dịch natri dodecyl sulfat 1% (kl/tt) ml kẽm dithiol (TT) vào 10 ml dung dịch A phép thử kim loại nặng Đun nóng nồi cách thuỷ phút Làm nguội để yên 30 phút Nếu dung dịch tạo thành có màu đỏ khơng đậm màu đỏ thu cách dùng 10 ml dung dịch thiếc chuẩn (5 phần triệu Sn) (TT) thay cho dung dịch A Kẽm Lấy ml dung dịch A phép thử kim loại nặng, thêm nước cất vừa đủ 100 ml Lấy 10 ml dung dịch thu được, thêm ml dung dịch đệm acetat pH 4,4 (TT) ml dung dịch natri thiosulfat 0,1M (TT), ml dung dịch dithizon 0,001% (kl/tt) cloroform Lắc để yên phút Màu tím lớp cloroform khơng đậm màu thu cách dùng hỗn hợp 2ml dung dịch kẽm chuẩn (10 phần triệu Zn) (TT)và ml nước cất thay cho dung dịch thử Tiến hành mẫu trắng kiểm tra, dùng 10 ml nước cất thay cho 10 ml dung dịch thử Thử nghiệm khơng có giá trị lớp cloroform thu mẫu trắng có màu xanh lục Cắn nung Lấy g đồ đựng cắt nhỏ cho vào chén nung thích hợp cân bì Nung 800 ± 25oC tới khối lượng không đổi Để chén nung cho nguội bình hút ẩm sau lần nung, lượng cắn khơng q 0,1% Thử nghiệm dịch chiết Thư nghiƯm hoá lý Những thử nghiệm sau thực dịch chiết từ đồ đựng chất dẻo, lợng chất dẻo tính theo diện tích bề mặt (cả mặt) chiết nhiệt độ qui định Mẫu chất dẻo đồng chất liệu đợc cắt thành miếng dài khoảng cm rộng khoảng 0,3 cm Chuyển mẫu chia nhỏ vào bình thuỷ tinh hình trụ dung tích 250 ml có nút mài, thêm khoảng 150 ml nớc tinh khiết Lắc khoảng 30 giây, gạn bỏ nớc rửa lại lần Cho vào bình chiết thích hợp lợng mẫu chuẩn bị có diện tích bề mặt khoảng 1200 cm2 bề dầy mẫu 0,5 mm mỏng hơn, 600 cm bề dày lớn 0,5 mm Thêm 200 ml nớc tinh khiết chiết nóng nồi cách thuỷ 70oC 24 nåi hÊp ë 121oC 30 Lµm ngi nhng không dới 20oC Lấy 20,0 ml dịch chiết vào bình thích hợp để dùng cho phép thử dung lợng đệm Gạn dịch chiết lại vào bình đậy kín Dùng nớc tinh khiết để làm mẫu trắng phép thử sau: Độ màu sắc: Dịch chiết phải (Phụ lục 2) không màu (Phụ lục 9.3) Độ hấp thụ ánh sáng: Lọc dịch chiết cần dịch lọc có độ hấp thụ ánh sáng không 0,08 220 đến 240 nm không 0,05 240 đến 360 nm (Phụ lục 4.1) Dùng nớc để làm mẫu trắng pH: Cứ 20 ml dịch chiết mẫu trắng cho thêm ml dung dịch kali clorid 0,1% (kl/tt) (TT), xác định pH dung dịch (Phụ lục 6.2) Hiệu số pH hai dung dịch không đợc lớn 1,5 Chất không bay hơi: Cho 50,0 ml dịch chiết vào chén nung thích hợp cân bì đợc làm acid Bốc cách thuỷ khô sấy cắn 105oC Song song làm mẫu trắng Hiệu số cắn dịch chiết mẫu trắng không đợc vợt 15 mg Ghi chú: Nếu cắn dầu kiểm tra lại trình bay hơi, giai đoạn làm khô, giảm nhiệt dầu có xu hớng bám vào thành chén nung Cắn nung (ghi chú: Không cần phải làm thử nghiệm kết thử nghiệm cắn không bay không vợt mg): Tiến hành với chất không bay thu đợc từ mẫu thử mẫu trắng, nhng cho thêm lợng acid sulfuric vào chén nung Hiệu số cắn nung mẫu thử mẫu trắng không vợt mg Kim loại nặng: Dịch chiết lọc cần, lấy 20,0 ml cho vào ống Nessler, điều chỉnh pH tới khoảng 3,0 4,0 với dung dịch acid acetic M (TT) hay dung dÞch amoniac M (TT), pha loãng với nớc để thành 35 ml trộn Cho vào ống Nessler 2,0 ml dung dịch chì mẫu (1 phần triệu Pb) (TT) 20 ml nớc Điều chỉnh pH vào khoảng 3,0 4,0 với dung dÞch acid acetic M (TT) hay dung dÞch amoniac M (TT) Pha lo·ng víi níc ®Ĩ thành 35 ml trộn Cho vào ống 10 ml dung dịch dihydrosulfid (TT) vừa pha, thêm nớc thành 50 ml trộn Trong 10 phút, dịch chiết có màu nâu không đợc đậm màu ống chuẩn Dung lợng đệm: Lấy 20 ml dịch chiết đem chuẩn độ với dung dịch acid hydrocloric 0,01 M (TT) hay dung dÞch natri hydroxyd 0,01 M (TT) tới pH 7,0 xác định phơng pháp chn ®é ®o ®iƯn thÕ (Phơ lơc 10.2) Song song chuẩn độ với 20 ml mẫu trắng Nếu mẫu thử mẫu trắng dùng dung dịch chuẩn độ hiệu hai thể tích dùng không vợt 10,0 ml, dùng hai dung dịch chuẩn độ khác loại cho mẫu thử hay mẫu trắng tổng số thể tích không lớn 10,0 ml Những chất bị oxy hoá: Cho 20,0 ml dịch chiết vào bình thuỷ tinh nút mài, thêm 20,0 ml dung dịch kali permanganat 0,002 M ml dung dịch acid sulfuric 10% (kl/kl), đun sôi phút Để nguội, thêm 0,1 g kali iodid, lắc trộn để yên 10 phút tối Chuẩn độ dung dịch natri thiosulfat 0,01 M Dïng 0,25 ml dung dÞch hå tinh bột cho vào khoảng cuối chuẩn độ làm thị màu Song song làm mẫu trắng, hiệu số hai lần định lợng không khác 1,0 ml Thử nghiệm sinh học Những thử nghiệm sau xây dựng để đánh giá đáp ứng sinh học động vật vật liệu chất dẻo hay polymer khác tiêm chất chiết từ mẫu thử nghiệm Lượng mẫu thử lấy theo diện tích bề mặt đem chiết Khi diện tích bề mặt khơng thể xác định dùng 0,2 g mẫu thử cho ml dịch chiết Cần thận trọng chuẩn bị mẫu thử để tiêm, tránh nhiễm khuẩn chất lạ Thử nghiệm áp dụng cho loại chất dẻo polymer với điều kiện sử dụng Khi đồ đựng phải rửa tiệt khuẩn trước dùng thử nghiệm phải tiến hành mẫu đồ đựng xử lý với qui trình rửa tiệt khuẩn Mẫu thử dịch chiết từ mẫu đồ đựng cần thử Mẫu trắng dung môi dùng để chiết xử lý điều kiện qui trình mẫu thử Mẫu đối chiếu âm tính mẫu khơng cho phản ứng điều kiện thử a) Thử nghiệm toàn thân Thử nghiệm dùng để đánh giá đáp ứng toàn thân chuột nhắt sau tiêm dịch chiết từ mẫu cần thử Động vật thí nghiệm: Chuột nhắt trắng khoẻ mạnh, nguồn gốc, cân nặng 18 - 22 g, chưa dùng vào thí nghiệm trước Chuột cho ăn uống nước bình thường Dụng cụ: Nồi hấp có khả trì nhiệt độ 121 oC ± 2oC, có thêm hệ thống nước làm lạnh để làm nguội bình đựng mẫu thử đến khoảng 20oC sau hấp Tủ sấy có khả trì nhiệt độ 50oC ± 2oC 70oC ± 2oC Dùng ống nghiệm ống ni cấy có nắp xốy thuỷ tính trung tính (thuỷ tinh loại I) để chiết mẫu Chuẩn bị dụng cụ: Các dụng cụ thuỷ tinh cần tráng hỗn hợp acid cromic acid nitric nóng, súc rửa kỹ với nước, tráng lại nước cất Rửa dụng cụ để cắt với aceton dicloromethan trước dùng để cắt mẫu.Tất dụng cụ khác phải rửa với chất tẩy rửa thích hợp tráng kỹ nước cất Làm khô tiệt khuẩn dụng cụ phương pháp thích hợp Dung mơi chiết: việc lựa chọn dung môi chiết, số dung môi chiết đây, cần đại diện cho thành phần dung mơi có chế phẩm tiếp xúc trực tiếp với đồ đựng chất dẻo đem thử nghiệm Dung dịch tiêm natri clorid 0,9% (vơ khuẩn khơng có chất gây sốt) Ethanol 5% dung dịch tiêm natri clorid 0,9% Polyethylen glycol 400 Dầu thực vật: dùng dầu vừng, dầu lạc dầu hạt tinh chế phải đạt thêm yêu cầu sau: Dùng thỏ thí nghiệm theo qui định phép thử tiêm da Tiêm da 0,2 ml vào điểm, tiêm 10 điểm thỏ Quan sát chỗ tiêm 24, 48 72 sau tiêm Khơng có điểm có phản ứng dạng vết đỏ hay phồng có đường kính lớn 0,5 cm Chuẩn bị mẫu thử: Chọn cắt mẫu thử thành mảnh nhỏ theo kích thước hướng dẫn bảng Loại bỏ vật lạ xơ vải mảnh vụn nhỏ cách cho mẫu cắt vào ống đong thuỷ tinh loại I, dung tích 100 ml, có nút mài, thêm 70 ml nước cất để pha thuốc tiêm Lắc khoảng 30 giây, gạn bỏ hết nước, làm lại lần Với phần mẫu dùng chiết dung môi dầu thực vật, cần sấy khô mẫu thử nhiệt độ không 50oC Ghi chú: Không lau mẫu khăn khô/ẩm rửa dung môi hữu Bảng Dạng chất Bề dày Lượng mẫu cho 20 ml dung môi chiết Chia nhỏ thành dẻo Tương đương diện tích bề mặt 120 cm (cả < 0,5 mm hai mặt) Màng mỏng Những dải khoảng hay tờ cm x 0,3 cm 0,5 - mm Tương đương diện tích bề mặt 60 cm (cả hai mặt) Ống < 0,5 mm Chiều dài (cm) = 120 (cm 2) : [Chu vi đường Những phần (thành ống) kính + chu vi đường kính ngồi khoảng cm x 0,3 ống] (cm) cm 0,5 - mm Chiều dài (cm) = 60 (cm2) : [Chu vi đường (thành ống) kính + chu vi đường kính ngồi ống] (cm) Phiến mỏng, ống tạo khuôn > mm Tương đương với tổng diện tích bề mặt 60 cm2 (tồn bề mặt tiếp xúc) Những miếng khoảng cm x 0,3 cm Chuẩn bị dịch chiết: Cho lượng mẫu thử xử lý yêu cầu vào dụng cụ chiết, thêm 20 ml dung môi chiết Chuẩn bị với loại dung môi chiết theo yêu cầu phép thử Song song chuẩn bị mẫu trắng 20 ml cho loại dung môi xử lý điều kiện Chiết cách hấp nồi hấp 121 oC 60 phút tủ ấm 70 oC 24 50 oC 72 giờ, tuỳ thuộc vào loại chất dẻo đem thử Làm nguội đến nhiệt độ phòng khơng 20 oC, lắc mạnh vài phút gạn dịch chiết vào bình khơ, vơ khuẩn Bảo quản dịch chiết nhiệt độ từ 20 oC đến 30oC không dùng để thử để 24 Ghi chú: Điều kiện chiết không làm thay đổi trạng thái vật lý mẫu thử, làm chảy làm nóng chảy mẫu thử, dẫn tới làm giảm diện tích bề mặt mẫu thử Có thể cho phép mảnh dính nhẹ vào Nên cho mảnh nhỏ rửa vào dung môi chiết Nếu dùng ống nuôi cấy để chiết với dầu thực vật nồi hấp phải dán kín mép quanh nút với băng dính tốt để ngăn nước khơng vào dịch chiết Tiến hành: Lắc mạnh dịch chiết trước liều tiêm để đảm bảo chất chiết phân bố Chú ý không lấy tiểu phân nhìn thấy để tiêm tĩnh mạch Dùng chuột cho nhóm, nhóm thử với dịch chiết mẫu thử mẫu trắng Liều tiêm đường tiêm theo hướng dẫn bảng Riêng dịch chiết với dung môi polyethylen glycol mẫu trắng tương ứng cần pha lỗng với 4,1 thể tích dung dịch tiêm natri clorid 0,9 % để dung dịch có nồng độ khoảng 200 mg polyethylen glycol ml Quan sát tất chuột sau tiêm, sau vào thời điểm 24, 28 72 sau tiêm Nếu thời gian theo dõi khơng có chuột nhóm tiêm mẫu thử có phản ứng sinh học lớn đáng kể so với nhóm tiêm mẫu trắng mẫu thử đạt yêu cầu Nếu có chuột nhiều bị chết có chuột nhiều có biểu bất thường co giật, suy nhược có chuột trở lên bị giảm cân ( >2 g) mẫu thử khơng đạt u cầu Nếu có chuột bị chết có dấu hiệu phản ứng sinh học thử lại 10 chuột khác Với lần thử lại, mẫu thử đạt yêu cầu tất 10 chuột sống khơng có biểu sinh học khác đáng kể so với nhóm chứng Bảng Dịch chiết hay mẫu trắng Liều cho kg Đường tiêm Tốc độ tiêm (µl cho giây) Dung dịch tiêm natri clorid 0,9% 50 ml Tĩnh mạch 100 Dung dịch 5% (tt/tt) ethanol dung dịch tiêm natri clorid 0,9% 50 ml Tĩnh mạch 100 10g Trong màng bụng 50 ml Trong màng bụng Polyethylenglycol 400 Dầu thực vật b) Thử nghiệm tiêm da Thử nghiệm xây dựng để đánh giá phản ứng chỗ thỏ với dịch chiết mẫu thử sau tiêm vào da Động vật thí nghiệm: Chọn thỏ trắng, da mỏng, cắt lơng thật ngắn da khơng bị tổn thương bị kích ứng cọ xát Trong thời gian theo dõi, tránh tiếp xúc vào chỗ tiêm trừ cần phân biệt nốt phù nề với vết dầu đọng Ghi chú: thỏ trước dùng cho phép thử không liên quan thử chất gây sốt thỏ nghỉ thời gian sau lần thử trước, dùng vào phép thử da khơng bị tổn thương Tiến hành: Trong ngày thí nghiệm, cắt lông phần lưng thỏ, hai bên sống lưng, khoảng đủ rộng để thử Tránh gây kích ứng làm tổn thương da Dùng máy hút để loại hết lơng rơi ra, cần lau nhẹ da ethanol lỗng để khơ trước tiêm Mỗi loại dịch chiết cần thử thỏ, bên tiêm dịch chiết bên tiêm mẫu trắng theo hướng dẫn bảng Để tránh lãng phí, thỏ tiêm vài loại dịch chiết dịch chiết vài mẫu khác kết không ảnh hưởng lẫn Lắc mạnh dịch chiết trước lấy để tiêm Mẫu dịch chiết với polyethylen glycol 400 mẫu trắng tương ứng, cần pha loãng với dung dịch tiêm natri clorid 0,9% để có nồng độ polyethylen glycol khoảng 120 mg ml Bảng Dịch chiết hay mẫu trắng Số vị trí (cho thỏ) Liều cho vị trí (µl) Mẫu thử 200 Mẫu trắng 200 Quan sát chỗ tiêm để phát phản ứng mô ban đỏ, phù nề hoại tử Có thể lau nhẹ ethanol lỗng để dễ quan sát đánh giá kết Quan sát tất thỏ thí nghiệm thời điểm 24, 48 72 sau tiêm Chấm điểm tất chỗ tiêm mẫu trắng mẫu thử theo thang điểm qui định bảng Bảng Ban đỏ tạo thành vẩy Điểm Tạo thành phù nề* Điể m Khơng có ban đỏ Khơng có phù nề Ban đỏ nhẹ (vừa đủ nhận thấy) Phù nề nhẹ (vừa đủ nhận thấy) Ban đỏ nhận thấy rõ Phù nề nhẹ (viền phù nể rõ) Ban đỏ vừa phải tới đậm Phù nề vừa phải (phù nề cao khoảng mm) Ban đỏ đậm (sặc đỏ) tới tạo Phù nề nặng (phù nề cao mm lan thành vẩy nhẹ rộng khoảng tiếp xúc) *Không kể vết nề (cơ học) viêm Trong thời gian theo dõi, cần cắt lại lơng thỏ để dễ quan sát Tính điểm ban đỏ phù nề trung bình cho mẫu trắng mẫu thử lần chấm điểm (24, 28 72 giờ) cho thỏ Sau 72 giờ, cộng tất điểm ban đỏ phù nề cho riêng mẫu thử mẫu trắng Chia tổng số điểm mẫu cho 12 (2 thỏ x lần ghi điểm x lần ghi loại điểm) để xác định điểm trung bình chung với mẫu thử mẫu trắng tương ứng Phép thử đạt yêu cầu hiệu số điểm trung bình mẫu thử mẫu trắng tương ứng nhỏ Nếu lần ghi điểm đó, điểm phản ứng trung bình mẫu thử nghi ngờ cao mẫu trắng, làm lại thêm thỏ khác Phép thử đạt yêu cầu điểm trung bình mẫu thử mẫu trắng khác nhỏ 1,0 c) Thử nghiệm chất gây sốt Thử nghiệm qui định cho đồ đựng chất dẻo dùng cho thuốc tiêm truyền Dùng dung môi chiết dung dịch tiêm natri clorid 0,9% chất gây sốt tiến hành qui trình chiết hướng dẫn phép thử tiêm toàn thân Các dụng cụ chiết phải đảm bảo khơng có chất gây sốt Tiến hành theo thử nghiệm chất gây sốt (Phụ lục 13.4), Tiêm 10 ml dịch chiết cho kg thỏ 17.3.3 ĐỒ ĐỰNG BẰNG CHẤT DẺO DÙNG CHO CHẾ PHẨM NHỎ MẮT Đồ đựng chất dẻo cho chế phẩm nhỏ mắt chế tạo từ polymer có khối lượng phân tử đồng khoảng định Có thể dùng polypropylen đồng polymer propylen với không 25 % ethylen hỗn hợp polypropylen không 25% polyethylen thường có thêm chất hố dẻo, ổn định, chống oxy hoá, tạo màu, làm trơn Để lựa chọn đồ đựng chất dẻo phù hợp với chế phẩm nhỏ mắt cần phải tiến hành thử nghiệm thành phần chất dẻo, qui trình xử lý đồ đựng, mơi trường tiếp xúc, khả hấp thụ tính thấm chất thêm vào, điều kiện bảo quản ảnh hưởng đến chế phẩm Đồ đựng chất dẻo cho chế phẩm thuốc nhỏ mắt phải đáp ứng thử nghiệm sau: Thử độ kín, độ gấp uốn, độ dịch chiết, cắn không bay Phải đáp ứng thử nghiệm qui định cho đồ đựng chất dẻo dùng cho chế phẩm thuốc tiêm Thử nghiệm tiêm toàn thân, tiêm da Phải đáp ứng thử nghiệm qui định cho đồ đựng chất dẻo dùng cho chế phẩm thuốc tiêm Thử độ kích ứng mắt Thử nghiệm để đánh giá đáp ứng nhỏ dịch chiết mẫu thử vào mắt thỏ Dung môi chiết: (a) Dung dịch tiêm natri clorid 0,9% (b) Dầu thực vật Chuẩn bị dịch chiết: Tiến hành giống chuẩn bị dịch chiết để thử nghiệm tiêm tồn thân Động vật thí nghiệm: Chọn thỏ trắng khoẻ mạnh, trước chưa dùng để thử kích ứng mắt Nhà chăn ni phải khơng có mùn cưa, vỏ bào hay vật liệu khác làm kích ứng mắt thỏ Kiểm tra hai mắt thỏ trước thử dùng thỏ mà mắt khơng bị kích ứng để thí nghiệm Thử thích ứng mắt thỏ: Dùng thỏ, nhỏ vào mắt 100 µl mẫu trắng chuẩn bị thử nghiệm tiêm toàn thân nhỏ vào mắt 100 µl nước cất vơ khuẩn để tiêm Mắt thỏ coi thích ứng khơng nhận thấy khác có ý nghĩa hai mắt Qui trình thử: Dùng thỏ trắng cho dịch chiết đem thử Nhốt thỏ nơi chắn cần nhẹ nhàng yên tĩnh Kéo nhẹ hạ mí mắt xa để làm thành hốc lõm nhỏ khoảng 100 µl nước cất vơ khuẩn để tiêm, giữ mi mắt khoảng 30 giây Làm tương tự để nhỏ vào mắt 100 µl dịch chiết mẫu thử chuẩn bị thử nghiệm tiêm toàn thân Quan sát mắt thỏ vào thời điểm 24, 48 72 sau nhỏ Phép thử đạt yêu cầu dịch chiết mẫu thử chứng tỏ khơng có kích ứng đáng kể q trình theo dõi so với mẫu trắng mắt thỏ thích ứng với thử nghiệm Nếu có tượng kích ứng với mắt nhỏ nước cất vô khuẩn để tiêm mắt thỏ khơng thích ứng với thử nghiệm làm lại thí nghiệm với thỏ khác Trong lần thử lại, tất thỏ phải đạt yêu cầu thử nghiệm