15.18 XÁC ĐỊNH NITROGEN TOÀN PHẦN CỦA VẮC XIN VÀ SINH PHẨM BẰNG THUỐC THỬ NESSLER Nguyên lý Phương pháp dựa vào tính chất thuốc thử Nessler cho phản ứng màu với ion amoni (NH 4+) tạo thành sau vơ hố chất protein Phương pháp tiến hành a Chuẩn bị mẫu thử: Cho 0,2 ml chế phẩm 0,2 ml dung dịch acid sulfuric đậm đặc vào ống thuỷ tinh đem đốt bếp cát Để tăng tốc độ phản ứng cho vài giọt dung dịch oxy già (H 2O2) đậm đặc vào ống đốt sau làm nguội Khi chế phẩm vơ hố hồn tồn, dung dịch màu, cho nước cất vào đủ 10ml thu dung dịch A Lấy 1ml dung dịch A vào ống nghiệm, thêm 8,5 ml nước cất 0,5 ml thuốc thử Nessler, mẫu thử b Song song tiến hành làm mẫu trắng gồm: 9,5 ml nước cất 0,5 ml thuốc thử Nessler c Song song tiến hành dựng đường chuẩn: Hút dung dịch amoni sulfat chuẩn có hàm lượng 0,05 mg nitrogen/ml vào ống nghiệm theo thứ tự sau: 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7 ml Cho nước cất vừa đủ 9,5 ml 0,5ml thuốc thử Nessler Lắc ống nghiệm Đo quang phổ bước sóng 420nm Vẽ đường cong chuẩn Lượng protein tồn phần chế phẩm tính theo cơng thức sau: X ( g %) = ax 6,25 x10 x100 = ax0,03125 1,0 x 0,2 x1000000 Trong đó: a: Lượng nitơ tìm đường chuẩn (µg) 6,25: Hệ số chuyển đổi nitơ thành protein 10: Độ pha loãng dung dịch vơ hóa 100: Chuyển thành phần trăm 1,0: Lượng mẫu thử đem so màu (ml) 0,2: Lượng mẫu thử đem vơ hóa (ml) 1000000: Hệ số chuyển µg thành g Cách pha dung dịch amoni sulfat chuẩn có hàm lượng nitơ 0,05mg/ml Cân 0,2375 g amoni sulfat (đã sấy khơ bình hút ẩm silicagel đến trọng lượng khơng đổi), hồ tan vào vừa đủ 500ml nước cất Dung dịch vừa pha có hàm lượng nitrogen 0,1mg/ml, trước dùng pha loãng lần nước cất Tiêu chuẩn cho phép Hàm lượng nitrogen toàn phần vắcxin sinh phẩm tùy theo yêu cầu loại mẫu thử