15.16 XÁC ĐỊNH HIỆU GIÁ HUYẾT THANH KHÁNG ĐỘC TỐ UỐN VÁN Hiệu giá huyết kháng độc tố uốn ván xác định cách so sánh mức độ bảo vệ liều kháng độc tố uốn ván thử nghiệm kháng độc tố uốn ván chuẩn chuột nhắt trắng có trọng lượng 16-18 g sau trung hoà lượng cố định độc tố uốn ván Xác định liều độc tố uốn ván thử nghiệm (L+/10) L+/10 lượng độc tố uốn ván nhỏ lại sau trung hồ với 0,1 đơn vị quốc tế (IU) kháng độc tố uốn ván chuẩn đủ để gây chết chuột có trọng lượng xác định thời gian 96 Pha kháng độc tố uốn ván chuẩn với nước muối sinh lý để có dung dịch kháng độc tố chứa 0,5 IU/ml Pha độc tố uốn ván với nước muối sinh lý (hoặc dung dịch pepton 1%) để có dung dịch độc tố chứa 3-5 Lf/ml Trong dãy ống nghiệm, cho vào ống: 1,0 ml dung dịch kháng độc tố uốn ván chuẩn chứa 0,5 IU/ml, thể tích thay đổi dung dịch độc tố uốn ván (ví dụ 0,1 ml; 0,2 ml; 0,3 ml; 0,4 ml; 0,5 ml tuỳ theo độc tính độc tố uốn ván) nước muối sinh lý để vừa đủ 2,5 ml ống nghiệm Lắc ống nghiệm để yên 37 0C 45 phút, tránh ánh sáng Tiêm 0,5 ml da cho chuột nhắt, dùng chuột cho độ pha Theo dõi ghi chép số chuột bị chết 96 Cách xác định: Hỗn dịch có lượng độc tố thấp sau tiêm gây chết chuột vòng 96 có chứa lượng độc tố 5L+/10 2,5 ml hay 1L+/10 0,5 ml (một liều tiêm/1 chuột) Xác định hiệu giá huyết kháng độc tố uốn ván Hiệu giá huyết kháng độc tố uốn ván số đơn vị quốc tế (IU) kháng độc tố uốn ván có 1,0 ml huyết thử nghiệm Pha huyết kháng độc tố uốn ván chuẩn với nước muối sinh lý để có dung dịch 0,5 IU /ml Pha độc tố uốn ván với nước muối sinh lý (hoặc dung dịch pepton 1%) để có dung dịch độc tố chứa 5L+/10 thể tích xác định Pha huyết kháng độc tố uốn ván thử nghiệm với nước muối sinh lý để có độ pha 1/2600; 1/2800; 1/3000; 1/3200; 1/3400;… tuỳ theo hiệu giá có kháng độc tố uốn ván thử nghiệm Trong dãy ống nghiệm, cho vào ống: thể tích dung dịch độc tố uốn ván chứa 5L+/10; 1,0 ml dung dịch kháng độc tố uốn ván thử nghiệm độ pha loãng nước muối sinh lý để vừa đủ 2,5 ml ống nghiệm Pha mẫu chứng: Cho vào ống nghiệm lần lượt: thể tích dung dịch độc tố uốn ván chứa 5L +/10, lượng 0,9 ml; 1,0 ml; 1,1 ml dung dịch kháng độc tố uốn ván chuẩn chứa 0,5 IU/ml sau lượng nước muối sinh lý để vừa đủ 2,5 ml ống nghiệm Lắc ống nghiệm để yên 370C 45 phút, tránh ánh sáng Tiêm 0,5 ml da cho chuột nhắt, dùng chuột cho độ pha Theo dõi ghi chép số chuột bị chết 96 Cách tính hiệu giá Thử nghiệm có giá trị mẫu chứng có chứa 0,9 ml 1,0 ml dung dịch kháng độc tố uốn ván chuẩn gây chết 100% chuột vòng 96 mẫu có chứa 1,1 ml dung dịch kháng độc tố uốn ván chuẩn không gây chết chuột thời gian theo dõi Dung dịch có chứa lượng kháng độc tố uốn ván thử nghiệm lớn không bảo vệ chuột thời gian 96 giống mẫu chứng có chứa 1,0 ml dung dịch kháng độc tố uốn ván chuẩn có chứa 0,5 IU/ml Hiệu giá huyết kháng độc tố uốn ván tính sau: Hiệu giá (IU/ml) = 0,5 x N Trong đó: N: Số lần pha loãng kháng độc tố uốn ván thử nghiệm 0,5: Số IU có ml dung dịch kháng độc tố uốn ván chuẩn dùng thử nghiệm