BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI NGUYỄN HOÀNG YẾN NGHI£N CøU TíNH ĐA HìNH THáI ĐƠN C677T GEN MTHFR BệNH NHÂN UNG THƯ TUYếN GIáP THể BIệT HóA Chuyờn ngnh : Tai Mũi Họng Mã số : 60720155 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Quang Trung HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Quang Trung, người thầy trực tiếp hướng dẫn thực luận văn cao học Thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm làm việc giúp tơi hồn thành nghiên cứu Trong q trình nghiên cứu học tập, nhận lời nhận xét, góp ý quý báu từ thầy để thực tốt nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Huy Bình, phó trưởng môn Sinh lý – Đại học Y Hà Nội, người hướng dẫn khoa học, tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình làm luận văn Tơi xin cảm ơn Ths Vũ Trung Lương, phó trưởng khoa Tai Mũi Họng – Bệnh viện Bạch Mai tạo điều kiện, giúp đỡ tơi q trình thu thập bệnh nhân mẫu bệnh phẩm nghiên cứu Tôi xin cảm ơn Ban lãnh đạo Trung tâm Y học hạt nhân Ung bướu, đặc biệt GS.TS Mai Trọng Khoa PGS.TS Trần Đình Hà, TS Phạm Cẩm Phương tạo điều kiện hết mức cho tiến hành nghiên cứu Đơn vị Gen trị liệu - Bệnh viện Bạch Mai Tôi xin cảm ơn tập thể cán Đơn vị Gen trị liệu, đặc biệt TS Nguyễn Thuận Lợi, người dẫn, giúp đỡ tận tình suốt thời gian tơi thực nghiên cứu Tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè người thân quan tâm, động viên tinh thần suốt trình học tập thực luận văn tốt nghiệp Hà Nội, ngày 22 tháng 11 năm 2017 Học viên Nguyễn Hoàng Yến LỜI CAM ĐOAN Tơi Nguyễn Hồng Yến, học viên Cao Học khóa 24, chuyên ngành Tai – Mũi – Họng , Trường Đại học Y Hà Nội xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn TS Nguyễn Quang Trung Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp nhận sở nơi nghiên cứu cho phép lấy số liệu xác nhận Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm cam kết Hà Nội,ngày 22 tháng 11 năm 2017 Người viết cam đoan Nguyễn Hoàng Yến CHỮ VIẾT TẮT AJCC Hiệp hội ung thư Hoa Kỳ ARMS BMI DNA F F/Rm F/Rw EGFR MBH MAPK MTHFR mTOR PCR PI3K TG TMH TNM (American Joint Committee on Cancer) Amplification refractory mutation system Body mass index Deoxiribonucleic acid Forward primer Forward primer/ Reverse mutation primer Forward primer/ Reverse wild type primer Epidermal Growth Factor Receptor Mô bệnh học Mitogen – Activated Protein Kinase Methylene tetrahydrofolate reductase Mammalian Target of Rapamycin Polymerase Chain Reaction Phosphotidylinositol - Kinase Tuyến giáp Tai mũi họng Tumor Nodes Metastasis UTBMTG UTTG SNP 5,10-MTHF 5-MTHF (International Union Against Cancer) Ung thư biểu mô tuyến giáp Ung thư tuyến giáp Sigle nucleotide polymorphism 5,10- Methylene tetra hydrofolate 5-Methyl tetra hydrofolate MỤC LỤC Nguyễn Hoàng Yến CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG .3 TỔNG QUAN 1.1 Tình hình nghiên cứu đa hình thái đơn C677T gen MTHFR bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt hóa 1.2 Bệnh học ung thư tuyến giáp 1.2.1 Dịch tễ học yếu tố nguy 1.2.2 Lâm sàng 1.2.3 Mô bệnh học .7 1.2.4 Phân loại giai đoạn ung thư tuyến giáp thể biệt hóa 1.3 Gen MTHFR .13 1.3.1 Tổng quan gen MTHFR 13 1.3.2 Đa hình gen MTHFR 14 1.3.3 C677T (C677T-Ala222Val) chức sinh hóa MTHFR .16 1.4 Các phương pháp phân tích đa hình gen MTHFR 17 1.4.1 Kỹ thuật PCR 18 1.4.2 Kỹ thuật ARMS - PCR .20 1.4.3 Kỹ thuật giải trình tự gen trực tiếp 20 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.1.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân .22 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 23 2.1.3 Cỡ mẫu nghiên cứu 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu .23 2.3.1 Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 3/2017 đến tháng 10/2017 .23 2.3.2 Địa điểm nghiên cứu .23 2.4 Thiết kế nghiên cứu .24 2.5 Công cụ phương pháp thu thập số liệu 25 2.6 Các bước tiến hành .25 2.6.1 Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng 25 2.6.2 Đánh giá giai đoạn bệnh 26 2.6.3 Xét nghiệm đa hình thái đơn C677T gen MTHFR 26 2.7 Phân tích xử lý số liệu .29 2.8 Đạo đức nghiên cứu .29 CHƯƠNG 29 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 29 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 30 3.1.1 Đặc điểm nhóm bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt hóa .30 3.2 Kết xác định đa hình thái đơn C677T gen MTHFR .33 3.2.1 Kết tách chiết DNA 33 3.2.2 Kết xác định kiểu gen MTHFR C677T phương pháp 33 3.2.3 Kết xác định kiểu gen MTHFR C677T phương pháp 34 3.2.4 Kết xác định kiểu gen tần số alen 35 3.3 Mối liên quan đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với số đặc điểm nhóm ung thư tuyến giáp .38 3.4 Mối tương quan đa hình đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với giai đoạn bệnh .41 3.4.1 Mối liên quan đa hình đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với khối u .41 3.4.2 Mối liên quan đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với hạch bạch huyết vùng 42 3.4.3 Mối liên quan đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với giai đoạn bệnh .43 3.4.4 Mối liên quan đa hình đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với đột biến gen V600E 44 Nhận xét: 44 Kết bảng cho thấy khơng có mối liên quan đa hình thái đơn C677T gen MTHFR đột biến V600 E (p>0,05) .44 Chương 446 BÀN LUẬN 46 4.1 Bàn luận đặc điểm đối tượng nghiên cứu .46 4.1.1 Tuổi 46 4.1.2 Giới 48 4.1.3 Các yếu tố nguy 48 4.1.4 Chỉ số khối thể (BMI) 49 4.1.5 Lý khám bệnh .50 4.1.6 Mô bệnh học 50 4.2 Bàn luận xác định đa hình thái đơn C677T gen MTHFR kĩ thuật ARMS PCR .50 4.2.1 Kết tách chiết DNA 50 4.2.2 Phân tích đa hình thái đơn C677T gen MTHFR phương pháp ARMS-PCR giải trình tự gen 52 4.2.3 Sự phân bố kiểu gen tần số alen đa hình thái đơn C677T gen MTHFR bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt hóa Việt Nam 53 4.3 Mối liên quan đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với yếu tố nguy giai đoạn bệnh ung thư tuyến giáp 55 4.3.1 Đặc điểm tuổi, giới, số khối, yếu tố nguy 55 4.3.2 Mối liên quan đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với giai đoạn bệnh .56 4.3.3 Mối liên quan đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với đột biến BRAV V600E 57 4.4 Điểm mạnh điểm yếu nghiên cứu 58 KẾT LUẬN 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO .60 PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Nguyễn Hoàng Yến CHỮ VIẾT TẮT Bảng 1.1 Phân loại giai đoạn UTTG thể biệt hóa theo AJCC Bảng 1.2 Vị trí kiểu đột biến gen MTHFR 14 Bảng 1.3 Bảng phân bố tần số đột biến gen MTHFR giới 16 Bảng 2.1 Trình tự chuỗi DNA mồi .28 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 28 30 31 Bảng 3.1 Đặc điểm yếu tố nguy nhóm UTTG (N=70) 31 Yếu tố nguy 31 n 31 % 31 Tiền sử chiếu tia xạ vùng đầu cổ 31 31 31 Sống vùng có bướu cổ địa phương lưu hành .31 31 31 Tiền sử mắc bệnh lý tuyến giáp 31 31 11,42 31 Khơng mắc bệnh 31 68 31 97,14 31 Tiền sử gia đình có người bị UTTG 31 31 8,57 31 Nhận xét: Có 62 bệnh nhân không tiền sử bệnh 31 Có bệnh nhân có tiền sử bệnh lý TG, có bệnh nhân có tiền sử Basedow, bệnh nhân có nhân TG .31 Có bệnh nhân có tiền sử gia đình có người bị UTTG .31 Bảng 3.2 Đặc điểm BMI đối tượng nghiên cứu (N = 70) 31 BMI 31 N 31 % 31 Gầy (T homozygous polymorphism in the MTHFR Gene” Cancer Epidemiol; 35: 56-58 Ozdemir S, Silan F, Hasbek Z, Uludag A, et al (2012), Increased Tallele frequency of 677 C>T polymorphism in the methylenetetrahydrofolate reductase gene in differentiated thyroid carcinoma Genet Test Mol Biomarkers 16: 780- 784 http://dx.doi.org/10.1089/gtmb.2011.0347 10 YANG Y.-M., ZHANG T.-T., YUAN L., REN Y (2014), “The association between the C677T polymorphism in MTHFR gene and the risk of thyroid cancer: a meta-analysis”, European Review for Medical and Pharmacological Sciences; 18: 2097-2101 11 Chen Y, Wang B, Yan S, Wang YG (2014), “ Significant association between NTHFR C677T polymorphism and thyroid cancer risk: evidence from a meta- analysis”, Genet Test Mol Biomarkers 2014 Oct;18(10):695 – 702 doi: 10.1089/gtmb.2014.0029 Epub 2014 Ju.l 12 Zara-Lopes T., Gimenez-Martins A.P.A., Nascimento-Filho C.H.V., Castanhole-Nunes M.M.U., Galbiatti-Dias A.L.S., Padovani-Júnior J.A., Maniglia J.V., Francisco J.L.E., Pavarino E.C and E.M GoloniBertollo (2016), “Role of MTHFR C677T and MTR A2756G polymorphisms in thyroid and breast cancer development”, Genet Mol Res 15 (2): doi: http://dx.doi.org/10.4238/gmr.15028222 13 Ivanov V.K, Gorsky A.I (1999), “Dynamics of thyroid cancer incidence in Russia following the Chernobyl accident”, J Radial Prot 19 (4), 305 – 318 14 Đặng Văn Chính (1997), Ung thư giáp trạng, Bài giảng bệnh học ung thư tập I, Nhà xuất Y học Hà Nội, tr 160 - 171 15 Rossi, R.L., et al (1986), Current results of conservative surgery for differentiated thyroid carcinoma World J Surg, 10(4): pp 612-222 16 Boone R.T., Chun Yang Fan, Hanna E.Y.(2003), Well - Differentiated Carcinoma of the Thyroid, Otolaryngologic Clinics of North America, Otolaryngol Clin N Am, Vol 36, pp 73 - 90 17 Greenfield L D., Kenneth H L (1992), Principles and Practice of Radiation Oncology, Second Edition, J.B Lippincott Company, Philadenphia, pp 1356 - 1380 18 Gharib H., Goellner J.R (1993), Fine-needle aspiration biopsy of the thryoid: An appraisal, Am Intern Med, Vol 118, pp 282 - 289 19 Stephen B.E, David R.B, Carolyn C.C et al (2010) AJCC cancer staging manual, 7, Springer, New York, 87-96 20 Kumar V, Abbas AK, Aster JC (2012), Robbins Basic Pathology, th edition, Saunders Publisher 21 Goyette P, Sumner JS, Milos R cộng (1994), "Human methylenetetrahydrofolate reductase: isolation of cDNA, mapping and mutation identification", Nature Genetics 7(2), tr 195-200 22 Gauhan D.J., Barbaux S., Kluijtman L.A et al (2000), The human and mouse methylenetetrahydrofolat reductase genes: genomic organization, mRNA structure and likage to the CLCN6 gene, Gene, (257), 279 - 289 23 Linnebank M, Homberger A, Nowak-Goettl U et al (2000), Linkage disequilibrium of the common mutation 677C→T and 1298A→C of the human methylenetetrahydrofolate reductase gene as proven by the novel polymorphisms 129C→T, 1068C→T, Eur J Ped, 159, 472 - 473 24 Rosenberg N, Murata M, Ikeda Y et al (2002), The frequent 5,10methylenetetrahydrofolate reductase C677T polymorphism is associated with a common haplotype in Whites, Japanese, and Africans, Am J Hum Genet, 70, 758 - 762 25 Frosst P, Blom H.J, Milos R et al (1995), A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase, Nat Gene., 10, 111 - 113 26 Goyette P, Frosst P, Rosenblatt DS et al (1995), Seven novel mutations in the methylenetetrahydrofolate reductase gene and genotype/phenotype correlations in severe MTHFR deficiency, Am J Hum Genet, 56, 1052 - 1059 27 Goyette P, Christensen B, Rosenblatt DS et al (1996), Severe and mild mutations in cis for the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene, and description of novel mutations in MTHFR, Am J Hum Genet, 59, 1268 - 1275 28 Viel A, Dall'Agnese L, Simone F et al (1997), Loss of heterozygosity at the 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase locus in human ovarian carcinomas, Br J Cancer, 75, 1105 - 1110 29 Weisberg I, Tran P, Christensen B et al (1998), A second genetic polymorphism in methylenetrahydrofolate reductase (MTHFR) associated with decreased enzyme activity, Mol Genet Metabol, 64, 169 - 172 30 Rady PL, Szucs S, Grady J et al (2002), Genetic polymorphisms of methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) and methionine synthase reductase (MTRR) in ethnic populations in Texas: A report of a novel MTHFR polymorphic site, G1793A, Am J Med Genet, 107, 162 – 168 31 Botto LD, Yang Q (2000), 5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review, Am J Epidemiol, (151), 862 - 877 32 Wilcken B, Bamforth F, Li Z et al (2003), Geographical and ethnic variation of the 677T>C allene of 5, 10 meththylenetetrahydrofolat reductase (MTHFR): findings from over 7000 newborns from 16 areas worldwide, J Med Genet, 40, 619 - 625 33 Schneider J A, Rees D C, Liu Y T et al (1998), Worldwide distribution of a common MTHFR mutation, Am J Hum Genet, 62, 1258 - 1260 34 Sadewa A H, Sunarti, Sutomo R et al (2002), The C677T mutation in the MTHFR gene among the indonesia Javanese population, Kobe J Med Sci., 8, 137 - 144 35 Hegete R A, Tully C, Young T K et al (1997), 677T mutation of MTHFR and cardiovascular disease in Canada Inuit, Lancet, 349, 1221 - 1222 36 Rodgers GM, Conn MT (1990), Homocystein, an athrogenic stimulus reduces protein C activation by arterial and venous endothelial cells, Blood, (75), 895 - 901 37 Rodgers GM, Kane WH (1986), Activation of endogenous factor V by a homocystein induced vascular endothelial cell activator, J Clin Invest, (77), 1909 - 1916 38 Department of Health, Taiwan: Cancer Registration System Annual Report.Taiwan, Department of Health 39 Significant Association of Methylenetetrahydrofolate Reductase Single Nucleotide Polymorphisms with Prostate Cancer Susceptibility in Taiwan, Anticancer ResearchSeptember 2010 vol 30 no 3573-3577 40 Blount BC, Mack MM, Wehr CM et al “Folate deficiency causes uracil misincorporation into human DNA and chromosome breakage: implications for cancer and neuronal damage” Proc Natl Acad Sci 41 Tạ Thành Văn (2010), PCR số kỹ thuật sinh học phân tử, Nhà xuất Y học 42 Lê Công Định Vũ Trung Lương (2013) Nghiên cứu đặc điểm di hạch ung thư biểu mô tuyến giáp thể nhú Bệnh viện Bạch Mai Tạp chí Tai Mũi Họng Việt Nam, 58(1), 262-268 43 Trần Trọng Kiểm (2008) Nghiên cứu nạo vét hạch cổ chọn lọc bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt hố Tạp chí Y học Việt Nam số Tập 342, 29-32 44 Hedinger C.W.E and Son L.H (1988) WHO histological typing of thyroid tumors Apringer-Verlag, New York, 1-87 45 Mai Trọng Khoa cộng (2006) Hiệu điều trị I – 131 điều trị ung thư tuyến giáp thể biệt hóa Tạp chí Y học lâm sàng, số đặc san, 12 – 21 46 Parkin, D.M., Stiller, C.A., cộng (1988 ) “Cancer Incidence in Five Continents”, IRAC Scientific Publication No 87, Lyon, France, International Agency for Reseach on Cancer 47 Parkin, D.M., Whelan, S.L., Ferlay, J cộng (2002) “Cancer Incidence in Five Continents”, IRAC Scientific Publication No 155, Lyon, France, International Agency for Reseach on Cancer 48 Ali Suner, Hakan Buyukhatipoglu, Gokmen Aktas, Tulay Kus, Mustafa Ulasli, Serdar Oztuzcu, Mehmet Emin Kalender, Alper Sevinc, Seval Kul, and Celaletdin Camci)Polymorphisms in the MTHFR gene are associated with recurrence risk in lymph node-positive breast cancer patients BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU Mã HSBA: Mã lưu trữ: Mã nghiên cứu: I PHẦN HÀNH CHÍNH: Họ tên: ………………………………………… Tuổi……3 Giới: Nam/Nữ Địa chỉ: Số nhà………… Thôn, phố………………Xã, phường……… …………… Huyện (Quận,TX)………….………………Tỉnh, Thành phố……………….…………… Ngày vào viện: ………/………/20…… Ngày viện ………/……/20…… Nghề nghiệp:.……………… ………… ………………………….…… …………… Thông tin liên lạc: ……………………………………………….……… ………… II PHẦN CHUYÊN MÔN: Lý vào viện:   1.Đau vùng cổ 5.Tự sờ thấy u   2.Tức nặng vùng cổ Tình cờ SA/khám  3.Nuốt vướng 7.Khác……………………………   4.Khàn tiếng Tiền sử: Xạ trị  Người thân bệnh tuyến giáp lành tính  Bệnh tuyến giáp lành tính  Người thân có ung thư tuyến giáp  Ung thư tuyến giáp  Chỉ số cận lâm sàng FT3: FT4: Tg: Anti TG: TSH: Vị trí khối nguyên phát: Thùy trái  Thùy phải  Eo tuyến giáp  Vị trí lấy mẫu bệnh phẩm:  Tại chỗ  Nơi di Đặc điểm mô bệnh học:  Ung thư biểu mô tuyến thể nhú Ung thư biểu mô tuyến thể nang  Ung thư biểu mô tuyến thể tủy  Chẩn đoán giai đoạn TNM Khối u nguyên phát (T)  Tx  T2   T1 T3  T4 Hạch vùng cổ (N) (0) Khơng có hạch (1) Có thấy bên (2) Có thấy khác bên (3) Có thấy bên Di M0  M1  Giai đoạn I  III  II  IV  III TRẠNG THÁI ĐỘT BIẾN GEN MTHFR  Bình thường  Đột biến Ghi rõ: PHỤ LỤC I Quy trình tách DNA DNA tách từ tế bào bạch cầu sử dụng Kit PROMEGA: Lấy 300ul máu, sau bổ sung thêm 900ul Cell Lysis Solution => Mix Ủ 10 phút nhiệt độ phòng Ly tâm 14500 rcf 30 giây Loại bỏ dịch Bổ sung 300ul Nuclei Lysis Solution => Mix Bổ sung 100ul Protein Precipitation Solution Vortex 20 giây Ly tâm 16000 rcf phút Chuyển sịch sang ống eppendorf có chứa 300ul Isopropanol => Mix Ly tâm 16000 rcf 10 phút 10.Loại bỏ dịch Bổ sung 300ul ethanol 70% 11.Ly tâm 16000 rcf phút => Loại bỏ dịch 12.Làm khô mẫu 15 phút máy hút chân không 13.Bổ sung 100ul nước 3D/ DNA Rehydration Solution Ủ 65°C 4°C qua đêm PHỤ LỤC II TRANG THIẾT BỊ TÁCH VÀ ĐIỆN DI DNA − − − − − − − − − − − − − − − − Máy li tâm Kubota 3300, máy Centrifuge 5424 R (Eppendorf) Máy minispin Máy lắc vortex Máy đo mật độ quang NanoDrop 1000 (Thermo) Máy ủ nhiệt Thermomixer comfort (Eppendorf) Máy PCR mastercycle epgradient (Eppendorf) Máy điện di Mulpid Exu (Nhật Bản) Máy chụp Geldoc Tủ an toàn sinh học Tủ lạnh bảo quản -4oC, -30oC Ống PCR 0,2 ml, ống eppendorf 1,5ml khử trùng Bộ pipet 1000μl, 200μl, 100μl, 20μl, 10 μl Đầu côn loại khử trùng khơng có DNA (free DNA) Giá để ống, phiến lạnh để mẫu Găng tay, trang Bút dạ, đồng hồ bấm giờ, thùng đựng rác PHỤ LỤC III HĨA CHẤT SINH PHẨM TÁCH DNA Bộ hóa chất để tách DNA (kit Omega – USA) − − − − − − − Cell Lysis Solution 28 Nucleic Lysis Solution RNase Solution DNA rehydration Solution Protein precipitation Solution Isopropanol tinh (96 -100%) nhiệt độ phòng (bảo quản 40C) Ethanol 70% nhiệt độ phòng (bảo quản 40C) Hóa chất để PCR, điện di − − − − − − − − PCR Master mix 2x (Fermantas) Thang DNA chuẩn X174 DNA/ HaeIII Digest (Biolabs) Dung dịch EDTA (0.5M, PH = 8) Đệm điện di UltrapureTBETM buffer 0.5X (Invitrogen) RedsafeTM (Intron Biotechnology) Thạch Agarose (Promega, Spain) Nước tinh GIBCO® UltraPure Distilled Water (Invitrogen) Mẫu bệnh phẩm DNA tách chiết ... Nghiên cứu tính đa hình thái đơn C677T gen MTHFR bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt hóa với mục tiêu sau: Đánh giá nguy đa hình thái đơn C677T gen MTHFR bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt. .. kiểu gen tần số alen đa hình thái đơn C677T gen MTHFR bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt hóa Việt Nam 53 4.3 Mối liên quan đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với yếu tố nguy giai đoạn bệnh ung thư. .. thể biệt hóa 3 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tình hình nghiên cứu đa hình thái đơn C677T gen MTHFR bệnh nhân ung thư tuyến giáp thể biệt hóa Báo cáo đánh giá vai trò đa hình thái đơn C677T gen MTHFR với