BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG I HC Y H NI NGUYN TH THANH THO Đánh giá giá trị HOS test mẫu tinh trïng bÊt ®éng Chun ngành : Mơ học - Phơi thai học Mã số : NT 62720101 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP BÁC SỸ NỘI TRÚ Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN KHANG SƠN HÀ NỘI - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y H NI NGUYN TH THANH THO Đánh giá giá trị HOS test mẫu tinh trùng bất ®éng Chuyên ngành : Mô học - Phôi thai học Mã số : NT 62720101 LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP BÁC SỸ NỘI TRÚ Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN KHANG SƠN HÀ NỘI - 2017 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.Tình hình vô sinh giới Việt Nam 1.1.1 Vô sinh nam tinh trùng di động 1.1.2 Thụ tinh ống nghiệm cổ điển (IVF) tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (IVF/ICSI) 1.2 Cấu tạo tinh trùng .8 1.2.1 Tinh trùng bình thường 1.2.2 Tinh trùng bất thường 11 1.2.3 Tinh dịch đồ 11 1.3 Một số phương pháp đánh giá khả sống tinh trùng trước có HOS Test .11 1.3.1 Phương pháp nhuộm eosin, eosin- nigrosin, trypan blue 12 1.3.2 Phương pháp kích thích học 13 1.3.3 Kỹ thuật laser 13 1.3.4 Sử dụng pentoxyfiline 13 1.4 Nghiệm pháp HOS Test 15 1.4.1 Cấu tạo chức màng bào tương, nguyên lý HOS Test 15 1.5 Các nghiên cứu HOS Test 20 1.6 Ứng dụng 26 1.6.1 Đánh giá mẫu tinh dịch 26 1.6.2 HOS Test sử dụng tiêu chí dự đốn khả thụ tinh tinh trùng, góp phần chẩn đốn vơ sinh nam 27 1.6.3 HOS Test giúp lựa chọn tinh trùng có tồn vẹn DNA cao 27 1.6.4 HOS Test có vai trò lớn lĩnh vực hỗ trợ sinh sản .31 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .35 2.1 Đối tượng 36 Mẫu tinh trùng bất động hoàn toàn 37 người đàn ông 36 2.2 Phương pháp nghiên cứu 36 2.2.1 Mơ hình nghiên cứu 36 2.2.2 Chuẩn bị dụng cụ hóa chất .36 2.3.Qui trình nghiên cứu 37 2.4 Chỉ tiêu nghiên cứu: .38 2.5 Xử lý số liệu 38 2.6 Địa điểm thời gian nghiên cứu 38 2.7 Đạo đức nghiên cứu .38 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 38 3.1 Kết đặc điểm đối tượng nghiên cứu 39 3.2 Tỉ lệ dạng biểu phản ứng HOS Test theo thời gian 39 3.3 Mối tương quan tỉ lệ tinh trùng có phản ứng HOS với tỉ lệ tinh trùng sống tỉ lệ tinh trùng có hình thái bình thường 46 3.4 Xác định loại dung dịch HOS Test phù hợp thời gian tối ưu ủ tinh trùng dung dịch HOS Test 47 3.5 Đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu giá trị chẩn đoán dương nghiệm pháp HOS Test với dung dịch DD2, thời điểm 30 phút 50 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 51 4.1 Bàn luận đặc điểm đối tượng nghiên cứu 51 4.2 Các dạng phản ứng HOS Test 52 4.2.1 Tinh trùng có phản ứng HOS Test .52 4.2.2 Các dạng biểu phản ứng HOS Test .52 4.3 Mối tương quan tỉ lệ tinh trùng có phản ứng HOS Test tỉ lệ tinh trùng sống, tỉ lệ tinh trùng có hình thái bình thường .59 4.4 Loại dịch thời gian thực HOS Test phù hợp 59 4.5 Giá trị phản ứng HOS Test .64 4.6 Phương pháp HOS Test 67 4.6.1.Bàn luận phương pháp HOST 67 4.6.2.Quy trình 67 KẾT LUẬN 69 KHUYẾN NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Các dạng biểu phản ứng HOS Test dung dịch thay đổi theo thời gian 41 Bảng 3.2 Các dạng biểu phản ứng HOS Test dung dịch thay đổi theo thời gian 42 Bảng 3.3 Các dạng biểu phản ứng HOS Test dung dịch thay đổi theo thời gian 43 Bảng 3.4 Các dạng biểu phản ứng HOS Test dung dịch thay đổi theo thời gian 44 Bảng 3.5 Tỉ lệ phần trăm tinh trùng có phản ứng HOS bốn loại dung dịch biến đổi theo thời gian 47 Bảng 3.6 Tỉ lệ phần trăm tinh trùng chết bốn loại dịch thay đổi theo thời gian 48 Bảng 3.7 Tỉ lệ tinh trùng (TT) có phản ứng HOS Test bốn loại dung dịch khảo sát, thời điểm 30 phút 49 Bảng 3.8 Giá trị phản ứng HOS Test với dung dịch DD2 .50 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Các dạng biểu phản ứng HOS Test dung dịch thay đổi theo thời gian .41 Biểu đồ 3.2 Các dạng biểu phản ứng HOS Test dung dịch thay đổi theo thời gian .42 Biểu đồ 3.3 Các dạng biểu phản ứng HOS dung dịch thay đổi theo thời gian 44 Biểu đồ 3.4 Các dạng biểu phản ứng HOS Test dung dịch thay đổi theo thời gian .45 Biểu đồ 3.5 Mối tương quan tỉ lệ tinh trùng có phản ứng HOS tỉ lệ tinh trùng có hình thái bình thường 46 Biểu đồ 3.6 Mối tương quan tỉ lệ tinh trùng có phản ứng sống tỉ lệ tinh trùng có phản ứng HOS Test 46 Biểu đồ 3.7 Tỉ lệ tinh trùng có phản ứng HOS Test bốn loại dung dịch khảo sát, biến đổi theo thời gian 47 Biểu đồ 3.8 Tỉ lệ tinh trùng chết (eosin +) loại dung dịch HOS Test, biến đổi theo thời gian .49 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu tạo siêu vi tinh trùng .10 Hình 1.2 Các dạng biểu tinh trùng phản ứng HOS Test .25 Hình 1.3 Các dạng biểu tinh trùng có phản ứng HOS Test kính hiển vi quang học với độ phóng đại 400 lần .25 Hình 3.1 Một số dạng biểu phản ứng HOS Test 40 Hình 3.2 Hình ảnh tinh trùng có cuộn bắt màu eosin 48 ĐẶT VẤN ĐỀ Kỹ thuật ICSI đời phương pháp điều trị hiệu cho cặp vợ chồng vô sinh, đặc biệt nguyên nhân nam giới với tinh trùng ít, yếu kèm hình dạng bất thường cao tinh trùng thu nhận từ mào tinh, tinh hoàn Tinh trùng tươi trữ đông sau lọc rửa lựa chọn để tiêm vào trứng dựa hình thái khả di động chúng Tuy nhiên, nhiều trường hợp, mẫu tinh trùng thu nhận bất động hoàn tồn gây khó khăn cho việc lựa chọn Thực tế cho thấy, số trường hợp mẫu tinh trùng bất động hồn tồn có tỉ lệ đáng kể tinh trùng sống Việc lựa chọn cách ngẫu nhiên hay dựa vào hình thái tinh trùng mẫu tinh trùng bất động hoàn toàn để thực ICSI gây giảm đáng kể tỉ lệ thụ tinh có thai Để cải thiện kết ICSI trường hợp này, nhiều phương pháp mô tả để lựa chọn tinh trùng bất động sống Một số phương pháp để xác định tinh trùng sống: kỹ thuật nhuộm eosin, trypan blue, kích hoạt tinh trùng cách bổ xung pentoxyfilline, kích thích học - kỹ thuật laser, nhiên tất phương pháp có nhược điểm gây độc cho tinh trùng, ảnh hưởng đến khả sống tinh trùng [1] HOS Test đời khắc phục hạn chế Khi đưa tế bào vào môi trường áp lực thẩm thấu thấp (môi trường nhược trương) nước vào tế bào để cân áp lực bên bên màng tế bào; tế bào sống với chức màng ngun vẹn có biểu trương phồng lên Ứng dụng điều năm 1984, Jeyendran cộng thử nghiệm đánh giá tính tồn vẹn chức màng bào tương tinh trùng người dung dịch có áp suất thẩm thấu thấp [2] Màng tinh trùng khơng có vai trò quan trọng q trình trao đổi chất, đảm bảo sống cho tinh trùng mà cần thiết q trình thụ tinh trứng tinh trùng tham gia vào q trình hoạt hóa tinh trùng, phản ứng cực đầu, giúp tinh trùng bám bề mặt trứng Nghiệm pháp HOS Test (Hypo- Osmotic Swelling Test, HOS Test, HOST) ban đầu xem tiêu chí đánh giá tỷ lệ sống tinh trùng mẫu tinh trùng hoàn toàn bất động, WHO 2010 ghi nhận phương pháp đánh giá tỷ lệ sống, áp dụng rộng rãi cho xét nghiệm tinh dịch Sau dùng để đánh giá khả thụ tinh mẫu tinh trùng [3] Với phát triển mạnh mẽ ngành hỗ trợ sinh sản nay, HOS Test có vai trò quan trọng việc phát tinh trùng sống mẫu tinh trùng bất động hồn tồn với mục đích sử dụng tinh trùng sống để tiêm vào bào tương nỗn (ICSI) Sự kết hợp HOS Test với ICSI làm tăng hiệu chu kỳ ICSI với mẫu tinh trùng bất động hoàn [2], [4] Trong trường hợp mẫu tinh trùng bất động hoàn toàn, việc kiểm tra sống tinh trùng quan trọng, định thành công IVF Chọn nhầm tinh trùng chết để ICSI đưa đến tỉ lệ thụ tinh thấp không tạo phôi Với mong muốn đánh giá cách đầy đủ giá trị HOS Test tinh trùng bất động, làm tăng tỉ lệ thành công chu kỳ ICSI, đặc biệt với mẫu tinh trùng bất động hồn tồn, chúng tơi thực đề tài “Đánh giá giá trị HOS Test mẫu tinh trùng bất động” với mục tiêu: Đánh giá giá trị HOS Test mẫu tinh trùng bất động CHƯƠNG 65 có thay đổi nhiều tỉ lệ HOST Sau 10 phút tỉ lệ tinh trùng có phản ứng HOST chết stress áp lực thẩm thấu tăng lên, tăng cao sau 30 phút Mối tương quan với tinh trùng bình thường mẫu astheno 0,35, p