BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ NỮ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ VÀ CÀNH NHỎ CÂY MUỒNG TRUỔNG (Zanthoxylum avicennae, HỌ CAM (Rutaceae)) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2019 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ NỮ 1401461 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ VÀ CÀNH NHỎ CÂY MUỒNG TRUỔNG (Zanthoxylum avicennae, HỌ CAM (Rutaceae)) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh PGS TS Đỗ Thị Hà Nơi thực hiện: Khoa Hóa Thực vật Viện Dược liệu Bộ môn Thực vật Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu, hồn thành khóa luận tốt nghiệp Viện Dược liệu Bộ môn Thực vật trường Đại học Dược Hà Nội, nhận nhiều hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ thầy cơ, anh chị bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc, tơi xin bày tỏ lòng kính trọng lời cảm ơn chân thành đến: TS Hà Vân Oanh, người tạo điều kiện, dẫn dắt đến với ngày đầu tham gia nghiên cứu, người hỗ trợ, hướng dẫn tơi suốt q trình thực khóa luận PGS TS Đỗ Thị Hà, người tin tưởng giao đề tài, tạo điều kiện nghiên cứu thuận lợi, giúp đỡ thời gian thực khóa luận Các chị cơng tác Khoa Hóa Thực vật - Viện Dược Liệu truyền đạt kinh nghiệm q báu, ln góp ý, động viên, giúp đỡ cho tơi q trình nghiên cứu Tồn thể thầy cô, anh chị, bạn bè làm việc, nghiên cứu môn Dược học Cổ truyển môn Thực vật trường Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện nghiên cứu thuận lợi thời gian tơi thực khóa luận Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân, bạn bè ln bên cạnh, động viên, ủng hộ lúc khó khăn Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2019 Sinh viên Trần Thị Nữ MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ iii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Zanthoxylum L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Zanthoxylum L 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố 1.1.3 Thành phần hóa học 1.2 Tổng quan loài Zanthoxylum avicennae (Lam.) DC 1.2.1 Đặc điểm thực vật 1.2.2 Sinh thái phân bố 1.2.3 Thành phần hóa học 1.2.4 Tác dụng dược lý 13 1.2.5 Tính vị, công .15 CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Nguyên liệu phương tiện nghiên cứu 16 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 16 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 16 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.2.1 Nội dung nghiên cứu đặc điểm thực vật 17 2.2.2 Nội dung nghiên cứu hóa học 17 2.3 Phương pháp nghiên c ứu 17 2.3.1 Phương pháp nghiên c ứu đặc điểm thực vật 17 2.3.2 Phương pháp nghiên c ứu hóa học 18 CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Nghiên cứu thực vật 19 3.1.1 Đặc điểm thực vật 19 3.1.2 Đặc điểm giải phẫu cành 22 3.1.3 Đặc điểm bột dược liệu 24 3.2 Nghiên cứu hóa học 26 3.2.1 Định tính nhóm chất hữu thường gặp dược liệu 26 3.2.2 Chiết xuất 34 3.2.3 Khảo sát phân lập hợp chất cao H (cao n-hexan) 35 3.3 Bàn luận 43 3.3.1 Về thực vật 43 3.3.2 Về hóa học 43 CHƯƠNG IV - KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 4.1 Kết luận 45 4.2 Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Z Zanthoxylum STT Số thứ tự TLTK Tài liệu tham khảo MCF-7 Michigan Cancer Foundation-7 (Tế bào ung thư vú) K-562 Tế bào ung thư máu HA22T Tế bào ung thư gan người IC50 Half-maximal inhibitory concentration (Nồng độ ức chế 50%) MIC Minimum Inhibitory Concentration (Nồng độ ức chế tối thiểu) DPPH 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl ABTS 2,2-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power EtOAc Ethyl acetat SKLM Sắc ký lớp mỏng SKĐ Sắc ký đồ TT Thuốc thử to Nhiệt độ m/v Khối lượng/thể tích v/v Thể tích/thể tích H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) 13 C-NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13) DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer (Phổ DEPT) d doublet s singlet t triplet δ Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) J Hằng số tương tác (đơn vị Hz) i DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Bảng Bảng 1.1 Các loài thuộc chi Zanthoxylum L Việt Nam Bảng 1.2 Một số chất phân lâp từ loài thuộc chi Zanthoxylum L Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu thường gặp cành nhỏ Muồng truổng Trang 33 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ MT2 friedelan-3-on 39 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ MT4 glutinol 41 ii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình Tên hình Trang Hình 1.1 Một số coumarin phân lập từ Zanthoxylum avicennae 7,8 Hình 1.2 Một số alcaloid phân lập từ Zanthoxylum avicennae 8,9 Hình 1.3 Một số flavonoid phân lập từ Zanthoxylum avicennae 10 Hình 1.4 Thành phần tinh dầu Zanthoxylum avicennae 11 Hình 1.5 Lignan dẫn chất phân lập từ Zanthoxylum avicennae 12 Hình 1.6 Một số hợp chất khác phân lập từ Zanthoxylum avicennae 13 Hình 3.1 Đặc điểm hình thái quan sinh dưỡng Muồng truổng Ba Vì Hình 3.2 Đặc điểm hình thái quan sinh sản Muồng truổng Ba Vì 20 21 Hình 3.3 Vi phẫu cành Muồng truổng 23 Hình 3.4 Vi phẫu Muồng truổng 25 Hình 3.5 Đặc điểm bột cành 25 Hình 3.6 Đặc điểm bột 26 Hình 3.7 Sơ đồ chiết xuất dược liệu 34 Hình 3.8 Sắc ký đồ cao H khai triển với hệ dung môi I II 35 Hình 3.9 Sơ đồ phân lập hợp chất cao H 37 Hình 3.10 Các chất phân lập 38 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học MT2 40 Hình 3.12 Cấu trúc hóa học MT4 43 iii ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện giới, việc nghiên cứu phân lập, chiết tách hoạt chất từ thảo dược để tìm thuốc mới ngày quan tâm phát triển Khơng sản phẩm thuốc có nguồn gốc từ thảo dược, nhiều hợp chất thiên nhiên chứng minh có tác dụng đột phá chữa bệnh ung thư, tiểu đường, tim mạch…Sử dụng sản phẩm thuốc có nguồn gốc từ thảo dược để phòng trị bệnh xu hướng Việt Nam Muồng truổng (Zanthoxylum avicennae) mọc hoang khắp rừng núi tỉnh thành nước Nhân dân thường lấy nấu ăn, dùng chữa đòn ngã, tổn thương, viêm tuyến vú, nhọt, viêm mủ da; lấy rễ vàng uống để chữa mẩn ngứa, lở loét, viêm gan vàng da, viêm thận; dùng để chữa đau dày, đau bụng…[5], [10] Đây vị thuốc có mặt nhiều thuốc dân gian Việt Nam, lồi có nhiều tiềm để nghiên cứu phát triển Ở Ba Vì, người dân địa phương sử dụng làm gia vị Trên giới có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý cây, phát có nhiều hoạt chất với hoạt tính sinh học bật chống viêm, chống ung thư… [21], [27] Ở Việt Nam có số nghiên cứu thành phần hóa học cơng bố lồi [6], [7], nhiên chưa có nhiều nghiên cứu chi tiết đặc điểm thực vật cây, chưa có nghiên cứu Muồng truổng Ba Vì, mà thành phần hóa học đặc điểm hình thái lồi thực vật khơng qui định giống, lồi mà điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng Xuất phát từ lý trên, đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật chiết xuất, phân lập số hợp chất cành nhỏ Muồng truổng (Zanthoxylum avicennae, họ Cam (Rutaceae))” thực với mục tiêu: Mơ tả đặc điểm hình thái thực vật, đặc điểm vi phẫu cành, lá, đặc điểm vi học bột cành, bột giám định tên khoa học Muồng truổng thu hái Ba Vì Định tính nhóm chất cành nhỏ phản ứng hóa học Chiết xuất, phân lập xác định số hợp chất từ cành nhỏ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Zanthoxylum L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Zanthoxylum L Zanthoxylum L có vị trí phân loại [45]: Giới thực vật (Plantae) Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa hồng (Rosidae) Bộ Cam (Rutales) Họ Cam (Rutaceae) Phân họ Cửu lý hương (Rutoideae) Chi Xuyên tiêu (Zanthoxylum L.) 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố Cây thường xanh rụng hàng năm, dạng bụi gỗ nhỏ, thường cao 5-15 m, cá biệt có lồi gỗ lớn, cao tới 35 m, mọc thẳng trườn, leo Vỏ ngồi có nhiều gai nhọn sần sùi, màu xám nâu nhạt, vỏ có nhiều xơ thơm Lá kép lông chim lẻ chẵn, có cuống, khơng có kèm, có 5-21 đơi chét, mọc đối mọc cách, chét có mép ngun có khía cưa Cụm hoa có dạng hình chùm, hình xim hình chùy (rất mọc đơn độc) mọc nách đầu cành Hoa lưỡng tính đơn tính, bao hoa 6-8 mảnh 4-5 đài, 4-5 cánh tràng Nhị 46, thường thối hóa hoa cái, bầu thượng, 1-5 nỗn, hoa đực bầu nhụy thối hóa Quả nang, gồm 1-5 rời dính phía dưới Hạt hình trứng gần hình cầu, màu đen đỏ, bóng [13] Chi Zanthoxylum L gồm khoảng 200 lồi, phân bố chủ yếu khu vực nhiệt đới giới Hầu hết số loài phân bố tập trung Nam Mỹ Chúng phân bố rải rác số khu vực miền Bắc Australia vùng Thái Bình Dương Một số phân bố tới khu vực ôn đới thuộc Đông Á Bắc Mỹ Trong vùng Đơng Nam Á có khoảng 20 lồi Ở Trung Quốc có khoảng 41 loài (25 loài đặc hữu) [13], [24] Tại Việt Nam, có 13 lồi thuộc chi Zanthoxylum L thống kê mô tả PHỤ LỤC PHỤ LỤC ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ NỮ 1401461 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ VÀ CÀNH NHỎ CÂY MUỒNG TRUỔNG (Zanthoxylum avicennae, HỌ CAM (Rutaceae)). .. Nghiên cứu đặc điểm thực vật chiết xuất, phân lập số hợp chất cành nhỏ Muồng truổng (Zanthoxylum avicennae, họ Cam (Rutaceae)) thực với mục tiêu: Mơ tả đặc điểm hình thái thực vật, đặc điểm. .. phẫu cành, lá, đặc điểm vi học bột cành, bột giám định tên khoa học Muồng truổng thu hái Ba Vì Định tính nhóm chất cành nhỏ phản ứng hóa học Chiết xuất, phân lập xác định số hợp chất từ cành