TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ MÔN DƯỢC LÝ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU SÀNG LỌC TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA 10 MẪU THỬ (TỪ CT1 ĐẾN CT10) TRÊN THỰC NGHIỆM HÀ NỘI - 2017 MỤC LỤC CHẤT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.1 Chất liệu nghiên cứu 1.1.1 Thuốc nghiên cứu 1.1.2 Hóa chất nghiên cứu 1.1.3 Dụng cụ nghiên cứu 1.2 Động vật thí nghiệm 1.3 Địa điểm nghiên cứu 1.4 Phương pháp nghiên cứu 1.4.1 Tác dụng giảm đau 1.4.2 Tác dụng cầm máu: Đánh giá thời gian máu chảy thời gian máu đông 1.4.3.Tác dụng nhu động ruột trương lực trơn ruột cô lập 1.4.4 Tác dụng lên huyết áp 10 mẫu thử CT chuột cống trắng .7 1.4.5 Tác dụng chống viêm cấp 1.4.6 Tác dụng 10 mẫu thử CT mạch tai thỏ cô lập [6] .12 1.5 Xử lý số liệu 12 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .13 2.1 Tác dụng giảm đau 13 2.1.1 Tác dụng giảm đau 10 mẫu thử CT phương pháp mâm nóng 13 2.1.2 Nghiên cứu tác dụng giảm đau 10 mẫu CT máy đo ngưỡng đau Dynamic Plantar Aesthesiometer 16 2.2 Tác dụng cầm máu 20 2.3 Tác dụng nhu động ruột trương lực trơn ruột cô lập 28 2.4 Ảnh hưởng lên huyết áp 10 mẫu CT chuột cống trắng 43 2.5 Tác dụng chống viêm mơ hình gây viêm chân chuột carrageenin 49 2.6 Tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây viêm màng bụng chuột 51 2.7 Tác dụng 10 mẫu thử CT mạch tai thỏ cô lập 54 KẾT LUẬN 55 3.1 Tác dụng giảm đau 56 3.1.1 Trên mơ hình mâm nóng 56 3.1.2 Trên mơ hình đo ngưỡng đau máy rê kim 56 3.2 Tác dụng cầm máu 56 3.3 Tác dụng nhu động ruột trương lực trơn ruột cô lập 56 3.4 Tác dụng lên huyết áp 10 mẫu CT chuột cống trắng 57 3.5 Tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột carrageenin 57 3.6 Tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây viêm màng bụng chuột 57 3.7 Tác dụng 10 mẫu thử CT mạch tai thỏ cô lập 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 CHẤT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.1 Chất liệu nghiên cứu 1.1.1 Thuốc nghiên cứu - Mẫu thử gồm10 mẫu, từ CT1 đến CT10, dạng cao đặc, có tỷ lệ sau: + Mẫu thử CT1: 3kg dược liệu khô tương đương 763,7g cao + Mẫu thử CT2: 3kg dược liệu khô tương đương 567g cao + Mẫu thử CT3: 3kg dược liệu khô tương đương 602,9g cao + Mẫu thử CT4: 3kg dược liệu khô tương đương 753,8g cao + Mẫu thử CT5: 3kg dược liệu khô tương đương 659,3g cao + Mẫu thử CT6: 3kg dược liệu khô tương đương 691g cao + Mẫu thử CT7: 3kg dược liệu khô tương đương 835,4g cao + Mẫu thử CT8: 3kg dược liệu khô tương đương 755g cao + Mẫu thử CT9: 3kg dược liệu khô tương đương 742,7g cao + Mẫu thử CT10: 3kg dược liệu khô tương đương 815,4g cao - Liều dự kiến người : 23 g dược liệu khô/ngày, tương đương 0,46 g dược liệu khô/kg/ngày (tính người lớn nặng trung bình 50 kg) 1.1.2 Hóa chất nghiên cứu - Codein phosphat Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương - Aspirin, biệt dược Aspirin-100 viên nén bao tan ruột, hàm lượng 100mg Công ty Cổ phần Traphaco, Việt Nam - Dung dịch Tyrod A, dung dịch Tyrod B, dung dịch Ringer - Các hóa chất carageenin, formaldehyd, dung dịch natri clorid 0,9% đủ tiêu chuẩn phòng thí nghiệm – Trường Đại học Y Hà Nội - Dung dịch xét nghiệm máu ABX Minidil LMG hãng ABX – Diagnostics 1.1.3 Dụng cụ nghiên cứu - Máy đo viêm Plethysmometer No 7250 hãng Ugo - Basile (Italy) - Máy Hot plate model – DS37 hãng Ugo-Basile (Italy) - Máy đo phản ứng đau Dynamic Plantar Aesthesiometer 37450 hãng Ugo – Basile (Italy) - Buồng nuôi quan cô lập Two-Chamber Isolated Organ Bath 4050 hãng Ugo – Basile (Italy) - Hệ thống đo huyết áp đuôi chuột không xâm lấn hãng ADInstrument (New Zealand) - Máy huyết học Exigo – Boule Medical AB Thụy Điển - Máy xét nghiệm sinh hóa bán tự động Erba Chem V3 (Ấn Độ) - Đồng hồ bấm giây STOP WACTH hãng Q&Q Citizen - Nhật Bản Trung Quốc sản xuất - Cốc đựng dung dịch có chia vạch loại 500ml, 100ml, bơm tiêm loại 20ml, 10ml, 5ml, 1ml - Cân điện tử nhãn hiệu hãng YMC.Co.Ltd, Nhật Bản - Bình đựng dung dịch Ranger lactat - Dụng cụ phẫu thuật thỏ: bàn mổ, kéo, panh, kẹp, kim khâu, khâu 1.2 Động vật thí nghiệm - Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 25 ± 2g Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp - Chuột cống trắng chủng Wistar trưởng thành, khỏe mạnh, cân nặng trung bình 200 ± 20 g Học viện Quân Y cung cấp - Thỏ chủng Newzealand White, lông trắng, giống, khỏe mạnh, trọng lượng 1,8 kg - 2,5 kg Trung tâm cung cấp động vật thí nghiệm Đan Phượng - Hà Tây cung cấp - Chuột nuôi 5-7 ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu điều kiện phòng thí nghiệm với thức ăn chun biệt (do viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp) nước uống tự Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội 1.3 Địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội 1.4 Phương pháp nghiên cứu 1.4.1 Tác dụng giảm đau Nghiên cứu tác dụng giảm đau 10 mẫu thử CT phương pháp mâm nóng (hot plate) [1] Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành 22 lô, lô 10 con: - Lô (chứng sinh học): uống nước cất liều 0,2mL/10g/ngày - Lô (thuốc đối chứng): uống codein phosphat 20 mg/kg - Lô 3: uống CT1 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 4: uống CT1 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 5: uống CT2 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 6: uống CT2 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 7: uống CT3 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 8: uống CT3 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 9: uống CT4 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 10: uống CT4 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 11: uống CT5 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 12: uống CT5 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 13: uống CT6 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 14: uống CT6 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 15: uống CT7 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 16: uống CT7 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 17: uống CT8 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 18: uống CT8 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 19 uống CT9 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 20: uống CT9 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 21: uống CT10 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 22: uống CT10 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) Chuột lô uống nước thuốc ngày lần vào buổi sáng, với thể tích 0,2 mL/10g/ngày ngày liên tục Đo thời gian phản ứng với nhiệt độ chuột trước uống thuốc sau uống thuốc lần cuối Đặt chuột lên mâm nóng (hot plate) ln trì nhiệt độ 560C hệ thống ổn nhiệt Tính thời gian từ lúc đặt chuột lên mâm nóng đến chuột liếm chân sau Loại bỏ chuột phản ứng nhanh (trước giây) chậm (sau 30 giây) So sánh thời gian phản ứng với kích thích nhiệt trước sau uống thuốc thử Nghiên cứu tác dụng giảm đau 10 mẫu thử CT máy đo ngưỡng đau [1], [3] Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành 22 lô, tương tự nghiên cứu trên, lô 10 Chuột lô uống nước thuốc ngày lần vào buổi sáng, với thể tích 0,2 mL/10g/ngày ngày liên tục Đo thời gian phản ứng với đau chuột lực gây đau chuột (sử dụng máy Dynamic Plantar Aesthesiometer 37450 Ugo Basile) trước uống thuốc sau uống thuốc lần cuối Chỉ số nghiên cứu: Thời gian phản ứng với kích thích đau, so sánh trước sau uống thuốc thử Lực gây đau, so sánh trước sau uống thuốc thử 1.4.2 Tác dụng cầm máu: Đánh giá thời gian máu chảy thời gian máu đông Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành 21 lô, lô 10 con: - Lô (chứng sinh học): uống nước cất liều 0,2mL/10g/ngày - Lô 2: uống CT1 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 3: uống CT1 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 4: uống CT2 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 5: uống CT2 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 6: uống CT3 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 7: uống CT3 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 8: uống CT4 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 9: uống CT4 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 10: uống CT5 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 11: uống CT5 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 12: uống CT6 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 13: uống CT6 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 14: uống CT7 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 15: uống CT7 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 16: uống CT8 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 17: uống CT8 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 18 uống CT9 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 19: uống CT9 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 20: uống CT10 liều 5,52 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 12) - Lô 21: uống CT10 liều 16,56 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) Chuột lô uống nước ngày lần vào buổi sáng, với thể tích 0,2 mL/10g/ngày ngày liên tục Xét nghiệm tiến hành thời điểm: trước sau uống mẫu thử ngày Tiến hành: Nhúng đuôi chuột vào bình ổn nhiệt ni quan lập đặt nhiệt độ 370C Thời gian máu chảy tính từ lúc máu bắt đầu chảy đến máu ngừng chảy Cắt đuôi chuột lấy giọt máu cho lên lam để tính thời gian máu đơng, thời gian đơng máu tính từ lúc lấy giọt máu vào lam kính đến lúc giọt máu đơng lại 1.4.3.Tác dụng nhu động ruột trương lực trơn ruột cô lập Nghiên cứu tiến hành ruột thỏ cô lập ghi nhu động ruột theo phương pháp Magnus [2] Tiến hành: - Cô lập ruột thỏ đoạn hồi tràng, đoạn dài cm, chọn đoạn ruột có đường kính tương tự Các đoạn ruột nuôi bể nuôi quan cô lập, ln trì nhiệt độ 370C có nồng độ CO2, O2 đạt tiêu chuẩn qui định Mỗi công thức pha dung dịch Tyrod với nồng độ sau: 740 mg/100ml Tyrod, 890 mg/100ml Tyrod, 1110 mg/100ml Tyrod, 1480 mg/100ml Tyrod - Ghi nhu động ruột thỏ qua bút ghi trước (nhu động bình thường) sau nhỏ mẫu thử - Nghiên cứu thay đổi nhu động ruột trương lực trơn ruột trước sau dùng mẫu thử (thể qua tần số biên độ nhu động ruột) 1.4.4 Tác dụng lên huyết áp 10 mẫu thử CT chuột cống trắng Chuột cống trắng chia thành 11 lô, lô 10 con: Lô 1: Lô chứng: uống nước cất Lô 2: Uống CT1 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo hệ số 6) Lô 3: Uống CT2 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo hệ số 6) Lơ 4: Uống CT3 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo hệ số 6) Lơ 5: Uống CT4 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo số 6) Lơ 6: Uống CT5 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo số 6) Lô 7: Uống CT6 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo số 6) Lô 8: Uống CT7 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo hệ số 6) Lô 9: Uống CT8 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo số 6) Lơ 10: Uống CT9 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo số 6) Lơ 11: Uống CT10 liều 2,76 g/kg/ngày (liều tương đương với liều dự kiến lâm sàng, tính theo số 6) Chuột lơ uống nước cất liên tục ngày Chuột từ lô đến lô 11 uống mẫu thử tương ứng liên tục vòng ngày Chỉ số đánh giá: - Huyết áp tâm thu, huyết áp tâm trương, huyết áp trung bình nhịp tim - Các thời điểm đánh giá gồm: - to: Thời điểm chuột chưa uống nước cất/ mẫu thử - t1: Thời điểm sau uống nước cất/ mẫu thử ngày - t2: Thời điểm sau uống nước cất/ mẫu thử ngày - t3: Thời điểm sau ngày uống nước cất/ mẫu thử 1.4.5 Tác dụng chống viêm cấp Trên mơ hình gây phù chân chuột carrageenin [1], [4], [5] Chuột cống trắng chia ngẫu nhiên thành 22 lô, lô 10 con: - Lô (chứng sinh học): uống nước cất liều 1ml/100g/ngày - Lô (thuốc đối chứng): uống aspirin 200 mg/kg - Lô 3: Uống CT1 liều 2,76 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 6) - Lô 4: Uống CT1 liều 8,28 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 5: Uống CT2 liều 2,76 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 6) - Lô 6: Uống CT2 liều 8,28 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 7: Uống CT3 liều 2,76 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 6) - Lô 8: Uống CT3 liều 8,28 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 9: Uống CT4 liều 2,76 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 6) - Lô 10: Uống CT4 liều 8,28 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 11: Uống CT5 liều 2,76 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 6) - Lô 12: Uống CT5 liều 8,28 g dược liệu/kg/ngày (gấp liều tương đương lâm sàng) - Lô 13: Uống CT6 liều 2,76 g dược liệu/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng, hệ số ngoại suy 6) Kết bảng 2.7 cho thấy: - Huyết áp tâm thu lô chuột uống mẫu thử CT1, CT2, CT4, CT5, CT6, CT7, CT8, CT9 CT10 liều 2,76 g/kg/ngày khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống mẫu thử giờ, sau ngày uống mẫu thử liên tục (p>0,05) - Huyết áp tâm thu lô chuột uống mẫu thử CT3 liều 2,76 g/kg/ngày khơng có khác biệt có nghĩa so với lơ chứng so sánh thời điểm trước sau uống mẫu thử (p>0,05) Tuy nhiên, huyết áp tâm thu lô chuột uống mẫu thử CT3 tăng rõ rệt so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống mẫu thử sau ngày uống mẫu thử liên tục (p 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 78,30 ± 1,89 79,10 ± 1,20 79,50 ± 0,71 79,10 ± 0,99 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 78,60 ± 2,37 79,70 ± 0,48 78,50 ± 0,71 79,50 ± 0,71 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 78,80 ± 1,69 79,50 ± 0,71 78,90 ± 0,88 79,00 ± 1,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 78,70 ± 1,64 78,70 ± 0,82 79,10 ± 0,74 79,00 ± 0,82 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 78,90 ± 1,20 79,20 ± 0,79 79,30 ± 1,06 78,80 ± 1,14 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 78,90 ± 1,10 79,30 ± 1,06 79,10 ± 0,99 79,40 ± 0,70 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 78,90 ± 1,10 78,50 ± 1,18 79,20 ± 0,92 79,40 ± 0,84 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 79,30 ± 0,95 79,00 ± 0,82 79,70 ± 0,67 79,00 ± 0,94 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 79,20 ± 1,32 79,10 ± 0,88 78,20 ± 1,23 79,10 ± 0,88 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Khác biệt so với trước uống thuốc: *p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 Kết bảng 2.8 cho thấy: Huyết áp tâm trương tất lô chuột uống mẫu thử từ CT1 đến CT10 liều 2,76 g/kg/ngày khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống mẫu thử giờ, sau ngày uống mẫu thử liên tục (p > 0,05) 45 Bảng 2.9 Ảnh hưởng 10 mẫu thử CT lên huyết áp trung bình chuột bình thường Lơ chuột Lơ 1: Lơ chứng Uống nước cất Lô 2: CT1 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 3: CT2 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 4: CT3 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 5: CT4 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 6: CT5 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 7: CT6 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 8: CT7 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 9: CT8 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 10: CT9 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô Lô 11: CT10 liều 2,76 g/kg/ngày p so với lô T0 Huyết áp trung bình (mmHg) (X ± SD) T1 T2 T3 89,23 ± 3,45 88,97 ± 3,14 89,00 ± 2,01 89,22 ± 3,49 89,35 ± 1,81 89,26 ± 3,04 89,55 ± 2,74 90,92 ± 2,12 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 88,33 ± 2,66 88,63 ± 2,52 88,52 ± 1,57 89,02 ± 2,17 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 88,42 ± 2,37 91,48 ± 3,32 > 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05 89,05 ± 2,95 90,30 ± 3,05 91,07 ± 4,08 88,43 ± 3,57 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 89,27 ± 1,14 90,50 ± 2,21 91,91 ± 5,10 90,23 ± 1,26 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 88,88 ± 1,69 88,37± 2,02 90,90 ± 2,19 90,63 ± 1,78 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 89,13 ± 1,60 89,63 ± 4,26 91,60 ± 5,33 90,18 ± 5,63 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 89,40 ± 2,42 90,60 ± 3,83 90,77 ± 3,09 92,35 ± 4,74 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 88,18 ± 2,18 88,44 ± 3,74 91,23 ± 4,13 89,09 ± 1,78 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 90,43 ± 2,33 90,33 ± 4,05 90,20 ± 2,43 91,70 ± 2,43 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 92,23 ± 2,54* 95,30 ± 3,70* Khác biệt so với trước uống thuốc: *p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 Kết bảng 2.9 cho thấy: 46 - Huyết áp trung bình lơ chuột uống mẫu thử CT1, CT2, CT4, CT5, CT6, CT7, CT8, CT9 CT10 liều 2,76 g/kg/ngày khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống mẫu thử giờ, sau ngày uống mẫu thử liên tục (p>0,05) - Huyết áp trung bình lơ chuột uống mẫu thử CT3 liều 2,76 g/kg/ngày khơng có khác biệt có nghĩa so với lơ chứng so sánh thời điểm trước sau uống mẫu thử (p>0,05) Tuy nhiên, huyết áp trung bình lô chuột uống mẫu thử CT3 tăng rõ rệt so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống mẫu thử sau ngày uống mẫu thử liên tục (p 0,05 308,70 ± 60,84 > 0,05 312,10 ± 55,56 > 0,05 335,40 ± 55,97 > 0,05 327,10 ± 65,79 > 0,05 323,10 ± 79,38 > 0,05 327,30 ± 69,04 > 0,05 325,50 ± 55,40 > 0,05 318,80 ± 78,02 > 0,05 312,30 ± 76,73 > 0,05 Nhịp tim (lần/phút) (X ± SD) T1 T2 T3 302,80 ± 310,20 ± 306,60 ± 62,19 61,50 57,42 324,30 ± 336,90 ± 307,40 ± 79,78 70,49 81,00 > 0,05 > 0,05 > 0,05 301,50 ± 325,60 ± 301,10 ± 48,44 64,42 29,35 > 0,05 > 0,05 > 0,05 315,40 ± 302,40 ± 308,30 ± 57,51 77,82 53,01 > 0,05 > 0,05 > 0,05 329,30 ± 309,60 ± 325,20 ± 51,64 64,69 74,75 > 0,05 > 0,05 > 0,05 310,10 ± 321,60 ± 315,80 ± 58,17 79,10 63,46 > 0,05 > 0,05 > 0,05 309,00 ± 323,30 ± 312,00 ± 47,23 53,98 55,74 > 0,05 > 0,05 > 0,05 321,50 ± 328,20 ± 332,60 ± 69,68 69,28 50,21 > 0,05 > 0,05 > 0,05 333,40 ± 329,80 ± 339,20 ± 66,91 63,66 84,66 > 0,05 > 0,05 > 0,05 328,90 ± 336,00 ± 305,30 ± 71,22 68,30 55,18 > 0,05 > 0,05 > 0,05 316,00 ± 305,40 ± 312,80 ± 73,24 68,19 51,94 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Khác biệt so với trước uống thuốc: *p < 0,05; **p < 0,01; ***p < 0,001 Kết bảng 2.10 cho thấy: Nhịp tim tất lô chuột uống 10 mẫu thử từ CT1 đến CT10 liều 2,76 g/kg/ngày khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh thời điểm trước sau uống mẫu thử giờ, sau ngày uống mẫu thử liên tục (p > 0,05) 48 2.5 Tác dụng chống viêm mơ hình gây viêm chân chuột carrageenin Bảng 2.11 Tác dụng chống viêm 10 mẫu thử CT mơ hình gây phù chân chuột Lô Lô Chứng sinh học Lô Aspirin 200 mg/kg Lô CT1 liều 2,76g/kg Lô CT1 liều 8,28g/kg Lô CT2 liều 2,76g/kg Lô CT2 liều 8,28g/kg Lô CT3 liều 2,76g/kg Lô CT3 liều 8,28g/kg Lô CT4 liều 2,76g/kg Lô 10 CT4 liều 8,28g/kg Lô 11 CT5 liều 2,76g/kg Lô 12 CT5 liều 8,28g/kg Lô 13 CT6 liều 2,76g/kg Lô 14 CT6 liều 8,28g/kg Lô 15 CT7 liều 2,76g/kg Sau (V1) % giảm Độ phù phù so (%) chứng 53,56 ± 22,64 25,04 ± 11,60 ** 53,11 ± 20,91 47,83 ± 17,02 46,96 ± 18,52 51,74 ± 17,62 59,53 ± 23,88 56,71 ± 21,31 48,89 ± 16,31 50,61 ± 16,88 54,57 ± 28,49 50,69 ± 22,48 49,08 ± 29,27 48,95 ± 23,43 50,12 ± 27,46 Sau (V2) % giảm Độ phù phù so (%) chứng 67,91 ± 19,32 52,59 0,84 10,71 12,33 3,40 -11,13 -5,86 8,72 5,51 -1,88 5,37 8,37 8,62 6,43 19,79 20,04 ± 9,55 Sau (V3) Sau 24 (V4) % giảm % giảm Độ phù Độ phù phù so phù so (%) (%) chứng chứng 94,45 ± 22,75 ± 70,48 *** 65,71 ± 3,23 22,65 62,69 ± 7,69 18,70 62,37 ± 8,16 18,68 64,68 ± 4,74 17,55 81,29 ± -19,71 23,91 72,49 ± -6,74 20,39 55,65 ± 18,05 28,82 52,62 ± 22,52 16,92* 64,88 ± 4,46 25,27 60,10 ± 11,49 30,24 61,47 ± 9,48 27,08 59,56 ± 12,29 19,57 54,66 ± 19,50 28,81 49 46,77 ± 17,67 *** 90,03± 33,69 77,11 ± 26,45 76,79 ± 35,24 77,91 ± 39,27 81,01± 16,73 78,05 ± 8,29 61,08 ± 24,80 ** 57,57 ± 13,08*** 69,85± 22,43 * 62,69 ± 27,76 * 78,59 ± 19,43 68,76 ± 14,26 ** 62,96± 22,52 ** 12,22 51,38 4,35 18,08 18,42 17,23 13,93 17,08 35,11 38,83 25,79 33,40 16,50 26,95 33,11 9,18 ± 3,97** 50,02 ± 16,72 49,68 ± 14,80 18,82 ± 8,64 19,33 ± 7,94 19,53 ± 10,67 20,00 ± 10,75 17,15 ± 6,40 15,47 ± 8,33 20,29 ± 12,05 18,16 ± 10,39 19,48 ± 8,37 20,54 ± 6,70 18,47 ± 7,57 59,63 9,95 10,55 17,25 28,20 14,15 12,07 24,61 32,02 10,80 20,18 14,35 9,70 18,80 Lô 16 CT7 liều 8,28g/kg Lô 17 CT8 liều 2,76g/kg Lô 18 CT8 liều 8,28g/kg Lô 19 CT9 liều 2,76g/kg Lô 20 CT9 liều 8,28g/kg Lô 21 CT10 liều 2,76g/kg Lô 22 CT10 liều 37,23 ± 20,43 51,10 ± 23,19 47,90 ± 27,00 39,13 ± 21,78 45,30 ± 21,23 38,00 ± 11,91 43,50 ± 8,28g/kg 22,28 30,49 4,60 10,57 26,94 19,88 29,05 18,79 53,19 ± 21,67 19,74 58,14 ± 14,38 21,63 62,27 ± 8,30 14,63 49,15 ± 27,62 24,01 60,99 ± 18,61 23,72 ++ 56,68 ± 16,54 20,61 50,76 ± 16,43 24,11 * 58,82 ± 20,97 ** 82,67 ± 17,18** 66,11 ± 19,61 64,67± 31,67 * 58,98 ± 18,80 ** 69,75 ± 28,61* 73,26 ± 18,41 * 37,51 12,17 29,76 31,29 37,18 24,97 22,17 19,73 ± 10,58 19,56 ± 9,81 15,45 ± 7,97 19,23 ± 9,96 49,68 ± 14,80 19,59 ± 5,51 20,05 ± 11,19 13,28 14,00 32,06 15,46 22,07 13,90 11,86 Khác biệt so với lô chứng trắng (lô 1): *p0,05 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 61,46 ± 7,38 61,79 ± 6,93 62,080± 7,16 61,63 ± 6,59 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 62,21 ± 7,55 61,96 ± 6,63 61,71 ± 6,73 61,83 ± 7,13 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 61,92 ± 6,22 61,38 ± 5,93 61,96 ± 6,57 62,13 ± 7,62 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 Ptr-s>0,05 Kết bảng 2.15 cho thấy: - CT3 liều 1110mg/100ml Ringer 1480mg/100ml Ringer có tác dụng làm co mạch tai thỏ lập, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p 0,05 - Tất mẫu thuốc CT lại liều 740mg/100ml Ringer, liều 890mg/100ml Ringer, liều 1110mg/100ml Ringer liều 1480mg/100ml Ringer không ảnh hưởng đến trơn mạch tai thỏ cô lập, thể không làm thay đổi số giọt chảy phút so với thời điểm trước dùngmẫu thử (p>0,05) KẾT LUẬN 55 3.1 Tác dụng giảm đau 3.1.1 Trên mơ hình mâm nóng - CT1 liều 5,52g/kg, CT4 liều 5,52g/kg CT5 liều 5,52g/kg thể tác dụng giảm đau rõ 3.1.2 Trên mơ hình đo ngưỡng đau máy rê kim - CT8 liều, đặc biệt liều 16,56g/kg thể tác dụng giảm đau rõ 3.2 Tác dụng cầm máu - CT5 liều 16,56g/kg CT9 liều 5,52g/kg thể rõ tác dụng làm giảm thời gian máu chảy so với lô chứng sinh học - CT9 liều 16,56g/kg CT10 liều 5,52g/kg thể rõ tác dụng làm giảm thời gian đông máu so với lô chứng sinh học - Tất mẫu thử CT liều không ảnh hưởng đến số lượng tiểu cầu máu chuột sau thời gian uống thuốc 3.3 Tác dụng nhu động ruột trương lực trơn ruột cô lập - CT10 không ảnh hưởng đến tần số biên độ nhu động ruột cô lập so với trước dùng thuốc - CT2, CT3, CT4, CT5, CT6, CT7, CT9 mức liều không ảnh hưởng đến tần số nhu động ruột, nhiên giảm rõ rệt biên độ nhu động ruột cô lập so với trước dùng thuốc thử - CT1, CT8 liều 1480mg/100ml Tyrod làm tăng rõ rệt tần số nhu động ruột cô lập so với trước dùng thuốc thử Liều 740mg/100ml Tyrod, liều 890mg/100ml Tyrod liều 1110mg/100ml Tyrod không ảnh hưởng đến tần số nhu động ruột so với trước dùng thuốc CT1, CT8 liều làm giảm rõ rệt biên độ nhu động ruột cô lập so với trước dùng thuốc thử 56 3.4 Tác dụng lên huyết áp 10 mẫu CT chuột cống trắng - CT1, CT2, CT4, CT5, CT6, CT7, CT8, CT9 CT10 liều 2,76 g/kg/ngày không ảnh hưởng đến huyết áp tâm thu, huyết áp tâm trương, huyết áp trung bình nhịp tim chuột cống trắng - CT3 liều 2,76 g/kg/ngày gây tăng huyết áp tâm thu huyết áp trung bình chuột cống trắng sau uống mẫu thử sau ngày uống mẫu thử liên tục 3.5 Tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột carrageenin - CT4, CT5, CT7, CT9 CT10 liều có tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây phù chân chuột 3.6 Tác dụng chống viêm cấp mơ hình gây viêm màng bụng chuột CT4, CT5, CT9, CT10 thể tác dụng chống viêm cấp tốt mơ hình gây viêm màng bụng chuột 3.7 Tác dụng 10 mẫu thử CT mạch tai thỏ cô lập - CT3 gây co mạch tai thỏ lập - Tất mẫu thuốc CT lại tất liều 740mg/100ml Ringer, liều 890 mg/100ml Ringer, liều 1110 mg/100ml Ringer liều 1480 mg/100ml Ringer không làm ảnh hưởng đến mạch tai thỏ cô lập 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Gerhard Vogel H (2008) Chapter H: Analgesic, anti-inflammatory, anti- pyretic activity Drug discovery and evaluation Pharmacological assays, Springer, pp 669-774 Gerhard Vogel H (2008) Chapter J: Isolated ileum (Magnus Technique) Drug discovery and evaluation: Pharmacological Assays, pp 1246-1248 Đào Văn Phan (2012) Dược lý học lâm sàng, Nhà xuất Y học, tr 166 - 180 Kyoung Soo Kim, Hae In Rhee, Eun Kyung Park et al (2008) Antiinflammatory effects of Radix Gentianae Macrophyllae (Qinjiao), Rhizoma Coptidis (Huanglian) and Citri Unshiu Pericarpium (Wenzhou migan) in animal models Chinese Medicine, 3(10) Mitul Patel et al (2012) In vivo animal models in preclinical evaluation of anti-inflammatory activity – A review International journal of pharmaceutical research and allied sciences, 1(2), pp 01-05 Gerhard Vogel H (2008) Chapter A: Cardiovascular analysis Drug discovery and evaluation Pharmacological assays, Springer, pp 26-276 Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Trưởng nhóm nghiên cứu TS Phạm Thị Vân Anh Trường Đại học Y Hà Nội xác nhận Chữ ký TS Phạm Thị Vân Anh Trưởng phòng Tổ chức Cán 58 ... 12 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .13 2.1 Tác dụng giảm đau 13 2.1.1 Tác dụng giảm đau 10 mẫu thử CT phương pháp mâm nóng 13 2.1.2 Nghiên cứu tác dụng giảm đau 10 mẫu CT máy... môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội 1.3 Địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội 1.4 Phương pháp nghiên cứu 1.4.1 Tác dụng giảm đau Nghiên cứu tác dụng. .. 3.7 Tác dụng 10 mẫu thử CT mạch tai thỏ cô lập 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 CHẤT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.1 Chất liệu nghiên cứu 1.1.1 Thuốc nghiên cứu - Mẫu thử gồm10 mẫu,