TĨM TẮT NỘI DUNG Vi khuẩn lactic có ý nghĩa quan trọng đời sống Chúng sinh nhiều chất kháng khuẩn để kháng vi sinh v ật gây b ệnh Do đó, vi ệc tìm chất kháng khuẩn sinh từ vi khuẩn lactic nhằm b ổ sung cho nh ững nghiên cứu chất kháng khuẩn ứng dụng chất kháng khuẩn vào cu ộc sống ứng dụng Dược học Với đề tài “ Khảo sát khả ức chế Escherichia coli Salmonella vi khuẩn acid lactic phân lập t s ản phẩm sữa có thị trường” sử dụng môi trường MRS để phân lập tuyển chọn vi khuẩn lactic, sử dụng phương pháp nhuộm Gram, Catalase, Oxydase, kh ả sinh để định danh sơ bộ, sử dụng phương pháp khuếch tán gi ếng th ạch phương pháp nhỏ giọt để kiểm tra kháng lại vi khuẩn E.coli Salmonella Kết cho thấy có tổng số dịng vi khuẩn lactic phân lập từ 16 mẫu s ữa chua (được mua siêu thị, tiệm tạp hóa, cửa hàng bách hóa thành phố Cần Thơ) cho vòng kháng khuẩn dòng th ị Đường kính vịng kháng khuẩn từ 4,6 – 10,3mm Như vậy, sử dụng vi khuẩn lactic từ sản phẩm sữa chua thị trường để kháng lại vi khuẩn E.coli Salmonella MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT E.Coli Escherichia coli LAB Lactic acid bacteria MRS Lactobacillus MRS Broth TSA Lactobacillus MRS Broth TSB Tryptic Soyabean Broth SCA Simmon Citrate Agar DANH SÁCH HÌNH Hình Thử độ phân giải CaCO3 cuả LAB Hình Kết nhuộm Gram Hình Kết hoạt tính Catalase âm tính mẫu sữa chua Hình 4 Kết hoạt tính Oxydase âm tính Hình Kết âm tính thử nghiệm citrate âm tính mẫu sữa Hình LAB kháng E.coli Salmonella phương pháp khuếch tán giếng thạch Hình LAB sinh kháng khuẩn với E.coli phương pháp nhỏ giọt DANH SÁCH BẢNG CHƯƠNG MỞ ĐẦU Ngay từ xa xưa, với kinh nghiệm người bi ết phát tri ển kỹ thuật chế biến thực phẩm để sử dụng lâu dài kinh nghi ệm đ ến sử dụng, nhóm thực phẩm lên men phát triển từ trước loài người có kiến thức vi sinh vật Trong q trình lên men Lactic, acid lactic tạo thành làm thức ăn có v ị chua, làm h th ấp PH môi trường dẫn đến ức chế vi sinh vật gây hại ổn định hệ vi sinh vật sản phẩm nên kéo dài thời gian bảo quản làm cho s ản phẩm an toàn đ ối v ới người (Lê Văn Nhương csv., 2009) Ứng dụng việc acid lactic làm cho thức ăn có vị chua d ễ ch ịu nh gây ức chế dịng vi khuẩn có hại cho đường ruột mà người ta dùng đ ể ch ế biến thực phẩm, chất gia vị đồ uống nh ẹ nh : Sữa chua, siro, dịch quả…(Lê Văn Nhương csv., 2009) Trong đó, sữa chua hay cịn g ọi yaourt sản phẩm tiếng giới từ lâu tiêu thụ ph ổ biến với nhiều loại sữa chua khác th ị tr ường th ế gi ới nói chung thị trường Việt nam nói riêng Ngày nay,với tiến nhanh chóng cơng nghệ sản xuất mà cơng ty ngồi nước nghiên cứu sản xuất nhi ều sản ph ẩm s ữa chứa l ợi khuẩn với nhiều dạng bào chế khác gọi chung nh ững ch ế ph ẩm probiotic Có nhiều chủng lợi khuẩn đường ruột bi ết đến nh ư: Lactobacillus, Bacillus, Bifidobacterium,… vi khuẩn thuộc chi Lactobacillus ưa chuộng làm probiotic để nhằm gây ức chế kháng lại vi khuẩn gây hại cho đường ruột có Escherichiacoli Salmonella Ở Việt Nam tỉ lệ người mắc bệnh đường ruột cao đặc bi ệt tr ẻ em, môi trường sống ăn uống không hợp vệ sinh, nên số lượng nhi ểm khuẩn đường ruột xảy nhiều, việc dùng kháng sinh trình tr ị liệu nhiễm khuẩn tránh khỏi Nhưng s d ụng dài lâu gây hại đến sức khỏe người lớn lẫn trẻ em mà tác hại bên mà không hay biết Một mặt trái việc l ạm dụng thuốc kháng sinh dài lâu gây hại cho khuẩn có l ợi Th ực t ế, kháng sinh có ph ổ rộng tiêu diệt vi khuẩn xấu tốt Vì dùng khơng h ướng d ẫn, lạm dụng tiêu diệt khuẩn có lợi có đường ruột, làm cân b ằng mang tính tự nhiên thể Một bị cân bằng, khu ẩn xấu hoành hành, dễ phát sinh nhiều bệnh rối loạn dày, làm cho chứng bệnh nghiêm trọng làm giảm hiệu thuốc kháng sinh Biết vi khuẩn lactic có khả tạo sản phẩm có th ể ức ch ế m ột s ố vi sinh vật có hại Đây mạnh vi khuẩn lactic thu hút s ự quan tâm nhiều nhà khoa học Các sản phẩm sau lên men nh acid h ữu cơ, diacetyl, hydro peroxyt đặc biệt bacteriocin có khả ức ch ế s ự phát triển vi sinh vật.Vậy để giảm việc dùng kháng sinh nhiều, bổ sung thay chế phẩm lên men có ch ứa vi khuẩn lactic đ ể kháng lại vi khuẩn gây bệnh đường ruột Escherichiacoli, Salmonella,… Nhằm tiếp nối cho việc nghiên cứu khảo sát dịng vi khuẩn lactic có khả sinh chất kháng khuẩn với vi khuẩn gây bệnh nay, đề tài “ Khảo sát khả kháng khuẩn Escherichia coli Salmonella vi khuẩn acid lactic phân lập từ sản phẩm sữa ” thực Mục tiêu Nhằm tìm số dịng vi khuẩn lactic có khả sinh ch ất kháng khuẩn từ sản phẩm sữa lên men Nội dung nghiên cứu Phân lập 2.Định Danh Sơ Bộ Khả ức chế Vi Khuẩn CHƯƠNG : TỔNG QUANG TÀI LIỆU VI KHUẨN LACTIC 1.1 Đặc điểm hình thái Vi khuẩn axit lactic (LAB) vi sinh vật phổ bi ến r ộng rãi, có th ể tìm thấy mơi trường giàu carbohydrate, thực vật, thực phẩm lên men niêm mạc bề mặt người, động vật cạn biển Trong thể người động vật, LAB phần vi sinh vật bình thường vi sinh v ật hệ sinh thái tự nhiên sống đường tiêu hóa (Florou-Paneri et al., 2013) Vi khuẩn acid lactic xếp chung vào họ Lactobacteriaceae Các sản phẩm lên men axit lactic truyền thống sử dụng lâu đời lên men rau hoa quả, lên men thịt, lên men cá Nhưng đến năm 1878, Lister m ới phân l ập LAB , ông gọi vi khuẩn Bacterium lactic (hiện gọi Trestococcus lactic) Từ đến nay, nhiều loại LAB phát ứng dụng có ích c chúng ngày đựợc mở rộng nhiều lĩnh vực, đặc biệt th ực ph ẩm th ực phẩm chức Công nghiệp lên men để sản xuất axit lactic có th ể nói đ ược hình thành từ năm 1881 (Nguyễn Lân Dũng csv, 1997).Vi khuẩn lactic có hình dạng khác chúng điều có đặc ểm chung sau: chúng vi khuẩn Gram dương, khơng có khả sinh bào tử, catalase âm tính, oxydase âm tính, khử nitrat âm tính hâu hết không chuy ển đ ộng (Lê Văn Nhương csv, 2009) 1.2 Phân loại Orla Jensen mô tả bảy chi năm 1919, có tên c m ột số chủng, Streptococcus , cịn hiệu lực ngày Nhóm LAB bao gồm 16 chi (J.A Narvhus, et al.,2003).Các vi khuẩn lên men acid lactic đa dạng bao gồm nhiều giống khác Theo nghiêng cứu, vi khuẩn lactic xác định số loài (species) thuộc gi ống (genus) sau : Aerococus, Alloiococcus, Lactobacillus, Atopobium, Lactococcus, Bifidobacterium, Leuconostoc, Carnobacterium, Pediococcus, Enterococcus, Tetragenococcus, Streptococcus, Vagococcus, Weissella (Lê Văn Nhương csv, 2009) Một số vi khuẩn lactic thường gặp là: Lactobacillus : Giống Lactobacillus bao gồm 52 loài trực khuẩn phổ biến nhất, hình dạng tế bào chúng thay đổi từ hình b ầu dục đ ến hình que dài (Lê Văn Nhương csv, 2009).Ví dụ: nhóm Lactobacillus Casei – Pediococcus, nhóm Leuconostoc nhóm Lactobacillus acidophilus Lactobacillus acidophilus Các chủng phân lập từ phân trẻ sơ sinh trăm năm trước đây, sử dụng thương mại tác nhân probiotic thực phẩm Nó chất lên men đồng đẳng bắt buộc s ố lactobacilli chịu oxy ( Marcus J Claesson et al.,2007), Loài Lactobacillus plantarum tế bào hình que kích thước ( 0,7-1) x (3-8)µm x ếp thành chuỗi đứng riêng lẻ, Lactobacillus bulgaricus lại có dạng que dài, mảnh có kích thước (0,7-0,9) x (5-20)µm đứng riêng l ẻ cặp đơi hay tạo thành chuỗi ngắn.(Lê Văn Nhương csv, 2009).Mặc dù có hệ thống phân giải protein phức tạp để phân hủy peptit, có khả tổng h ợp hầu h ết axit amin Lactobacillus plantarum tìm thấy nhiều mơi trường sống giàu dinh dưỡng, chẳng hạn sản phẩm từ sữa, thịt, rau th ực v ật ( Cai Y et al.,1999 ) Streptococcus: loại có hình dạng tế bào hình trịn hình ovan, đường kính 0,5 - 1µm Tế bào thường tạo chuỗi dài xếp đơi, đứng đơn lẻ, có khả lên men loại đường glucose, fructose, galatose, lactose… Chúng thường có nhiều sữa sữa chua Chúng có khả tích tụ 0,8 – 1% acid lactic.(Lê Văn Nhương csv, 2009) Leuconostoc : lại có hình dài hình ovan, đường kính khoảng (0,5 – 0,8)µm chiều dài khoảng 1,6µm Nhưng đơi chúng lại có dạng h trịn, xếp thành chuỗi khơng tạo thành đám Pediococcus có dạng hình cầu, đứng riêng lẻ, kết đơi hay k ết chu ỗi tạo đám tỷ cầu hay bát cầu khuẩn.(Lê Văn Nhương csv, 2009) 1.3 Đặc điểm sinh hóa vi khuẩn lactic Vi khuẩn lên men axit lactic có hai dạng hình hình cầu hình que Tuy nhiên, ni cấy điều kiện môi trường hay điều kiện ngoại cảnh khác có hình dạng khác chúng có m ột s ố đ ặc ểm sau: chúng vi khuẩn Gram dương, khơng có khả sinh bào tử, catalase âm tính, oxydase âm tính, khử natri âm tính hầu hết khơng chuy ển đ ộng, chúng khơng có khả tổng hợp nhân hem polyphyrine, chúng khơng có chứa xitocrom Chúng sinh trưởng 17 có mặt oxy, lo ại c thể có khả lên men hiếu khí yếm khí (Lê Văn Nhương csv , 2009) 1.4 Cơ chế trình lên men lactic Trong trình lên men axit lactic, chất tham gia vào trình lên men đường glucose fructose Khi sử dụng ngu ồn nguyên li ệu đường đôi hay chất chứa gốc đường trước tham gia vào trình lên men chúng phải thủy phân thành glucose hay fructose nh enzyme tương ứng Lên men axit lactic trình chuy ển hố y ếm khí đường thành axit lactic (Lê Văn Nhương csv, 2009) Có ki ểu len men lactic Trong lên men lactic đồng hình thực tế xuất axit lactic, lên men d ị hình sản phẩm cuối đa dạng: axit lactic, etanol, axit acetic CO2 Ch ỉ có lên men lactic đồng hình có ý nghĩa mặc công nghi ệp (Nguy ễn Lân Dũng csv, 1997) Tầm quan trọng vi khuẩn axit lactic thực phẩm đồ uống từ sữa lên men xem xét trước vào đầu năm 1990 tổng quan vai trò vi khuẩn axit lactic kimchi , sản phẩm cá lên men sữa chua thực vật (Sook Jong Rhee et al,.2003)Vai trò vi khuẩn axit lactic trình lên men rượu gạo / bia báo cáo (Rhee SJ et al.,2003) Bánh mì hấp idli từ Ấn Độ puto từ Philippines, làm gạo, lên men Leuconostoc Hàn Quốc sikhae Philippine burong ISDA / dalag , mà thực cách trộn cá muối loại ngũ cốc, đ ược lên men giai đoạn đầu Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc mesenteroides bắt đầu tăng trưởng tương đối nhanh chóng vật liệu thực vật khác (rau ngũ cốc) phạm vi rộng nhiệt độ n ồng đ ộ mu ối so v ới vi khuẩn axit lactic khác Trong trình phát triển, Leuconostoc mesenteroides tạo carbon dioxide axit, dẫn đến thay đổi môi trường ều kiện có lợi cho tăng trưởng vi khuẩn axit lactic khác Tương tự, trình lên men khác khởi xướng Leuconostoc mesenteroides bao gồm vai trò bật cho vi khuẩn axit lactic khác thu ộc chi Lactobacillus Pediococcus giai đoạn sau SỰ ỨC CHẾ VI KHUẨN BỆNH CỦA ACID LACTIC 2.1 Tạo sản phẩm acid hữu trình lên men Trong trình lên men vi khuẩn lactic sinh acid h ữu c Các acid chất kháng khuẩn trực tiếp vi khuẩn lactic Chúng bao gồm acid lactic, acid acetic, acid probionic, acid butyric, acid lactic acid acetic s ản phẩm Chúng tạo mơi trường khơng thích hợp cho phát tri ển vi sinh vật gây bệnh, gây hỏng Theo Mariae Thomas, số vi sinh vật gây bệnh (Samonella, Listeria sp.) số vi sinh vật sinh độc tố ( Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Clostridium hotulinum) bị ức chế chí bị tiêu diệt pH môi trường giảm nhanh Sự phát triển E.coli bị ức chế pH=5,1 cịn Staphylococcus bị ức chế pH < 5,3, vi khuẩn lactic có th ể ch ịu tới pH=3 Các acid hữu cơ, đặc biệt acid acetic có kh ả ức ch ế m ạnh đ ối với nhiều loài vi sinh vật sinh độc tố, vi khuẩn sinh bào tử, n ấm m ốc, n ấm men 10 • • • • Đĩa khử Nước cất khử Khây ng ng nghim Pipet 10-100àl v 100- ã ã ã Tăm Đèn cồn, que cấy, bậc lửa Giấy kháng sinh 1000àl Húa cht v dung mụi ã ã ã • • • • • Môi trường TSA dày 4mm, đều, phẳng Vi khuẩn E.coli Samolnella Vi khuẩn lactic tăng sinh 24 giờ, 370C Dòng thị Mơi trường TSA dày 4mm Quy trình thực Chuẩn bị dịng thị (E.coli Samolnella) ni cấy đĩa 24 giờ, khuẩn lạc cho vào nước cất vơ trùng tiến hành pha lỗng dung dịch vi khuẩn để xác định mật số vi khuẩn Dịch huyền phù dòng vi khuẩn thị với mật số 10-1 CFU/ml • Dùng tăm bơng lấy dịch vi khuẩn gây bệnh (E.coli Samolnella) có mật độ vi khuẩn 10-1CFU/ml để tráng lên đĩa có mơi trường TSA dày 4mm • Sau tráng đĩa, để khoảng 5-10 phút đợi đĩa khơ • Dùng pipep hút 13μl dịch LAB hoạt hóa mơi trường MRS lỏng 370C 24h nhỏ vào đĩa thạch vừa tráng lớp vi khuẩn gây bệnh tránh nhỏ gần tràng thành đĩa (mỗi mẫu dịch ph ải s dụng đầu co khác để hút) • Để khơ đem ủ tủ ấm nhiệt độ 37 C 24h sau xem xét vòng kháng khuẩn ghi lại kết  Phương pháp thực lần dòng vi khu ẩn b ệnh đ ể lấy kết xác • 28 • CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN • THU MẪU VÀ PHÂN LẬP VI KHUẨN LACTIC VÀ THỬ CaCO TRÊN MƠI TRƯỜNG MRS • 1.1 Thu mẫu • Tổng cộng thu 16 mẫu sữa chua thị trường Cần Thơ, siêu thị, tiệm tạp hóa cửa hàng bách hóa • Bảng Mười sáu mẫu sữa chua khảo sát • S • • TÊN SẢN PHẨM • Sữa chua uống Yakul hương Cam • Sữa chua uống SuSu • • • S • • TÊN SẢN PHẨM • Sữa chua ăn mua Cái Răng • Sữa chua ăn Vinamil hương Nha Đam • Sữa chua ăn Proby • Sữa chua ăn Su Su hương Dâu • Sữa chua ăn BaVi • Sữa chua ăn Men Sống • Sữa chua ăn Nuti • Sữa chua ăn Vinamilk Star Sữa chua uống Bentagen hương dâu • Sữa chua Vinamilk hương Nha đam • Sữa chua uống TH trure • • • • • • • • • • Sữa chua Proby Sữa chua Nutri hương Dâu • Sữa chua uống Vinamilk khơng Đường • • • • • 29 • 1.2 Phân lập vi khuẩn lactic thử độ phân giải CaCO vi khuẩn lactic môi trường MRS Tổng cộng 16 mẫu sữa chua vi sinh thị trường (Bảng 4.1) tiến • hành phân lập theo phương pháp liệt kê chương phương pháp nghiên cứu Sau 48 nuôi tủ ấm, quan sát thấy mặt thạch xuất nhiều loại vi khuẩn với kích thước, hình dạng khác có điểm chung có màu trắng đục có dạng trắng trơn trơn láng thấy đường cấy phần thạch suốt CaCO3 bị phân giải acid lactic • Sau tiến hành phân lập tiếp tục, thu nhận chủng khiết phương pháp cấy ria đĩa thạch MRS, mật độ tế bào giảm dần theo vết cấy, xuất vi khuẩn mọc riêng rẽ • Kết thu chủng vi khuẩn lactic phân lập, làm thử độ làm CaCO3 (hình 4.1) • • • • • • • • • • • • Hình Thử độ phân giải CaCO3 cuả LAB • • • Bảng Các đặc điểm hình thái khuẩn lạc phân lập môi trường MRS khả làm CaCO3 mẫu s ữa • S T T • M ẫ u s ữ a • Đ n g • H V i ề 30 • B ề m ặt • M u • L m t r o n g n C a C O • • • • • • • • • • S C S C S C A S C B S C • B ì a • • T n g u y ê n • B ì a • • T n g u y ê n • B ì a • • T n g u y ê n • B ì a • • T n g u y ê n • B ì • T 31 • L ồi , tr n n g • L ồi , tr n n g • L ồi , tr n n g • L ồi , tr n n g • L ồi T r ắ n g • C ó • C ó • C ó • C ó • C ó đ ụ c T r ắ n g đ ụ c T r ắ n g đ ụ c T r ắ n g t r n • T r • • • S C a , tr n n g n g u y ê n • B ì a • T n g u y ê n • 32 • L ồi , tr n n g ắ n g đ ụ c • T r ắ n g đ ụ c • C ó • ĐỊNH DANH SƠ BỘ • 2.1 Phương pháp nhuộm gram • Hầu hết, chủng vi khuẩn qua kết nhuộm gram cho thấy điều vi khuẩn Gram dương, bắt màu tím sen với thuốc nhuộm có dạng hình cầu, sống đơn, đôi kết thành chuỗi ngắn, số dòng gom thành cụm Kết nhuộm Gram thể hiên Bảng 4.3 • Bảng Kết nhuộm gram • S T T • M ẫ u S ữ a • M u S ắc • • S C • Tí m se n • • S C • Tí m se n • • S C A • Tí m se n C ác h sắ p xế p • Đ n, đ , ch u ỗi , ch ù m • Đ n, đ ôi , ch u ỗi , ch ù m • Đ n, đ • 33 H ìn h d n g • C ầu • G m • + • C ầu • + • C ầu • + • • • S C B • Tí m se n • • S C • Tí m se n • • S C • Tí m se n , ch u ỗi , ch ù m • Đ n, đ ôi , ch u ỗi , ch ù m • Đ n, đ , ch u ỗi , ch ù m • Đ n, đ ôi , ch u ỗi , ch ù m • 34 • C ầu • + • C ầu • + • C ầu • + • • • • • • • • • • • • Hình Kết nhuộm Gram 35 • 2.2 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính Catalase • Qua phép thử catalase tồn dịng vi khuẩn phân lập âm tính với catalase Tất khuẩn lạc màu trắng đục để Lam kính nhỏ H2O2 khơng sủi bọt • • • • • • • • • • • Hình Kết hoạt tính Catalase âm tính mẫu sữa chua • 2.3 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính Oxydase • Qua phép thử Oxydase tồn dịng vi khuẩn phân lập âm tính với catalase Tất khuẩn lạc khơng màu • • • • • • • • Hình 4 Kết hoạt tính Oxydase âm tính • 2.4 Phương pháp thử nghiệm citrate • Phương pháp thử nghiệm citrate mẫu sữa cho kết âm tính • • • Hình Kết âm 36 tính thử nghiệm citrate âm tính mẫu sữa • KẾT QUẢ KHẢO SÁT VÀ CHỌN LỌC CÁC DÒNG VI KHUẨN CĨ TÍNH KHÁNG KHUẨN CAO • 3.1 Phương pháp khuếch tán giếng thạch • Tổng mẫu thử khả kháng khuẩn phương pháp khuếch tán giếng thạch nêu phương pháp nghiêng cứu Kết biểu bảng 4.3 • Bảng 4 Giá trị trung bình đường kính vịng kháng khu ẩn sau l ần th mẫu sữa E.coli Salmonella phương pháp khu ếch tán giếng thạch • STT • Mẫu sữa • E.coli • Salmone lla • • SC3 • 8,3mm • Khơng tạo vịng • • SC4A • 9,0mm • 8,0mm • • SC4B • 7,3mm • 6,0mm • • SC5 • 10,3mm • 8,0mm • • SC7 • 4,6mm • Khơng tạo vịng • • SC10 • 5,3mm • 5,0mm • • • • • • • • • • Hình • LAB kháng E.coli Salmonella phương pháp khuếch tán • giếng thạch 37 • • • Nhận xét: • Các chủng LAB tạo thành vịng vơ khuẩn chủng vi khuẩn E.coli Salmonella phương pháp khuếch tán giếng thực lần lấy giá trị trung bình đường kính vịng kháng khuẩn mẫu Giá trị thể tính kháng mẫu thể qua bảng 4.3 • Trong số mẫu phương pháp khuếch tán giếng thạch : Có mẫu tạo vòng kháng khuẩn chủng vi khuẩn E.coli SC3 • (8,3mm), SC5 (10,3mm), SC7 (5,3mm), SC10 (4,6mm), mẫu tạo vòng kháng khuẩn chủng vi khuẩn Salmonella SC4A (8,0mm), SC4B (6,0mm), SC5 (8,0mm), SC10 (5,0mm) • Chủng LAB có khả ức chế E.coli cao SC5(10,3mm) thấp SC7 với đường kính trung bình 4,6mm • Chủng LAB có khả ức chế Salmonella cao SC4A SC5 (8,0 mm) thấp SC10 (5,0mm) • 3.2 Phương pháp nhỏ giọt Tổng mẫu thử khả kháng khuẩn phương pháp • nhỏ giọt nêu phương pháp nghiêng cứu Kết giá trị biểu bảng 4.4 • Bảng Giá trị trung bình đường kính vịng kháng khu ẩn sau l ần th mẫu sữa E.coli Salmonella phương pháp nh ỏ gi ọt • STT • Mẫ u s ữ a • E.coli • • • SC3 • 7,3 mm • • • SC4A • • • SC4B Khơng tạo vịng • 0,0mm • • SC7 • 38 8,3mm • • • Salmonel la Khơng tạo vịng Khơng tạo vịng Khơng tạo vịng Khơng tạo vịng • • SC5 • 9,0 mm • • SC10 • 3,0mm • Khơng tạo vịng • Khơng tạo vịng • • • • • • • • • • • • • • Hình LAB sinh kháng khuẩn với E.coli phương pháp nhỏ giọt • • • 39 Nhận xét: • • Các chủng LAB tạo thành vịng vơ khuẩn chủng vi khuẩn E.coli Salmonella phương pháp nhỏ giọt thực lần lấy giá trị trung bình đường kính vịng kháng mẫu Giá trị thể tính kháng mẫu thể qua Bảng 4.4 Trong số mẫu phương pháp nhỏ giọt : • Có mẫu tạo vịng kháng khuẩn chủng vi khuẩn E.coli SC3(7,3mm), SC5(9mm), SC7(8,3mm), SC10(3mm), khơng có kết kháng khuẩn Salmonella • Chủng LAB có khả ức chế E.coli cao SC5(9mm) thấp SC10 với đường kính trung bình 3mm • • • • • 40 • CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ • • KẾT LUẬN • Trong tổng số 16 mẫu sữa thử nghiệm, tìm mẫu có khả ức chế vi khuẩn E.coli Salmonella qua hai phương pháp thử kháng khuẩn • Đường kính vịng vơ khuẩn chủng LAB hai phương pháp thử kháng khuẩn dao động từ 4,6mm-10,3mm Khả ức chế cao SC5 (10,3mm) E.coli SC5 (8,0mm), SC4A (8,0mm) Salmonella • Kết cho thấy khả kháng khuẩn vi khuẩn lactic chủng vi khuẩn gây bệnh E.coli Salmonella có triển vọng nghiên cứu va phát triển tiếp • ĐỀ NGHỊ  Khảo sát thêm đặc tính kháng khuẩn khác vi khuẩn lactic khả sinh acid hữu cơ, khả kháng khuẩn hợp chất acetaldehyt, ehtanol hợp chất tạo mùi đặc trưng sinh vi khuẩn lactic qua trinh lên men, khả kháng khuẩn sản phẩm trao đổi chất diacetyl vi khuẩn lactic, khả sinh H2O2  Định danh phương pháp đại ( giải trình tự gen 16s rRNA)  Tinh chế vi khuẩn lactic thu để ứng dụng thực tế Dược, Y, Thực phẩm… • • • • • • 41 • • TÀI LIỆU THAM KHẢO Tạp chí khoa học Dihiya RS, Speck ML (1968) Hydrogen peroxide formation by lactobacilli and its effect on Staphylococcus aureus J Dairy Sci Đồn Anh Dũng, Nguyễn Cơng hà, Lý Nguyễn Bình Lê Nguy ễn Đoan Duy (2015) Nghiên cứu sử dụng vi khuẩn probiotic Lactobacillus Plantarum chế biến sữa chua Tạp chí khoa học trường Đại Học Cần Thơ Huỳnh Ngọc Tâm , Trần Thanh Trúc , Nguy ễn Văn M ười Hà Thanh Toàn (2016) Phân Lập Và Tuyển Chọn Dịng Vi Khuẩn Lactic Có Khả Năng Kháng Khuẩn Từ Dưa Lê Non (Cucumis Melo L.) Muối Chua Tạp chí Khoa Học Trường Đại Học Cần Thơ J.A Narvhus, L Axelsson (2003) In Encyclopedia of Food Sciences and Nutrition (Second Edition) Ayman Suliman Mazahreh, Omer Turki Mamdo Ershidat (2009) The bennefits of Lactic Acid Bacteria in Yogurt on the Gastrointestinal Function and Health In Pakistan Journal of Nutrition Nguyễn Thị Lam Đoan, Hoàng Thị Vân, Nguyễn Thị Thanh thúy, Nguy ễn Hoàng Anh (2016) Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn lactic từ nem chua v ới khả kháng vi sinh vật đặc điểm bacteriocin T ạp chí khoa h ọc nơng nghiệp Việt Nam 2016, tập 14 số 7: 1089-1099 Ngô Thị Phương Dung, Huỳnh Thị Yến Ly, Huỳnh Xuân Phong (2011) Phân Lập Và Tuyển Chọn Vi Khuẩn Lactic Có Khả Năng Sinh Chất Kháng Khu ẩn Tạp chí Khoa Học Trường Đại Học Cần Thơ Ngô Thị Ngọc Trân, Nguyễn Trọng Nghĩa Đặng Thị Hoàng Oanh (2016) Xác Định Tính Kháng Khuẩn Của Vi Khuẩn Lactic Với Vi Khuẩn (Streptococcus Agalactiae) Phân Lập Từ Cá Rô Phi (Oreochromis Niloticus) Bệnh Phù Mắt Và Xuất Huyết Tạp chí Khoa Học Trường Đại Học Cần Thơ, Rodney H Perez, Takeshi Zendo, Kenji Sonomoto (2014) Novel bacteriocins from lactic acid bacteria (LAB): various structures and applications In Us Nation Library of Medecien National Institutes of Health 10 Rhee SJ, Lee CYJ, Kim KK, Lee CH (2003) Comparison of the traditional (samhaeju) and industrial (Congju) rice wine brewing in Korea Korean J Food Sci Technol ... Escherichiacoli, Salmonella, … Nhằm tiếp nối cho vi? ??c nghiên cứu khảo sát dòng vi khuẩn lactic có khả sinh chất kháng khuẩn với vi khuẩn gây bệnh nay, đề tài “ Khảo sát khả kháng khuẩn Escherichia coli Salmonella. .. Salmonella vi khuẩn acid lactic phân lập từ sản phẩm sữa ” thực Mục tiêu Nhằm tìm số dịng vi khuẩn lactic có khả sinh ch ất kháng khuẩn từ sản phẩm sữa lên men Nội dung nghiên cứu Phân lập 2.Định... đoạn sau SỰ ỨC CHẾ VI KHUẨN BỆNH CỦA ACID LACTIC 2.1 Tạo sản phẩm acid hữu trình lên men Trong trình lên men vi khuẩn lactic sinh acid h ữu c Các acid chất kháng khuẩn trực tiếp vi khuẩn lactic Chúng