KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DỊCH HUYỀN PHÙ CÂY Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE

Thông tin tài liệu

Đề tài nghiên cƣ́u “Khảo sát khả năng ƣ́ng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl trong thu nhận hợp chất anthraquinone” đƣợc tiến hành tại trại thực nghiệm sinh học, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh và phòng sắc ký, Viện Công nghệ Sinh học và Công nghệ Môi trƣờng, Đại học Nông Lâm, thành phố Hồ Chí Minh tƣ̀ tháng 3/2007 đến hết tháng 8/2007. Kết quả thu đƣợc: - Mô sẹo tƣ̀ mẫu lớp mỏng tế bào cây D. burmanni Vahl đƣợc hình thành trên môi trƣờng khoáng cơ bản Gamborg’s B5 bổ sung: NAA (0,2 mg/l)/2,4-D (0,2 mg/l), đƣờng 20 g/l, PVP (1,25 mg/l) ở pH 5,8, trong điều kiện ủ tối. - Các kỹ thuật sắc ký cột, sắc ký bản mỏng đƣợc sƣ̉ dụng nhằm cô lập và ly trích hợp chất anthraquinone trong cây D. burmanni in vitro. Hợp chất này đƣợc sử dụng nhƣ chất tham chiếu để định lƣợng anthraquinone trong các thành phần khác nhau của cây Drosera burmanni Vahl. - Kết quả định lƣợng anthraquinone bằng kỹ thuật HPLC cho thấy: hàm lƣợng anthraquinone trong rễ là 3,03% so với trọng lƣợng khô, nhiều hơn trong thân lá (2,78%); ở cây không có sắc tố đỏ là 2,8% trong khi ở cây có sắc tố đỏ là 0,78%; trong sinh khối huyền phù tế bào là 0,02% (so với trọng lƣợng tƣơi), trong khi không thấy có sƣ̣ hiện diện của anthraquinone trong dịch môi trƣờng.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI ́ CÂY MÔ SẸO TẠO DICH HUYỀN PHÙ CÂY ̣ Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa : 2003-2007 Sinh viên thực hiện: HỒNG THỊ THU Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************************** KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI ́ CÂY MÔ SẸO TẠO DICH HUYỀN PHÙ CÂY ̣ Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGS.TS BÙI VĂN LỆ HOÀNG THỊ THU ́ TS PHAN PHƢƠC HIỀN ThS QCH NGƠ DIỄM PHƢƠNG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 LỜI CẢM ƠN Khóa luận đƣợc hoàn thành với s ự quan tâm giúp đỡ nhiều của các thầ y cô, các anh chị các bạn Em xin gƣ̉i lời cảm ơn chân thành đế n : PGS.TS Bùi Văn Lê ̣ , ngƣời đã tâ ̣n tình hƣớng dẫn và ta ̣o mo ̣i điề u kiê ̣n để em thƣ̣c hiê ̣n khóa luâ ̣n này Thạc sĩ Quách Ngô Diễm Phƣơng, ngƣời trực tiếp hƣớng dẫn, dạy động viên em hoàn cảnh khó khăn Đề tài đƣợc hồn thành với nhiều nhiệt tình tâm huyết của chị Cảm ơn chị tất Em cảm ơn Tiến sĩ Phan Phƣớc Hiền, dạy giúp đỡ của thầy giúp em nhiều quá trình thực đề tài Thạc sĩ Kiều Phƣơng Nam , ngƣời gợi ý cho em lời khuyên bổ ích Em cảm ơn anh Điề n , anh Hoàng, anh Cƣờng và các anh chi ̣phòng sắ c ký , Viê ̣n Công nghê ̣ Sin h ho ̣c và Công nghê ̣ Môi trƣờng , ĐH Nông Lâm TP HCM Cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình của các anh chị suốt thời gian chúng em thƣ̣c tâ ̣p Cảm ơn anh Bình cùng tồn thể các bạn sinh viên năm tƣ trƣờng ĐH Khoa học Tự nhiên , ĐH Mở sẵn sàng giúp đỡ và đô ̣ng viên nhƣ̃ng lúc gă ̣p khó khăn đề tài Cảm ơn lớp CNSH 29 thân yêu và các ba ̣n thân đã cùng chia sẻ tấ t cả nhƣ̃ng nỗi buồ n vui suố t bố n năm đa ̣i ho ̣c Và hết , cảm ơn bố m ẹ, chị gái em trai yêu quý chăm lo , ủng hộ, tin tƣởng , cảm ơn nhà cho chỗ dựa vững chắc cuô ̣c sớ ng Tháng 9/2007 Hồng Thị Thu iii TĨM TẮT Đề tài nghiên cƣ́u “Khảo sát khả ƣng du ̣ng kỹ thuâ ̣t nuôi cấ y mô ́ sẹo, tạo dịch huyền phù Drosera burmanni Vahl thu nhâ ̣n hơ ̣p chấ t anthraquinone” đƣơ ̣c tiế n hành ta ̣i trại thực nghiệm sinh học, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đa ̣i ho ̣c Quố c gia thành phố Hồ Chí Minh và phịng sắ c ký , Viê ̣n Công nghê ̣ Sinh ho ̣c và Công nghê ̣ Môi trƣờng , Đại học Nơng Lâm, thành phố Hồ Chí Minh tƣ̀ tháng 3/2007 đến hết tháng 8/2007 Kế t quả thu đƣơ ̣c: - Mô se ̣o tƣ̀ mẫu lớp mỏng tế bào D burmanni Vahl đƣơ ̣c hinh thành ̀ môi trƣờng khoáng bản Gamborg’s B5 bổ sung: NAA (0,2 mg/l)/2,4-D (0,2 mg/l), đƣờng 20 g/l, PVP (1,25 mg/l) pH 5,8, điề u kiê ̣n ủ tố i - Các kỹ thuật sắc ký cột , sắ c ký bản mỏng đƣơ ̣c sƣ̉ du ̣ng nhằ m lâ ̣p và ly trích hợp chất anthraquinone D burmanni in vitro Hơ ̣p chấ t này đ ƣợc sử dụng nhƣ chất tham chiếu để định lƣợng anthraquinone các thành phần khác của Drosera burmanni Vahl - Kế t quả đinh lƣơ ̣ng anthraquinone bằ ng kỹ thuâ ̣t HPLC cho thấ y ̣ : hàm lƣơ ̣ng anthraquinone rễ là 3,03% so với tro ̣ng lƣơ ̣ng khô, nhiề u thân lá (2,78%); không có sắc tố đỏ 2,8% ở có sắ c tố đỏ là 0,78%; sinh khố i huyề n phù tế bào là 0,02% ( so với tro ̣ng lƣơ ̣ng tƣơi ), không thấ y có sƣ̣ hiê ̣n diê ̣n của anthraquinone dich môi trƣờng ̣ iv SUMMARY The thesis “Study on application of callus and suspension cultures in Drosera burmanni Vahl to produce anthraquinone compound” was carried out at Plant Biotechnology lab, University of Natural Sciences; and Chromatography room, Research Institute for Biotechnology and Enviromental Technology, University of Agriculture and Forestry, HCM city from March to August, 2007 Results: - Callus of D burmanni Vahl was cultured successfully by using Gamborg’s B5 medium (modified) supplemented with NAA (0,2 mg/l), 2,4-D (0,2 mg/l), succrose (20g/l), PVP (1,25 mg/l), pH was adjusted to 5,8 before autoclaving - Column Chromatography and Thin Layer Chromatography were used to purify anthraquinone compound in D burmanni This compound was used as authentic sample for HPLC technique - Roots of D burmanni contained 3,01% dry weight (DW) of anthraquinone, larger than 2,78% in leaves - Anthraquinone content of red-leaf D burmanni Vahl took 0,78% of DW, compared with 2,78% DW in green-leaf trees - Biomass of D burmanni’s suspension contained 0,02% of fresh weight of anthraquinone, while no quantifiable amounts of anthraquinone has been found in spent medium Ho Chi Minh city, September, 2007 Hoang Thi Thu v MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tƣ̣a .i Lời cảm ơn iii Tóm tắt iv Summary v Mục lu ̣c vi Danh sách các chƣ̃ viế t tắ t ix Danh sách các hinh x ̀ Danh sách các sơ đồ biểu đồ xii Danh sách các bảng xiii Chƣơng1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Yêu cầu 1.4 Ý nghĩa đề tài Chƣơng 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan về Drosera burmanni Vahl 2.1.1 Vị trí phân loại 2.1.2 Phân bố 2.1.3 Mơ tả hình thái 2.1.4 Đặc tính sinh học 2.1.5 Đặc điểm sinh thái 2.1.6 Thành phần hóa học 2.1.7 Phƣơng pháp nhân giống 11 2.1.8 Tầm quan trọng 12 2.1.8.1 Ý nghĩa về sinh thái 12 2.1.8.2 Ý nghĩa nghiên cứu tiến hóa thực vật 12 2.1.8.3 Gía trị dƣợc tính 12 2.1.8.4 Ứng dụng công nghiệp 14 2.1.8.5 Gía trị kinh tế 15 2.1.9 Các nghiên cứu nƣớc 16 2.2 Tổng quan về kỹ thuật nuôi cấy huyền phù tế bào để thu nhận hợp chất thứ cấp 17 2.2.1 Khái niệm hợp chất thứ cấp 17 2.2.2 Nuôi cấy mô sẹo 18 2.2.2.1 Khái niệm mô sẹo 18 2.2.2.2 Ứng dụng của nuôi cấy mô sẹo 19 2.2.3 Nuôi cấy dịch huyền phù 19 2.2.3.1 Khái niệm huyền phù tế bào 19 2.2.3.2 Nguyên tắc tạo huyền phù 19 vi 2.2.3.3 Một số yếu tố ảnh hƣởng đến sự tạo huyền phù tế bào 20 2.2.3.4 Các phƣơng pháp nuôi cấy huyền phù 20 2.2.3.5 Các điều kiện nuôi cấy dịch tế bào ảnh hƣởng đến việc sản xuất các hợp chất thứ cấp 22 2.2.4 Các phƣơng pháp gia tăng sự sản xuất hợp chất thứ cấp nuôi cấy huyền phù 22 2.2.4.1 Tối ƣu hóa điều kiện nuôi cấy 22 2.2.4.2 Chọn lọc dòng tế bào có khả sản xuất cao 22 2.2.4.3 Bổ sung tiền chất 22 2.2.4.4 Cố định tế bào 23 2.2.4.5 Cảm ứng sự phân hóa mô 23 2.2.4.6 Nhân tố cảm ứng (elicitor) 23 2.3 Các kỹ thuật sử dụng luận văn 24 2.3.1 Phƣơng pháp ly trích – thu nhận hợp chất 24 2.3.1.1 Sắc ký cột 24 2.3.1.2 Sắc ký nhanh cột khô (Dry Column Flash Chromatography) 26 2.3.1.3 Sắc ký lớp mỏng điều chế 27 2.3.2 Kỹ thuật sắc ký lỏng cao áp HPLC định lƣợng hợp chất thứ cấp 28 Chƣơng 3: VẬT LIỆU – PHƢƠNG PHÁP 31 Thời gian địa điểm thực 31 3.1 Nuôi cấy mô sẹo, tạo dịch huyền phù 31 3.1.1 Vật liệu 31 3.1.2 Phƣơng pháp 33 3.1.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng của thành phần khoáng nồng độ đƣờng lên sự phát triển của mẫu cấy lớp mỏng 33 3.1.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát sự kết hợp loại hormone thích hợp cho việc kích ứng tạo mơ sẹo 34 3.1.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát nồng độ thích hơ ̣p của 2,4-D kết hợp với NAA (0,2 mg/l) để cảm ứng tạo mô sẹo 35 3.1.2.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hƣởng của các kiểu nuôi cấy lên sự tăng sinh khối mô sẹo tạo dịch huyền phù 36 3.1.2.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát sự ảnh hƣởng của ánh sáng lên sự hình thành sắc tố đỏ của mơ sẹo 37 3.2 Ly trich và cô lâ ̣p hơ ̣p chấ t anthraquinone D burmanni 38 ́ 3.2.1 Vật liệu 38 3.2.2 Phƣơng pháp 39 3.3 Định lƣợng hợp chất anthraquinone các nguyên liệu nuôi cấy in vitro khác phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp HPLC 40 3.3.1 Vật liệu 40 3.3.2 Phƣơng pháp 40 3.3.2.1 Xác định điều kiện, thơng số kỹ tḥt thích hợp 40 3.3.2.2 Xây dựng đƣờng chuẩn 41 vii 3.3.2.3 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hƣởng của cách xử lý mẫu định lƣợng hợp chất anthraquinone 41 3.3.2.4 Thí nghiệm 7: So sánh hàm lƣợng hợp chất anthraquinone các phận khác của in vitro 43 3.3.2.5 Thí nghiệm 8: So sánh hàm lƣợng hợp chất anthraquinone các mẫu có sắc tố đỏ mẫu không có sắc tố đỏ 44 3.3.2.6 Thí nghiệm Xác định hàm lƣợng anthraquinone mẫu dịch huyền phù tạo đƣợc từ thí nghiệm 45 3.4 Xử lý thống kê 45 Chƣơng 4: KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 46 4.1 Nuôi cấy mô sẹo tạo dịch huyền phù 46 4.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hƣởng của thành phần khoáng nồng độ đƣờng lên sự phát triển của mẫu cấy lớp mỏng 46 4.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát sự kết hợp loại hormone thích hợp cho việc kích ứng tạo mơ sẹo 48 4.1.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát nồng độ thích hơ ̣p của 2,4-D kết hợp với NAA (0,2 mg/l) để cảm ứng tạo mô sẹo 49 4.1.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hƣởng của các kiểu nuôi cấy lên sự tăng sinh khối mô sẹo tạo dịch huyền phù 54 4.1.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát sự ảnh hƣởng của ánh sáng lên sự hình thành sắc tố đỏ của mơ sẹo 56 4.2 Ly trich và cô lâ ̣p hơ ̣p chấ t anthraquinone D burmanni 58 ́ 4.3 Định lƣợng hợp chất anthraquinne các nguyên liệu nuôi cấy in vitro khác phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp HPLC 59 4.3.1 Xây dựng đƣờng chuẩn 59 4.3.2 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hƣởng của cách xử lý mẫu định lƣơ ̣ng hợp chất anthraquinone 61 4.3.3 Thí nghiệm 7: So sánh hàm lƣợng hợp chất anthraquinone các phận khác của in vitro 62 4.3.4 Thí nghiệm 8: So sánh hàm lƣợng hợp chất anthraquinone các mẫu có sắc tố đỏ mẫu không có sắc tố đỏ 64 4.3.5 Thí nghiệm Xác định hàm lƣợng anthraquinnone mẫu dịch huyền phù tạo đƣợc từ thí nghiệm 66 Chƣơng 5: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 68 5.1 Kết luận 68 5.1.1 Nuôi cấy mô sẹo tạo dịch huyền phù 68 5.1.2 Định lƣợng hợp chất anthraquinone sắc ký lỏng cao áp HPLC 68 5.2 Đề nghị 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 PHỤ LỤC viii ́ ́ ́ ́ DANH SACH CAC CHƢ̃ VIÊT TĂT 2,4-D : 2,4-dichlorophenoxy acetic acid BAP : 6-benzylaminopurine CRD : Completely Randomized Design (Hoàn toàn ngẫu nhiên) ctv : cộng tác viên HPLC : High Performane Liquid Chromatography (Sắ c ký lỏng ao áp ) IAA : 3-indolyl-acetic acid IBA : 3-indolebutyric acid MS : Murashige & Skoog, 1962 NAA : naphthalene acetic acid PVP : poly vinyl pyrrolidone TCL : Thin Cell Layer (Lớ p mỏng tế bào ) TLC : Thin Layer Chromatography (Sắ c ký bản mỏng) ix ́ DANH SACH CÁC HÌNH TRANG Hình 2.1 Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl giới Hình 2.2 Hình thái của Drosera burmanni Vahl Hình 2.3 Lá D burmanni Hình 2.4 D burmanni Vahl tự nhiên Hình 2.5 Cấu trúc hóa học của số flavonoid flavonoid glucoside 10 Hình 2.6 Mơ ̣t sớ loa ̣i Drosera có giá trị kinh tế cao giới 15 Hình 2.7 Hệ thống ni cấy gián đoạn qui mô nhỏ các máy lắc 21 Hình 2.8 Một bioreactor qui mơ phịng thí nghiệm 21 Hình 2.9 Sắ c ký cô ̣t 24 Hình 2.10 Mô hinh sắ c ký nhanh cô ̣t khô 26 ̀ Hình 2.11 Sắc ký lớp mỏng 27 Hình 2.12 Sơ đồ hoa ̣t đô ̣ng các bô ̣ phâ ̣n của máy HPLC 29 Hình 3.1 Cây D burmanni Vahl nuôi cấy in vitro 31 Hình 4.1 Mơ se ̣o đƣơ ̣c hình thành tƣ̀ mẫu lớp mỏng D.burmanni môi trƣờng Gamborg’s B5 bổ sung NAA (0,2 mg/l) 2,4-D với nồ ng đô ̣ thay đổ i 52 Hình 4.2 Mơ se ̣o đƣơ ̣c hinh thành tƣ̀ mẫu lớp mỏng lóng thân ̀ D burmanni môi trƣờng Gamborg’s B5 bổ sung NAA (0,2 mg/l) 2,4-D với nồ ng đô ̣ thay đổ i 53 Hình 4.3.A Mơ sẹo nuôi môi trƣờng lỏng lắc 55 Hình 4.3.B Cụm tế bào quan dƣới kính hiển vi 40X 55 Hình 4.3.C Tế bào đơn quan dƣới kính hiển vi 40X 55 Hình 4.4 Ảnh hƣởng của ánh sáng lên sự hình thành sắc tố đỏ của mô se ̣o D burmanni 57 Hình 4.5 Sắc ký đồ HPLC của anthraquinone tham chiếu 14 ppm 60 Hình 4.6 Sắc ký đồ HPLC của anthraquinone tham chiếu 28 ppm 60 x Multiple range analysis for PHATHOA.ketqua by PHATHOA.nghiemthuc -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 5.533333 X 19.466667 X 22.233333 X 22.233333 X 36.100000 X 3 52.766667 X -contrast difference +/limits - -16.7000 10.4576 * - -47.2333 10.4576 * - -30.5667 10.4576 * - -13.9333 10.4576 * - -16.7000 10.4576 * - -30.5333 10.4576 * - -13.8667 10.4576 * - 2.76667 10.4576 - 0.00000 10.4576 - 16.6667 10.4576 * - 33.3000 10.4576 * - 30.5333 10.4576 * - 16.6333 10.4576 * - 13.8667 10.4576 * - -2.76667 10.4576 -* denotes a statistically significant difference One-Way Analysis of Variance -Data: THAN.ketqua Level codes: THAN.nghiemthuc Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 9890.8050 1978.1610 128.438 0000 Within groups 184.8200 12 15.4017 -Total (corrected) 10075.625 17 missing value(s) have been excluded Table of means for THAN.ketqua by THAN.nghiemthuc -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 000000 0000000 2.2658087 -3.491727 3.491727 38.900000 2.8000000 2.2658087 35.408273 42.391727 3 72.233333 2.7666667 2.2658087 68.741606 75.725060 55.533333 2.7666667 2.2658087 52.041606 59.025060 50.000000 0000000 2.2658087 46.508273 53.491727 22.233333 2.7666667 2.2658087 18.741606 25.725060 -Total 18 39.816667 9250125 9250125 38.391175 41.242158 Multiple range analysis for THAN.ketqua by THAN.nghiemthuc -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 000000 X 22.233333 X 38.900000 X 50.000000 X 55.533333 X 3 72.233333 X -contrast difference +/limits - -38.9000 6.98345 * - -72.2333 6.98345 * - -55.5333 6.98345 * - -50.0000 6.98345 * - -22.2333 6.98345 * - -33.3333 6.98345 * - -16.6333 6.98345 * - -11.1000 6.98345 * - 16.6667 6.98345 * - 16.7000 6.98345 * - 22.2333 6.98345 * - 50.0000 6.98345 * - 5.53333 6.98345 - 33.3000 6.98345 * - 27.7667 6.98345 * -denotes a statistically significant difference One-Way Analysis of Variance -Data: LA.ketqua Level codes: LA.nghiem_thu Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 714.60667 142.92133 9.224 0008 Within groups 185.93333 12 15.49444 -Total (corrected) 900.54000 17 Table of means for LA.ketqua by LA.nghiem_thu -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 8.300000 0000000 2.2726229 4.797772 11.802228 16.700000 0000000 2.2726229 13.197772 20.202228 3 27.766667 2.7666667 2.2726229 24.264438 31.268895 22.233333 2.7666667 2.2726229 18.731105 25.735562 13.900000 2.8000000 2.2726229 10.397772 17.402228 13.900000 2.8000000 2.2726229 10.397772 17.402228 -Total 18 17.133333 9277944 9277944 15.703555 18.563112 Multiple range analysis for LA.ketqua by LA.nghiem_thu -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 8.300000 X 13.900000 XX 13.900000 XX 16.700000 XX 22.233333 XX 3 27.766667 X -contrast difference +/limits - -8.40000 7.00446 * - -19.4667 7.00446 * - -13.9333 7.00446 * - -5.60000 7.00446 - -5.60000 7.00446 - -11.0667 7.00446 * - -5.53333 7.00446 - 2.80000 7.00446 - 2.80000 7.00446 - 5.53333 7.00446 - 13.8667 7.00446 * - 13.8667 7.00446 * - 8.33333 7.00446 * - 8.33333 7.00446 * - 0.00000 7.00446 Phụ lục 2.4: thí nghiệm One-Way Analysis of Variance -Data: SG4KIEU.ketqua Level codes: SG4KIEU.nghiemthuc Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 1.7196917 5732306 42.858 0000 Within groups 1070000 0133750 -Total (corrected) 1.8266917 11 Table of means for SG4KIEU.ketqua by SG4KIEU.nghiemthuc -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 2.0100000 0208167 0667708 1.9010937 2.1189063 2.3466667 0676593 0667708 2.2377604 2.4555729 3 1.9666667 0726483 0667708 1.8577604 2.0755729 2.9133333 0868588 0667708 2.8044271 3.0222396 -Total 12 2.3091667 0333854 0333854 2.2547135 2.3636198 Multiple range analysis for SG4KIEU.ketqua by SG4KIEU.nghiemthuc -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -3 1.9666667 X 2.0100000 X 2.3466667 X 2.9133333 X -contrast difference +/limits - -0.33667 0.21781 * - 0.04333 0.21781 - -0.90333 0.21781 * - 0.38000 0.21781 * - -0.56667 0.21781 * - -0.94667 0.21781 * -* denotes a statistically significant difference Phụ lục ... HỌC ************************** KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THU? ??T NUÔI ́ CÂY MÔ SẸO TẠO DICH HUYỀN PHÙ CÂY ̣ Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE Giáo viên hƣớng... Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE ” đời 1.2 Mục tiêu  Khảo sát khả tạo mô sẹo từ Drosera burmanni Vahl  Khảo sát khả tạo dịch huyền phù tế bào Drosera burmanni Vahl  Khảo sát... thu nhận chủ động tăng sinh lƣợng chất quinone đƣợc nghiên cứu thành công, đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THU? ??T NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DỊCH HUYỀN PHÙ CÂY Drosera burmanni Vahl TRONG

Ngày đăng: 03/09/2013, 09:59

Xem thêm: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DỊCH HUYỀN PHÙ CÂY Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE, KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DỊCH HUYỀN PHÙ CÂY Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE