Ðây là phiên bản html của tập tin http://iasvn.org/uploads/files/dautay_1008085239.pdf. G o o g l e tự động tạo ra những phiên bản html của các tài liệu khi chúng tôi crawl web. Để liên kết tới hoặc đánh dấu trang này, hãy sử dụng URL sau: http://www.google.com/search?q=cache:j2gTCXqhwaAJ:iasvn.org/uploads/files/dautay_1008085239.pdf+%22m%C3%B4i+tr%C6%B0%E1%BB%9Dng+nu%C3%B4i+c %E1%BA%A5y+in+vitro%22&hl=vi&ct=clnk&cd=4&gl=vn Google không có một mối liên hệ nào đến các tác giả của các trang web này cũng như không chịu trách nhiệm về nội dung của chúng. Những cụm từ tìm kiếm này đã được tô sáng: môi trường nuôi cấy in vitro Page 1 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa – 1  N H H   N G C  A BI  N PHÁP X  LÝ KH  TRÙNG M  U VÀ CÁC Y  U T  MÔI TR   N G TRONG NHÂN NHANH GI  NG DÂU TÂY IN VITRO Phm Xuân Tùng & Phm Th Lan Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa Vin Khoa hc K thut Nông nghip min Nam Tóm tt Các thí nghim    c tin hành   ánh giá hiu qu kh trùng mu ca CH và nh h  ng ca mt s yu t môi tr ng   n vic nhân nhanh ging dâu tây in vitro. Kt qu cho thy vi ch phm CH 36%, dung dch 8% có hiu qu kh trùng tt nht vi mu là chi  nh ca cây con khi x lý 15 phút (85,6% cây sng không b nhim nm, khun). Môi tr ng MS có b sung 0,4-0,6 mg/l BAP cho h s nhân chi cao nht (51,6 ln) vi cht l  ng chi khá tt. Chi tách t cm nuôi cy trên MS+BAP v  n thân tt nht khi cy chuyn hai ln cách nhau 15 ngày trên môi tr ng MS không có cht i u hòa sinh tr ng. MS có b sung 0,2 mg/l NAA và 0,2 g/l than hat tính là thích hp cho vic tái sinh b r in vitro. Phi hp vi phun b sung phân NPK tím và Atonik, 10 ngày mt ln, giá th   t mùn en rt thích hp cho vic cy chuyn cây dâu tây ra v n   m. T khóa: dâu tây, Fragaria x ananasa, môi tr  ng Murashige-Skoog, calcium hypochlorite, 6-benzylamino purine, naphthalene-acetic acid, indole-butyric acid. Summary Experiments were conducted to investigate the effect of CH on sterilization of apical doom and influence of other factors in the culture medium on in vitro rapid propagation of strawberry. Results indicated that 8% solution of the currently available preparation 36% CH was highly effective in sterilization of apical dooms from runners for 15 minutes (85.6 % live explants free from comtamination). MS medium containing 0.4-0.6 mg/l BAP gave the highest shoot multiplication rate (51.6x) with good shoot appearance. Shoot buds excised from callus masses, cultured in MS medium suplemented with high concentration of BAP, grew best in height when subcultured twice after every 15 days on MS medium free of plant growth regulators. MS medium suplemented with 0.2 mg/l NAA and 0.2 g/l active charcoal showed the best results in in vitro regeneration of root system. Incombination with NPK and Atonik sprays at 10-day intervals, the black peat- moss gave the best results in transplanting the in vitro plantlets into the nethouse nursery. Key words: strawberry, Fragaria x ananasa, Murashige – Skoog medium, calcium hypochlorite, 6-benzylamino purine, naphthalene acetic acid, indole-butyric acid. Page 2 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa – 2 1.   T V  N   Nh vi nhiu lai cây trng nhân ging vô tính khác, nuôi cy mô là biên pháp k thut    c s dng rng rãi   nhân ngun ging sch bnh dâu tây (Fragaria x ananasa). Có th tái sinh cây in vitro t mnh lá (Nehra & Stushnoff, 1989; Liu & Stanford, 1988), t nõan cha th tinh hoc tràng hoa (Prediery và cs, 1989), t ht phn (Rosati và cs, 1975) hoc phôi cha tr ng thành (Wang và cs, 1984). Tuy nhiên, ph ng pháp có ý ngha thc tin và ph bin nht là to mu sch bnh t mô phân sinh, nuôi cy callus, to và nhân nhanh cm chi, to cây có r in vitro, sn xut xut cây ging t thân bò (runner). Cht l ng cây ging in vitro là yu t có nh h  ng quan trng   n hiu qa sn xut cây ging tiêu chun cng nh kh nng sinh tr  ng và nng sut ca v n dâu (Rancillac & Nourrisseau, 1989; Stapteton & cs, 2001). Nuôi cy mô là k thut    c ng dng nhân nhanh ging dâu tây ti  à Lt trong nhng nm gn ây. Tuy nhiên, cây ging ca mt s c s nhân ging   a ra sn xut là rt khác nhau v cht l  ng và sc sng. H s nhân luôn là vn   quan trng nht    c quan tâm, nhng kích th c cây và quy mô b r là vn   có ý ngha quyt  nh   n sc sng, kh nng phc hi và phát trin nhanh khi cy chuyn ra giá th ex vitro. Báo cáo này trình bày mt s kt qu nghiên cu nhm xác  nh các yu t nh h  ng ca môi tr  n g nuôi c y in vitro và giá th ex vitro nhm xây dng hòan chnh quy trình sn xut ging cht l  ng cao phc v sn xut ti  à lt. 2. V  T LI U VÀ PH   N G PHÁP NGHIÊN C  U 2.1. Vt li u nghiên c u Vt liu là ging Angelique ( M  á) nhp ni t Israel, ging này thích ng khá tt vi i u kin khí hu  à Lt và có nhiu   c i  m u vit nh qu   p, cng và nng sut cao. 2.2. Ph   n g pháp nghiên c u Môi tr  ng Murashige- Skoog (MS) (1962) có b sung 8g/l agar, 30 g/l    n g và pH 5.8    c dùng làm môi tr ng nuôi cy c bn cho các thí nghim (TN) nuôi cy in vitro. Ph  ng pháp b trí cho tng thí nghim nh mô t d i ây. Thí nghim 1: Kho sát nng   calcium hypochlorite (CH)[36 % Ca(OCl) 2 ] và thi gian x lý kh trùng mu ban   u. Các nghim thc gm: C 1.1 = CH 4 %, trong 10 phút C 2.1 = CH 6%, trong 10 phút C 1.2 = CH 4 %, trong 15 phút C 2.2 = CH 6%, trong 15 phút C 3.1 = CH 8%, trong 10 phút C 3.2 = CH 8%, trong 15 phút Chi  nh ca tay non (runner) kho mnh    c chn làm vt liu cho quá trình nhp mu. Chi này    c ra sch bi   t bng xà phòng tr c khi    c x lý trong dung dch kh trùng CH vi nng   và thi gian kh trùng Page 3 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa – 3 theo các nghim thc nêu trên. Tr c khi tách  nh sinh tr  ng, mu x lý    c ra sch bng n c ct vô trùng 3 – 4 ln trong i  u kin vô trùng. Mi mu  nh sinh tr ng    c cy trong mt ng nghim có cha 8 ml môi tr ng ã tit trùng. TN    c b trí hòan tòan ngu nhiên vi ba ln nhc li, 30 mu / mt ln nhc. Ch tiêu theo giõi là t l (%) mu sng và sch nm, khun 20 ngày sau khi cy. Thí nghim 2: Kho sát nh h ng nng   6-benzylamino purine (BAP) trong môi tr  ng MS   n tc   nhân chi. Các nghim thc gm: C 0 = MS + 0,0 mg/l BAP C 3 = MS + 0,6 mg/l BAP C 1 = MS + 0,2 mg/l BAP C 4 = MS + 0,8 mg/l BAP C 2 = MS + 0,4 mg/l BAP C 5 = MS + 1,0 mg/l BAP Nhng mu sng, sch và có sc sinh tr ng tt thu    c t TN 1    c chn làm mu cy   to chi. TN    c b trí hòan tòan ngu nhiên vi ba ln nhc li, 10 bình/ ln nhc, 3 chi / bình tam giác 250 ml cha 40 ml môi tr  ng ã tit trùng (theo tng nghim thc). Các s liu thu thp sau 50 ngày cy gm: h s nhân (s chi/c m chi); trng l ng trung bình ca cm chi. Thí nghim 3: Xác  nh môi tr  ng v  n thân cho dâu tây trong nuôi cy in vitro. Các nghim thc gm: V 1.1 = MS + 0,0 mg/l BAP , cy chuyn mt ln * V 1.2 = MS + 0,0 mg/l BAP, cy chuyn hai ln ** V 2.1 = MS + 0,05 mg/l BAP, cy chuyn mt ln V 2.2 = MS + 0,05 mg/l BAP, cy chuyn hai ln V 3.1 = MS + 0,1 mg/l BAP, cy chuyn mt ln V 3.2 = MS + 0,1 mg/l BAP, cy chuyn hai ln * Cy chuyn mt ln: nuôi 30 ngày mi chuyn sang môi tr  ng mi; ** Cy chuyn hai ln: cng nuôi 30 ngày, nhng 15 ngày chuyn mt ln sang môi tr ng mi có cùng hàm l ng BAP; Mu cy là nhng chi có kích th c nh nhau    c tách ra t nhng cm chi chn t nghim thc tt nht ca TN2. TN gm ba ln nhc vi 10 bình tam giác 250 ml / ln nhc, 15 chi / bình. Ch tiêu theo giõi: chiu cao trung bình ca chi (cm) sau 30 ngày. Thí nghim 4: Kho sát nh h ng ca naphthalene-acetic acid (NAA) và indole- butyric acid (IBA)  các nng   khác nhau   n kh nng ra r ca cây dâu tây in vitro. Các nghim thc gm: R 0 = MS R 1 = MS + 0,1 mg/l NAA R 4 = MS + 0,1 mg/l IBA R 2 = MS + 0,2 mg/l NAA R 5 = MS + 0,2 mg/l IBA R 3 = MS + 0,3 mg/l NAA R 6 = MS + 0,3 mg/l IBA Page 4 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa – 4 Cây   n l   ng   u    c chn t nghim thc tt nht ca TN 3 làm vt liu. Các nghim thc    c b trí hòan tòan ngu nhiên vi ba ln lp li, mi ln 10 bình tam giác 250 ml vi 20 cây/bình. Môi tr ng cho TN ra r in vitro còn    c b sung thêm 0,2 g/l than hot tính. S liu thu thp sau 15 ngày cy: s r trung bình / cây, chiu dài r trung bình / cây (cm). Thí nghim 5: Kho sát nh h ng ca mt s loi giá th và phân bón   n t l sng và sc sinh tr  ng ca cây in vitro khi ra v  n   m. TN    c b trí   kho sát mt s loi giá th và phân bón khác nhau nhm xác  nh    c lai giá th và phân bón phù hp cho cây dâu tây in vitro khi cy chuyn ex vitro. Tt c các loi giá th    c x lý vô trùng bng dung dch formalin theo ph ng pháp thông th ng. Các lai phân bón hóa hc    c b sung tùy tng nghim thc và    c bón d  i dng phun s  ng. Hàm l ng và s ln bón là nh nhau cho các nghim thc: 8 g/l, 3ln/tháng. Thành phn các lai phân bón s dng nh sau: + Atonik 1.8 DD, gm 3   ng phân: Sodium -5- nitroguaire olate 0,3% Sodium - o- nitrophen olate 0,6% Sodium - p- nitrophen olate 0,9% + NPK tím: 15% N, 5% P 2 O 5 , 20% K 2 O; 0,5% Bo, 0,02% Fe, 0,02% Zn + Urea: 46 % N Cây in vitro có b r 10 ngày tui    c chuyn ra v n   m (  nguyên trong bình)   thích ng (acclimatization) trong mt tun. Sau ó, cây    c ly ra khi bình, ra sch môi tr ng bám trên r và cy vào khay xp 96 bu (   ng kính bu 3 cm). Các nghim thc    c b trí ngu nhiên trong nhà l  i vi 3 ln nhc li, 100 cây / ln nhc. Trong nm ngày   u, cây    c che 60 % nng trc tip bng l  i en thoáng t 9 h -16 h. Các k thut chm sóc khác    c áp dng theo quy trình chung ca nhà m cp mt ca Trung tâm nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa. Các nghim thc gm: G 1 =   t mùn en + NPK tím G 5 =   t fine   + NPK tím G 2 =   t mùn en + urea G 6 =   t fine   + urea G 3 =   t mùn en G 7 =   t fine   G 4 =   t mùn en + NPK tím + Atonik Ch tiêu theo giõi: t l cây sng (%); chiu cao trung bình/ cây sau 30 ngày. 3. K T QU  VÀ TH O LU  N Thí nghim 1: Hiu qu tit trùng ca các nng   và thi gian x lý CH. Kt qu kho sát nh h  ng ca CH  các nng   và thi gian khác nhau   n t l sng và sch nm khun  giai o n tái sinh cây in vitro, cho thy nng   8% CH và thi gian 15 phút là thích hp nht (Bng 1). Nghim thc này cho t l Page 5 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa – 5 sng, sch bnh (nm, khun) là cao nht (85,6%) khác bit rt có ý ngha so vi các nghim thc khác. Kt qu này cng t  ng thích vi kt qu ca Sánchez- Cuevas & Salaverría (2004) khi s dng sodium hypochlorite và phù hp vi các quan sát tr c ây ca các tác gi. Bng 1. T l (%) mu sng, sch  các nng   CH và thi gian x lý khác nhau. Nghim thc 10 phút 15 phút Trung bình theo C C 1 = 4% CH 12,2 f 25,6 e 18,9 c C 2 = 6% CH 48,9 d 66,7 c 57,8 b C 3 = 8% CH 75,6 b 85,6 a 80,7 a Trung bình theo T 45,6 b 59,3 a - CV% = 4,27 Chú thích: - C = nng   ; T = Thi gian - Các nghim thc   n l (in nghiêng) có cùng ch cái không khác bit có ý ngha vi P = 1%; - Các trung bình theo C và T có cùng ch cái không khác bit có ý ngha vi P = 1%; Thí nghim 2:  nh h ng nng   6-benzylaminopurine (BAP) trong môi tr ng MS   n tc   nhân chi (h s nhân). Theo Bhatt & Dhar (2000), vi môi tr ng MS, BAP có hiu qu tt nht kích thích phát sinh chi in vitro   i vi dâu tây, so vi kinetin và 2-ip. BAP (1-4 mg/l) cho tc   s l  ng chi cao hn áng k so vi các lai cytokinin s dng trong thí nghim ca h. Nghiên cu ca Stapteton và cng s (2001) cng cho thy, hàm l  ng cytokinin quá cao trong môi tr ng nuôi cây in vitro (MS) có nh h  ng xu   i vi s ra qu và kh nng chng chu trên   ng rung ca cây dâu tây. Trong môi tr ng in vitro, hàm l ng cytokinin cao quá s làm gim s l  ng chi / cm và cht l  ng chi, trong nhiu tr  ng hp dn   n hin t ng thy tinh hóa (vitrification) ca cm chi (Wang và cs, 1984). Trong thí nghim này, môi tr  ng MS có b sung 0,2 mg/l BAP cho h s nhân thp, nhng vi 0,8 mg/l BAP thì xut hin hin t ng thy tinh hóa làm cho h s nhân gim (Bng 2). Kt qu này phù hp vi kt lun ca các tác gi va nêu trên. Nghim thc 0,6 mg/l BAP cho h s nhân cao nht (51,6 ln), chi hi nh nhng thành thc và   u, mc dù có khi l ng / cm (3,1g) nh hn so vi nng   0,4 mg/l BAP. Kt qu cho thy các nghim thc 0,4 và 0,6 mg/l BAP có hiu qu gia tng h s nhân chi và vi cht l ng chi khá tt. Bng 2. H s nhân và trng l  ng trung bình ca cm chi sau 30 ngày cy. Page 6 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa – 6 Nghim thc H s nhân (s chi/c m) Trng l  ng cm chi (g) C 1 MS + 0,0 mg/l BAP 1,4 e 0,32 e C 2 MS + 0,2 mg/l BAP 35,7 cd 1,83 d C 3 MS + 0,4 mg/l BAP 44,2 b 3,60 a C 4 MS + 0,6 mg/l BAP 51,6 a 3,10 b C 5 MS + 0,8 mg/l BAP 36,9 c 2,40 c C 6 MS + 1,0 mg/l BAP 31,0 d 2,30 cd CV% 5,4 3 3,06 Prob. ** ** Chú thích: - Trong cùng ct, các giá tr trung bình có cùng ch cái khác bit không có ý ngha; - ** P=0,01 Thí nghim 3. M ôitr  ng v n thân thích hp cho cây ging dâu tây nuôicy in vitro. Mohamed và cs (1991) phát hin rng nh h ng ca các cht i u hòa sinh tr ng trong môi tr ng nuôi cy có th kéo dài   n bn tháng sau khi cây ã    c trng ra   ng rung. Trong i u kin môi tr  ng nuôi cy có nhiu BAP (Thí nghim 2), chc chn nh h ng c ch v n thân và xu h ng tip tc phát sinh chi còn kéo dài sau khi tách chuyn cây sang môi tr ng tái sinh cây. Nghim thc MS + 0,0 mg/l BAP + cy chuyn 2 ln cho cây   ng   u, thân mp, cng cát, sc sinh tr ng mnh, chiu cao cây cao nht (3,4cm), cao hn có ý ngha so vi các nghim thc còn li (Bng 3). Kt qu thu    c cho thy cy chuyn hai ln trên môi tr ng không b sung BAP có tác dng rõ làm gim dn d l  ng BAP trong mô cm chi, tích ly trong qúa trình nhân chi giai   an tr c. Vì vy, chi không tip tc phát sinh, mà cây phát trin chiu cao. Kt qu này cho phép xác  nh    c môi tr  ng in vitro phù hp cho cây dâu tây sinh tr ng. Bng 3. Chiu cao trung bình ca cây 30 ngày sau cy. Nghim thc Chiu cao trung bình [...]... i ch ph m calcium hypochlorite 36% hi n có trên th tr n g, dung d ch 8% và th i gian x lý 15 phút có hi u qu r t t t trong x lý kh trùng m u dâu tây t nh sinh tr n g cây con (runner) tr c khi nh p m u 2) Môi tr n g MS có b sung 0,6 mg/l BA cho h s nhân cao nh t, thích h p cho vi c nhân nhanh in vitro b ng ph n g pháp nhân c m ch i nh m gia t ng h s nhân trong quá trình nhân gi ng 3) Nghi m th c MS . Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa – 1  N H H   N G C  A BI  N PHÁP X  LÝ KH  TRÙNG M  U VÀ CÁC Y  U T  MÔI TR   N G TRONG NHÂN NHANH GI  NG. bi   t bng xà phòng tr c khi    c x lý trong dung dch kh trùng CH vi nng   và thi gian kh trùng Page 3 -----------------------------------------------------------------------------------------------------------