ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA HỌC  +  NGUYỄN THỊ THẢO NGUYÊN NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO CHIẾT ETHANOL CỦA LÁ TẦM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH SƢ PHẠM HOÁ Đà Nẵng - 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA HỌC  +  NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO CHIẾT ETHANOL CỦA LÁ TẦM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA SVTH : NGUYỄN THỊ THẢO NGUYÊN Lớp : 14SHH GVHD: GS.TS ĐÀO HÙNG CƢỜNG Đà Nẵng - 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐHSP Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : NGUY N TH TH O NGUY N Lớp : 14SHH Tên đề tài: “Nghiên cứu tt v x t p ầ ọ t ethanol tầm gửi kh chua” Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị - Nguyê l ệu: l tầ - Dụ g ụ t M y gử t u t Lê C u Đ Nẵ g tb: sắ g p (Trung tâm kỹ thuật tiêu chuẩ ố p ổ GC MS 789 A 5975C ủ g Ag l t lường chất lượng - Đ Nẵng) + Tủ sấy, lò nung, cân phân tích, b p cách thủy, sinh hàn hồ lưu b p nhiệt k , cốc thủy t l ũ t ủy tinh, bình tam giác, ố g pp t b ứ b tẩ lọ t u t ện, g p ễu lọc, phễu chi t, b ỏ g ột y sắ Nội dung nghiên cứu -X nh thành phần hóa học cao chi t ethanol l i từ tổng cao ethanol tầm gửi kh chua - Phân lập p â ây n cao ethanol l i từ tổng cao ethanol tầm gử trê u -X t p ầ ọ tr Giáo viên hƣớng dẫn: GS.TS Đ Ngày giao đề tài: 01/08/2017 Ngày hoàn thành: 15/03/2018 g H p â g Cườ g bằ g p ươ g p p GC – MS C ủ ệ G PGS.TS Lê Tự H S vê K t qu vê ướ g dẫ GS.TS Đ t v ộp b K H g y 26 tháng ă g Cườ g 2018 g :…… Đ Nẵ g g y…t g… ă CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG 18 LỜI CẢM ƠN Đ t GS.TS Đ t ự g ệ trợ g ệp tốt ề t H g Cườ g ệ ềt v E ũ gx t gử lờ khoa Hóa, t ứ sở vật luậ tốt g ệp tậ t b ướ g dẫ y x gử lờ ỗ trợ v g p ỡ tr g suốt qu tr ọ Sư p t ầy ô g Đ Nẵ g ất dụ g ụ t g ệ gd yv ô gt ặ b ệt l t ầy Trầ M g p t t p ò gt Lụ tốt ỗ luậ tốt y Đà Nẵng, ngày 26 tháng 04 năm 2018 Sinh viên thực Nguy n Thị Thảo Nguyên MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 T ấp t t ủ ề t Đối tƣợng mục đích nghiên cứu 2.1 Đố tượ g g ê ứu 2.2 Mụ ứu g ê Nộ du g g ê ứu 3.1 P ươ g p p g ê ứu l t uy t 3.2 P ươ g p p g ê ứu t ự Ý g ĩ Bố ụ ọ v t ự tễ ủ g ệ ề t ề t CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU V HỌ TẦM GỬI 1.2 ĐẠI CƯ NG V C Y TẦM GỬI TR N C Y KH CHUA [2 1.2.1 Tê gọ 1.2.2 Nguồ gố v p â bố 1.2.3 Mô t t ự vật 1.2.4 Đ ều ệ s trưở g v p t tr 1.3 C NG DỤNG CHỮA BỆNH CỦA L TẦM GỬI TRONG D N GIAN 1.4 NGHI N CỨU V THÀNH PHẦN H A HỌC CỦA HỌ TẦM GỬI 1.4.1 C ô g tr g ê ứu trê t g 1.4.2 C ô g tr g ê ứu t V ệt N 14 CHƢƠNG 16 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 NGUY N LIỆU DỤNG CỤ H A CHẤT VÀ S ĐỒ NGHI N CỨU 16 ẫu v xử l 2.1.1 Thu 2.1.2 Đ t 2.1.3 Dụ g ụ ẫu guyê l ệu 16 ột số ất v t ất tr tb gd g ê t 17 ứu 19 21 2.2 PHƯ NG PH P NGHI N CỨU 22 2.2.1 P ươ g p p t ẫu t ự vật 22 2.2.2 P ươ g p p GC-MS 24 2.3 PHƯ NG PH P NG M DẦM TẠO TỔNG CAO ETHANOL 25 2.4 PHƯ NG PH P CHI T PH N BỐ LỎNG – LỎNG TỪ TỔNG CAO ETHANOL 26 2.4.1 Nguyên tắ 26 2.4.2 C t 26 2.5 PH N L P PH N ĐOẠN CAO TỔNG ETHANOL 26 2.5.1 Sắ b 2.5.2 Sắ ỏ g 26 ột 30 2.5.3 T y sắ 2.5.4 T sắ b ỏ g ột lự ọ ệ du g ô y sắ ột 33 – hexan 35 2.6 PHƯ NG PH P SẮC KÝ KHÍ K T HỢP KHỐI PHỔ (GC-MS) 47 CHƢƠNG 49 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 49 3.1 K T QU THU NH N TỔNG CAO ETHANOL BẰNG PHƯ NG PH P NG M CHI T 49 3.1.1 K t qu t u ậ tổ g t l 49 3.2 K T QU X C Đ NH THÀNH PHẦN H A HỌC CỦA D CH CHI T ETHANOL CỦA L C Y TẦM GỬI TR N C Y KH CHUA 56 3.3.3.T p ầ ọ ủ d td l t từ ũ 56 3.3 K T QU X C Đ NH THÀNH PHẦN HO HỌC TRONG C C PH N ĐOẠN PH N L P ĐƯỢC TỪ TỎNG CAO ETHANOL 60 3.3.1 K t qu sắ 3.3.2 K t qu ột d t t l (2 15g 60 p ầ ọ p â TG.E1 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT AAS : Atomic Absorption Spectrophotometric GC : Gas Chromatography MS : Mass Spectrometry STT : Số t ứ tự TCVN : T uẩ V ệt N DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu 3.1 Tên bảng Thể tích dịch chiết ethanol sau ngâm chiết Trang 48 Khối lượng cao thu sau cô quay chân không dịch chiết 3.2 3.3 3.4 3.5 ethanol Thành phần nhóm chức phân đoạn cao ethanol Thành phần hóa học dịch chiết ethanol Thành phần hóa học định danh phân đoạn BL 49 49 55 60 DANH MỤC CÁC HÌNH Số Tên bảng hiệu 1.1 Một số l 1.2 Hình ảnh tầm gửi 1.3 Bảng đồ phân bố tầm gửi giới 1.4 ây t uộ ọ tầ Trang gử u tr c hóa học flavonoid 10 2.1 L tầm gửi khế chua Liên hiểu, Đà Nẵng 15 2.2 B t l tầm gửi 44 2.3 L tươi, l khô b t l xay mịn (từ tr i sang phải) sau thu hái 16 2.4 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 20 2.5 K thu t chiết ngâm dầm (Maceration) 21 2.6 Bản mỏng slicagel 60F254 32 2.7 Bình triển khai dạng hình khối trụ có nắp đ y 33 2.8 Kết chạy sắc ký mỏng với dung môi ethanol (từ tr i sang phải) soi đèn UV bước sóng 365 nm 33 Kết chạy sắc ký mỏng với hệ dung môi ethyacetate: 2.9 dichlomethane theo c c tỷ lệ (từ tr i sang phải) soi đèn UV 34 bước sóng 365 nm 2.10 2.11 t sắc ký cao n – hexane sau nhồi c t Sơ đồ phân l p cao chiết ethanol 2.12 36 t sắc ký (d = 3.5 cm, h = 50 cm) 37 t sắc ký sau nhồi (1), nạp mẫu bắt đầu rửa giải (2), trình 38 rửa giải (3,4) 2.12 Các bình hứng dung dịch giải ly (15 ml) 38 Mẫu t ux uy s g Mẫu t xuất lụ ( t tủ ệ u l Ag s g dướ ố g g ệ Mẩu t ( uy u âu y (+) T uố t ử: T uố t ử:Gly s – H2SO450%/metanol Anilin T uố t ử: sắ b ỏ g vớ Iod LIPID CHẤT BÉO) Mẫu t ô gp ứ g (-) Mẫu t ứ g (-) T uố t ử: 1% PHENOL V l ô gp HCl ặ 53 Mẫu t xuất ô g ệ v t (-) T uố t ử: 5% T uố t ử: FeCl3/H2O Bortrager Mẫu t ô g p ứ g (-) Mẫu t s g uy u x sang (+++) T uố t ử: G l t Mẫu t uy màu nâu (+++) T uố t ử: St s y T uố t ử: 5% ặ FeCl3/H2O TANNIN Mẫu t ô gp ứ g vớ t uố t ử(-) Mẫu t ô gp Mẫu t ứ g vớ t uố t (-) p ô g ứ g vớ t uố t (-) T uố t ử: H2SO4 ậ T uố t ử: ặ 1N T uố t ử: Baljet AgNO3 + 5N NH4OH SESQUITERP EN–LACTON Mẫu t ô gp Mẫu t xuất 54 ệ Mẫu t uy ứ g vớ t uố t ử(-) t tủ l u ( t t lẫ tr Ag sang màu vàng ỏl cam (++) g trầ ỏ 3.1.3 Kết chiết ph n bố lỏng – longrtoongr cao ethanol Lá tầm gửi c y khế chua (Thu mua Liên Chiểu – Đà Nẵng) Xử lý sơ b , để khô tự nhiên, nghiền thành b t Bột l tầ gử hiết ngâm dầm ethanol D t lầ D t lầ D t lầ Lọc, cô đuổi dung môi Cao ethanol (175g) Lắc với dung môi - n-hexane - dichlomethane D t n-hexane D t dichlomethane Hìn 3.3 Sơ đồ c t Cơ đuổi dung môi Cô đuổi dung môi Cao n-hexane (19.245g) D Cao dichlomethane (8,753g) Cơ đuổi dung mơi C t l ò l (20,015g) t tác cao t ano từ Tầm gử k 55 t l ò l 3.2 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DỊCH CHIẾT ETHANOL CỦA LÁ CÂY TẦM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA 3.3.3.Thành phần hóa học dịch chiết diclometan từ nhũ Sắ GC-MS ủ d 3.1 K t qu x gử t t t p ầ l từ l ọ tr ây tầ gd gử ượ t t t ượ tổ g ợp b g 3.5 Hình 3.4 Sắc ký đồ G dịch chiết ethanol 56 l từ l ệ ây tầ Bảng 3.4 Thành phần hóa học dịch chiết ethanol STT T g Dệ t lưu(p t peak(%) 4.45 3.35 Tê gọ 1,4-Dioxane-2,5-dione, 3,6-dimethyl(C6H8O4) 5.01 46.66 6,6-dimethyl-1-ethynyl-7oxabicyclo[4.1.0] heptan2-one 5.20 2.87 2,2Dimethoxypropionamide (C5H11O3) 57 Cô g t ứ ấu t 6.22 3.28 Isobutyric acid-2-D1 9.64 0.98 4-(2hydroxylethyl)morpholi n-3-one 10.41 0.77 Propanoic acid,2(methoxymethoxyl )-(C5H10O4) 14.69 4-(2hydroxylethyl)morpholi n-3-one 58 16.07 1.96 9-octodecanoic acid(Z)(CAS)(C18H34O2) 19.42 0.46 9-octodecanoic acid(Z)(CAS)(C18H34O2) 10 19.95 0.78 9-octodecanoic acid(Z)(CAS)(C18H34O2) 11 29.94 0.88 Butyl octanoate(C11H24O2) 59 12 38.67 0.31 Methyl 10,12pentacosodiynoate (C26H44O2) 13 49.19 31.97 Methyl commate B(C31H50O3) Nhận xét: Từ t qu b g 3.5 ượ 13 ấu tử tr g d u Tr g 2-one lượ g ấu tử td l t p ươ g p p GC-MS t từ ũ từ l ây tầ gử trê d ây y ấu tử 6,6-dimethyl-1-ethynyl-7-oxabicyclo[4.1.0] heptan- lượ g ất l 46.66% t ứ 31 97% ấu tử Methyl commate B (C31H50O3 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC TRONG CÁC PHÂN ĐOẠN PHÂN LẬP ĐƢỢC TỪ TỎNG CAO ETHANOL 3.3.1 Kết sắc kí cột cao ethanol 15g) Sắ d GC ủ p â t p ầ ọ TG.E1 ượ t ượ tr ệ b y b g 3.11 60 3.24 v t qu Hình 3.5 Sắc ký đồ G phân đoạn TG.E1 Bảng 3.11 Thành phần hóa học định danh phân đoạn TG.E1 N ậ x t: Từ b g 3.11 p ươ g pháp GC-MS ủ p â BL.H4C2A Tr rb x ld yd (47 91% g ấu tử ột số ấu tử lượ g ũ g d ượ 13 ấu tử ất l 1-Piperidine lượ g Triethyl citrate (8,11%); Acetic acid, 2-(2,2,6-trimethyl-7-oxa-bicyclo[4.1.10]hept1-yl)-propenyl ester (7,46%) 61 3.3.2 Kết định danh thành phần hóa học ph n đoạn TG.E1 K t qu d t p ầ ọ ượ tr b y b ng 3.12 Bảng 3.5 Thành phần hóa học định danh phân đoạn BL STT RT %AREA NAME FORMULAR 9,10-Secocholesta5,7,10(19)-triene-1,31 12.698 2.19 diol, 25- [(trimethylsilyl)oxy]-, (3β 5Z 7E - 5-Hydroxy-6-methyl12,13-dioxa2 13.163 1.21 tricyclo[7.3.1.0(1,6)]trid ecane-8-carboxylic acid, methyl ester 2,4a,7-Trihydroxy-1methyl-83 14.554 8.51 methylenegibb-3-ene 1,10-carboxylic acid 1-4 lactone 15.45 1.39 9-α-Hydroxyarteether 62 2,7:3,6Dimethanonaphth[2,3b]oxirene, 16.559 3,4,6,9,9- pentachloro8.17 1a,2,2a,3,6,6a,7,7aoctahydro-, (1 α 2β β 3β 6β β β7 α - Androst-5-en-17-one, 18.09 1.13 3,8,12,14-tetrahydroxy-, (3β 12β 14β - Pregn-4-ene-3,20-dione, 18.289 22.886 1.13 1.69 17,21-dihydroxy-, bis(Omethyloxime) Azafrin 6β- 23.865 1.15 Hydroxyfluoxymesteron e (22S)-6α 11β 21Trihydroxy-16α 17α- 10 24.921 1.44 propylmethylenedioxypr egna-1,4-diene-3,20dione 63 4,4,6a,6b,8a,11,11,14bOctamethyl- 11 26.927 1,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9, 1.07 10,11,12,12a,14,14a,14b -octadecahydro-2Hpicen-3-one 9,19-Cyclolanostane-3,712 13 14 27.445 27.673 27.978 diol 3.14 Lup-20(29)-en-3-one 1.76 9,19-Cyclolanost-24-en3- l 1.83 t t (3β - N ậ x t: Từ b g 3.12 p ươ g p p GC-MS p â 1- TG.E1 Tr t yl-8- b]oxirene, t yl g g bb-3- ấu tử lượ g (8.51% v d ượ 14 ấu tử ủ ất l 7-Tr ydr xy- 7:3 6-Dimethanonaphth[2,3- 3,4,6,9,9-pentachloro-1a,2,2a,3,6,6a,7,7a-octahydro-, (1 α 2β β 3β 6β β 7β α - (8.17%) 64 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận Qu qu tr u ởLê C -P â g ê u Đ Nẵ g TG.E1 l ứu t ềt d p ầ t u ượ ọ tr g l tầ t qu s u: g ấu tử ượ 14 ấu tử tr gử trê lượ g v 2,4a,7-Trihydroxy-1-methyl-8-methylenegibb-3-ene Dimethanonaphth[2,3-b]oxirene, ây 2,7:3,6- 3,4,6,9,9-pentachloro-1a,2,2a,3,6,6a,7,7a- octahydro  Kiến nghị T ô g qu ề t tô - T p tụ g ê ủ tử ứu ây Bằ g lă g -T dượ t tt s từ uố t p tụ p t tr tt ều ều v x ệ t du g ọ v dượ lự p t tr ột số vấ ột số 65 ủ ề p ầ ô v t ổ s u: ọ ưỡ g u ột số p â p ẩ p ụ vụ p ậ ứ ụ ấu y ọ TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Kiến thứ điều trị phòng ngừa bệnh tim mạch – Bộ Y t 14 [2 P H g Hộ “ ây cỏ miền Nam”-tập NXB trẻ [3 T p ọ [4 GS.TS P T [5 Nguyễ K P “Bí ẩn về tầm gửi” K “Nghiên cứu t c dụng dược lý tầm gửi” 14 P ụ g “Phương ph p cô l p hợp ch t hữu cơ” NXB Đ Quố g TPHCM [6 Đặ g Ngọ P ọ Qu – ĐH Sư p TPHCM “Nghiên cứu m t số đặc điểm sinh học, sinh th i loài Tầm gửi Năm nhị (Dendrophthoe pentandra (L) Miq – Thu c họ Tầm gửi (Loranthace) Thành phố Hồ hí Minh”, 2012 [7] Hoàng P M T “Thế giới thuốc nam” tr1 -102, 2005 [8] V ệ dượ l ệu , “ ây thuốc đ ng v t làm thuốc Việt Nam” tập I N b xuất ỹ t uật [9] Đỗ Tất Lợ “Những thuốc vị thuốc Việt Nam” N xuất b Y ọ Tiếng Anh [10] Daniel L Nickrent, Valéry Malécot, Romina Vidal-Russell & Joshua P Der , “A revised classification of Santalales ” p538-558, 2010 [11] Gunstone, F D., John L Harwood, and Albert J Dijkstra The Lipid Handbook with Cd-Rom 3rd ed Boca Raton: CRC Press, 2007 [12] Marin-Valencia, Isaac; Good, Levi B; Ma, Qian; Malloy, Craig R; Pascual, Ju M “Heptanoate as a neural fuel: energetic and neurotransmitter precursors in normal and glucose transporter I-deficient (G1D) brain” J ur l C r br l Blood Flow & Metabolism 33 (2): 175–182, 2012 [13 N rt Y ll ’ r d Mu dH “Isolation and identification of active antidioxant compound from star fruit (averrhoa carambola) Mislettoe (Dendrophtoe pentandra (L.) Miq) Ethanol extract” j urmal of Applied Sciences 6(8) p.1659 – 1663, 2006 [14] W gs t t C u ul v ộ g “Medicinal plants used in Kungkrabaen Royal Development Study Center, Chanthaburi Province” T 66 J ur l phytopharmacy, 13(1), p.33 – 39, 2006 [15] "You Can Control Your Cholesterol: A Guide to Low-Cholesterol Living" Merck & Co Inc, 2009 [16] V Y D vyd v M El z ld G z l z d A V K s l v “Correlation between the retention of cardiac glicosides in reversed – phase High – performance liquid choramatography with a diphenylsil stationary phase, the strucure of their molecules and their biological activitty” J ur l Chromatography,248, pp 49 - 62, 2001 [17] New CDC vital signs: CDC finds 200,000 heart disease and stroke deaths could be prevented Centers for Disease Control and Prevention, 2013 67 ...ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KHOA HÓA HỌC  +  NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC CAO CHIẾT ETHANOL CỦA LÁ TẦM GỬI TRÊN CÂY KHẾ CHUA. .. g ột y sắ Nội dung nghiên cứu -X nh thành phần hóa học cao chi t ethanol l i từ tổng cao ethanol tầm gửi kh chua - Phân lập p â ây n cao ethanol l i từ tổng cao ethanol tầm gử trê u -X t p... dịch chiết ethanol sau ngâm chiết Trang 48 Khối lượng cao thu sau cô quay chân không dịch chiết 3.2 3.3 3.4 3.5 ethanol Thành phần nhóm chức phân đoạn cao ethanol Thành phần hóa học dịch chiết ethanol