Đang tải... (xem toàn văn)
Thạc sĩ, tiến sĩ, cao học, luận văn, khóa luận
Bộ giáo dục và đào tạo trờng đại học nông nghiệp I ------------------ Bùi Thanh Khiết Nghiên cứu quy trình sản xuất vacxin viêm gan vịt từ chủng virus vacxin nhợc độc DH-EG-2000 và ứng dụng phòng, can thiệp dịch vào thực tế sản xuất Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành: Thú y Mã số : 60.62.50 Ngời hớng dẫn khoa học: ts. nguyễn bá hiên Hà Nội - 2007 Trng i hc Nụng nghip 1 - Lun vn Thc s khoa hc ----------------------------------------------------- i Lời cam đoan Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và cha từng đợc ai công bố trong bất kì công trình nào khác. Tôi xin cam đoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đ đợc chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Bùi Thanh Khiết Trng i hc Nụng nghip 1 - Lun vn Thc s khoa hc ----------------------------------------------------- ii Lời cám ơn Quá trình học tập và nghiên cứu ở lớp cao học Thú y K14 Trờng Đại học Nông nghiệp I Hà Nội, tôi luôn nhận đợc sự giúp đỡ nhiệt tình của các thầy giáo, cô giáo. Đến nay tôi đ hoàn thành khóa học. Nhân dịp này tôi xin đợc bày tỏ lòng biết ơn chân thành đối với các thầy cô giáo trong Nhà trờng, Khoa sau đại học, Khoa Chăn nuôi - Thú y, trong đó có các thầy cô giáo ở Bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm - Bệnh lý. Đặc biệt, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Bá Hiên ngời đ trực tiếp hớng dẫn, giúp đỡ tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu này. Xin chân thành cảm ơn T.S. Nguyễn Viết Không - Trởng bộ môn Hoá sinh - Miễn dịch - Bệnh lý cùng các đồng nghiệp ở Viện thú y quốc gia và các Trạm, Chi cục Thú y đ giúp đỡ tôi trong quá trình thực tập. Xin chân thành cảm ơn Dự án P.H.E. thuộc Trung tâm sinh thái nông nghiệp (Đại học Nông nghiệp I Hà Nội) đ hỗ trợ một phần kinh phí cho đề tài nghiên cứu này. Xin chân thành cảm ơn các cơ quan, những ngời thân và bạn bè đ động viên, giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài nghiên cứu. Rất mong nhận đợc những ý kiến góp ý của các thầy cô giáo đối với đề tài nghiên cứu tôi đ thực hiện. Xin trân trọng cám ơn ! Tác giả Bùi Thanh Khiết Trng i hc Nụng nghip 1 - Lun vn Thc s khoa hc ----------------------------------------------------- iii Mục lục Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Danh mục ảnh vii 1. Mở đầu i 1.1 Tính cấp thiết của đề tài 1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 3 1.3 ý nghĩa khoa học của đề tài 3 2. Tổng quan tài liệu 4 2.1 Bệnh viêm gan virus ở vịt 4 2.2 Virus gây bệnh viêm gan vịt 16 2.3 Miễn dịch chống virus viêm gan vịt 22 2.4 Một số hiểu biết về vacxin phòng bệnh viêm gan vịt 26 3. Nội dung - nguyên liệu, phơng pháp nghiên cứu 30 3.1 Nội dung nghiên cứu 30 3.2 Nguyên liệu 31 3.3 Phơng pháp nghiên cứu 32 4. Kết quả và thảo luận 47 4.1 Kiểm tra giống vacxin trớc khi đa vào sản xuất 47 4.1.1 Khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus vacxin nhợc độc viêm gan vịt DH-EG- 2000 47 Trng i hc Nụng nghip 1 - Lun vn Thc s khoa hc ----------------------------------------------------- iv 4.1.2 Kết quả xác định chỉ số ELD 50 của chủng vurus vacxin DH-EG-2000 51 4.1.3 Kết quả xác định chỉ số EID 50 của chủng vurus vacxin DH - EG 2000 53 4.2 Nghiên cứu qui trình sản xuất vacxin viêm gan vịt nhợc độc từ chủng virus vacxin DH - EG - 2000 55 4.2.1 Qui trình sản xuất vacxin 55 4.2.2 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin 57 4.2.3 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin 61 4.2.4 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của vacxin 63 4.2.5 Xác định khả năng bảo hộ của vacxin với vịt trong độ tuổi mẫn cảm 73 4.3 ứ ng dụng vacxin trong phòng, can thiệp dịch 79 4.3.1 Kết quả ứng dụng vacxin trong phòng bệnh cho vịt 80 4.3.2 ứ ng dụng vacxin trong việc can thiệp dịch 81 5. Kết luận và đề nghị 86 Tài liệu tham khảo 88 Trường ðại học Nông nghiệp 1 - Luận văn Thạc sỹ khoa học ----------------------------------------------------- v Danh môc ch÷ viÕt t¾t DHV : Duck Hepatitis Virus RNA : Axit Ribonucleic DNA : Axit Desoxyribonucleic EID 50 : 50 Percent Embryo Infective Dose ELD 50 : 50 Percent Embryo Lethal Dose GDP : Gross Dometic Product OIE : Office International des Epizooties GOT : Glutamat - Oxaloaxetat - Transaminaza GPT : Glutamat - Pyruvat – Transaminaza ®vth : §¬n vÞ trung hoµ Tr : Trang pp : Pages Trng i hc Nụng nghip 1 - Lun vn Thc s khoa hc ----------------------------------------------------- vi Danh mục bảng STT Tên bảng trang 2.1 Tình hình bệnh viêm gan vịt ở một số nớc Châu á 7 4.1 Kết quả cấy truyền trên phôi gà để kiểm tra tính ổn định của chủng virus vacxin DH-EG-2000 49 4.2. Kết quả thí nghiệm để xác định chỉ số ELD 50 52 4.3 Kết quả thí nghiệm để xác định chỉ số EID 50 54 4.4 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin nhợc độc viêm gan vịt DH-EG-2000 59 4.5 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin nhợc độc viêm gan vịt DH-EG-2000 62 4.6 Kết quả phản ứng trung hòa để kiểm tra hiệu lực vacxin 66 4.7 Kết quả công cờng độc để kiểm tra hiệu lực của vacxin cho vịt nuôi tại phòng thí nghiệm 69 4.8 Kết quả công cờng độc để kiểm tra hiệu lực của vacxin cho vịt nuôi ngoài thực địa 72 4.9 Biến động hàm lợng kháng thể của vịt đợc tiêm vacxin nhợc độc viêm gan vịt DH - EG - 2000 (Lô 1) 75 4.10 Tổng hợp biến động hàm lợng kháng thể của vịt đợc tiêm vacxin nhợc độc viêm gan vịt DH-EG-2000 77 4.11 Tổng hợp kết quả phòng bệnh cho vịt con bằng tiêm vacxin nhợc độc viêm gan vịt sản xuất từ chủng virus DH - EG - 2000 81 4.12 Tổng hợp kết qủa can thiệp dịch bằng vacxin nhợc độc viêm gan vịt DH-EG - 2000 83 4.13 Tổng hợp kết qủa can thiệp dịch bằng vacxin theo thời gian mắc bệnh của vịt 84 Trng i hc Nụng nghip 1 - Lun vn Thc s khoa hc ----------------------------------------------------- vii Danh mục hình STT Tên hình trang 4.1 Sơ đồ tóm tắt quy trình sản xuất vacxin nhợc độc viêm gan vịt chủng DH-EG-2000 56 4.2 Biểu đồ biến động hàm lợng kháng thể ở vịt đợc tiêm vacxin viêm gan vịt nhợc độc chủng DH-EG-2000 77 Danh mục ảnh STT Tên ảnh trang 2.1 Hình thái cấu trúc virus viêm gan vịt 17 2.2 Phôi vt bình thờng (a) v phôi vt xuất huyết do b gây nhiễm virus viêm gan vt (b) 17 4.1 Phôi gà còi cọc, xuất huyết do gây nhiễm virus vacxin DH- EG-2000 50 4.2 Gan phôi gà xuất huyết, hoại tử sau khi gây nhiễm virus vaxin DH-EG-2000 50 4.3 Kết quả PCR với cặp mồi Duck HPBF2/Duck HPBR2 đặc hiệu để nhận biết virus viêm gan vịt cờng độc type I 64 4.4 Phôi vịt 12 ngày tuổi sau khi tiêm hỗn dịch huyết thanh-virus 67 4.5 T thế chết của vịt mắc bệnh viêm gan virus (Opisthotonus) 85 4.6 Gan vịt bình thờng (a) và gan vịt bị xuất huyết do nhiễm virus viêm gan vịt cờng độc (b) 85 Trng i hc Nụng nghip 1 - Lun vn Thc s khoa hc ----------------------------------------------------- 1 1. Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết của đề tài Việt Nam là một trong những nớc thuộc Đông Nam châu á có nền văn minh lúa nớc lâu đời. Với gần 70% dân số làm nông nghiệp. Xuất phát từ những đặc điểm riêng biệt về địa hình, tập quán canh tác, điều kiện thuận lợi cho việc chăn thả tự nhiên nên vịt là loài thủy cầm đợc ngời nông dân nớc ta rất a chuộng vì chúng dễ nuôi, qui mô đàn đa dạng, phù hợp với tập quán chăn nuôi nhỏ lẻ. Hơn nữa vịt là loài chịu khó tìm kiếm thức ăn, chúng thu nhặt đợc lơng thực rơi vi sau thu hoạch, tận dụng đợc nguồn thức ăn phong phú trong tự nhiên, tiết kiệm đợc chi phí cho ngời chăn nuôi. Vì thế con vịt đ từ lâu đ gắn bó với ngời nông dân Việt Nam. Nghề nuôi vịt cũng là một nghề truyền thống của ngời nông dân Việt Nam. Những năm gần đây nớc ta sản xuất khoảng 30000 đến 40000 tấn thịt vịt một năm; 800 triệu đến 1 tỷ quả trứng, 1000 đến 1500 tấn lông vũ. Theo số liệu thống kê của FAO, (2003) [22] tổng số vịt của Việt Nam là 57 triệu con, đứng thứ 2 thế giới, chỉ sau Trung Quốc, sản lợng thịt vịt của Việt Nam là 67,8 nghìn tấn, đứng thứ 5 thế giới. Trong chăn nuôi vịt, một trong những những bệnh thờng gặp và gây ra những tổn thất kinh tế nghiêm trọng phải kể đến bệnh viêm gan do virus. Viêm gan virus ở vịt (Duck Virus Hepatitis - DVH) là bệnh truyền nhiễm cấp tính, lây lan mạnh của loài vịt, tỷ lệ nhiễm và chết cao. Vịt con dới 6 tuần tuổi dễ cảm nhiễm. Đặc biệt là vịt dới 3 tuần tuổi và nặng nhất ở vịt con từ 1 - 7 ngày tuổi với tỷ lệ chết có thể lên đến 100%. Trên thế giới bệnh viêm gan virus ở vịt đ gây nhiều thiệt hại cho đàn Trng i hc Nụng nghip 1 - Lun vn Thc s khoa hc ----------------------------------------------------- 2 vịt nuôi. Năm 1949, ở Long Island (Mỹ), Levine và Fabricant đ phát hiện bệnh trên đàn vịt Bắc Kinh ở 70 trại vịt lớn. Tổng số vịt con chết trong vụ dịch lên đến 750.000 con. Sau đó bệnh đợc phát hiện trên khắp thế giới. ở Việt Nam, năm 1978 Trần Minh Châu và cộng sự đ ghi nhận có bệnh viêm gan virus ở vịt. Sau đó phát hiện bệnh xảy ra ở nhiều địa phơng gây thiệt hại nghiêm trọng cho các hộ chăn nuôi vịt. Năm 2001, các tác giả Nguyễn Văn Cảm, Nguyễn Thu Hà, Nguyễn Khánh Ly cho biết: Qua điều tra 20 ổ dịch ở Hng Yên, Hà Nội, Hà Tây, Tuyên Quang số vịt con chết vì bệnh này lên đến hàng chục nghìn con, tỷ lệ chết trong đàn từ 48,57% đến 90,00%, tập trung ở vịt con từ 2 - 5 ngày và dới 3 tuần tuổi (Nguyễn Văn Cảm, 2001) [3]. Theo quyết định số 63/2005/QĐ-BNN ngày 13 tháng 10 năm 2005 của Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn, bệnh viêm gan virus ở vịt đợc xếp vào danh mục các bệnh nguy hiểm của động vật. Ngày nay, chủ trơng chuyển đổi cơ cấu cây trồng vật nuôi nhằm tăng hiệu quả kinh tế trong sản xuất nông nghiệp đợc đông đảo nông dân hởng ứng. Xu hớng chăn nuôi thủy cầm thơng phẩm với quy mô lớn ngày càng đợc a chuộng ở các vùng đồng bằng do thời gian chăn nuôi ngắn, quay vòng vốn nhanh, hiệu quả kinh tế cao. Ngoài những lợi ích kinh tế, việc chăn nuôi với quy mô tập trung cao lại tạo điều kiện cho bệnh viêm gan virus ở vịt càng có cơ hội lây lan mạnh trên diện rộng và diễn biến phức tạp. Trong khi đó các biện pháp dùng kháng sinh phòng bệnh này là không có hiệu quả. Vacxin phòng bệnh viêm gan vịt hiện đang dùng đợc chế từ các chủng virus cờng độc TT (Trần Minh Châu và cộng sự, 1985) [6] và từ chủng virus viêm gan vịt nhợc độc TN của Asplin (Lê Thanh Hoà, Nguyễn Nh Thanh, Nguyễn Bá Hiên, 1984) [9]. Xuất phát từ mức độ nguy hiểm, diễn biến ngày càng phức tạp của bệnh và yêu cầu của thực tế sản xuất đang cần một loại vacxin phòng bệnh có hiệu . thực hiện đề tài: " ;Nghiên cứu quy trình sản xuất vacxin viêm gan vịt từ chủng virus vacxin nhợc độc DH- EG- 2000 và ứng dụng phòng, can thiệp dịch vào. từ chủng virus DH - EG - 2000 81 4.12 Tổng hợp kết qủa can thiệp dịch bằng vacxin nhợc độc viêm gan vịt DH- EG - 2000 83 4.13 Tổng hợp kết qủa can thiệp dịch