z PHÂN HIỆU TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP KHOA: NÔNG HỌC - - TIỂU LUẬN MƠN VI SINH VẬT CÁC GIẢI PHÁP PHỊNG NGỪA VÀ ĐIỀU TRỊ BỆNH DO VI SINH VẬT GÂY RA GVHD: SVTH: Đồng Nai, ngày 20 tháng năm 2018 MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU Việt Nam nói riêng nước nhiệt đới nói chung có ều ki ẹn thuận lợi cho VSV sinh trưởng phát tri ển Từ bệnh người, động vật, trồng VSV gây ngày nhiều Đặc bi ệt bệnh VSV gây trồng, diễn ngày nhiều khó phòng ngừa ều tr ị gây ảnh hưởng đến suất trồng, giảm giá trị thẩm mĩ nông sản làm gi ảm sức sống gây chết trồng, VSV trông gây b ệnh ti ết chất độc ảnh hưởng trực tiếp đến bị bệnh, gây độc cho ng ười gia súc, bệnh gây nhiểm cho đất tr ồng trọt Vì v ậy phòng ng ừa ều tr ị bệnh VSV gây vấn đề cấp bách Chính vậy, nhóm chúng em tiến hành tìm hi ểu nghiên c ứu v ề đ ề tài “ Phương pháp phòng ngừa điều trị bệnh VSV gây ra” Trong đề tài trình bày số giải pháp phòng ngừa điều trị bệnh VSV gây Hi v ọng đề tài phần cung cấp thêm thông tin nhu cầu cấp bách Trong qua trình tìm hiểu đề tài, chúng em c ố g ắng tìm hi ểu, nghiên cứu với lượng kiến thức hạn chế, ti ểu luận khơng tránh khỏi thiếu sót Rất mong nhận đóng góp th ầy để s ữa chữa sai sót nâng cao kiến thức để đề tâì sau hồn thi ện Nhóm chúng em xin chân thành cảm ơn! Chương TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung vi sinh vật 1.1.1 Khái niệm Vi sinh vật thể nhỏ bé, nhìn rỏ chúng kính hi ển vi Phần lớn vi sinh vật sinh vật đơn bào nhân sơ hay nhân th ực, m ột s ố tập hợp đơn bào Vi sinh vật gồm nhiều nhóm phân loại khác nhau, chúng có đ ặc điểm chung hấp thụ chuyển hóa chất dinh dưỡng nhanh, sinh truongwr phát triển nhanh, phân bố rộng 1.1.2 Đặc điểm vi sinh vật Vi sinh vật nhóm riêng bi ệt sinh gi ới Chúng tập hợpnhững sinh vật thuộc nhiều giới khác Giữa nhóm khơng có quan hệ mật thiết với có chung đặc ểm sau đây: Kích thước nhỏ bé Kích thước vi sinh vật thường đo micromet, đ ể quan sát chúng, phải sử dụng kính hiển vi 1µm (micromet) = 1/1000 mm Chính vi sinh vật có kích thước nhỏ bé nên diện tích bề mặt tập đồn vi sinh vật lớn Chẳng hạn số lượng cầu khuẩn chiếm thể tích cm³ có diện tích bề mặt 6m² Hấp thu nhiều, chuyển hóa nhanh Vì kích thước nhỏ bé nên vận tốc hấp thụ chuy ển hóa vi sinh v ật vượt xa sinh vật bậc cao Chảng hạn vi khuẩn lactic có th ể phân giải lượng đường lactose nặng 1.000 – 10.000 lần khối lượng chúng Năng lực chuyển hóa sinh chất mạnh mẽ vi sinh vật dẫn đến tác dụng to lớn chúng thiên nhiên ho ạt đ ộng sống người Sinh trưởng nhanh, phát triển mạnh So với sinh vật khác vi sinh v ật có tốc độ sinh tr ưởng sinh sơi nảy nở lớn Vi khuẩn E coli điều kiện thích hợp 20 phút phân chia lần, từ tế bào ban đầu, sau 24 phân chia cho 4.722.366.500.000.000.000.000 tế bào (nặng 4722 tấn) Tất nhiên thực tế khơng thể tạo điều kiện sinh trưởng lí tưởng nên số lượng vi khuẩn thu ml dung dịch nuôi cấy đạt tới mức 108 – 109 tế bào Thời gian hệ nấm men Saccharomyces cerevisiae 120 phút Khi nuôi cấy thu nhận sinh khối giàu prôtêin phục vụ chăn nuôi người ta nhận thấy tốc độ tổng hợp nấm men cao bò tới 100.000 lần thời gian hệ tảo Chlorella giờ, vi khuẩn lam Nostoc 23 gi Năng lực thích ứng mạnh dễ phát sinh biến dị Năng lực thích ứng vi sinh vật vượt xa so với động v ật th ực v ật Trong q trình tiến hóa lâu dài vi sinh vật tạo nên c chế ều hòa trao đổi chất để thích ứng với điều kiện sống bất lợi Người ta nhận thấy lượng enzim thích ứng chiếm 10% lượng prơtêin chiếm thể vi sinh vật Sự thích ứng vi sinh vật nhiều vượt sức tưởng tượng người Phần lớn vi sinh vật giữ nguyên sức sống nhiệt độ nitơ lỏng (196°C), chí nhiệt độ hiđro lỏng (-253°C) Một số vi sinh vật sinh trưởng nhiệt độ 250°C, chí 300°C Một số vi sinh vật thích nghi với mơi trường có nồng độ muối 32% NaCl Vi khuẩn Thiobacillus thioxidans sinh trưởng Ph = 0,5 vi khuẩn Thiobacillus denitrificans lại thích hợp phát triển pH = 10,7 Vi khuẩn Micrococus radiodurans có th ể chịu cường độ xạ tới 750.000 rad Ở nơi sâu đại dương (11304 m) nơi có áp lực tới 1103,4 atm thấy có vi sinh vật sinh s ống Nhiều vi sinh vật thích nghi với điều kiện mơi trường hồn tồn thiếu ơxi Một số nấm sợi phát triển thành váng dày bề ngâm có nồng độ phenol cao Vi sinh vật dễ phát sinh biến dị chúng thường đ ơn bào, đ ơn bội, sinh sản nhanh, số lượng nhiều, tiếp xúc trực tiếp với môi trường s ống Hình thức biến dị thường gặp đột biến gen thường dẫn đến thay đổi hình thái, cấu tạo, kiểu trao đổi chất, sản phẩm trao đổi chất, tính kháng nguyên, tính đề kháng… Chẳng hạn tìm thấy khả sinh kháng sinh nấm sợi Penicillium chrysogenum người ta đạt tới sản lượng 20 đ ơn vị penicilin ml dung dịch lên men Ngày nhà máy s ản xuất penicillin người ta đạt tới suất 100.000 đơn vị/ml Bên cạnh bi ến dị có lợi, vi sinh vật thường sinh biến dị có hại nhân loại, hạn tính kháng thuốc Phân bố rộng, chủng loại nhiều Vi sinh vật phân bố khắp nơi Trái Đất Chúng có mặt th ể người, động vật, thực vật, đất, nước, khơng khí, đồ dùng, vật liệu, từ biển khơi đến núi cao, từ nước ngọt, nước ngầm nước mặn biển… Trong đường ruột người thường không 100 – 400 loài vi sinh vật khác nhau, chúng chiếm 1/3 khối lượng khô phân Chiếm số lượng cao đường ruột người vi khuẩn Bacteroides fragilis, chúng đạt tới s ố lượng tỉ tế bào/ gram phân Ở độ sâu 10.000m Đông Thái Bình Dương, nơi hồn tồn tối tăm l ạnh lẽo có áp suất cao người ta phát thấy khoảng triệu – tỉ vi khuẩn/ml (chủ yếu vi khuẩn lưu huỳnh) Ở độ cao lên tới 84km khơng khí người ta phát hi ện th có vi sinh vật Mặt khác khoan xuống lớp đá trầm tích sâu 427m châu Nam Cực người ta phát vi khuẩn sống Về chủng loại, toàn giới động vật có kho ảng 1,5 tri ệu lồi, thực vật có khoảng 0,5 triệu lồi vi sinh vật có 100.000 lồi bao gồm 30.000 động vật nguyên sinh, 69000 loài nấm, 23.000 vi tảo, 2500 vi khuẩn lam, 1500 vi khuẩn 1.2 Nhóm vi sinh vật gây bệnh 1.2.1 Vi khuẩn gây bệnh Hình thái cấu tạo vi khuẩn Vi khuẩn hại loại ngun sinh đơn bào khơng có di ệp l ục, d ạng hình 10 Bảng 3.21: Nồng độ presim ức chế chủng nấm gây thối trái chôm chôm sau thu hoạch Mẫu nấm L.psedotheobroma e F.verticillioides 0,02 0,03 % % 5,90b 3,83c 0,04% 0,05% ĐC LSD0,05 CV(5) 2,30d 1,40d 9,0a 1,18 14,01 0,50b 0,00c 0,00c 0,00c 3,40a 0,08 5,73 P.mali 6,43a 2,63b 2,43b 2,00c 6,27a 0,43 5,78 Lasmeniasp 0,00b 0,00b 0,00b 0,00b 3,70a 0,17 12,07 G.cylindrosporum 0,00b 0,00b 0,00b 0,00b 3,10a 0,08 7,21 P.virgatula voucher 0,50b 0,00b 0,00c 0,00c 5,30a 0,37 15,47 P.clavispora 0,50b 0,50b 0,50c 0,00c 2,97a 0,13 7,64 Bảng 3.22: Nồng độ canxi lactat ức chế chủng nấm gấy thối trái chôm chôm sau thu hoạch Mẫ u N ấ m 0,15% 0,35 % 9,00 0,45% ĐC LSD0,05 L psedotheobromae 9,00 0,25 % 9,00 9,00 9,00 0;0 F verticillioides 3,27a 3,27a 3,27a 3,00a 3,4a 0,68 12,65 P mail 5,80a 5,73a 6,03a 6,17a 6,27a 8,76 0,99 Lasmenis sp 3,83a 3,83a 3,83a 3,60a 3,70a 3,03 0,21 G cylindrosporum 3,10a 3,07a 3,03a 3,00a 3,10a 4,46 0,26 P virgatulavoucher 4,67a 5,10a 5,20a 5,27a 5,3a 0,70 7,31 P clavispora 3,73a 3,63a 3,07a 2,90a 2,97a 15,83 0,97 62 CV(5) Bảng 3.23: Nồng độ kali socbat ức chế chủng nấm gây thối trái chôm chôm sau thu hoạch Mẫu Nấm L psedotheobromae F verticillioides P mail Lasmenis sp 0,2% 1,63c 2,53a 3,44b 0,83c G cylindrosporum P virgatulavoucher 4,73b 3,50c 0,3% 1,77c 2,89a 4,27b 0,17c d 4,53b 3,20d P clavispora 5,77a 5,57a 0,4% 2,17c 2,82a 4,10b 0,00d 0,5% 3,43b 2,83a 4,33b 0.00d 4,57b 3,33c d 5,57a ĐC 9,00a 3,17a 5,50a 4,67a LSD0,05 0,90 0,73 0,92 0,76 CV(5) 15,10 14,28 11,26 28,87 4,60b 6,17a 3,43cd 4,43a 0,58 0,25 6,25 3,84 4,10c 0,27 2,96 5,83a Bảng 3.24: N ồng đ ộ citrubio ức ch ế ch ủng n ấm gây th ối trái chôm chôm sau thu ho ạch Mẫu Nấm 0,02% 0,03 0,04 0,05% ĐC % % L psedotheobromae 6,10b 5,83b 4,73c 0,17d 9,00a F verticillioides 0.00b 0,00b 0,00b 0,00b 3,40a P mail 2,27b 1,77c 1,4c 0,33d 6,27a Lasmenis sp 0,00b 0,00b 0,00b 0.00d 3,70a G cylindrosporum 0,00b 0,00b 0,00b 0,00b 3,10a P virgatulavoucher 0,00b 0,00b 0,00b 0,00b 5,30a P clavispora 0,00b 0,00b 0,00b 0,00b 2,97a 3.5.2 Ức chế bệnh vi khuẩn Lactobaillus spp LSD0,05 CV(5) 0,38 0,08 0,47 0,17 0,84 0,37 0,13 3,91 6,58 10,36 12,09 7,21 18,39 11,51 3.5.2.1.Ức chế khuẩn ty nấm gây bệnh thối trái chôm chôm b ởi vi khuẩn Lactobaillus plantarum Lactobaillus fermentum 3.5.2.1.Ức chế phát triển khuẩn ty dòng nấm gây thối trái chơm chơm phương pháp nuôi cấy môi trường kép “dua-culture”, sau ngày ni cấy điều kiện nhiệt độ phòng điều kiện bảo quản 13 0C kết sau: Sau ngày nuôi cấy môi trường kép có th ể thấy có chủng n ấm b ị ức chế hoàn toàn vi khuẩn Lactobaillus plantarum Lactobaillus fermentum điều kiện nhiệt độ phòng nhiệt độ bảo quản chôm chôm(13 0C) Năm chủng nấm bao gồm F.verticillioides, P mail , Lasmenia sp., G cylindrosporum, P virgatulavoucher Riêng hai chủng nấm L psedotheobromae P clavispora có bị ức chế chủng vi khuẩn khơng hồn tồn 63 Cụ thể, điều kiện nhiệt độ phòng, chủng L Psedotheobromae sinh trưởng 43% mơi trường có vi khuẩn L Plantarum 65% mơi tr ường có vi khuẩn L fermentum so với đối chứng khơng có vi khuẩn chủng n ấm sinh trưởng 100% Còn chủng nấm P clavispora có bị ức chế hồn tồn b ởi vi khuẩn L Plantarum sinh trưởng 45% mơi trường có vi khuẩn L fermentum so với đối chứng 86% Như vậy, hai chủng vi khu ẩn đ ều có kh ả ức chế tốt chủng nấm gây thối trái chơm chơm ều kiện nhiệt độ phòng Chủng nấm L Plantarum ức chế mạnh h ơn chủng L fermentum Ở điều kiện, chủng nấm L psedotheobromaesinh trưởng 14% mơi trường có khuẩn L Plantarum 25% môi trường vi khuẩn L fermentum so v ới đ ối chứng khơng có vi khuẩn chủng nấm sinh trưởng 100% Chủng nấm P clavispora bị ức chế hồn tồn mơi trường có vi khuẩn L Plantarum sinh trưởng 17% môi trường cso vi khuẩn L Fermentum so v ới đ ối ch ứng vi khuẩn chủng nấm sinh trưởng 80% sau ngày ni cấy Trên sở cho thấy, điều kiện nhiệt độ bảo quản (13 0C) chủng nấm bị ức chế mạnh so với chủng nấm L Fermentum 3.5.3 Ức chế bào tử nấm gây bệnh thối trái chôm chôm vi khuẩn Lactobaillus plantarum Lactobaillus fermentum Khi phủ môi trường malt extract aga có chứa bào tử nấm lên mơi tr ường MRS cấy vi khuẩn kết đối kháng thể qua bảng 3.25 Bảng 3.25: Sự ức chế chủng nấm gây thối trái chôm chôm sau thu hoạch vởi vi khuẩn L Plantarum L fermentum điều kiện nhiệt độ phòng 130C Mẫu Nấm L psedotheobromae L Fermentum P mail Lasmenis sp G cylindrosporum P virgatulavoucher P clavispora Lactobaillus plantarum Nhiệt độ 130C phòng ++ +++ +++ +++ ++ ++ ++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ 64 Lactobaillus fermentum Nhiệt độ phòng 130C ++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ +++ Ghi chú: - ức chế khơng nhìn thấy, + đường kính vòng ức ch ế từ 0,1 -30 mm, ++ đường kính vòng ức chế từ 30 -75 mm, +++ đường kính vòng ức chế >75 mm (Theo Magnusson et al, 2003) Sự ức chế bào tử chủng nấm phương pháp phủ hai l ớp mơi trường có vi khuẩn L Plantarum (Bảng 5) cho thấy, vi khuẩn lactic chủng L Plantarum có khả ức chế phát triển bào tử n ấm mức đ ộ trung bình (30 – 75 mm), ức chế mạnh phát tri ển bào tử n ấm L Fermentum (trên 75 mm) Cũng điều kiện nhiệt độ phòng, chủng vi khu ẩn L Fermentum có khả ức chế mạnh chủng nấm gồm F.verticillioides, P mail Lasmenia sp., ức chế mức trung bình đ ối v ới ch ủng nấm L psedotheobromae, ức chế yếu hai chủng nấm P virgatula voucher P clavispora không ức chế ch ủng n ấm G cylindrosporum Ở môi trường nhiệt độ bảo quản 130C, chủng nấm bị ức chế mạnh điều kiện mơi trường có vi khuẩn L Plantarum (vòng ức ch ế 75 mm), ngoại trừ Lasmenia sp Bị ức chế mức độ trung bình.Trong ều ki ện mơi trường có vi khuẩn L Fermentum chủng nấm bị ức chế mạnh, chủng nấm G cylindrosporum, P virgatula voucher P Clavispora b ị ức ch ế trung bình (vòng ức chế 30 – 77 mm) Vi khuẩn LAB chúng minh nhứ biện pháp bảo quản sinh h ọc (Milani et al, 1998), chủ yếu ngăn ngừa hư hỏng, kéo dài th ời gian s d ụng c sản phẩm thực phẩm đảm bảo an toàn (Klaenhammer, 1993; Lawe Arendt, 2004) Hai chủng vi khuẩn L Plantarum L Fermentum th ể hi ện ho ạt tính ức chế lại chủng nấm điều kiện in-vitri, nhiên phổ ức chế khác Kết nghiên cứu phù hợp với kết luận Magnusson ctv., 2003 cho chủng vi khuẩn Lactobacillus spp Có kh ả ức ch ế n ấm b ệnh b ởi khả sinh hợp chất kháng nấm chúng như: axit hữu cơ, axit lactic, axetic, axit caproic, axit formic, propionic diaxetyl, hydrogen peoxit, cyclo (L-Phe-Pro), cylo (L-Phe-trans-4-OH-L-Pro) axit phenylaxetic,… Qua kết luận, chủng vi khuẩn L Plantarum có kh ả ức ch ế chủng nấm so với chủng vi khuẩnL Fermentum điều kiện nhi ệt độ bảo 65 quản chôm chôm 130C hỗ trợ cho việc ức chế nấm tốt so với nhiệt đ ộ phòng Vì nhiệt độ 22 – 280C điều kiện phát triển tối ưu nấm gây bệnh chôm chôm (Lisa Keith et al., 2011) 3.6 Nghiên cứu định loại vi sinh vật nội sinh dòng keo tràm đối kháng nấm Ceratocystismanginecans gây bệnh chết héo 3.6.1 Đặc điểm hình thái số đặc điểm sinh học chủng vi sinh vật nội sinh Đặc điểm sinh trưởng chủng vi sinh vật nội sinh: Hai chủng vi khuẩn nội sinh B1 B15 sinh trưởng tốt nh ất tr ị s ố pH từ 5,5 đến 6,0 thang nhiệt độ từ 28-300C Chủng nấm nội sinh F5 sinh trưởng tốt trị số pH từ 6,0 – 6,5 thang nhiệt độ từ 24-260C, sợi nấm màu vàng, hệ sinh trưởng nhanh, có th ể đạt tới 210 µm Đặc điểm hình thái chủng vi sinh vật nội sinh: Chủng vi khuẩn nội sinh B1 có màu vàng nhạt, khuẩn lạc dày, khô, b ề mặt nhăn, mép nhăn Tế bào chủng B1 soi kính hi ển vi ện tử qt có hình que, đầu tế bào tròn, chiều dài trung bình 1,4-1,9µm, chi ều r ộng trung bình 0,6-0,8µm Kết thí nghiệm xác định gram hai chủng vi khuẩn n ội sinh B1 B15 cho thấy chúng thuộc vi khuẩn gram dương Chủng nấm nội sinh F5 có khuẩn lạc màu vàng, s ợi nấm cong queo, phân nhiều nhánh dính Túi bào tử hình cầu, màu vàng đến vàng sẫm Túi bào tử thường mọc từ sợi nấm, đường kính trung bình 31,3-90,5µm Các bào tử thường hình thành nhóm cặp ba, bào tử đơn có hình elip, chiều dài trung bình 13-18µm, chiều rộng trung bình 3-5µm 3.6.2 Kết định danh chủng vi sinh vật nội sinh Bảng 3.26: Kết định danh chủng vi sinh vật nội sinh Ký hiệu chủng B1 B15 F5 Tên khoa học Bacillus Bacillus Blakeslea Trình tự tham chiếu ABQL01000001 ABQL01000001 JN206228.1 66 Độ tương đồng (%) 1005/1005 1399/1400 573/576 Kết nghiên cứu tính kháng bệnh 57 dòng Keo tràm thơng qua vi sinh vật nội sinh xác định dược chủng vi khuẩn nội sinh (B1 B15) m ột chủng nấm nội sinh (F5) có khả ức chế mạnh đối v ới n ấm C manginecans gây bệnh chết héo keo (Nguyễn Minh Chí et al, 2016) Vi ệc phân lập định danh vi sinh vật nội sinh có trong nh ững c ứ khoa học để tuyển chọn giống kháng bệnh ứng dụng phòng tr dịch hại Các chủng vi sinh vật nội sinh định danh kỹ thu ật sinh học phân tử Kết giải mã trình tự gen chủng, so sánh đ ộ tương đồng với trình tự tham chiếu ngân hàng gen tổng h ợp bảng 3.26 Kết bảng 3.26 cho thấy, sau giải mã trình tự gien so sánh v ới ngân hàng gien, chủng vi khuẩn nội B1 B15 có s ố cặp nucleotit t ương đ ồng tương ứng 1005/1005 1399/1400, độ tương đồng tương ứng 100% 99,9% với loài phụ Bacillus subtilissubsp, subtilis, thu ộc loài Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn., họ Bacillaceae, Bacillales, lớp Bacilli, ngành Firmicutes Chủng nấm nội sinh F5 có 573/576 cặp nucleotit tương đồng, độ tương đồng đạt 99,5% với loài BlakesleatrisporaThaxt, thuộc họ Choanephoraceae, b ộ Mucorales, lớp Zygomycetes, ngành nấm tiếp hợp Zygomycota Vi khuẩn Bacillus subtilissubtilis kiểm nghi ệm vè kết lu ận đảm bảo an toàn sinh học Hiện sử dụng phòng tr sinh h ọc đ ối với nấm Eutypalât gây bệnh loét thân,cành nhỏ đối v ới nhi ều vi sinh v ật gây bệnh nhiều loài trồng khác (Ferreira et al, 1998) Nấm Blakesleatrispora xác định an toàn sinh h ọc đối v ới người, động vật đa số loài tr ồng Loài nấm dùng để sản xuất loại phẩm màu thực phẩm nguyên li ệu ph ục v ụ công nghiệp dược carotenonit – tiền chất vitamin A, - m ột ch ất ch ống oxy hóa cực mạnh phòng chống ung thư bệnh tim mạch,… Như vậy, hồn tồn sử dụng vi khuẩn Bacillus subtilissubtilis n ấm Blakesleatrispora công tác quản lý dịch bệnh chết héo n ấm C.manginecans gây hại rừng trồng loại keo Vi ệt Nam thông qua vi ệc s ản xuất phế phẩm sinh học để kích kháng cho trồng 67 3.7 Khảo sát khả đối kháng chủng xạ khuẩn đ ối v ới nấm Pyricularia oryzae gây bện đạo ơn hại lúa 3.7.1 Bán kính vòng vơ khuẩn Kết phân lập 260 chủng xạ khuẩn từ ruộng trồng lúa nông dân Bằng phương pháp đánh giá nhanh khả đối kháng ch ủng xạ khuẩn nấm P oryzae gây bệnh đạo ôn ều ki ện phòng thí nghiệm tìm 26 chủng xạ khuẩn có khả đối kháng đ ể đánh giá thức hiệu đối kháng nấm P oryzae Hiệu đối kháng 26 chủng xạ khuẩn nấm P oryzae điều kiện phòng thí nghi ệm trình bày (Bảng 1) Ở thời điểm ngày sau thí nghiệm (NSTN), tất chủng xạ khuẩn thí nghiệm thể khả ức chế phát tri ển sợi n ấm P oryzae với nhiều mức độ khác Trong đó, chủng ST9, ST1 VL10 th ể khả ức chế nấm gây bệnh đạo ôn mạnh với bán kính vòng vơ khuẩn 9,8 mm; 9,4 mm 9,2 mm Kế đến chủng CT68, CT101, HG38, TV8, ST13 thể khả ức chế nấm P oryzae mạnh với bán kính vòng vơ khuẩn là: 8,8 mm; 7,8 mm; 7,8 mm; 8,8 mm 8,8 mm khác biệt có ý nghĩa so với chủng lại Đến thời ểm NSTN kh ả đ ối kháng chủng xạ khuẩn nấm P oryzae có s ự suy gi ảm Tuy nhiên, chủng xạ khuẩn CT68, TV8 ST9 thể khả ức chế khoanh khuẩn ty nấm gây bệnh đạo ơn mạnh khoảng cách vòng vơ khu ẩn l ần lượt 8,4 mm; 8,4 mm 8,4 mm cao khác bi ệt so v ới ch ủng x khu ẩn lại 68 Đến thời điểm 7NSTN bán kính vòng vơ khuẩn chủng xạ khuẩn tiếp tục giảm Tuy nhiên, chủng xạ khuẩn CT68, TV8 ST9 th ể hi ện kh ả đối kháng mạnh với bán kính vòng vơ khuẩn 8,4 mm; 7,6 mm 8,4 mm khác biệt có ý nghĩa so với ch ủng l ại Đ ến th ời ểm 14 NSTN bán kính vòng vơ khuẩn giảm dần chủng xạ khuẩn CT68 v ẫn trì khả đối kháng cao với nấm P oryzae v ới bán kính vòng vô khu ẩn 7,2 mm Kế đến chủng xạ khuẩn TV8 ST9 với bán kính vòng vô khuẩn l ần lượt là: 6,2 mm 6,4 mm khác biệt ý nghĩa th ống kê so v ới ch ủng l ại (Hình 1) 69 Hình 3.7: bán kính vòng vơ khuẩn( mm) 3chủng xạ khuẩn CT68,TV8,ST9 nấm Pỷiculari oryzae thời điểm 14 ngày sau thí nghiệm Hiệu suất đối kháng Hiệu suất đối kháng chủng xạ khuẩn thí nghiệm trình bày Bảng Thời điểm NSTN hiệu suất đối kháng ch ủng x khu ẩn dao động từ 11,54 – 51,56% Trong đó, chủng xạ khuẩn CT68, ST1, ST13, ST15, ST10 ST9 có hiệu suất đối kháng cao 47,44%; 41,03%; 41,03%; 44,87%; 45,05%; 48,72% 51,65% khác biệt có ý nghĩa so v ới ch ủng lại Đến thời điểm NSTN hiệu suất đối kháng chủng x khu ẩn có khuynh hướng tăng Trong đó, chủng xạ khuẩn CT68; TV8; TV31; ST9; ST13; ST15; ST10 ST16 có hiệu suất đối kháng cao 59,04%; 56,19%; 53,33%; 53,33%; 56,10%; 53,33% 56,10% khác bi ệt có ý nghĩa thống kê so với chủng xạ khuẩn l ại Đến th ời ểm NSTN, hi ệu su ất đối kháng chủng xạ khuẩn tiếp tục tăng ch ủng xạ khu ẩn CT68; HG38; TV8; ST9 có hiệu suất đối kháng cao 68,18%; 62,12%; 65,15% 64,39% khác biệt so với chủng l ại Đ ến th ời ểm 14 NSTN chủng xạ khuẩn CT68; HG38; TV8; ST9 có hiệu suất đối kháng cao l ần lượt 83,55%; 77,78%; 81,33% 77,78% khác biệt so với ch ủng l ại Như vậy, dựa vào kết Bảng cho th chủng x khu ẩn CT68, TV8 ST9 có bán kính vòng vơ khuẩn hiệu suất đối kháng cao kéo dài đ ến th ời điểm 14 NSTN Hiệu chủng xạ khuẩn tương tự k ết qu ả nghiên cứu trước Ningthoujam et al (2009) đánh giá kh ả đ ối kháng chủng xạ khuẩn Streptomyces sp nấm gây bệnh đạo ôn v ới hi ệu suất đối kháng đạt từ 44,2-60,5% Kết nghiên cứu Đinh Ngọc Trúc 70 Trần Vũ Phến (2014) cho thấy khả đối kháng ch ủng x khu ẩn thu từ ruộng lúa tỉnh Hậu Giang nấm gây bệnh đạo ơn với bán kính vòng vơ khuẩn đạt từ 6,7-8,4 mm 3.7.2 Khảo sát khả phân giải chitin chủng xạ khuẩn có triển vọng Kết khảo sát khả phân giải chitin chủng xạ khuẩn tri ển vọng trình bày (Bảng 3) cho thấy, tất chủng xạ khuẩn kh ảo sát thể khả phân giải chitin môi trường chitin agar Ở thời điểm NSTN, chủng xạ khuẩn CT68 có bán kính vòng phân gi ải cao 10,10 mm kết đến chủng xạ khuẩn TV8 ST9 có bán kính vòng phân giải 9,20 mm 9,30 mm khác bi ệt có ý nghĩa so v ới ch ủng xạ khuẩn lại Thời điểm NSTN, bán kính vòng phân gi ải chitin tăng lên rõ rệt Trong đó, chủng xạ khuẩn CT68 có bán kính phân gi ải cao nh ất 12,60 mm 71 chủng xạ khuẩn TV8 ST9 với bán kính vòng phân giải 11,20 mm 12,00 mm khác biệt có ý nghĩa so với ch ủng x khu ẩn l ại Ở thời điểm NSTN, chủng xạ khuẩn ST12 cho kết cao nhất, bán kính vòng phân giải 18,80 mm Kế đến chủng xạ khuẩn TV8 ST9 v ới bán kính vòng phân giải 17,60 mm 18,40 mm khác bi ệt có ý nghĩa thống kê so với chủng xạ khuẩn lại (Hình 2) Như vậy, qua thời điểm khảo sát chủng xạ khuẩn CT68, TV8 ST9 có bán kính vòng phân giải chitin cao khác bi ệt có ý nghĩa so v ới ch ủng x khuẩn thí nghiệm Kết thí nghiệm tương tự kết nghiên cứu trước ch ẳng hạn theo Đinh Ngọc Trúc (2011), khảo sát khả phân gi ải chitin c chủng xạ khuẩn phân lập từ đất trồng rau màu ĐBSCL Kết cho th tất chủng xạ khuẩn khảo sát có khả phân gi ải chitin Taechowisan et al (2003) khảo sát khả phân giải chitin 307 ch ủng x khuẩn mơi trường chitin agar, có 14 chủng xạ khuẩn thể khả phân giải chitin thời điểm NSTN với bán kính vòng phân gi ải l ớn h ơn5 mm 72 Hình 3.8 Khả phân giải chitin chủng xạ khuẩn thời ểm ngày sau thí nghiệm 73 74 KẾT LUẬN, TỒN TẠI, KIẾN NGHỊ Kết luận Qua nghiên cứu tìm hiểu đề tài “ gi ải pháp phòng ng ừa ều tr ị bệnh VSV gây ra”, nhóm tiến hành tìm hiểu, nghiên cứu sơ lược hình thái, cấu tạo, phương thức lan truyền VSV gây bệnh Đã tìm hi ểu s lược số phương pháp phòng trừ bệnh cho tr ồng Bên cạnh đó, nhóm thấy vai trò VSV nhiều lĩnh vực cu ộc s ống nh ư: công nghiệp, nông nghiệp, chế biến bảo quản lương thực thực phẩm, y học bảo vệ môi trường Đặc biệt, lĩnh vực nông nghiệp, Việt Nam hướng tới phát triển nông nghiệp bền vững Từ kết đạt nghiên cứu ta biết vai trò to lớn VSV từ ứng dụng, phục v ụ đắc lực cho ngành nông nghiệp chủ trương, định hướng trước mắt lâu dài n ước ta, nước khác giới Từ đó, ứng dụng VSV ngày sử dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực khác Kiến nghị Khi nghiên cứu cánh phòng ngừa điều trị bệnh VSV gây chư hồn chỉnh, nghiên cứu tiếp tục với hướng trước Đưa ứng dụng VSV bệnh hại nhiều loại khác t tìm loại phù hợp với ứng dụng Bệnh đốm đen xảy bưởi Phúc Trạch diễn lúc nh ỏ, th ời gian ủ bệnh dài đến gần đạt kích thước tối đa xuất tri ệu chứng bệnh nên khó phòng thuốc hóa học điều trị được, nên cần có nhiều nghiên cứu bệnh đốm đen bưởi Phúc Trạch để tìm thu ốc sinh học hạn chế chi phí khơng gây nhiểm mơi trường Cần nghiên cứu áp dụng nhiều loại chất hữu nhiều loại đất khác để xác định hiệu chế phẩm nấm Trichoderma spp, đ ối v ới bệnh vàng thối rể Tiếp tục ứng dụng chất Presim Triobio để bảo quản chôm chôm sau thu hoạch nhầm hạn chế chủng nấm gây thối Nên nghiên cứu phát triển chế phẩm vi khuẩn Lactic để ứng dụng bảo quản chôm chôm sau thu hoạch 75 76 ... - TIỂU LUẬN MÔN VI SINH VẬT CÁC GIẢI PHÁP PHÒNG NGỪA VÀ ĐIỀU TRỊ BỆNH DO VI SINH VẬT GÂY RA GVHD: SVTH: Đồng Nai, ngày 20 tháng năm 2018 MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU Vi t Nam nói... tìm hi ểu nghiên c ứu v ề đ ề tài “ Phương pháp phòng ngừa điều trị bệnh VSV gây ra Trong đề tài trình bày số giải pháp phòng ngừa điều trị bệnh VSV gây Hi v ọng đề tài phần cung cấp thêm thông... thiệu chung vi sinh vật 1.1.1 Khái niệm Vi sinh vật thể nhỏ bé, nhìn rỏ chúng kính hi ển vi Phần lớn vi sinh vật sinh vật đơn bào nhân sơ hay nhân th ực, m ột s ố tập hợp đơn bào Vi sinh vật gồm