BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ……… VŨ NGỌC LAN NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG IN VITRO KHÔNG SỬ DỤNG CHẤT ðIỀU TIẾT SINH TRƯỞNG VÀ MỘT SỐ BIỆN PHÁP KỸ THUẬT NI TRỒNG HAI LỒI LAN BẢN ðỊA (DENDROBIUM NOBILE LINDL., DENDROBIUM CHRYSANTHUM LINDL.) TẠI HÀ NỘI LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Trồng trọt Mã số : 62 62 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN THỊ LÝ ANH TS NGUYỄN VĂN GIANG HÀ NỘI - 2012 i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, hình ảnh, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Các tài liệu trích dẫn rõ nguồn gốc giúp ñỡ ñã ñược cám ơn Tác giả Vũ Ngọc Lan ii LỜI CẢM ƠN Trước hết, tơi xin trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh TS Nguyễn Văn Giang, thầy tận tình dìu dắt, hướng dẫn tơi q trình thực đề tài Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy cô giáo tồn thể đồng nghiệp Viện Sinh học Nơng nghiệp, Bộ môn Sinh lý Thực Vật, Khoa Nông học, Khoa Công nghệ thực phẩm, Khoa Công nghệ Sinh học, Viện ðào tạo Sau đại học, Phòng Khoa học Hợp tác Quốc tế, Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ban lãnh đạo chuyên viên Vụ Khoa học Công nghệ Môi trường Bộ Giáo dục ðào tạo ñã tạo ñiều kiện, hướng dẫn tận tình để tơi thực 01 đề tài trọng điểm cấp Bộ, nguồn kinh phí chủ yếu để tơi đủ khả triển khai nghiên cứu thu ñược kết luận văn Tơi xin bày tỏ tỏ lòng biết ơn tình cảm u thương tới bơ mẹ, chồng, anh chị em bạn bè cho tơi động lực tạo điều kiện trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày tháng Tác giả luận án Vũ Ngọc Lan năm 2011 iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt viii Danh mục bảng ix Danh mục hình xii MỞ ðẦU 16 Tính cấp thiết đề tài 16 Mục tiêu yêu cầu ñề tài 18 Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài 18 ðối tượng phạm vị nghiên cứu đề tài 19 ðóng góp luận án học thuật lý luận 19 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 21 Giới thiệu chi lan Hồng Thảo (Dendrobium) hai lồi lan địa Dendrobium nobile Lindl (D.nobile) Dendrobium chrysanthum Lindl (D.chrysanthum) 21 1.1.1 Nguồn gốc phân bố chi Hoàng Thảo (Dendrobium) 21 1.1.2 Phân bố chi lan Hoàng Thảo (Dendrobium) Việt Nam 21 1.1.3 ðặc ñiểm thực vật học chi lan Hoàng Thảo (Dendrobium) 24 1.1.4 Một số đặc điểm lồi lan địa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl 1.1.5 Giá trị sử dụng thực trạng khai thác số loài lan Hồng Thảo địa miền Bắc Việt Nam 1.2 Cơ sở khoa học kỹ thuật nuôi cấy nhân giống ñề tài 1.2.1 27 Kỹ thuật nhân giống nuôi cấy mô tế bào thực vật 29 32 32 iv 1.2.2 Nhân giống bioreactor 35 1.2.3 Môi trường dinh dưỡng nuôi cấy in vitro 38 1.3 Các nghiên cứu nhân giống in vitro lan 42 1.3.1 Nghiên cứu lựa chọn mẫu nuôi cấy 43 1.3.2 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 44 1.3.3 Ảnh hưởng nguồn bon hữu 45 1.3.4 Ảnh hưởng hỗn hợp chất hữu tự nhiên 46 1.3.5 Ảnh hưởng phương thức nuôi cấy 47 1.3.6 Nhân giống in vitro Dendrobium nobile Dendrobium chrysanthum 1.4 Các nghiên cứu nuôi trồng lan Hồng Thảo 1.4.1 Các điều kiện để trồng lan Dendrobium 1.4.2 Nghiên cứu nuôi trồng lan Dendrobium sau nuôi cấy mô 51 53 53 57 Chương VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 60 2.1 Vật liệu nghiên cứu 60 2.2 Nội dung nghiên cứu 61 2.3 Phương pháp nghiên cứu 62 2.3.1 Bố trí thí nghiệm 62 2.3.2 Các tiêu theo dõi phương pháp ñánh giá 72 2.3.3 ðiều kiện thí nghiệm 73 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 73 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 74 3.1 Xác ñịnh lựa chọn phương pháp khử trùng, quan ni cấy để tạo nguồn vật liệu in vitro với hai lồi lan D.nobile D.chrysanthum 3.1.1 74 Xác định hiệu khử trùng ñối với chồi mầm H2O2 2% HgCl2 0,1% 74 v 3.1.2 3.2 Xác ñịnh phương pháp khử trùng ñối với lan 76 Nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố ñến khả nhân nhanh, tạo hồn chỉnh in vitro hai lồi lan D.nobile D.chrysanthum theo phương pháp ni cấy mô truyền thống 3.2.1 Ảnh hưởng môi trường đến khả nhân nhanh lồi lan D.nobile D.chrysanthum 3.2.2 89 Ảnh hưởng hàm lượng khoai tây ñến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) loài lan rừng D.nobile 3.2.5 84 Ảnh hưởng hợp chất hữu tự nhiên ñến khả nhân nhanh loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.2.4 78 Ảnh hưởng hàm lượng saccaroza ñến khả nhân nhanh loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.2.3 78 92 Ảnh hưởng hàm lượng chuối chín ñến khả nhân nhanh cụm chồi loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.2.6 Ảnh hưởng mơi trường đến sinh trưởng chồi lan với loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.2.7 100 Nghiên cứu ảnh hưởng than hoạt tính (THT) đến khả sinh rễ chồi loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.3 99 Nghiên cứu ảnh hưởng cường ñộ ánh sáng tới khả sinh trưởng chồi lan D.nobile D.chrysanthum 3.2.8 96 102 Nghiên cứu khả nhân nhanh in vitro hai lồi lan D.nobile D.chrysanthum theo phương pháp nuôi cấy cải tiến 3.3.1 105 Nghiên cứu ảnh hưởng phương thức nuôi cấy sử dụng nút bơng đến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) lồi lan D.nobile 105 vi 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng phương thức nuôi cấy sử dụng nút màng thống khí đến khả nhân nhanh protocorm lồi lan D.nobile 3.3.3 106 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng saccaroza ñến trình nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) ni cấy đặc thống khí lồi lan D.nobile 3.3.4 107 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng saccaroza ñến trình nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) ni cấy lỏng lắc thống khí lồi lan D.nobile 3.3.5 108 Nghiên cứu ảnh hưởng phương thức nuôi cấy ñến khả nhân nhanh cụm chồi ñối với lồi lan D.chrysanthum 3.4 110 ðặc điểm sinh trưởng in vitro hai loài lan D.nobile D.chrysanthum vườn ươm, vườn sản xuất 3.4.1 111 Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ ñến tỷ lệ sống chất lượng vườn ươm 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum 111 Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể ñến tỷ lệ sống chất lượng vườn ươm 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.4.3 112 Nghiên cứu ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng ñến chiều cao, số in vitro 02 loài lan (D.nobile D.chrysanthum) vườn ươm 3.5 114 Nghiên cứu ảnh hưởng số tác nhân giai đoạn ni trồng thu thập hai loài lan D.nobile D.chrysanthum 121 vii 3.5.1 Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể trồng ñến sinh trưởng loài lan rừng thu thập D.nobile D.chrysanthum vườn sản xuất 3.5.2 121 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua ñến sinh trưởng 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 126 137 Kết luận 137 ðề nghị 139 Các cơng trình cơng bố có liên quan ñến luận án 140 Tài liệu tham khảo 141 Phụ lục 154 viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BAP Benzyl amino purin D.chrysanthum Dendrobium chrysanthum Lindl CV(%) Hệ số biến ñộng (Correlation of Variants) ðC ðối chứng IAA Indol acetic acid IBA Indol butyric axit α NAA α Naphtyl acetic axit KC KnudsonC, 1965 Kn Kinetin LSD Sai khác tối thiểu có ý nghĩa P = 0.05 (Least Significant Difference) MS Murashige-Skoog, 1962 D.nobile Dendrobium nobile Lindl RE Robert Ernst, 1979 THT Than hoạt tính VW Vacin and Went, 1949 ix DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 1.1 ðặc điểm hai lồi lan nghiên cứu 1.2 Thực trạng phân bố, giá trị sử dụng làm dược liệu chi Hoàng Thảo (Dendrobium) phía Bắc Việt Nam 1.3 75 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng ñến tỷ lệ mẫu sống nẩy mầm 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.4 74 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng ñến khả sống chồi mầm lan D.chrysanthum 3.3 43 Ảnh hưởng phương pháp khử trùng ñến khả sống chồi mầm lan D.nobile 3.2 32 Một số loại mô cấy kết đạt nhân giống vơ tính in vitro số lồi Dendrobium 3.1 30 Phân hạng mức độ bị đe dọa số lồi chi lan Hoàng thảo Việt Nam 1.4 28 76 Ảnh hưởng mơi trường đến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) loài lan D.nobile (Sau tuần nuôi cấy) 3.5 Ảnh hưởng mơi trường đến khả nhân nhanh cụm chồi 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.6 79 81 Ảnh hưởng hàm lượng saccaroza ñến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) loài lan rừng D.nobile (Sau tuần nuôi cấy) 3.7 85 Ảnh hưởng hàm lượng saccaroza ñến khả nhân nhanh cụm chồi 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum 87 x 3.8 Ảnh hưởng dịch nghiền hợp chất hữu tự nhiên ñến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) loài lan rừng D.nobile (Sau tuần nuôi cấy) 3.9 Ảnh hưởng hàm lượng khoai tây ñến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) loài lan D.nobile (Sau tuần nuôi cấy) 3.10 90 93 Ảnh hưởng dịch nghiền hợp chất hữu tự nhiên đến khả nhân nhanh cụm chồi 02 lồi lan D.nobile D.chrysanthum 3.11 Ảnh hưởng hàm lượng chuối chín đến khả nhân nhanh cụm chồi 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.12 95 97 Ảnh hưởng loại mơi trường đến sinh trưởng chồi lan 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum (Sau tuần nuôi cấy) 3.13 Ảnh hưởng cường ñộ chiếu sáng ñến sinh trưởng chồi 02 lồi lan D.nobile D.chrysanthum (Sau 30 ngày ni cấy) 3.14 101 Ảnh hưởng than hoạt tính đến khả tạo rễ chồi 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum 3.15 100 103 Ảnh hưởng phương thức nuôi cấy ñến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) lồi lan D.nobile (Sau tuần ni cấy) 3.16 105 Ảnh hưởng phương thức ni cấy đến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) ñối với lồi lan D.nobile (Sau tuần ni cấy) 3.17 107 Ảnh hưởng hàm lượng ñường saccaroza ñến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) loài lan D.nobile ni cấy đặc thống khí (Sau tuần ni cấy) 107 xi 3.18 Ảnh hưởng hàm lượng saccaroza ñến khả nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) lồi lan D.nobile ni cấy lỏng lắc thống khí (Sau tuần nuôi cấy) 3.19 Ảnh hưởng phương thức ni cấy đến khả nhân nhanh cụm chồi lồi lan D.chrysanthum (Sau tuần ni cấy) 3.20 109 110 Ảnh hưởng thời vụ trồng ñến tỷ lệ sống hình thái in vitro ngồi vườn ươm 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum (Sau 01 tháng nuôi trồng) 3.21 Ảnh hưởng giá thể ñến tỷ lệ sống hình thái in vitro 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum vườn ươm 3.22 111 112 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng ñến ñộng thái tăng chiều cao số in vitro 02 loài lan D.nobile D.chrysanthum vườn ươm 3.23 Ảnh hưởng giá thể ñến ñộng thái tăng chiều dài cành, ñường kính thân số chồi loài lan rừng thu thập D.nobile 3.24 115 121 Ảnh hưởng giá thể ñến ñộng thái tăng chiều dài cành, đường kính thân số chồi loài lan rừng thu thập D.chrysanthum (Sau tháng nuôi trồng) 3.25 124 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua ñến ñộng thái tăng trưởng chiều dài cành, đường kính thân, số lá, số chồi loài lan rừng thu thập D.nobile 3.26 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua ñến tỷ lệ hoa kích thước hoa lồi lan rừng thu thập D.nobile 3.27 127 131 Ảnh hưởng loại chế phẩm dinh dưỡng ñến ñộng thái tăng chiều cao, đường kính thân, số số chồi TB/cây loài lan rừng thu thập D.chrysanthum 132 xii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Cấu tạo hoa D.nobile Lindl 27 1.2 Cấu tạo hoa D.chrysanthum Lindl 27 2.1 Loài lan D.nobile Lindl 60 2.2 Loài lan D.chrysanthum Lindl 60 3.1 Hình thái chồi mầm D.nobile sau khử trùng 75 3.2 Gieo hạt lan rừng D.nobile (Sau tuần nuôi cấy) 77 3.3 Gieo hạt lan rừng D.chrysanthum 77 3.4 Ảnh hưởng mơi trường đến ñộng thái tăng ñường kính cụm thể sinh chồi lồi lan rừng D.nobile 3.5 Ảnh hưởng mơi trường đến động thái nhân nhanh cụm chồi lồi lan rừng D.nobile 3.6 88 Ảnh hưởng hàm lượng khoai tây đến động thái tăng đường kính cụm thể sinh chồi loài lan rừng D.nobile 3.12 88 Ảnh hưởng hàm lượng saccaroza đến động thái tăng chồi lồi lan rừng D.chrysanthum 3.11 85 Ảnh hưởng hàm lượng saccaroza đến động thái tăng chồi lồi lan rừng D.nobile 3.10 83 Ảnh hưởng hàm lượng saccaroza ñến ñộng thái tăng đường kính cụm thể sinh chồi lồi lan rừng D.nobile 3.9 82 Minh họa môi trường đến nhân nhanh cụm chồi lồi lan D.nobile 3.8 82 Ảnh hưởng mơi trường đến động thái nhân nhanh cụm chồi loài lan rừng D.chrysanthum 3.7 80 93 Ảnh hưởng dịch nghiền hợp chất hữu tự nhiên đến động thái tăng chồi lồi lan rừng D.nobile 95 xiii 3.13 Ảnh hưởng dịch nghiền hợp chất hữu tự nhiên ñến ñộng thái tăng chồi loài lan rừng D.chrysanthum 3.14 Ảnh hưởng hàm lượng chuối chín đến động thái nhân nhanh cụm chồi loài lan rừng D.nobile 3.15 101 Ảnh hưởng hàm lượng THT ñến khả rễ lan D.nobile 3.18 98 Ảnh hưởng cường ñộ chiếu sáng ñến khả sinh trưởng chồi lan D.nobile 3.17 98 Ảnh hưởng hàm lượng chuối chín đến ñộng thái nhân nhanh cụm chồi loài lan rừng D.chrysanthum 3.16 96 104 Nuôi cấy lỏng lắc nhân nhanh thể sinh chồi (protocorm) lồi lan D.nobile 105 3.19 Ni cấy thống khí mơi trường đặc với lồi D.nobile 108 3.20 Ni cấy lỏng lắc thống khí với lồi D.nobile 109 3.21 Nhân nhanh cụm chồi loài D.chrysanthum nuôi cấy bioreactor 111 3.22 Cây in vitro vườn ươm, vườn sản xuất 113 3.23 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng ñến ñộng thái tăng chiều cao in vitro loài lan rừng D.nobile 3.24 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng ñến ñộng thái tăng chiều cao in vitro loài lan rừng D.chrysanthum 3.25 3.27 116 Ảnh hưởng chế phẩm sinh dưỡng ñến ñộng thái tăng số in vitro loài lan rừng D.nobile 3.26 115 116 Ảnh hưởng chế phẩm sinh dưỡng ñến ñộng thái tăng số in vitro loài lan rừng D.chrysanthum 117 Cây in vitro vườn ươm 117 xiv 3.28 Ảnh hưởng giá thể ñến ñộng thái tăng chiều dài cành loài lan rừng thu thập D.nobile 3.29 Ảnh hưởng giá thể ñến ñộng thái tăng đường kính thân lồi lan rừng thu thập D.nobile 3.30 122 122 Ảnh hưởng giá thể ñến ñộng thái tăng số chồi loài lan rừng thu thập D.nobile 123 3.31 Cây D.nobile trồng giá thể than củi vườn sản xuất 123 3.32 Ảnh hưởng giá thể ñến ñộng thái tăng chiều dài cành loài lan rừng thu thập D.chrysanthum 3.33 Ảnh hưởng giá thể đến động thái tăng đường kính thân loài lan rừng thu thập D.chrysanthum 3.34 131 Ảnh hưởng loại chế phẩm dinh dưỡng ñến ñộng thái tăng chiều dài cành loài D.chrysanthum thu thập 3.41 129 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua đến đường kính, màu sắc hoa loài D.nobile 3.40 129 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua ñến ñộng thái tăng số chồi loài lan rừng thu thập D.nobile 3.39 128 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua ñến ñộng thái tăng số loài lan rừng thu thập D.nobile 3.38 128 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua đến động thái tăng đường kính thân loài lan rừng thu thập D.nobile 3.37 126 Ảnh hưởng chế phẩm dinh dưỡng qua ñến ñộng thái tăng chiều dài cành loài lan rừng thu thập D.nobile 3.36 125 Ảnh hưởng giá thể đến động thái tăng số chồi lồi lan rừng thu thập D.chrysanthum 3.35 125 133 Ảnh hưởng loại chế phẩm dinh dưỡng ñến ñộng thái tăng đường kính thân lồi D.chrysanthum thu thập 133 xv 3.42 Ảnh hưởng loại chế phẩm dinh dưỡng ñến ñộng thái tăng số loài D.chrysanthum thu thập 3.43 134 Ảnh hưởng loại chế phẩm dinh dưỡng đến động thái tăng số chồi lồi D.chrysanthum thu thập 134 16 MỞ ðẦU Tính cấp thiết đề tài Trong giới lồi hoa nói hoa lan lồi hoa ñẹp quyến rũ mê hồn mầu sắc hương thơm, ñặc biệt ñường nét hoa thật cầu kỳ, sắc sảo, thêm vào hoa lan có ñặc tính bền tươi lâu (Trần Hợp, 1989) [9] (Nguyễn Nghĩa Thìn, 2006) [46] Ngồi giá trị làm cảnh trang trí, hoa lan sử dụng với nhiều mục đích khác như: Dùng làm thực phẩm (giống Orchis), rau xanh (giống Anoetochilus), trà uống (lồi Jumellea fragrans), hương liệu (Vannila plannifolia) đặc biệt lan dùng làm dược liệu, có tác dụng chữa bệnh số loài thuộc chi Orchis, Platanthera, Gymnadenda, Dactylorhiza đặc biệt chi Hồng thảo (Dendrobium nobile, Caulis Dendrobium, Dendrobium loddgesii, Dendrobium chrysanthum, Dendrobium fimbriatum, Dendrobium nobile Lindi), (Lê Trần ðức, 1977) [7], (ðỗ Huy Bích, 2004) [3] (Dương ðức Huyến, 2007) [17] Hoàng Thảo chi lớn của họ Lan (Orchidaceae) Theo A Takhajan (1966) chi Hoàng Thảo giới có khoảng 1400 lồi, chủ yếu phân bố lục địa ðơng Nam Á đảo thuộc Philippin, Malaixia, Inđonêxia, Niu Ghinê, ðơng Bắc Ơxtrâylia Ở Việt Nam biết 107 loài thứ thuộc chi Hoàng Thảo phân bố chủ yếu vùng núi suốt từ Bắc vào Nam số ñảo ven biển (ðào Thị Thanh Vân, ðặng Thị Tố Nga, 2008) [55] Tuy nhiên, trình phát triển kinh tế xã hội, nguyên nhân khác nhau, nhiều lồi Hồng Thảo nước ta bị tuyệt chủng bị ñe dọa tuyệt chủng (Nguyễn Xuân Linh, 2002) [23] Năm 2004, số loài lan thuộc chi lan Hồng Thảo có danh lục ðỏ “Sách ñỏ Việt Nam” như: Kim ðiệp (Dendrobium fimbriatum Hook 1823), Ngọc Vạn Vàng (Dendrobium chrysanthum Lindl 1830), Thuỷ Tiên Hường (Dendrobium amabile (Lour.) 17 O’Brien, 1909), Hạc Vĩ (Dendrobium aphyllum (Roxb.) C Fisch 1928), Hoàng Thảo hoa trắng - vàng (Dendrobium nobile var albolu-teum) (Huyen & Aver 1989)[67], (Phan Thúc Huân, 1989) [14] Dương ðức Huyến, 2007) [17] Do vừa có giá trị làm hoa cảnh vừa làm dược liệu nên hai lồi lan địa vùng núi trung du phía Bắc Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindl.) Ngọc vạn vàng (Dendrobium chrysanthum Lindl.) thuộc chi Hồng thảo bị khai thác kiệt quệ với số lượng hàng trăm nghìn giò khai thác/năm ðặc biệt, hai lồi lan rừng xuất tiểu ngạch sang Trung Quốc với giá cao nên tốc ñộ khai thác ngày tăng dẫn ñến nguy tuyệt chủng tự nhiên Như vậy, ñể bảo tồn phát triển hai lồi lan quý nhằm phục vụ ñược nhu cầu tiêu dùng khơng đường khác phải tiến hành nhân giống nuôi trồng chúng quy mô lớn (Trần Hợp, 1989) [11], (Nguyễn Tiến Bân, 1990a) [2] Dương ðức Huyến, 2007) [17] Hiện nay, giới Việt nam, phương pháp nuôi cấy mơ phương pháp nhân giống lan cho hệ số nhân cao, số lượng giống lớn giá thành giống hợp lý (Lê Văn Hòa, 2008) [9] (Trần Hợp, 1990) [12] Tuy nhiên, cho ñến nước ta, nghiên cứu nhân giống ni trồng lan Hồng thảo chủ yếu giống lan lai nhập nội nhằm sản xuất hoa cắt cành hay trồng chậu làm cảnh Việc nhân giống kỹ thuật ni cấy mơ đặc biệt sử dụng ni cấy mơ cải tiến hai lồi lan ñịa: Dendrobium nobile Lindl (D.nobile) Dendrobium chrysanthum Lindl (D.chrysanthum) chưa có đề tài nghiên cứu đề cập đến (Trần Văn Huân, Văn Tích Lượm, 2007) [16] Xuất phát từ vấn đề nêu trên, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu nhân giống in vitro khơng sử dụng chất ñiều tiết sinh trưởng số biện pháp kỹ thuật ni trồng hai lồi lan ñịa (Dendrobium nobile Lindl., Dendrobium chrysanthum Lindl.) Hà Nội” với mong muốn góp 18 phần làm sở cho việc tạo nguồn giống khơng chứa chất ñiều tiết sinh trưởng thực vật tổng hợp phục vụ cho sản xuất nguyên liệu dược Mục tiêu yêu cầu ñề tài 2.1 Mục tiêu ñề tài Xây dựng quy trình nhân giống in vitro khơng sử dụng chất ñiều tiết sinh trưởng thực vật tổng hợp để góp phần làm sở trì, phát triển nguồn gen đồng thời thúc đẩy việc ni trồng lan rừng ñịa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl nghề sản xuất nguyên liệu dược mang lại hiệu kinh tế 2.2 Yêu cầu ñề tài + Xác ñịnh ñược phương pháp thích hợp ñể tạo nguồn vật liệu in vitro ñối với loài lan ñịa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl + Xác ñịnh ñược bước kỹ thuật nhân nhanh in vitro theo hướng khơng sử dụng chất điều tiết sinh trưởng tổng hợp lồi lan địa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl + Xác ñịnh ñược số khâu kỹ thuật cải tiến nhân giống lồi lan địa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl để có hệ số nhân giống cao chất lượng in vitro tốt + Xác ñịnh ñược số khâu kỹ thuật ni trồng lồi lan ñịa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl giai ñoạn vườn ươm Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học - Kết đề tài sử dụng làm tài liệu tham khảo cho việc nghiên cứu, giảng dạy hoa lan nói chung chi lan Hồng Thảo nói riêng - Kết nghiên cứu đề tài dẫn liệu khoa học có giá trị khả nhân giống in vitro không sử dụng chất ñiều tiết sinh trưởng 19 dẫn ảnh hưởng giá thể, chế phẩm dinh dưỡng ñến sinh trưởng hai lồi lan địa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl thuộc chi Hồng Thảo có nguy tuyệt chủng Việt Nam 3.2 Ý nghĩa thực tiễn - Góp phần bảo tồn phát triển lồi lan rừng địa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl - ðề tài ñã ñề xuất ñược quy trình nhân giống in vitro khơng sử dụng chất điều tiết sinh trưởng bước ñầu ñưa kỹ thuật chăm sóc thu thập lồi lan rừng ñịa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl Gia Lâm - Hà Nội ðối tượng phạm vị nghiên cứu ñề tài 4.1 ðối tượng nghiên cứu đề tài - Hai lồi lan rừng địa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl thuộc chi Hoàng thảo - Các môi trường nuôi cấy Vacin and Went, 1949 (VW); KnudsonC, 1965 (KC), Murashige-Skoog, 1962 (MS), Robert Ernst, 1979 (RE) - Dịch chiết hữu từ loại củ quả: khoai tây, cà rốt, táo, chuối chín - Các yếu tố ảnh hưởng đến nhân nhanh in vitro: saccaroza, than hoạt tính, - Hệ thống bioreactor hãng Sartorius sản xuất, mã hiệu máy Biostat Bplus tích tối đa 10 lít - Các giá thể: Bột dừa, xơ dừa, than củi, gỗ nhãn, dương xỉ - Các chế phẩm dinh dưỡng: Antonic, Yogen, Komix, Growmore, ðầu trâu 4.2 Phạm vi nghiên cứu ñề tài Các nghiên cứu ñược tiến hành Viện Sinh học Nông nghiệp - Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội; Học viện Hậu Cần - Ngọc Thụy - Long Biên - Hà Nội ðóng góp luận án học thuật lý luận - ðã xây dựng quy trình nhân giống in vitro cho hai loài lan ... nhân giống loài lan ñịa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl ñể có hệ số nhân giống cao chất lượng in vitro tốt + Xác ñịnh ñược số khâu kỹ thuật ni trồng lồi lan địa Dendrobium nobile. .. nhanh in vitro theo hướng khơng sử dụng chất điều tiết sinh trưởng tổng hợp ñối với loài lan ñịa Dendrobium nobile Lindl Dendrobium chrysanthum Lindl + Xác ñịnh ñược số khâu kỹ thuật cải tiến nhân. .. trưởng số biện pháp kỹ thuật ni trồng hai lồi lan địa (Dendrobium nobile Lindl. , Dendrobium chrysanthum Lindl. ) Hà Nội với mong muốn góp 18 phần làm sở cho việc tạo ñược nguồn giống khơng chứa chất