BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN ĐẶNG THỊ MAI LAN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ ĐỘC TỐ ĐƢỜNG RUỘT (ENTEROTOXIN) CỦA VI KHUẨN Listeria, Salmonella spp., Staphylococcus aureus Ô NHIỄM TRONG THỊT LỢN Ở MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y Thái Nguyên, năm 2017 BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN ĐẶNG THỊ MAI LAN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ ĐỘC TỐ ĐƢỜNG RUỘT (ENTEROTOXIN) CỦA VI KHUẨN Listeria, Salmonella spp., Staphylococcus aureus Ô NHIỄM TRONG THỊT LỢN Ở MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC Chuyên ngành: Ký sinh trùng & VSV học thú y Mã số: 62.64.01.04 LUẬN ÁN TIẾN SĨ THÚ Y Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Đặng Xuân Bình PGS.TS Nghiêm Ngọc Minh Thái Nguyên, năm 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi thực với giúp đỡ của: - Ths Phạm Thị Phương Lan anh, chị, em Bộ môn Công nghệ vi sinh - Viện Khoa học sống - Đại học Thái Nguyên - Ths Nguyễn Thị Hoài Thu tồn thể anh, chị, em phòng Cơng nghệ sinh học mơi trường phòng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ gen - Viện Công nghệ sinh học Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận án rõ nguồn gốc Thái Nguyên, ngày tháng Tác giả Đặng Thị Mai Lan năm 2017 ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án này, với nỗ lực, cố gắng thân, xin đặc biệt bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy: PGS.TS Đặng Xuân Bình PGS.TS Nghiêm Ngọc Minh, người trực tiếp hướng dẫn truyền đạt nhiều kinh nghiệm q báu cho tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn tới Ths Phạm Thị Phương Lan anh, chị, em Bộ môn Công nghệ vi sinh - Viện Khoa học sống - Đại học Thái Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện cho hồn thành luận án Tơi xin gửi lời cảm ơn tới Ths Nguyễn Thị Hoài Thu tồn thể anh, chị, em phòng Cơng nghệ sinh học mơi trường phòng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ gen - Viện Công nghệ sinh học tận tình giúp đỡ tạo điều kiện tơi q trình nghiên cứu hồn thiện luận án Nhân dịp xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường, Ban Chủ nhiệm Khoa Chăn nuôi Thú y, thầy cô, anh chị em đồng nghiệp khoa Chăn nuôi Thú y, Lãnh đạo Chi cục Thú y, Trạm thú y tỉnh Thái Nguyên, Bắc Giang, Hà Tây - Hà Nội, Vĩnh Phúc ln tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành luận án Lời sau cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới người bạn, người thân gia đình bố, mẹ kịp thời động viên tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận án Xin cảm ơn người chồng thân yêu giúp đỡ, chia sẻ với suốt năm tháng qua Xin trân trọng cảm ơn tất giúp đỡ quý báu Thái Nguyên, ngày tháng năm 2017 Đặng Thị Mai Lan iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU x DANH MỤC CÁC HÌNH xii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Điểm đề tài Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình ngộ độc thực phẩm nhiễm vi khuẩn Listeria, Salmonella spp Staphylococcus aureus giới Việt Nam 1.1.1 Tình hình ngộ độc thực phẩm nhiễm vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus giới 1.1.2 Tình hình ngộ độc thực phẩm nhiễm vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus Việt Nam 1.2 Ngộ độc thực phẩm nhiễm Listeria, Salmonella spp., S aureus nguyên nhân gây nhiễm khuẩn vào thịt lợn 1.2.1 Khái niệm ngộ độc phân loại tình trạng ngộ độc 1.2.2 Ngộ độc thực phẩm Listeria, Salmonella spp S aureus 1.2.3 Nguyên nhân gây nhiễm khuẩn vào thịt 11 1.3 Đặc điểm sinh vật, hóa học số vi khuẩn gây ô nhiễm thịt lợn 14 1.3.1 Sơ đồ phân lập vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus 14 1.3.2 Đặc điểm sinh vật, hóa học vi khuẩn Listeria 18 1.3.3 Đặc điểm sinh vật, hóa học vi khuẩn Salmonella spp 20 1.3.4 Đặc điểm sinh vật, hóa học vi khuẩn S aureus 25 iv 1.4 Các yếu tố độc lực vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus 29 1.4.1 Các yếu tố độc lực vi khuẩn Listeria 29 1.4.2 Các yếu tố độc lực vi khuẩn Salmonella spp 30 1.4.3 Các yếu tố độc lực vi khuẩn S aureus 35 1.5 Gen sản sinh độc tố đường ruột vi khuẩn Salmonella spp S aureus 39 1.5.1 Gen sản sinh độc tố đường ruột Salmonella spp 39 1.5.2 Gen sản sinh độc tố đường ruột S aureus 41 1.6 Biện pháp phòng chống ngộ độc thực phẩm 44 1.6.1 Giải pháp trước mắt 44 1.6.2 Giải pháp lâu dài 46 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 47 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 47 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 47 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 47 2.1.3 Thời gian nghiên cứu: Từ năm 2012 đến năm 2015 47 2.2 Vật liệu nghiên cứu 47 2.2.1 Động vật thí nghiệm 47 2.2.2 Các loại mơi trường, hóa chất thiết bị sử dụng trình nghiên cứu 47 2.3 Nội dung nghiên cứu 49 2.3.1 Xác định tỷ lệ nhiễm đặc tính sinh học vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus thịt lợn tươi bán chợ Trung tâm số tỉnh phía Bắc 49 2.3.2 Xác định serovar chủng Salmonella spp phân lập phương pháp ngưng kết nhanh phiến kính 49 2.3.3 Xác định khả sản sinh độc tố đường ruột vi khuẩn Salmonella spp S aureus “Phản ứng khuếch tán da thỏ” 49 2.3.4 Xác định gen sản sinh độc tố enterotoxin vi khuẩn Salmonella spp S aureus phân lập 49 2.4 Phương pháp nghiên cứu 49 2.4.1 Phương pháp lấy mẫu 49 v 2.4.2 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus nhiễm thịt lợn 50 2.4.3 Phương pháp nhuộm Gram xác định hình thái vi khuẩn 52 2.4.4 Phương pháp xác định đặc tính sinh hóa chủng Listeria, Salmonella spp S aureus phân lập 52 2.4.5 Phương pháp xác định độc lực chủng vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus phân lập chuột thí nghiệm 55 2.4.6 Phương pháp xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh chủng vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus phân lập 56 2.4.7 Phương pháp xác định serovar vi khuẩn Salmonella spp phân lập 57 2.4.8 Phương pháp xác định khả sản sinh độc tố đường ruột vi khuẩn Salmonella spp S aureus “Phản ứng khuếch tán da thỏ” 57 2.4.9 Phương pháp xác định gen sản sinh độc tố đường ruột enterotoxin vi khuẩn Salmonella spp S aureus phương pháp PCR 58 2.4.10 Phương pháp đọc trình tự ADN máy đọc tự động phân tích kết phần mềm chuyên dụng vi khuẩn S aureus 61 2.4.11 Phương pháp biểu tinh gen seb 534 vi khuẩn S aureus 61 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 62 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 63 3.1 Tình hình tiêu thụ tỷ lệ nhiễm khuẩn thịt lợn số tỉnh phía Bắc 63 3.1.1 Khảo sát tình hình giết mổ lợn địa bàn số tỉnh phía Bắc 63 3.1.2 Xác định tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus thịt lợn bán chợ Trung tâm tỉnh Thái Nguyên, Bắc Giang, Hà Tây Hà Nội Vĩnh Phúc 64 3.2 Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Listeria, Salmonella spp., S aureus thịt lợn bán chợ Trung tâm tỉnh Thái Nguyên, Bắc Giang, Hà Tây - Hà Nội, Vĩnh Phúc 66 3.2.1 Kết tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Listeria thịt lợn 66 3.2.2 Kết tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp thịt lợn 67 3.2.3 Kết tỷ lệ nhiễm vi khuẩn S aureus thịt lợn 68 3.3 Xác định tiêu vi khuẩn Listeria, Salmonella spp., S aureus nhiễm thịt lợn bán chợ 69 3.3.1 Xác định tiêu vi khuẩn Listeria nhiễm thịt lợn 69 vi 3.3.2 Xác định tiêu vi khuẩn Salmonella spp nhiễm thịt lợn 70 3.3.3 Xác định tiêu vi khuẩn S aureus nhiễm thịt lợn 71 3.4 Xác định tỷ lệ vi khuẩn Listeria, Salmonella spp., S aureus nhiễm thịt lợn theo thời gian lấy mẫu sau bán hàng 73 3.4.1 Xác định tỷ lệ vi khuẩn Listeria nhiễm thịt lợn theo thời gian lấy mẫu 73 3.4.2 Xác định tỷ lệ vi khuẩn Salmonella spp nhiễm thịt lợn theo thời gian lấy mẫu 75 3.4.3 Xác định tỷ lệ vi khuẩn S aureus nhiễm thịt lợn theo thời gian lấy mẫu 78 3.5 Tỷ lệ cường độ nhiễm vi khuẩn Listeria, Salmonella spp., S aureus thịt lợn theo mùa 80 3.5.1 Tỷ lệ cường độ nhiễm vi khuẩn Listeria thịt lợn theo mùa 80 3.5.2 Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp thịt lợn theo mùa 83 3.5.3 Tỷ lệ cường độ nhiễm vi khuẩn S aureus thịt lợn theo mùa 86 3.6 Giám định đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus phân lập 90 3.6.1 Giám định đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn Listeria phân lập 90 3.6.2 Giám định đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn Salmonella spp phân lập 91 3.6.3 Giám định đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn S aureus phân lập 92 3.7 Thử độc lực chủng vi khuẩn Listeria, Salmonella spp S aureus phân lập chuột thí nghiệm 93 3.7.1 Kết thử độc lực chủng vi khuẩn Listeria phân lập chuột thí nghiệm 93 3.7.2 Kết thử độc lực chủng vi khuẩn Salmonella spp phân lập chuột thí nghiệm 94 3.7.3 Kết thử độc lực chủng vi khuẩn S aureus phân lập chuột thí nghiệm 95 3.8 Kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng Listeria, Salmonella spp S aureus phân lập 97 vii 3.8.1 Kết kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng Listeria phân lập 97 3.8.2 Kết kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng Salmonella spp phân lập 98 3.8.3 Kết kiểm tra tính mẫn cảm với kháng sinh chủng S aureus phân lập 99 3.9 Kết xác định khả sản sinh độc tố đường ruột vi khuẩn Salmonella spp S aureus “Phản ứng khuếch tán da thỏ” 100 3.9.1 Kết xác định khả sản sinh độc tố đường ruột vi khuẩn Salmonella spp “Phản ứng khuếch tán da thỏ” 100 3.9.2 Kết xác định khả sản sinh độc tố đường ruột vi khuẩn S aureus “Phản ứng khuếch tán da thỏ” 102 3.10 Kết xác định serovar chủng Salmonella spp phân lập phương pháp ngưng kết nhanh phiến kính theo sơ đồ Kauffmann - White 103 3.11 Xác định gen sản sinh độc tố đường ruột enterotoxin chủng Salmonella spp S aureus phân lập 104 3.11.1 Gen sản sinh độc tố đường ruột enterotoxin vi khuẩn Salmonella spp 105 3.11.2 Gen sản sinh độc tố đường ruột enterotoxin nhóm B vi khuẩn S aureus 107 3.12 Đề xuất số biện pháp phòng ngừa 118 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 120 Kết luận 120 Kiến nghị 121 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 122 TÀI LIỆU THAM KHẢO 123 I Tài liệu tiếng Việt 123 II Tài liệu Tiếng Anh 129 III Tài liệu Internet 137 PHỤ LỤC 139 viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT APS: Ammoniumpersulfate AOAC: Association of Official Agricultural Chemists bp: base pair (cặp base) C perfringens: Clostridium perfringens DBB: Denaturing Binding Buffer DEB: Denaturing Elution Buffer ADN: Acid deoxyribonucleic dNTPs: deoxynucleotide triphosphate E coli: Escherichia coli EDTA: Ethylene Diamine Tetraacetic Acid Epp: Eppendorf IPTG: Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside LB: Luria and Bertani MHC II: Histocompatibility complex class II MRSA: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus MSSA: Methicillin‐ sensitive Staphylococcus aureus NCBI: Ngân hàng gen NĐTP: Ngộ độc thực phẩm PCR: Polymerase Chain Reaction PBS: Phosphate buffer saline S aureus: Staphylococcus aureus SCC: Staphylococcal chromosomal cassette SDS: Sodium dodecyl sulfate se: Staphylococcal enterotoxin sea: Staphylococcal enterotoxin A seb: Staphylococcal enterotoxin B sec: Staphylococcal enterotoxin C sed: Staphylococcal enterotoxin D see: Staphylococcal enterotoxin E ses: Staphylococcal enterotoxin S 131 83 Gill S R., Fouts D E., Archer G L., Mongodin E F., Deboy R T., Ravel J., Paulsen I T., Kolonay, J F., Brinkac L., Beanan M., Dodson R J., Daugherty S C., Madupu R., Angiuoli S V., Durkin A S., Haft D H., Vamathevan J., Khour I H., Utterback T., Lee C., Dimitrov G., Jiang L., Qin H., Weidman J., Tran K., Kang K., Hance I R., Nelson K E., Fraser C M (2005), “Insights on evolution of virulence and resistance from the complete genome analysis of an early methicillin-resistant Staphylococcus aureus strain and a biofilmproducing methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis strain”, Journal of Bacteriology, 187, pp 2426 - 2438 84 Greenfield R A., Brown B R., Huntchins J B., Iandolo J J., Jackson R., Slater L N., Bronze M S (2002), “Microbiological, biological and chemical weapons of warfare and terrorism”, The American Journal of the Medical Science, 323(6), pp 326 - 340 85 Haeghebaert S., Le Q F., Gallay A., Bouvet P., Gomez M., Vaillant V (2002), Les toxi-infections alimentaires collectives en France, en 1999 et 2000, Bull Epidémiol Hebdo, 23, pp 105 - 109 86 Haghjoo E., Galan J E (2004), Salmonella typhy encodes a functional cytolethal distending toxin that is delivered into host cells by a bacterial - internalization pathway, Section of Microbial Pathogenesis, Yale University School of Medicine, New Haven, CT 06536, USA 87 Hagan, Bruner (1981), “Infection discaser of metie animals”, Seven edition, Puplished by Cornell University press Ltd, pp 164 - 168 88 Hao D., Xing X., Li G., Wang X., Zhang W., Xia X., Meng J (2015), “Prevalence, toxin gene profiles and antimicrobial resistance of Staphylococcus aureus isolated from quick - frozen dumplings”, Journal of Food Protection, 78 (1), pp 218 - 223 89 Harvey J., Gilmour A (2000), Staphylococcus aureus, In: (Eds.) Robinson R K., Batt C A., Patel P D Encyclopedia of food microbiology Academic Press, London, pp 2066 - 2071 90 He W., Lui Y., Qi J., Chen H., Zhao C., Zhang F., Li H., Wang H (2013), “Food animal related Staphylococcus aureus multidrug resistant ST9 strains with toxin genes”, Foodborne Pathogens Disease, 10(9), pp.782 - 788 132 91 Herron O L., Fitzgerald J R., Musser J M., Kapur V (2007), “Molecular correlates of host specialization in Staphylococcus aureus”, PLoS ONE, (10), pp 1120 92 Holden M T., Feil E J., Lindsay J A., Peacock S J., Day N P., Enright M C., Foster T J., Moore C E., Hurst L., Atkin R., Barron A., Bason N., Bentley S D., Chilling W C., Chilling W T., Churcher C., Clark L., Corton C., Cronin A., Doggett J., Dowd L., Feltweel T., Hance Z., Harris B., Hauser H., Holroyd S., Jagels K., James K D., Lennard N., Line A., Mayes R., Moule S., Mungall K., Ormond D., Quail M A., Rabbinowitsch E., Rutherford K., Sanders M., Sharp S., Simmonds M., Stevens K., Whitehead S., Barell B G., Spratt B G., Parkhill J (2004), “Complete genomes of two clinical Staphylococcus aureus strains: evidence for the rapid evolution of virulence and drug resistance”, Proceedings of the National Academy of Sciences, 101(26), pp 9786 - 9791 93 Jamali H., Radmehr B., Ismail S (2014), “Prevalence and antimicrobial resistance of Listeria, Salmonella, and Yersinia species isolates in ducks and geese”, Poultry Science, 93(4), pp 1023 - 1030 94 Jay J M (2000), Modern food Microbiology, An Arpen publication, Maryland, pp 511 - 528 95 Jogensen H J., Mork T., Hogasen H R., Rorvik L M (2004), “Enterotoxigenic Staphylococcus aureus in bulk in Norway”, Journal of Applied Microbiology, 99, pp 158 - 166 96 Jones G W, Richardson A J (1981), “The attachment to of hela cells by S typhimurium the contribution of manose sensitive and manose - sensitive haemaglutimate activities”, Journal of General Microbiology, 127, pp 361 - 370 97 Kenneth Todar (2005), Salmonella and Salmonellosis, University of Wisconsin Madison Department of Bacteriology 98 Kumarss Amini, Taghi Zahraei Salehi, Gholamreza Nikbakht, Reza Ranjbar, Javid Amini, Shahrnaz Banou Ashrafganjooei (2010), “Molecular detection of invA and spv virulence genes in Salmonella enteritidis isolated from human and animals in Iran”, African Journal of Microbiology Research, (21), pp 2202 - 2210 133 99 Krause M., Fang F C., El-Gedaily A., Libby S., Guiney D G (1995), Mutational analysis of SpvR binding to DNA in the regulation of the Salmonella plasmid virulence operon, Plasmid 34 (1), pp 37 - 47 100 Kraushaar B., Fetsch A (2014), “First description of PVL-positive methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in wild boar meat”, International Journal of Food Microbiology, 186, pp 68 - 73 101 Lado B., Yousef A E (2007), Characteristics of Listeria monocytogenes important to food processors Ch In: Ryser ET, Marth EH (eds) Listeria, listeriosis and food safety, CRC Press Taylor & Francis Group, Boca Raton, pp 157 - 213 102 Lai J., Wu C., Qi J., Wang Y., Wang H., Liu Y., Shen J (2014), “Serot ype distribution and antibiotic resistance of Salmonella in food-producing animals in Shandong province of China, 2009 and 2012”, International Journal of Food Microbiology, 180, pp 30 - 38 103 Letertre C., Perelle S., Dilasser F., Fach P (2003), “Identification of a new putative enterotoxin SEU encoded by the egc cluster of Staphylococcus aureus”, Journal of Food Microbiology, 95, pp 38 - 43 104 Li Y C., Pan Z M., Kang X L., Geng S Z., Liu Z Y., Cai Y Q., Jiao X A (2014), “Prevalence, characteristics, and antimicrobial resistance patterns of Salmonella in retail pork in Jiangsu province, eastern China”, Journal of Food Protection, 77 (2), pp 236 - 245 105 Lopes G V., Pissetti C., Crus Payão Pellegrini D., Silva L E., Cardoso M (2014), „Resistance phenotypes and genotypes of Salmonella enterica subsp enterica isolates from feed, pigs, and carcasses in Brazil”, Journal of Food Protection, 78 (2), pp 407 - 413 106 Mary K Sandel, John L McKillip (2002), “Virulence and recovery of Staphylococcus aureus to the food industry using improvement on traditional approaches”, Food Control, 15, pp - 10 107 Meyer C., Fredriksson - Ahomaa M., Sperner B., Märtlbauer E (2011), “Detection of Listeria monocytogenes in pork and beef using the VIDAS® LMO2 automated enzyme linked immunoassay method”, Meat Science, pp 594 - 596 134 108 Mihaiu L., Lapusan A., Tanasuica R., Sobolu R., Mihaiu R., Oniga O., Mihaiu M (2014), “First study of Salmonella in meat in Romania”, Journal of Infection in Developing Countries, (1), pp 50 - 58 109 Murray E., Webb R., Swann M (1926), A disease of rabbits characterized by a large mononuclear leucocytosis, caused by a hitherto undescribed bacillus Bacterium monocytogenes (n sp.), Journal of Pathology and Bacteriology 29, pp 289 - 292 110 Muller W H., Trust T J., Kay W W (1989), “Fimbriation genes of Salmonella enteritidis”, Journal of Bacterology, Washington DC 20036, pp 4648 - 4654 111 Naomi Balaban, Avraham Rasooly (2000), “Staphylococcal enterotoxins” International Journal of Food Microbiology, 61, pp - 10 112 NCCLS (2000), Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, Approved standard, seventh edition edn, Pennsylvania, USA: The National Commintte for Clinical Laboratory Standards, pp - 10 113 Nema V., Agrawal R., Kamboj D V., Goel A K., Singh L (2007), “Isolation and characterization of heat resistant enterotoxigenic Staphylococcus aureus from a food poisoning outbreak in Indian subcontinent”, International Journal of Food Microbiology, 117(1), pp 29 - 35 114 Ng D L K., Tay L (1992), “Enterotoxigenic strains of coagulase-positive Staphylococcus aureus in drinks and ready-to-eat foods”, Food Microbiology, 10, pp 317 - 320 115 Norinaga Miwa, Asako Kawamura, Takashi Masuda, Masato Akiyama (2000), “An outbreak of food poisoning due to egg yolk reaction-negative Staphylococcus aureus”, International Journal of Food Microbiology, 64, pp 361 - 366 116 Ono H K., Omoe K., Imanishi K., Iwakabe Y., Hu D L., Kato H (2008), “Identification and characterization of two novel staphylococcal enterotoxins, types S and T”, Infection and Immunity, 76 (11), pp 4999 - 5005 117 Orskov I., Orskov F., Jann B., Jann K (1977), Serology, chemistry, and genetics of O and K antigens of Escherichia coli, Bacteriological Reviews 41, pp 667 - 710 118 Peterson J W (1980), Salmonella toxin, Pharm A ther VII, pp 719-724 135 119 Pinto B., Chenoll E., Azna R (2004), “Identification and typing of food-borne Staphylococcus aureus by PCR-based techniques”, Systematic and Applied Microbiology, 28, pp 340 - 350 120 Popoff M Y., Le Minor L (1997), Antigenic Formulas of the Salmonella Serovars, 7th revn, WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella, Institut Pasteur, Paris, France 121 Quinn P J., Carter M E., Makey B K., Carter G R (1994), Clinical Veterinary Microbiology, Wolfe publishing, Mosby - Year book Europe Limited, Edinburgh 122 Quinn P J., Carter M E., Makey B K., Carter G R (2002), Clinical veterinary microbiology, Wolfe Pulishing, London WC1 H9LB 123 Rebiahi S A., Abdelouahida D E., Rahmoun M., Abdelali S., Azzaoui H (2011), “Emergence of vancomycinresistant Staphylococcus aureus identified in the Tiemcen university hospital (North-West Algeria)”, Medecine et Maladies Infectieuses, 41 (12), pp 46 - 51 124 Reginald W Bennett, Gayle A Lancette (2001), Bacteriological Analytical Manual Online (Chapter12: Staphylococcus aureus), Center for Food Safety & Applied Nutrition, U.S.Food and Drug Administration 125 Reimeyer J C., Peterson J M., Wilson K J (1986), Salmonella cytotoxin: a component of the bacterial outer membrane, Microbiology Pathogenic, 1, pp 503 - 510 126 Rosec J P., Gigaud O (2002), “Staphylococci enterotoxin genes of classical and new types detected by PCR in France”, International Journal of Food Microbiology, 77, pp 61 - 70 127 Sambrook J., Russell D W (2001), Molecular Cloning, A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York 128 Sandefur P D., Peterson J W (1976), “Isolation of skin permeability factors from culture filtrates of Salmonella typhimurium”, Infection and Immunity, 14 (3), pp 671 - 679 129 Schoder D., Strauß A., Szakmary-Brändle K., Stessl B., Schlager S., Wagner M (2014), “Prevalence of major foodborne pathogens in food confiscated 136 from air passenger luggage”, International Journal of Food Microbiology, pp 401 - 402 130 Scott E Martin, John J Iandolo, Harvey J., Gilmour A., Sita R Tatini, Reginald Bennett, Merlin S Bergdoll (2000), Staphylococcus, Encyclopedia of Food Microbiology (Richard K Robinson, Carl A Batt Pradip D Patel), Academic Press, San Diego - San Francisco - New Yolk - Boston - London Sydney - Tokyo, pp 2062 - 2083 131 Simeão Carmo L., Souza Dias R., Roberto Linardi V., Jose de Sena M., Aparecida dos Santos D., Eduardo de Faria M., Castro Pena E., Jett M., Guilherme Heneine L (2001), “Food poisoning enterotoxigenic strains of Staphylococcus present in Minas cheese and raw milk in Brazil”, Food Microbiology, 19, pp - 14 132 Song M., Bai Y., Xu J., Carter M Q., Shi C., Shi X (2014), “Genetic diversity and virulence potential of Satphylococcus aureus isolates from raw and processed food commodities in Shanghai”, International Journal of Food Microbiology, 195, pp - 133 Steven R G., Derrick E F., Gordon L A (2005), “Insights on envolution of virulence and resistance from the complete genome analysis of an early Methicillin Resistant Staphylococcus aureus strain and Biofilm-Producing Methicillin - Resistant Staphylococcus epidermidis strain”, Journal of Bacteriology, 187 (7), pp 2426 - 2438 134 Susana M Portopcarrero, Melissa Newman, Benjy Mikel (2001), “Staphylococcus aureus survival, staphylococci enterotoxin production and shelf stability of country - cured hams manufactured under different processing procedures”, Meat Science, 62, pp 267 - 273 135 Tadee P., Boonkhot P., Patchanee P (2014), “Quantification of contamination levels and particular risk of Salmonella spp In pigs in slaughterhouses in Chiang Mai and Lamphun provinces, Thailand”, Japanese Journal of Veterinary Research, 62 (4), pp 171 - 179 136 Taylor D J schlum, Beeren L R., D.O J.T cliver, Bergdol M S (1982), “Emetic action of Staphylococcal enterotoxin A on weanlling pigs”, Infect inmumol, 36 (3), pp 1263 - 1266 137 137 Tawaratsumida K., Fujimoto F M Y., Fukase K., Suda Y., Hashimoto M (2009), “Characterization of N - terminal structure of TLR2 - activating lipoprotein in Staphylococcus aureus”, Journal of Biological Chemistry, 284, pp 9147 - 9152 138 Vally H., Glass K., Ford L., Hall G., Kirk M D., Shadbolt C., Veitch M., Fullerton K E., Musto J., Becker N (2014), “Proportion of illness acquired by foodborne transmission for nine enteric pathogens in Australia: An Expert Elicitation”, Foodborne Pathogens and Disease, 11(9), pp 727 - 733 139 Vemozy Rozand C., Mazuy Cruchaudet C., Bavai C., Richard Y (2004), “Comparison of three immunological methods for detecting staphylococcal enterotoxin from food”, Letter in Applied Microbiology, 39 (6), pp 1390 - 1394 140 Viktoria Atanmassova, Alexandra Meindl, Christian Ring (2001), “Prevalence of Staphylococcus aureus and staphylococci enterotoxin in raw pork and uncooked smoked ham - a comparison of classical culturing detection and RFLP - PCR”, International Journal of Food Microbiology, 68, pp 105 - 113, 141 Yarwood J M., McCormick J K., Paustian M L., Orwin P M., Kapur V., Schlievert P M (2002), “Characterization and expression analysis of Staphylococcus aureus pathogenicity island Implications for the evolution of staphylococcal pathogenicity islands, Staphylococcus aureus”, Journal of Biological Chemistry, 277 (15), pp 13138 - 13147 142 Yves Le Loir, Florence Baron, Michel Gautier (2003), “Staphylococcus aureus and food poisoning”, Genetic and Molecular Research, (1), pp 63 - 76 143 Walter Chaim, David A Eschenbach (2014), Specific bacterial infections: Listeria, The educational platform for FIGO, The international Federation of Gynecology and Obstetrics 144 Wei H L., Chiou C S (2002), Molecular subtyping of Staphylococcus aureus from an outbreak associated with a food handler, Epidemiology and Infection, Cambridge University Press, 128, pp.15 - 20 III Tài liệu Internet 145 Bremer P J., Fletcher G C., Osbome C (2004), Staphylococcus aureus, NewZealand Institute for Crop and Food Research gi|56673482|gb|AY852244.1| Staphylococcus aureus enterotoxin B (seb) gene, partial cds GAGAGTCAACCAGATCCTAAACCAGATGAGTTGCACAAATCGAGTAAAT TCACTGGTTTGATGGAAAATA TGAAAGTTTTGTATGATGATAATCATGTATCAGCAATAAACGTTAAATCT ATAGATCAATTTCTATACTT TGACTTAATATATTCTATTAAGGACACTAAGTTAGGGAATTATGATAATG TTCGAGTCGAATTTAAAAAC AAAGATTTAGCTGATAAATACAAAGATAAATACGTAGATGTGTTTGGAG CTAATTATTATTATCAATGTT ATTTTTCTAAAAAAACGAATGATATTAATTCGCATCAAACTGACAAACGA AAAACTTGTATGTATGGTGG TGTAACTGAGCATAATGGAAACCAATTAGATAAATATAGAAGTATTACT GTTCGGGTATTTGAAGATGGT AAAAATTTATTATCTTTTGACGTACAAACTAATAAGAAAAAGGTGACTGC TCAAGAATTAGATTACCTAA CTCGTCACTATTTGGTGAAAAATAAAAAACTCTATGAATTTAACAACTCG CCTTATGAAACGGGATATAT TAAATTTATAGAAAATGAGAATAGCTTTTGGTATGACATGATGCCTGCAC CAGGAGATAAATTTGACCAA TCTAAATATTTAATGATGTACAATGACAATAAAATGGTTGATTCTAAAGA TGTGAAGATTGAAGTTTATC TTACGACAAAGAAAAAGTGA ESQPDPKPDELHKSSKFTGLMENMKVLYDDNHVSAINVKSIDQFLYFDLIYSI KDTKLGNYDNVRVEFKNKDLADKYKDKYVDVFGANYYYQCYFSKKTNDI NSHQTDKRKTCMYGGVTEHNGNQLDKYRSITVRVFEDGKNLLSFDVQTNK KKVTAQELDYLTRHYLVKNKKLYEFNNSPYETGYIKFIENENSFWYDMMPA PGDKFDQSKYLMMYNDNKMVDSKDVKIEVYLTTKKK* A segment of gene encoding four desired histidines only 144 (336 nucleotides, 112 codons) TTGCACAAATCGAGTAAATTCACTGGTTTGATGGAAAATA TGAAAGTTTTGTATGATGATAATCATGTATCAGCAATAAACGTTAAATCT ATAGATCAATTTCTATACTT TGACTTAATATATTCTATTAAGGACACTAAGTTAGGGAATTATGATAATG TTCGAGTCGAATTTAAAAAC AAAGATTTAGCTGATAAATACAAAGATAAATACGTAGATGTGTTTGGAG CTAATTATTATTATCAATGTT ATTTTTCTAAAAAAACGAATGATATTAATTCGCATCAAACTGACAAACGA AAAACTTGTATGTATGGTGG TGTAACTGAGCATAAT Primers used for amplifying a segment of gene encoding four desired histidines P - SEB - F: 5’ ATGTTGCACAAATCGAGTAAATTC 3‟ (24 mer) P - SEB - R: 5‟ TCAATTATGCTCAGTTACACCACC 3‟ (24 mer) 145 Phụ lục 2.2: Các vector sử dụng để biểu Vector biểu pET21a+ Vector tách dòng pJET1.2/blunt ... Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm độc tố đường ruột (enterotoxin) vi khuẩn Listeria, Salmonella spp. , Staphylococcus aureus ô nhiễm thịt lợn số tỉnh phía Bắc Mục tiêu nghiên cứu - Xác định số. .. THỊ MAI LAN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM VÀ ĐỘC TỐ ĐƢỜNG RUỘT (ENTEROTOXIN) CỦA VI KHUẨN Listeria, Salmonella spp. , Staphylococcus aureus Ô NHIỄM TRONG THỊT LỢN Ở MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC Chuyên... 3.2.2 Kết tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp thịt lợn 67 3.2.3 Kết tỷ lệ nhiễm vi khuẩn S aureus thịt lợn 68 3.3 Xác định tiêu vi khuẩn Listeria, Salmonella spp. , S aureus nhiễm thịt lợn bán