Đang tải... (xem toàn văn)
Chất nền : ganglioside GM1, lactosylceramides, lactose,và nhiều glycoprotein.● Nó cũng có thể tách fucosides và arabinosides nhưng vớihiệu quả thấp hơn nhiềuβ galactosidase có nhiều đồng phân như :betagalactosidase (EBG), betaglucosidase ,6phosphobetagalactosidase, betamannosidase, vàlactasephlorizin hydrolase● . β galactosidase bị ức chế bởi Lribose , chất ức chếkhông cạnh tranh iốt , và các chất ức chế cạnhtranh phenylthyl thiobetaDgalactoside (PETG),Dgalactonolactone , isopropyl thiobetaDgalactoside(IPTG) , và galactose
Xác định hoạt độ enzym β- Galactosidase phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử Giảng viên: PGS.TS Quản Lê Hà Sinh viên: Nguyễn Thị Thúy Ngân MSSV: 20132749 Sơ lược enzym β- Galactosidase ● Chất : ganglioside GM1, lactosylceramides, lactose, nhiều glycoprotein ● Nó tách fucosides arabinosides với hiệu thấp nhiều Cấu trúc không gian ● β - galactosidase có nhiều đồng phân : beta-galactosidase (EBG), beta-glucosidase , 6-phospho-beta-galactosidase, beta-mannosidase, lactase-phlorizin hydrolase ● β - galactosidase bị ức chế L-ribose , chất ức chế không cạnh tranh iốt , chất ức chế cạnh tranh phenylthyl thio-beta-D-galactoside (PETG), D-galactonolactone , isopropyl thio-beta-D-galactoside (IPTG) , galactose - Enzym ngoại bào Tiết môi trường - Enzym nội bào Tích tụ tế bào, dạng tự liên kết với màng tế bào lyzosome Vi sinh vật tổng hợp NẤM MEN Candida pseudtropicalis, Crypotoccus laurentii, Kluyverromyces lactics, K.fragilis, K marxianus, Torulopsis sphaerica, T versalitis … NẤM MỐC Aspergilus awmori, A cellulosae, Penicilum canescens, Rhizopus acidus, R.niveus VI KHUẨN Streptococcus pneumoniae SP3-BS71, Clostridium perfringens, Lactococcus pneumonira… Mô hình sản xuất enzym từ nấm men đề tài A Two expression Plasmids Β-galactosidase Dùng thị X- Glal ● Nguyên tắc: phương pháp dựa khả thủy phân X-Gal hình thành nên kết tủa màu xanh blue kiểu indigo enzym β - galactosidase ● Ưu điểm: thao tác đơn giản, dễ thực hiện, hóa chất không phức tạp ● Nhược điểm: Độ xác thấp, khả sai số cao, xác định định tính không áp dụng để định lượng Quang phổ hấp thụ phân tử ● Nguyên tắc phương pháp : để xác định chất bất kì, ta tìm cách đo tín hiệu có quan hệ trực tiếp gián tiếp ● Yêu cầu : +Ánh sáng sử dụng nghiên cứu ánh sáng đơn sắc + Trong trình đo quang, không xuất tương tác chất nghiên cứu với chất lạ hay môi trường Quang phổ hấp thụ phân tử ● Ưu điểm: tính xác kết cao, áp dụng để định lượng chất cần phân tích ● Nhược điểm: thao tác phức tạp, cần độ chuẩn xác, có đầu tư thiết bị hóa chất Hóa chất ● Thiết bị dụng cụ ● ● ● ● Máy li tâm Máy so màu quang phổ Thiết bị ổn nhiệt Các dụng cụ kèm theo trình thao tác Chuẩn bị sinh khối ● + ly tâm 2ml dịch nuôi cấy, 4ᵒC với tốc độ 6000 vòng / ● ● ● ● phút phút + loại bỏ phần dịch trong, phần cặn bã tái tạo huyền phù thể tích dung dịch đệm Z làm lạnh + Pha loãng dịch huyền phù chứa tế bào vi sinh vật dung dịch đệm Z + Làm tăng tính thấm tế bào vi sinh vật pha loãng cách thêm 100 µl Cloroform 50 µl dung dịch SDS 0,1 % vào 1ml huyền phù pha loãng + Lắc để ổn định 28ᵒC phút Phân tích ● ● THANK YOU ... - galactosidase ● Ưu điểm: thao tác đơn giản, dễ thực hiện, hóa chất không phức tạp ● Nhược điểm: Độ xác thấp, khả sai số cao, xác định định tính không áp dụng để định lượng Quang phổ hấp thụ. .. chất lạ hay môi trường Quang phổ hấp thụ phân tử ● Ưu điểm: tính xác kết cao, áp dụng để định lượng chất cần phân tích ● Nhược điểm: thao tác phức tạp, cần độ chuẩn xác, có đầu tư thiết bị hóa... xuất enzym từ nấm men đề tài A Two expression Plasmids Β -galactosidase Dùng thị X- Glal ● Nguyên tắc: phương pháp dựa khả thủy phân X-Gal hình thành nên kết tủa màu xanh blue kiểu indigo enzym β